乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)

乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒一站式解决方案乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LD 或LDH ，EC1.1.1.27 ）是一类NAD依赖性激酶，有LDHA、LDHB、LDHC三种亚基，可构成6种四聚体同工酶。

动物乳酸脱氢酶是由4个亚单位组成的四聚体，常见的A、B 两种亚基构成的5种LDH同工酶（LDH1-5），C亚基则仅组成一种LDH同工酶即LDH-C4。

乳酸脱氢酶为含锌离子的金属蛋白，分子量为135-140kD，是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一，可催化丙酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应，也可催化相关的α-酮酸。

LDH广泛存在于人体组织中，以肾脏含量最高，其次是心肌和骨肌。

红细胞内LDH约为正常血清的100倍。

一、乳酸脱氢酶分类1.根据结合辅酶的不同，微生物体一般包含两种乳酸脱氢酶，NAD-依赖型乳酸脱氢酶（NAD-dependent lactate dehydrogenases，nLDHs）和NAD-非依赖型乳酸脱氢酶（NAD-independent lactate dehydrogenases，iLDHs）两大类。

2.按其催化底物的构型不同，NAD-依赖型乳酸脱氢酶可以分为NAD依赖型-L-乳酸脱氢酶（L-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）和NAD依赖型-D-乳酸脱氢酶（D-NAD-依赖型乳酸脱氢酶）两大类，分别催化丙酮酸合成L-乳酸和D-乳酸。

3.根据天然电子受体的不同，可以将NAD-非依赖型乳酸脱氢酶分为三类。

第一类为膜蛋白，利用膜醌类作为外部的电子受体；第二类直接利用O2作为电子受体，根据氧化终产物的不同，又将其细分为乳酸氧化酶（Lactate oxidase，LOX）和乳酸单氧酶（Lactate monooxygenases，LMO），其中前者产生丙酮酸和H2O2，而后者产生乙酸、CO2和H2O；第三类是硫胺b2（flavocytochrome b2），存在于真菌中，它天然的电子受体为细胞色素c。

乳酸脱氢酶测定试剂盒（乳酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中乳酸脱氢酶的活性。

分说明1.1 规格试剂1:3×60 mL，试剂2:1×45 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×20 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×12 mL；试剂1:2×60 mL，试剂2:2×15 mL；试剂1:1×40 mL，试剂2:1×10 mL；试剂1:1×4L，试剂2:1×1L；试剂1:1×16L，试剂2:1×4L。

1.2主要组成成分试剂1主要组分：试剂2主要组分：2.1 净含量应不低于试剂瓶标示装量。

2.2 外观试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液。

外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.3 试剂空白2.3.1 试剂空白吸光度在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.50。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，用生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率(△A/min)应不大于0.002。

2.4 分析灵敏度测试300U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0085。

2.5 准确度用参考物质（GBW09177）对试剂（盒）进行测试，相对偏差应不超过±10%。

2.6 重复性用血清样品或质控样品重复测试所得结果的重复性（变异系数，CV）应不大于5%。

2.7 线性2.7.1 在[25,750]U/L区间内，线性相关系数r应不小于0.990；2.7.2 [25,100）U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；[101,750]U/L区间内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.8 批间差试剂（盒）批间相对极差应不大于10％。

乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。

本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。

同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。

细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。

通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。

LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。

LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。

本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。

吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。

该酶联反应原理的示意图如下：可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。

一个试剂盒可进行100次检测。

包装清单：产品编号产品名称包装C0016-1 LDH释放试剂 1.5mlC0016-2 乳酸溶液2mlC0016-3 酶溶液1ml×2C0016-4 INT溶液(10X) 0.2mlC0016-5 INT稀释液2ml—说明书1份保存条件：-20℃保存，一年有效。

乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒
（乳酸底物法）
2.1外观和性状
外观和性状应符合表2要求。

表2 试剂盒内各组分的外观性状
2.2试剂空白
2.2.1试剂空白吸光度
试剂以生理盐水为空白时，在温度37℃、波长340nm、光径1.0 cm 条件下，吸光度≤0.50。

2.2.2试剂空白吸光度变化率
试剂以生理盐水为空白时，在温度37℃、波长340nm、光径1.0 cm 条件下，吸光度变化率≤0.002。

2.3分析灵敏度
试剂盒测试浓度为100U/L被测物时，吸光度变化率≥0.004。

2.4线性范围
2.4.1试剂盒在25 ~750U/L区间（范围）内，其回归系数r≥0.990。

2.4.2相对偏差或绝对偏差应符合表3 要求。

表3 相对偏差或绝对偏差
2.5精密度
2.5.1试剂盒重复性CV 值应≤5%。

2.5.2试剂盒批间相对极差（R）应≤10.0%。

2.6准确度
相对偏差（Bias%）应在参考物质靶值±10%以内。

2.7液体装量
试剂盒不同规格的净含量应不少于其标示量。

乳酸（LAC）测定试剂盒（乳酸氧化酶法）适用范围：该试剂盒用于体外定量测定人血浆中乳酸的浓度。

1.1 产品规格1.2 组成成分该试剂盒由试剂1（R1）、校准品（选配）和质控品（选配）组成。

1.2.1试剂组成试剂1: Tris缓冲液≥50.0mmol/L 乳酸氧化酶（LOX）≥0.2KU/L过氧化物酶（POD）≥0.5KU/L4-氨基安替比林≥0.4mmol/LTOPS0.5mmol/ L1.2.2 校准品组成乳酸目标浓度：2.50mmol/L该校准品为水基质液体校准品1.2.3质控品组成水平1：乳酸目标浓度： 1.50mmol/L水平2：乳酸目标浓度： 5.00mmol/L该质控品为水基质液体质控品2.1 外观a) R1应为无色至淡红色溶液，无混浊，无未溶解物。

b) 校准品应为无色至淡黄色溶液，无混浊，无未溶解物。

c) 质控品应为无色至淡黄色溶液，无混浊，无未溶解物。

2.2 净含量液体组分不少于标示值。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度应不大于0.500。

2.4 分析灵敏度LAC试剂盒测定浓度5.00mmol/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不小于0.200。

2.5 准确度回收试验：测定回收率，应在85%-115%之间。

2.6 精密度2.6.1重复性变异系数应不大于5%。

2.6.2批间差批间相对极差（R）应不大于10%。

2.7 线性在（0,13.30] mmol/L范围内，LAC试剂盒的线性相关系数r应不低于0.9900；在（0,2.00]范围内绝对偏差应不超过0.30mmol/L，在(2.00,13.30]范围内相对偏差应不超过±15%。

2.8 质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.9校准品溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供乳酸校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。

乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒说明书（乳酸→丙酮酸连续监测法）【产品名称】中文名称：乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒（乳酸→丙酮酸连续监测法）英文名称：LACTATE DEHYDROGENASE REAGENT KIT（L→P method）【包装规格】50ml/盒（R-1：40ml×1，R-2：10ml×1），240ml/盒（R-1：64ml×3，R-2：48ml×1），250ml/盒（R-1：40ml×5，R-2：10ml×5），375ml/盒（R-1：100ml×3，R-2：75ml×1），2500ml/盒（R-1：500ml×4，R-2：500ml×1）。

【预期用途】本试剂盒用以测定人血清乳酸脱氢酶(LDH)的活力。

【检验原理】乳酸脱氢酶在催化乳酸生成丙酮酸的同时将NAD+还原成NADH。

通过测定NADH在340nm处吸光度增加的速度可求得乳酸脱氢酶的活力。

LDHL-乳酸+ NAD+─────→丙酮酸+ NADH + H+【主要组成成份】试剂成份含量R-1 L-乳酸锂76mmol/LR-2 NAD ≥31mmol/l *不同批号试剂盒中的各组份，经检验符合产品性能指标的，可以互换。

【储存条件及有效期】本试剂盒在2-8℃下避光保存可稳定一年；试剂R-1、R-2开启后在2-8℃避光保存可稳定一个月。

【适用仪器】本试剂适用于日立7020型、日立7060型、日立7080型、日立7150型、日立7170型、日立7180型、日立7600（D）型、日立7600（P）型自动分析仪以及奥林巴斯AU600、AU2700、东芝-雅培、BECKMAN CX系列、BECKMAN LX-20型等自动分析仪。

本试剂在日立7020自动分析仪上已通过第三方验证，并备有以上各种自动分析仪的参数可供参考。

【样本要求】空腹血清，保存于室温可稳定3小时，保存于0℃以下可稳定1周。

乳酸脱氢酶测定试剂盒（乳酸底物法）
适用范围：本产品适用于体外定量测定人血清中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。

1.1 产品规格
1.2 主要组成成分
2.1 外观
2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无破损；
2.1.2试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；
2.1.3试剂2为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

2.2 净含量
净含量不低于标示值。

2.3 试剂空白
2.3.1空白吸光度
在主波长340nm、副波长405nm、37℃条件下,空白吸光度应小于0.5。

2.3.2空白吸光度变化率
在主波长340nm、副波长405nm、37℃条件下，空白吸光度变化率不大于0.002/min。

2.4 线性范围
(25,1000)U/L范围内，相关系数≥0.990；
(25,100]U/L范围内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；
(100,1000)U/L范围内，线性相对偏差应不超过±10%。

2.5 分析灵敏度
在产品说明书规定参数设定条件下，换算为测定浓度为300U/L的样本, 吸光度变化率△A/min应不小于0.015。

2.6 精密度
2.6.1批内重复性
CV≤5.0%。

2.6.2 批间差
相对极差R≤10.0%。

2.7 准确度
测定参考物质GBW(E)090593，测定结果应不超过标示值的±10%。

2.8 稳定性
未开封试剂2℃~8℃储存，可稳定12个月。

取到效期后2个月内产品进行检测，检测结果应满足2.4和2.7的规定。

乳酸测定试剂盒（乳酸氧化酶法）说明书【产品名称】通用名称：乳酸测定试剂盒（乳酸氧化酶法）英文名称：lactic acid Assay Kit（LAC）【包装规格】R1：1⨯40ml、R2：1⨯10ml；R1：2⨯40ml、R2：2⨯10ml；R1：2⨯60ml、R2：2⨯15ml；校准品（选配）：1⨯2ml（1个水平）。

【预期用途】用于体外定量测定人血浆中乳酸的含量。

临床上主要用于代谢性酸中毒的辅助诊断。

【检验原理】乳酸在乳酸氧化酶（lactate oxidase）的催化下，生成丙酮酸和过氧化氢，过氧化氢、4—氨基安替比林、4—氯酚反应生成紫红色化合物，在546nm处有最大吸收峰，其吸光强度与样本中乳酸含量成正比。

乳酸氧化酶乳酸＋O2—————〉丙酮酸＋H2O2过氧化物酶H2O2＋4—氯酚＋4—氨基安替比林—————〉紫色产物＋2H2O【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。

试剂R1:4-氯酚2.1mmol/L、过氧化物酶2KU/L；试剂R2：4—氨基安替比林3.5mmol/L 、乳酸酶3KU/L；校准品:含乳酸水溶液。

校准品可溯源至Randox 参考品CAL2351，注：浓度见每批瓶标示。

不同批号试剂盒中各组分不可互换。

【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期，有效期365天。

试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定30天。

备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。

【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。

【样本要求】1、新鲜空腹血浆。

血液从静脉处收集，存于冰浴，血浆在30分钟内离心，并在1h内上机测定，延迟离心会使乳酸值升高。

离心后2℃～8℃可保存3小时。

2、为保证样本各组分稳定，新鲜采集的血浆需用抗凝剂EDTA氟化钠处理。

【检验方法】（1）双试剂无需配制，直接使用。

1、方法依据：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒（IFCC法）测定方法2、适用范围：适用于人血清或血浆乳酸脱氢酶(LDH)的测定。

3、试剂仪器：3.1 试剂：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司原装试剂盒。

3.2未开启的试剂盒避光保存于2℃～8℃有效期为一年。

试剂开瓶后应避光保存，在2℃～8℃可稳定30天。

试剂不可冰冻。

3.3 仪器：迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪.4、操作程序4.1方法原理LDH 催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH，NADH 的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活性成正比。

LDH乳酸+ NAD+ + H2O 丙酮酸+ NADH + H+4.2样本要求新鲜血清、肝素抗凝或EDTA抗凝血浆样本，采集后及时测定，应避免溶血和污染。

4.3上机操作4.3.1试剂装载、校准、样品和质控血清分析操作详见“《迈瑞BS-2000M全自动生化分析仪标准操作、维护、保养规程》”。

4.3.2 校准：4.3.2.1 标准液的准备：校准品使用深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司配套冻干品，按说明书要求稀释后分装，-20℃冷冻保存，用前提前15分钟从冰箱中取出，复溶到室温后上机检测。

4.3.2.2 校准程序：首次使用校准。

当有以下情况时需重新校准：1）换试剂批号或出现质控漂移时；2）当仪器做完保养后；3）仪器进行零件更换时。

每次试验前用准备好的校准品进行校准，校准通过后进行检测。

4.3.2.3 质控：在标本开始之前做质控，质控通过后方能进行标本的检测。

4.3.3 测试基本参数4.4参考范围115～220 U/L （注：各实验室应有自己的参考范围。

）4.5 方法评价线性范围：4～1000U/L内。

当样本测定值超过上限时，应将样本用生理盐水稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。

精密度：批内变异系数：≤ 3.0%；批间变异系数：≤5.0%。

分析灵敏度：本试剂盒的检测低限不高于4 U/L。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810299062.5(22)申请日 2018.04.04(71)申请人 浙江力耐得传动科技有限公司地址 312300 浙江省绍兴市上虞区百官街道城东工业区(72)发明人 李丰盛　倪建芬　黄丽珍　(51)Int.Cl.C12Q 1/28(2006.01)C12Q 1/26(2006.01)(54)发明名称一种高灵敏的乳酸测定方法及乳酸检测试剂盒(57)摘要本发明涉及一种高灵敏度测定乳酸的方法，同时本发明还涉及乳酸检测试剂盒，属于医学检验、乳酸菌发酵食品测定技术领域。

乳酸检测试剂是用于高原反应、运动员训练、重症糖尿病，以及其它原因引起的机体酸中毒时的重要检测指标，也是乳酸发酵食品检测的一项指标。

本方法是用原乳酸氧化酶法，另外再引入丙酮酸氧化酶，使一分子的乳酸经过乳酸氧化酶和丙酮酸氧化酶反应，能生成两分子的过氧化氢，再经Trinder反应生成红色，在波长500～600nm下检测吸光度，计算出乳酸的含量。

该方法灵敏度高，重复性好，线性宽，稳定性好，很实用于常规实验室应用。

权利要求书2页 说明书8页 附图1页CN 110343740 A 2019.10.18C N 110343740A1.一种测定乳酸的方法，步骤如下：1).将样品与主要由乳酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、磷酸盐、过氧化物酶、4-氨基安替比林、色原组成的试剂混合，使之发生如下反应：2).检测最终反应物在主波长500～600nm吸光度，测算出乳酸的含量。

2.根据权利要求1所述测定乳酸的方法，其特征在于：被测样品与试剂的比例控制在1/ 80至1/120。

3.一种乳酸检测试剂盒，其特征在于：包括试剂一和试剂二；试剂一：试剂二：所述试剂一与试剂二的比为1/1到4/1。

4.根据权利要求3所述乳酸检测试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为醋酸盐、甘氨酸盐、磷酸盐、三羟甲基氨基甲烷、2-吗啉乙磺酸、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、4-羟乙基哌嗪丙磺酸中的一种或多种。