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苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)简介：苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase, MDH)是合成苹果酸的关键酶之一，催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化，参与众多生理代谢途径如TCA循环C4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH在植物的生长发育中发挥着重要作用，广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上，为三羧酸循环中的一种酶，由于酶的来源不同，其某些性质也不尽相同。
MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
Leagene苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)检测原理是在弱碱条件下，以草酰乙酸(OAA)作为显色底物，OAA在MDH催化下被NADH还原为苹果酸(Mal)，每催化1分子OAA消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(分光光度计)测定吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出苹果酸脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中苹果酸脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、研钵或匀浆器2、离心管或试管3、低温离心机4、比色杯5、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE046350TStorage试剂(A): MDH Lysis buffer 250ml 4℃避光试剂(B): PMSF 1ml -20℃试剂(C): MDH Assay buffer100ml RT试剂(D): NADH 1支-20℃试剂(E): ddH2O 10ml RT使用说明书1份1、配制MDH Lysis buffer工作液：取出MDH Lysis buffer和PMSF，恢复至室温，MDHLysis buffer：PMSF按一定比例混合，混匀，即配即用，不易久置，否则白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)简介：苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)是合成苹果酸的关键酶之一，催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化，参与众多生理代谢途径如TCA循环C4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH在植物的生长发育中发挥着重要作用，广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上，为三羧酸循环中的一种酶，由于酶的来源不同，其某些性质也不尽相同。
MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
Leagene苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA比色法)检测原理是在弱碱条件下，以草酰乙酸(OAA)作为显色底物，OAA在MDH催化下被NADH还原为苹果酸(Mal)，每催化1分子OAA消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(分光光度计)测定吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出苹果酸脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中苹果酸脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、研钵或匀浆器2、离心管或试管3、低温离心机4、比色杯5、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE046350TStorage试剂(A):MDH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃试剂(C):MDH Assay buffer100ml RT试剂(D):NADH1支-20℃试剂(E):ddH2O10ml RT使用说明书1份1、配制MDH Lysis buffer工作液：取出MDH Lysis buffer和PMSF，恢复至室温，MDHLysis buffer：PMSF按一定比例混合，混匀，即配即用，不易久置，否则白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
脱氢抗坏血酸(DHA)检测试剂盒(菲咯啉微板法)简介：维生素C(Vitamin C)又称L-抗坏血酸(AsA)，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。
在生物体内，维生素C是一种抗氧化剂，为酸性己糖衍生物，是稀醇式己糖酸内酯，保护身体免于自由基的威胁，同时也是一种辅酶，其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。
Vc有L-型和D-型两种异构体，只有L-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。
Leagene脱氢抗坏血酸(DHA)检测试剂盒(菲咯啉微板法)检测原理是利用还原剂将脱氢抗坏血酸还原成还原型抗坏血酸，在酸性条件下，维生素C(抗坏血酸)把三价铁离子还原成亚铁离子，后者与菲咯啉形成稳定的红色螯合物，以酶标仪检测吸光度，在一定浓度范围吸光度与抗坏血酸含量呈线性关系，从中减去样品中原有的还原型抗坏血酸含量，即得脱氢抗坏血酸含量，其优点是：1、反应稳定，不易褪色；2、操作简便；3、还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰，因此专一性好；4、灵敏度高。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、无水乙醇3、研钵或匀浆器4、离心管或试管5、比色杯6、分光光度计编号名称TC2040100TStorage试剂(A): 抗坏血酸标准(250μg/ml) 2ml4℃避光试剂(B): 组织匀浆液(5×) 500ml RT 避光试剂(C): DHA还原液200ml -20℃试剂(D): NaOH溶液100ml RT试剂(E): 酸性缓冲液3ml RT试剂(F): AsA Assay buffer 3ml RT 避光试剂(G): 菲咯啉显色液6ml 4℃避光使用说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、稀释组织匀浆液：组织匀浆液：蒸馏水稀释，获得组织匀浆液，待用。
2、制备AsA提取液：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量，加入研磨器内。
加入少量组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用组织匀浆液研磨，最后一并倒入离心管，补充组织匀浆液充分混匀后，离心，留取上清液即为AsA提取液。
天冬氨酸氨基转移酶AST紫外苹果酸脱氢酶法作业指导书1、前言试验名称：天冬氨酸氨基转移酶测定，英文名称：AST，方法：紫外苹果酸脱氢酶法。
本文件适用于安阳鼎城糖尿病医院检验科生化实验室，目的是指导工作人员正确的在科华KHB450全自动生化分析仪上测定血清、血浆样本中的天冬氨酸氨基转移酶活力，以保证测定结果的准确可靠。
本试验用体外定量测定人血清或血浆样本中天冬氨酸氨基转移酶的活力。
天冬氨酸氨基转移酶广泛分布于人体，而在心、肝、骨骼肌、肾和细胞内有较高浓度，这些组织的损伤或疾病，如心肌梗塞、肝坏死、肝硬化和肌营养不良等症均会引起血清或血浆中AST水平的升高。
2、测定原理本试验测定原理以IFCC推荐的方法为基础，实验分两步进行测定原理如下：a、样本中的AST催化L-天冬氨酸和α-氧代戊二酸氨基转换，生成草酰乙酸和L-谷氨酸。
b、在NADH和苹果酸脱氢酶（MDH）存在下，草酰乙酸被还原为L-苹果酸，同时NADH被氧化为NAD+，从而合340nm处的光吸收值下降，通过监测340nm处光吸收值下降的速率，可以测定ALT的活力。
c、样本中内源性丙柄酸的干扰可由试剂中LDH在初始孵育期内快速完全地消除，不会干扰测定。
L-天冬氨酸+α-氧代戊二酸AST草酰乙酸+L-谷氨酸MDH L-乳酸+ NAD+草酰乙酸+NADH＋H+3、试剂试剂生产商：上海科华公司。
剂型：液体双试剂。
包装量：R1：4*40ml R2：4*20ml注册号：沪食药监械（准）字2010第2400060号。
生产许可证号：沪药管械生产许20030916号。
基本成份：试剂1：L-天冬氨酸300mmol/l乳酸脱氢酶﹥1365u/lNADH0.27mmol/lTris缓冲液88mmol/lEDTA 5.0mmol/l试剂2：苹果酸脱氢酶（MDH）﹥1365u/lTris缓冲液88mmol/lα-氧代戊二酸36mmol/lEDTA 5.0mmol/l储存条件和有效期：试剂避光储存于2―8℃可稳定12个月。
苹果酸脱氢酶(MDH)提取液简介：苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase,MDH)是合成苹果酸的关键酶之一，催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化，参与众多生理代谢途径如TCA 循环C 4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH 在植物的生长发育中发挥着重要作用，广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上，为三羧酸循环中的一种酶，由于酶的来源不同，其某些性质也不尽相同。
MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
Leagene 苹果酸脱氢酶(MDH)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的苹果酸脱氢酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。
2、配制苹果酸脱氢酶提取工作液：取出苹果酸脱氢酶提取液和PMSF，恢复至室温，混合，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF 的效率会有所下降。
3、加入预冷的苹果酸脱氢酶提取工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
4、离心，留取上清液即为苹果酸脱氢酶粗提液，保存，用于苹果酸脱氢酶的检测或其他用途。
计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%编号名称CS0431Storage 试剂(A):苹果酸脱氢酶提取液500ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml 4℃使用说明书1份注意事项：1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20-80℃。
2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用苹果酸脱氢酶提取工作液稀释样品后重新测定。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
脱氢抗坏血酸（DHA）含量检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1245规格：100T/96S产品内容：提取液：液体110mL×1瓶，室温保存。
试剂一：液体20mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入5mL蒸馏水充分溶解。
标准品：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加入5.743mL蒸馏水充分溶解；吸取0.1mL上述溶液，加入0.9mL蒸馏水，混匀，即为0.1μmol/mL DHA。
产品说明：AsA作为植物细胞一个重要生理指标，其AsA的含量、氧化还原状态(AsA/DHA比率)及其合成与代谢相关酶类活性的变化涉及植物对一系列环境胁迫的响应。
DHA是AsA的可逆的氧化型，在生物体内，与抗坏血酸共同组成氧化还原系统，具有电子受体的作用。
DTT还原DHA生成AsA，通过测定体系中AsA的生成速率，即可计算出DHA含量。
自备仪器和用品：低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样品中DHA提取：称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g4℃离心20min，取上清液待测。
二、DHA测定操作：1.紫外分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。
2.试剂一在25℃水浴锅中预热30min以上。
3.标准管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL标准液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A1，A2，△A标准管=A2-A1。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板加入20μL上清液、160μL预热的试剂一和20μL试剂二，迅速混匀后于265nm比色，记录10s和130s的吸光值，分别为A3，A4，△A测定管=A4-A3。
酶法检测试剂盒举例5个酶法检测试剂盒是一种用于测定特定物质或分子在生物样本中的含量或活性的工具。
它们通常由一系列试剂和材料组成，可以通过酶反应来测量目标物质的浓度或活性。
以下是五个常见的酶法检测试剂盒的举例：1. 葡萄糖酸脱氢酶（G6PD）检测试剂盒：G6PD是一种关键的酶，参与细胞内葡萄糖代谢过程中NADPH的产生。
G6PD缺乏会导致溶血性贫血等疾病。
G6PD检测试剂盒可用于测定血液样本中G6PD活性水平，从而帮助诊断和监测相关疾病。
2. 脯氨酸氧化酶（PAO）检测试剂盒：PAO是一种参与氨基酸代谢的重要酶，可以将脯氨酸转化为丙酮酸和亚硝胺。
PAO检测试剂盒可用于测定尿液中PAO活性水平，从而评估肾功能和相关代谢紊乱。
3. 乳酸脱氢酶（LDH）检测试剂盒：LDH是一种广泛存在于各种组织和细胞中的酶，参与乳酸代谢过程。
LDH检测试剂盒可用于测定血液、尿液或其他体液中LDH活性水平，从而帮助诊断和监测心肌梗死、肝病、恶性肿瘤等疾病。
4. 超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒：SOD是一种抗氧化酶，能够清除细胞内的超氧阴离子自由基。
SOD 检测试剂盒可用于测定血液或组织样本中SOD活性水平，从而评估抗氧化能力和相关疾病的风险。
5. 淀粉酶（AMY）检测试剂盒：AMY是一种参与淀粉消化的消化酶，能够将淀粉分解为葡萄糖。
AMY检测试剂盒可用于测定食物样本或消化系统分泌物中AMY活性水平，从而评估消化功能和相关消化系统疾病。
以上是五个常见的酶法检测试剂盒的举例。
这些测试剂盒在医学、生物学研究和临床诊断中起着重要的作用，帮助我们了解生物样本中特定物质或分子的含量或活性水平，从而为疾病诊断、治疗和监测提供有力支持。
小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，组织匀浆及相关液体样本中苹果酸脱氢酶(MDH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)水平。
用纯化的小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入苹果酸脱氢酶(MDH)，再与HRP标记的苹果酸脱氢酶(MDH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的苹果酸脱氢酶(MDH)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠苹果酸脱氢酶(MDH)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：135 U/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
苹果酸含量检测试剂盒（WST 显色法）说明书可见分光光度法货号：BC5490 规格：50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 规格 保存条件 提取液一 液体30 mL×1瓶 2-8℃保存 提取液二 液体5 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体20 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×1瓶 -20℃保存 试剂三 液体12 mL×2瓶 2-8℃保存 试剂四 液体50 μL×1支 2-8℃保存 试剂四稀释液 液体8 mL×1瓶 2-8℃保存 标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1. 试剂二：临用前加入13 mL 蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃保存4周；2. 试剂四：临用前按试剂四：试剂四稀释液=10μL ：1mL （约8T ）的比例稀释试剂四备用，现用现配，用多少配多少；3. 标准品：100μmol/mL 苹果酸标准液。
临用前取20μL 100μmol/mL 苹果酸标准液，加入480μL 蒸馏水，充分混匀，配制成4μmol/mL 苹果酸标准液；再取100μL 4μmol/mL 苹果酸标准液，加入900μL 蒸馏水，充分混匀，配制成0.4μmol/mL 苹果酸标准液使用，现配现用。
（实验中每管需要100μL ，为减小实验误差，故配制大体积）。
产品说明：L-苹果酸是三羧酸循环的中间产物，也是苹果酸-天冬氨酸穿梭的重要组成部分。
苹果酸-天冬氨酸穿梭是氧化磷酸化的还原当量跨线粒体膜运输过程所必需的。
在低等生物体内，苹果酸在苹果乳酸发酵的过程中转化为乳酸，同时产生CO 2。
苹果酸常用作食品和制药工业的添加剂，苹果酸的定量分析在啤酒、葡萄酒、奶酪和水果生产领域也具有至关重要的作用。
苹果酸脱氢酶催化苹果酸和NAD 生成草酰乙酸、NADH 和NH 4+，在1-mPMS 作用下，WST-1可与NADH 反应，产生水溶性Formazan ，在450nm 下有最大吸收峰，据此可计算苹果酸含量。
专利名称：一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：李彬先,孟宪玲,张晓梅,王丹峰,吴翠翠,孙亚臣,石宏,董理
申请号：CN201711137382.2
申请日：20171116
公开号：CN107841526A
公开日：
20180327
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于生物检测技术领域，公开了一种苹果酸脱氢酶诊断试剂盒，设置有相互粘贴的第一箱体和第二箱体；所述第一箱体的中部铆接有转轴，所述转轴上套装有转盘，所述转盘的外侧设置有若干检测盒；所述检测盒的内侧设置有药品盒；所述第二箱体内卡装有多个注射装置，所述第一箱体的顶部焊接有检测池，所述检测池的上端套装有药品添加盒。
该试剂盒敏感性高，特异性强，重复性好。
由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素吗，适于测定不同生物样品内的苹果酸脱氢酶活性，如细胞和组织培养上清液以及纯化所得的线粒体。
申请人：北华大学
地址：132000 吉林省吉林市滨江东路3999号
国籍：CN
代理机构：北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)
代理人：李静
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苹果酸脱氢酶（MDH）的测定方法及在肝炎中诊断价值的研究摘要：目的苹果酸脱氢酶（MDH）的测定方法——速率法。
进一步探讨、研究MDH在肝炎诊断中的意义和价值。
方法建立了苹果酸脱氢酶的检测方法——速率法，并制备成试剂盒。
同时对120例健康体检者、120例肝炎病人和65例肝癌、65例肝硬化病人同时进行了MDH的检测分析。
结果肝炎病人血清中苹果酸脱氢酶明显升高，是对照组的5.2倍。
急性肝坏死时升高的更突出，是对照组的11.2倍，经统计学处理P<0.01。
肝炎的初期和病情的极期升高的幅度与严重性相关。
结论用速率法判定MDH快速、简便、准确、试剂样品的用量小，可用于各型自动生化分析仪。
MDH是肝炎的诊断、判断病情、估计愈后、观察疗效的良好指标，可提高肝炎的早期诊断率。
关键词：苹果酸脱氢酶；速率法；肝炎；肝硬化苹果酸脱氢酶发现于1910年，肝脏含量丰富，到目前为止分为线粒体中的M-MDH和位于胞浆中的C-MDH两种[1]，国外有人报道临床意义和测定方法，国内报道很少，临床应用主要用于肝炎的检测。
测定方法为分光光度法和比色法。
速率法未见有报道及试剂盒提供。
我们于2005年起对MDH的检测方法和对肝炎的诊断价值进行研究。
旨在于为肝炎的诊断提供新的敏感可靠的指标。
弥补肝功能常规组项的缺陷。
1 材料与方法1.1 试剂盒测定的原理在 340nm波长下，测定每分钟MDH吸光度的变化值（AA/分钟），计算MDH的活性。
1.2 试剂盒测定的方法及主要参数1.2.1 测定方法：速率法1.2.2 主要参数：反应温度37℃，测定时间60s，延迟时间：60s。
试剂用量250μL，样品用量25μL，反应波长340nm，反应方向：正反应。
1.3 研究对象1.3.1 正常对照组从健康体检中取健康人120例，年龄在28~74岁，平均年龄46.8岁，其中男58人，女62人。
1.3.2 试验组：120例，根据肝炎分型九项、肝功能检查、超声、临床症状体症诊断为肝炎的住院病人，不伴有它疾病，年龄30~75岁，平均年龄47.78岁，其中男59人，女61人。
NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书微量法NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC1055规格:100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，在4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入600μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。
草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。
因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH 分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：1、酶标仪/紫外分光光度计调节波长至340nm，蒸馏水调零。
DL －苹果酸检测方法介绍——科标检测OHOOH HO OC 4H 6O 5科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍：【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸及DL－苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
沙门菌CWDM_S苹果酸脱氢酶的检测江滟;王和【期刊名称】《中国微生态学杂志》【年(卷),期】2001(13)4【摘要】目的 :了解沙门菌细胞壁缺陷突变株 (CWDMS)的生物氧化及遗传特点和探讨细菌细胞壁缺陷变异的性质与机制。
方法 :采用 PAGE电泳法和分光光度法检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌及其CWDMS和伤寒沙门菌粗糙型的苹果酸脱氢酶 (MDH)同工酶的活性与类型。
结果 :伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的细菌型和伤寒沙门菌粗糙型经 PAGE电泳可见一条 MDH同工酶带 ,CWDMS电泳后可见两条MDH同酶带 ,在 CWDMS的 MDH中有一条泳动速率与细菌型及粗糙型的相同 ,另一条则较快。
分光光度法检测证实 ,细菌型与粗糙型的 MDH活性相似 ,CWDMS的 MDH活性则明显较低。
结论 :CWDMS保留了与其亲代细菌型一致的 MDH和形成了一种新的 MDH,并且其 MDH的活性已显著降低。
【总页数】2页(P216-217)【关键词】沙门菌属;细菌L型;苹果酸脱氢酶同工酶;检测【作者】江滟;王和【作者单位】贵阳医学院微生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R378.22【相关文献】1.细胞壁缺陷对伤寒沙门菌苹果酸脱氢酶活性影响的实验观察 [J], 江滟;王和2.实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1实验室检测能力验证结果评价 [J], 王洪;魏杰;于鹏丽;巩薇;岳秉飞3.大肠埃希菌与沙门菌纸基微流控联合检测试纸在沙门菌检测中的应用 [J], 郑晓风;郑晓琴;石莉;刘英玉;姚刚;张晓红4.殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定 [J], 刘晓红;何钟勤;孙晓宇;高心;薛莹;李倪娜5.大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)苹果酸脱氢酶(mdh)基因的插入失活[J], 汪清胤;黄永芬;David W.Emerich因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
殊异韦荣菌苹果酸脱氢酶的基因克隆及其重组蛋白的表达和活性测定刘晓红;何钟勤;孙晓宇;高心;薛莹;李倪娜【期刊名称】《口腔医学研究》【年(卷),期】2013(29)11【摘要】目的:对殊异韦荣菌(V·dispar)苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,MDH)基因进行克隆和重组表达,并对其重组蛋白进行纯化和活性测定。
方法:提取殊异韦荣菌基因组DNA,PCR扩增MDH同源区序列片段,克隆入pET-28a载体并转化至大肠杆菌DH5α,酶切及PCR鉴定,测序。
将重组质粒转入BL21(DE3)中,选择最佳表达条件,提纯及测定活性。
结果:PCR扩增产物特异,全长1139bp。
测序结果包含MDH基因,并与GenBank中所报道的大肠杆菌MDH基因序列进行对比分析,其同源性为99%。
MDH纯化后的蛋白活性值为0.4403U/mL。
结论:成功克隆殊异韦荣菌MDH基因,并通过基因序列和氨基酸分析证明其具有完整的阅读框架。
还获得了重组表达MDH蛋白的最适表达条件,并测出韦荣菌苹果酸脱氢酶的活性。
【总页数】5页(P1008-1011)【关键词】韦荣菌;苹果酸脱氢酶;基因克隆;重组表达;活性测定【作者】刘晓红;何钟勤;孙晓宇;高心;薛莹;李倪娜【作者单位】吉林大学口腔医学院牙体牙髓病科;吉林大学中日联谊医院口腔科;齐齐哈尔医学院附属第三医院口腔科【正文语种】中文【中图分类】R781.2【相关文献】1.华支睾吸虫线粒体苹果酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的功能鉴定 [J], 徐劲;郑南才;吴忠道;陈守义;胡旭初;应康;余新炳2.殊异韦荣菌中乳酸脱氢酶重组蛋白的表达、纯化及活性分析 [J], 何钟勤;钟丞;高心;薛莹;孙晓宇;刘晓红3.殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化 [J], 孙晓宇;何钟勤;刘晓红;高心;钟丞;薛莹4.殊异韦荣菌乳酸脱氢酶基因的克隆及鉴定 [J], 庾桦;何钟勤;高心;钟丞;李倪娜;薛莹;王志刚5.苹果细胞质型苹果酸脱氢酶基因克隆、表达及酶活性分析 [J], 姚玉新;郝玉金;李明;庞明利;刘志;翟衡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA微板法)
简介：
苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase, MDH)是合成苹果酸的关键酶之一，催化苹果酸和草酰乙酸(OAA)的相互转化，参与众多生理代谢途径如TCA循环C4循环脂肪酸的氧化呼吸作用氮同化等，因此MDH在植物的生长发育中发挥着重要作用，广泛存在于线粒体、细菌细胞膜上，为三羧酸循环中的一种酶，由于酶的来源不同，其某些性质也不尽相同。
MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。
根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，细菌中通常只含有NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。
Leagene苹果酸脱氢酶(MDH)检测试剂盒(OAA微板法)检测原理是在弱碱条件下，以草酰乙酸(OAA)作为显色底物，OAA在MDH催化下被NADH还原为苹果酸(Mal)，每催化1分子OAA消耗1分子NADH，通过分光光度比色法(酶标仪)测定处吸光度的变化，计算出NADH的消耗速率进一步推算出苹果酸脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中苹果酸脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、研钵或匀浆器
2、离心管或试管
3、低温离心机
4、96孔板
5、酶标仪
操作步骤(仅供参考)：编号
名称TE0461
100T
Storage
试剂(A): MDH Lysis buffer 250ml 4℃避光试剂(B): PMSF 1ml -20℃
试剂(C): MDH Assay buffer20ml RT
试剂(D): NADH 1支-20℃
试剂(E): ddH2O 10ml RT
使用说明书1份
1、配制MDH Lysis buffer工作液：取出MDH Lysis buffer和PMSF，恢复至室温，MDH
Lysis buffer：PMSF按一定的比例混合，混匀，即配即用，不易久置，否则蛋白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
2、准备样品：
①植物样品：取植物组织(根系)清洗干净，切碎，植物组织：MDH Lysis buffer工作液按一定比例，加入预冷的MDH Lysis buffer工作液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
，离心，留取上清液即为苹果酸脱氢酶粗提液。
短期4℃保存待用，长期-20℃冻存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苹果酸脱氢酶的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用MDH Lysis buffer工作液进行适当匀浆，离心，取上清液，-20℃冻存，用于苹果酸脱氢酶的检测。
④高活性样品：如果样品中含有较高活性的苹果酸脱氢酶，可以使用MDH Lysis buffer 工作液进行恰当的稀释。
3、配制NADH工作液：取出NADH，恢复至室温，准确溶解于ddH2O，混匀，4℃预冷
备用。
-20℃保存1W有效。
注意：该NADH工作液为过量。
4、MDH加样：按照下表设置对照孔(备选，一般可以不设对照孔)、测定孔，溶液应按照
顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的苹果酸脱氢酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
加入物(μl) 对照孔(备选) 测定孔
MDH Lysis buffer工作液 5 —
待测样品— 5
MDH Assay buffer 180 180
5、MDH测定：加入NADH工作液，立即以酶标仪测定吸光度(记为A0)并同时计时，每
隔30s测定一次处吸光度，其中至1min时吸光度记为A1，记录其变化。
Leagene建议加入NADH工作液后立即检测，加样时间越短越好，其反应基本在1-3min内，其后反应趋于平缓。
注意：该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADH的消耗速率，再进一步推算出苹果酸脱氢酶的量。
因此加入NADH工作液立即计时很重要，每次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
计算：
苹果酸脱氢酶活性：每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位。
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
液体样品MDH(U/ml·min)=ΔA/(0.01×t×0.005)
式中：ΔA=A0−A1
0.01=每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位
t=1=检测时间(min)
0.005=待测样品体积(ml)
组织样品MDH(U/g·min)=ΔA/(0.01×t×W)
式中：ΔA=A0−A1
0.01=每分钟NADH氧化吸光度变化0.01为1个酶活力单位
t=1=检测时间(min)
W=待测样品鲜重或干重(g)
注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于-20-80℃。
2、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑分光光度计的最小检
测体积。
4、该反应系统是利用速率变化，求得相应OD的变化，进而推算出NADH的消耗速率，
再进一步推算出苹果酸脱氢酶的量。
因此加入NADH工作液立即计时很重要，每
次检测指标不宜过多，否则有可能由于操作时间有差异进而导致结果偏差。
5、酶液的稀释度应尽量控制在A340/min下降范围在0.1-0.2之间，以便减少实验误差。
6、ΔA为反应最初1min内340nm处吸光度变化的绝对量，如有必要可减去对照液最初
1min的吸光度变化量。
7、所测样本的浓度过高，应用MDH Lysis buffer工作液稀释样品后重新测定。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
NR0001 DEPC处理水(0.1%)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。
