实验化脓性球菌的分离鉴定

第十章化脓性细菌(purulent bacterium)一、概念：化脓性细菌是一类能够感染人体并引起化脓性炎症的细菌。

二、分类：1．化脓性球菌：G+，葡萄球菌属，链球菌属G-，脑膜炎奈瑟菌，淋病奈瑟菌2．化脓性杆菌：G-，大肠埃希菌属，假单胞菌属第一节葡萄球菌属(Staphylococcus)在自然界分布广泛，是最常见的化脓性球菌。

模式代表菌株：金黄色葡萄球菌(S. aureus)一、生物学性状1．形态与染色：G+球菌，典型排列方式为葡萄串状，无特殊结构（体外）2．培养特性温度：28-38℃（37℃）；pH：4.5-9.8（7.4）培养基：普通培养基生长良好.血琼脂平板上生长繁茂并形成全透明溶血环（β溶血）菌落：中等大小（1-2mm），圆形，光滑，不透明，各种脂溶性色素3．生化反应4．分类根据色素，生化反应等不同类型，分为三种：主要性状金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌菌落色素金黄色白色白色或柠檬色血浆凝固酶＋－－α溶血素＋－－SPA ＋－－甘露醇发酵＋－－致病性强弱无5．抗原结构（1）葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A, SPA）性质：①细菌细胞壁的表面蛋白②可与人类、豚鼠、小鼠等多种哺乳动物IgG的Fc段非特异性结合，结合后的抗原抗体复合物有以下作用：a.抗吞噬b.损伤血小板，引起超敏反应c.可用于协同凝集试验（2）荚膜：黏附作用（3）多糖抗原：存在于细胞壁，为磷壁酸中的组分，分为两群A群――金黄色葡萄球菌B群――表皮葡萄球菌 (S.epidermidis)6．抵抗力（1）抵抗干燥，热（80℃，30min），盐（10-15％）（2）碱性染料敏感（结晶紫，龙胆紫）（3）耐药菌株迅速增多二、致病性（一）致病物质1．侵袭力（1）表面结构：SPA，荚膜等（2）酶类：①凝固酶(coagulase)：能使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的酶类物质。

是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标。

脓汁和粪便标本中病原菌的检测（作者：bibi）目的从脓汁和粪便标本中分离、培养和检测病原体。

方法培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定。

结果脓汁标本形成黄、白两种颜色菌落，均为革兰氏阳性菌，均对青霉素和链霉素敏感；粪便标本形成紫黑和粉红色两种菌落，均为革兰氏阴性菌，对青霉素不敏感，对链霉素敏感。

四种细菌均对广谱抗菌素庆大霉素敏感。

关键词：脓汁粪便微生物细菌菌落生化鉴定药敏试验引言：常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。

浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如SS、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。

这次实验我们从浓汁标本中检出的是金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌，从粪便标本中检出的是大肠埃希菌、痢疾志贺菌。

更重要的是我们了解了，医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握了微生物试验的基本技能和基本原理，树立了牢固的无菌观念。

同时培养学生自学能力、科学思维能力、动手能力和表达能力。

培养学生从临床标本中分离细菌以查找与疾病有关的病原体，为临床治疗预后调查提供一定的价值1.实验器材：接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯 CX21型生物显微镜、1500W电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子2.实验方法：2.1培养基的制备、消毒和灭菌培养基制备的一般程序：①调配→溶化→矫正pH →分装→灭菌→检定→保存。

脓汁和粪便标本中病原微生物的检测[摘要]通过革兰氏染色并在油镜下观察细菌形态结构、细菌的生化反应和细菌的血清学反应等手段区别和鉴定脓汁标本中和粪便标本中细菌，检测病原微生物，并进行细菌药物敏感性试验。

[关键词]脓汁标本、粪便标本、分离培养、革兰氏染色、细菌生化反应鉴定、细菌动力学试验、细菌血清学试验、细菌药物敏感性试验前言医学微生物学检查的目的是通过病原体的分离鉴定及检测病人的免疫应答等，以达到对传染性疾病做出病原学诊断，并根据实验室检查结果进行合理的药物治疗与防护。

临床的标本常含有很多杂菌，必须进行分离和纯化。

常见的化脓性病原菌有葡萄球菌，链球菌脑膜炎球菌等。

脓汁标本在做细菌分离培养的同时，均需直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体、芽孢有无，为临床提供最初诊断。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基，尽可能抑制杂菌，以利于病原体的检出。

通过革兰氏染色并在油镜下观察细菌形态结构、细菌的生化反应和细菌的血清学反应等手段可以区别和鉴定细菌的种类。

细菌药物敏感性实验可以防止细菌产生耐药性和确保治疗效果，同时也为细菌种类的鉴别提供了佐证。

1.材料与方法1.1培养基制备1.11材料天平、称量纸、药勺、干粉培养基、酒精灯、三角烧瓶、量筒、试管、试管架、5ml吸管、吸头、棉塞、标签纸、牛皮纸、皮筋1.12方法称取一定量的肉汤培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸一次，趁热分装；称取一定量的营养琼脂培养基，至于三角烧瓶中，加入适量的蒸馏水，煮沸三次（煮至刚刚冒泡，立刻置于台面，半分钟后再煮），使完全溶解，趁热分装。

（平板培养基：以无菌操作，倾注平皿10ml，琼脂完全凝固后，平板倒放，4℃冰箱保存备用。

斜面培养基：培养基趁热斜放，培基不超过试管长度的2/3，琼脂凝固以后，4℃冰箱保存备用。

）贴上标签后灭菌使用。

1.2细菌分离培养1.2.1材料脓汁标本、粪便标本、普通营养琼脂培平板、伊红美蓝琼脂平板、接种环、酒精灯1.2.2方法接种前，接种环烧灼灭菌。

单染色1、涂片：用接种环沾取细菌培养液，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。

（Tip:菌量不宜过多，以免标本过厚，影响染色结果）2、干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干，但切勿靠近火焰以免烤焦标本。

（注意：如烘干，以玻片不烫手为宜。

）3、固定：火焰固定。

将标本涂片在火焰外层内来回通过3次。

固定的作用一是杀死细菌，同时可改变对染料的通透性（因为活的细菌一般不让各种染料进入细胞内）。

再者使细菌与玻片粘附牢固，三是使细菌蛋白凝固后保持其固有的外形。

4、染色：滴加结晶紫、稀释复红或碱性美兰液1～2滴，使染液盖满涂膜，1～2分钟后，用细小流水洗去多余的染液，在空气中自然干燥或用吸水纸轻轻吸干（切忌拖、拉）。

5、镜检结果：用结晶紫染色的细菌葡萄球菌、大肠杆菌呈紫色；用复红染色者均为红色；用碱性美兰染色者均为蔚蓝色。

复染革兰染色法过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟每步染色完后均需水洗。

葡萄球菌的革兰染色变形杆菌的革兰染色链球菌的革兰染色紫碘酒红一一半半球阳杆阴阳紫阴红注：脑淋卡白抗孢除外过程1、涂片：用棉签或接种环沾取细菌培养液，在玻片上涂成直径约为1.0cm 的菌膜。

2、干燥：最好在室温中自然干燥，也可在远离火焰上方微微烘干。

但切勿靠近火焰以免烤焦标本。

3、固定：火焰固定。

4、革兰染色过程：初染：结晶紫1分钟媒染：碘液1分钟脱色：95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟5、镜检：球阳杆阴阳紫阴红化脓性球菌分离鉴定化脓性球菌主要有葡萄球菌、链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。

触酶实验原理：产生过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和氧分子-出现气泡。

操作步骤：在洁净玻片上滴一滴生理盐水，用接种环取少许细菌培养物与生理盐水中乳磨均匀，然后加3％过氧化氢数滴；或直接滴加3％过氧化氢于不含血液的细菌培养物中，立即观察结果。

结果观察：有大量气泡产生者为阳性。