硝态氮检测试剂盒(磺胺微板法)

COD、总氮、氨氮、硝氮测定方法重铬酸钾法测定COD一、方法的适用范围：用0.25mol/L的重铬酸钾溶液可测定大于50mg/L的Cod值，未经稀释的水样的测定上限是700mg/L。

用0.025mol/L的重铬酸钾溶液可测定5-50mg/L的Cod值。

二、仪器：1、加热管、配套冷凝管2、COD恒温加热器JK205-A3、250ML锥形瓶、20mL移液管4、50Ml酸式滴定管三、试剂：1、重铬酸钾标准溶液（0.25Mol/L）:称取预先在120°烘干2H的基准或优级纯重铬酸钾12.258g溶于水中，移入1000ml容量瓶，稀释至标线，摇匀。

2、试亚铁灵指示液：称取1.458g邻菲罗啉（C12H8N2·H2O），0.695g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)溶于水中，稀释至100ml，贮于棕色瓶中。

3、硫酸亚铁铵[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]标准溶液（约0.1mol/L）：称取39.5g硫酸亚铁铵溶于水中，边搅拌边缓慢加入20ml浓硫酸，冷却后移入1000ml 容量瓶中，加水稀释至标线，摇匀。

临用前，用重铬酸钾标准溶液标定。

注：标定方法：于空白试验滴定结束后的溶液中，准确加入10.00ml、0.25mol/l。

重铬酸钾溶液，混匀，用硫酸亚铁铵标准液标定，记录消耗的标准液的体积V标4、硫酸-硫酸银溶液：于2500ml浓硫酸中加入25g硫酸银。

放置1-2d,使其溶解。

（如无2500ml容器，可在500ml浓硫酸中加入5g硫酸银）。

5、硫酸汞：粉末四、实验步骤：1、取约0.4g硫酸汞于加热管中，用移液管取20.00ml水样于加热管中，加入10.00ml 重铬酸钾标准溶液，加沸石几粒，晃动均匀，并用纯净水作空白样。

2、于加热管中加入30ml的硫酸-硫酸银溶液，盖上冷凝管，放于恒温加热器上，179度加热2h（待温度上升为179°后开始计时2h）。

3、待冷却后加入90ml纯净水（可先用少许纯净水由冷凝管上部缓缓加入，冲洗管壁后移入锥形瓶中，并用剩余纯净水冲洗加热管），移入锥形瓶内，加3滴试亚铁灵指示剂，用硫酸亚铁铵滴定，至溶液由黄绿色变为酒红色，记录消耗的体积，V空白、V1、V2、、、、4、用滴定后的空白样加入10mL的重铬酸钾，滴定至变色，记录数据Ｖ标，用来标定硫酸亚铁铵标准溶液的浓度。

植物体内硝态氮含量的测定
测定植物体内硝态氮含量的方法可以通过以下步骤进行：
1. 样品准备：选择一定数量的植物组织或器官作为样品，如根、茎、叶等。

将样品收集并保持新鲜。

2. 样品处理：将样品在离子交换树脂柱中进行前处理，使用硝化态氮还原剂将硝态氮还原为氨。

3. 反应体系：将还原后的样品与含有硫酚酸、过硫酸铵等试剂的反应体系混合，形成可测定的化合物。

4. 反应媒介：选择合适的反应媒介来测定反应产生的化合物，如使用紫外光谱法、分光光度法、电化学法等。

5. 检测与测量：使用相应的仪器或设备进行测量和记录，根据每种方法的特点和原理，选择合适的测量方式。

值得注意的是，硝态氮含量的测定方法可能因不同的植物物种和研究目的而有所差异，因此建议在实施前进行相关的文献调研和方法优化。

土壤硝态氮测定方法转氨酶、硝态氮、铵态氮等测定方法六、氮含量（硝酸盐、亚硝酸盐、游离氨基酸、铵态氮等）的测定：（2g）样品提取液的提取: 称取新鲜植物组织2g，加入15ml无离子水研磨成匀浆，置于45℃振荡机中摇动浸提（或超声波）lh后用5ml无离子水冲洗干净，然后离心或过滤(如含色素需用活性炭脱色)，滤液备用。

备注（lg的经验）：可溶性糖、可溶性蛋白质、VC等需要研磨提取的简单指标也可以使用此提取液按比例测定。

1硝态氮的测定：标准氮试剂：精称KNO3 0.9021g，溶于少量重蒸无离子水中，并定容至250ml，含N 量为500µgNO3一N／ml。

5％水杨酸一硫酸溶液：称取水杨酸5g，溶于100ml浓H2SO4(比重1．84)中，搅拌溶解后贮于棕色瓶内，冰箱中至多保存l周，最好现用现配。

2mol／L NaOH溶液：称取NaOH 80g放入500ml硬质烧杯中，加入重蒸无离子水200ml，溶解后定容至l000ml。

操作方法标准曲线制作取：50ml容量瓶6只(编号)，依次加入标准氮试剂5、l0、l5、20、25、30ml，用无离子水定容，则成为50、100、l50、200、250、300 ug／ml的氮系列标准溶液；再取干沽50ml三角瓶7只，分别装入上述系列溶液0．2ml，剩下的1只三角瓶加入无离水0.2ml(作为O 点)；然后分别加入5％水杨酸一硫酸溶液0.8ml，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液l9ml，混匀。

冷却后利用751分光光度计，于410nm下比色，记录光密度(OD)值；并以OD 值为纵座标，以标准氮(0、50、l00、150、200、250、300 ug)为横座标，绘制一条标准曲线(通过原点的直线)。

0.1ml滤液＋0.4ml 5％水杨酸一硫酸溶液，混匀静置20--30min(显色)；最后加入2mol／L NaOH溶液9.5ml，混匀。

土壤硝态氮含量检测试剂盒（微量法）使用说明注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC0045规格：100T/96S产品内容：试剂一：粉剂×2瓶，4℃避光保存。

临用前根据用量每瓶加1mL浓硫酸充分溶解。

试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

产品说明：硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素，土壤中的有机物分解生成铵盐，被氧化后变为硝态氮。

土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接关系到作物的产量与品质。

在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。

自备实验用品及仪器：蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、振荡仪。

一、样本处理按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g新鲜土样，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，置于振荡仪中振荡提取1h，25℃，10000g离心10min，取上清待测。

二、测定操作表空白管测定管样本（μL）10蒸馏水（μL10试剂一（μL）2020充分混匀，25℃静置30min试剂二（μL）475475混匀，旋涡震荡，使出现的沉淀充分溶解，取0.2mL于微量石英比色皿/96孔板中测定410nm处吸光值A，△A=A测定管-A空白管三、计算公式a、用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997NO3-—N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷0.0156÷（W÷V样总）=64.1×（△A-0.0073）÷WV样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，gb、用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997NO3--N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷0.0078÷（W÷V样总）=128.2×（△A-0.0073）÷WV样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g注意事项：1.硝酸根不为土壤胶体吸附，且易溶于水，很容易在土壤内部移动，所以测定此指标时应注意采样深度一致。

硝态氮检测试剂盒(磺胺比色法)简介：硝态氮是植物最主要的氮源。

植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。

测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

Leagene 硝态氮检测试剂盒(磺胺比色法)检测原理是硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基磺酸和萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮化合物，其颜色深浅与氮含量在一定范围内呈正比，以分光光度计测定处吸光度，根据NO 2-反应的标准曲线将A 520换算成NO 2-浓度，再依据上述关系式即可计算出硝态氮含量。

该试剂盒主要用于测定植物组织、血液、组织样本等中的硝态氮含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(大豆、玉米等叶柄)、血液、组织样本等3、 离心管或试管4、 离心机5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，剪碎成碎片，加入硝态氮裂解液，剧烈振荡，静置澄清后，上清液即为硝态氮提取液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于硝态氮的检测。

编号 名称TC2333 50T Storage试剂(A): NO 2-标准(100μg/ml) 1ml RT 试剂(B): 硝态氮裂解液 500ml RT 试剂(C): NO 2- Assay buffer 500ml RT 试剂(D): 磺胺混合粉剂 10gRT 避光 使用说明书1份③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的硝态氮，可以使用硝态氮裂解液或蒸馏水进行恰当的稀释。

2、配制系NO2-标准溶液：取NO2-标准(100μg/ml)按下表继续稀释：加入物(ml) 1 2 3 4 5NO2-标准(100μg/ml)0.02 0.04 0.08 0.1 0.15蒸馏水0.98 0.96 0.92 0.9 0.85NO2-浓度(μg/ml) 2 4 8 10 153、O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

铵态氮和硝态氮测定方法---副本铵态氮测量方法（2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法）1）方法原理2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。

土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

2）试剂（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O，化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4•12H2O，化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O，化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100mL 混合液中加入10 mol•L-1氢氧化钠0.5mL。

（5）2.5µg•mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg•mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg•mL –1的标准溶液备用。

3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。

4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。

硝态氮检测试剂盒(水杨酸比色法)产品：硝态氮是植物最主要的氮源。

植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。

测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

Leagene 硝态氮检测试剂盒(水杨酸比色法)检测原理是在强酸条件下，NO 3-与水杨酸反应生成硝基水杨酸，后者在碱性条件下呈黄色，其颜色深浅与氮含量在一定范围内呈正比，以分光光度计或酶标仪测定410nm 处吸光度，根据NO 3-反应的标准曲线将A 520换算成NO 3-浓度，再依据上述关系式即可计算出硝态氮含量。

该试剂盒主要用于测定植物组织、血液、组织样本等中的硝态氮含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(大豆、玉米等叶柄)、血液等3、 浓硫酸4、 离心管或试管5、 离心机6、 比色杯7、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取植物组织，清洗干净，擦干，剪碎成1-2mm 的碎片，加入蒸馏水，煮沸30min ，冷却至室温，中速滤纸过滤，补水至，即为硝态氮提取液。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，编号 名称TC2337 100T Storage试剂(A): NO 3-标准(500μg/ml) 1ml RT 试剂(B): 水杨酸3g RT 试剂(C): NO 3- Assay Buffer 500mlRT使用说明书1份用于硝态氮的检测。

③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的硝态氮，可以使用硝态氮裂解液或蒸馏水进行恰当的稀释。

2、配制水杨酸工作液：按水杨酸：浓硫酸=的比例，把水杨酸溶解于浓硫酸，4℃避光保存，1周有效。

注意：浓硫酸为强酸，请小心操作。

3、配制系NO3-标准溶液：取NO3-标准(500μg/ml)按下表继续稀释：加入物(ml) 1 2 3 4 5NO3-标准(500μg/ml)0.002 0.004 0.008 0.016 0.024蒸馏水0.098 0.096 0.092 0.084 0.076NO3-浓度(μg/ml) 10 20 40 80 1204、NO3-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。

1.土培试验栽培方法：（1）采自大田耕层土，晾干后，捡出石块和根茬，将大土块敲碎，过3mm筛。

过筛后的土壤要充分混匀。

（2）根据试验目的选取合适大小的盆钵，一般选用塑料盆，盆子大小应保持一致。

禾谷类和豆科作物可选用20c m×20cm或20c m×25cm的盆钵，玉米、烟草、高粱和棉花可选用25c m×30cm或30c m×35cm的盆钵，。

（3）装盆前先试装一两盆，保持土层表面离盆沿3cm左右。

称取土样，若须加入蛭石或珍珠岩等，应根据所需比例加入，并混匀（体积比2.5/1）。

之后将称好的肥料和土样一块再混匀（若肥料颗粒较大，应先磨碎），装盆，将土平面抚平。

播种前一天请按土壤25%的含水量浇水，静置至水分完全渗入，放置一天培养，第二日再播种。

播种后覆上1cm厚的干土，然后再浇少量水，此后出苗前尽量不浇水。

2.采样方法：采样时选取长势一致的植株，采样在早上9:00-10:00之间进行，采下的植株立即装入已做好标记的塑料袋，密封袋口，以防水分散失，然后根据分析目的先把油菜按器官分开（根、茎、叶柄、叶片），以防止硝态氮在各器官之间的转移。

根系的采集可冲洗取出。

迅速称量各器官、部位鲜重,取出测定硝酸还原酶活性的样品，其余部分，放入冰箱待用。

3..硝酸还原酶活性测定方法：（1）剪下有代表性的油菜叶片，将其切成0.5×0.5cm的小片，(叶柄切成厚0.1cm的小段),称取5份，每份0.5g。

分别装入盛有10ml反应介质的50ml三角瓶中，其中3份反应介质为10mlPH7.5的0.05M磷酸缓冲液（内源基质法），并且其中1个三角瓶在加入样品前预先加入1ml30%的三氯乙酸作为对照，另外2份反应介质为5mlPH为7.5的0.1M磷酸缓冲液和5ml0.2MKNO3（外源基质法），对照和处理的三角瓶均放入真空干燥器中，抽气，使样品完全浸入反应介质，然后取出三角瓶，转入恒温箱，30℃下在黑暗条件下培养1个小时，培养完成后，取出三角瓶，立即在处理的4个三角瓶中也加入三氯乙酸，终止反应。

硝态氮的测定
1、试剂
（1）1＋4乙酸溶液
（2）氨基磺酸铵：称取2g氨基磺酸铵，用1＋4乙酸溶液溶解并稀释为100ml （3）0.5％麝香草酚乙醇溶液：称取0.5g麝香草酚，溶于无水乙醇中并稀释至100ml
（4）硫酸银：配制方法同COD测定中一致
2、操作方法
（1）取水样1ml
（2）加入0.1ml氨基磺酸铵，静置5min
（3）从管中央加入0.2ml麝香草酚（勿使沿管壁流下）
（4）加入2.0ml硫酸银，混匀，静置5min
（5）加入8ml蒸馏水，混匀
（6）加浓氨水至出现的黄色不再加深且氯化银沉淀溶解为止（约9ml左右），加氨水时注意缓慢少量多次加入，边加边小心混匀（定容至25ml）
（7）在波长420nm处测量吸光度。

AA3流动注射仪测定铵态氮、硝态氮试剂配制方法一、铵态氮测定试剂配制方法（1）缓冲溶液将40g柠檬酸钠溶入约600ml去离子水中，稀释至1000ml。

再加入1ml Brij-35, 30%溶液，并混合均匀.每周更换。

（2）水杨酸钠溶液将40 g水杨酸钠溶入约600 ml去离子水中，加入1g硝普钠，稀释至1000 ml并混合均匀。

每周更换。

（3）二氯异氰脲酸钠溶液（DCI）将20 g氢氧化钠和3g二氯异氰脲酸钠溶入约600 ml去离子水中，稀释至1000 ml并混合均匀。

每周更换。

二、硝态氮测定试剂配制方法水样和土壤样品公用试剂（1）硫酸铜储备液将1g硫酸铜溶入600mL去离子水中，稀释至1000mL并混合均匀。

（2）硫酸锌储备液将10 g硫酸锌溶入约600 mL 去离子水中，稀释至1000 mL并混合均匀。

（3）显色剂将10 g 磺胺溶入约600 mL 去离子水中，加入0.5 g N-1-萘基乙二胺二盐酸并混合均匀。

加入磷酸100 mL，稀释至1000 mL，储存于棕色瓶中。

每周或试剂吸收超过0.1 AU时更换。

水和废水样品所用试剂（4）氢氧化钠(NaOH)将10 g 氢氧化钠溶入约600 mL 去离子水中，小心地加入3 mL磷酸并混合均匀。

稀释至1000 mL 并加入1 mL Brij-35 (30% 溶液)。

（5）硫酸联胺(参见注意事项3)将10 mL 硫酸铜储备液, 10 mL 硫酸锌储备液和2 g 硫酸肼加入约600 mL 去离子水中，稀释至1000 mL 混合均匀。

用于土壤提取液的试剂(0.01 M CaCl2-溶液)（6）氢氧化钠(NaOH)将40 g 氢氧化钠溶入约600 mL 去离子水中，稀释至1000 mL 并加入1 mL Brij-35 (30% 溶液)。

（7）磷酸小心地将3 mL磷酸加入约600 mL去离子水混合均匀。

溶入4 g 十水二磷酸四钠（焦磷酸钠）并混合均匀。

稀释至1000 mL并加入1mL Brij-35 (30% 溶液).（8）硫酸肼(参见注意事项3)将14mL 硫酸铜储备液, 10 mL 硫酸锌储备液和6 g 硫酸肼加入约600 mL 去离子水中，稀释至1000 mL 混合均匀。