实验十 血清转氨酶的活性测定

一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。

2. 学习并掌握转氨酶活力测定的原理和方法。

3. 通过实验操作，提高对实验仪器的操作技能。

二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。

在人体内，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）最为重要。

ALT和AST活性的测定在临床上具有重要的诊断价值，可作为肝功能异常、心肌梗死等疾病的辅助诊断指标。

本实验采用分光光度法测定ALT活力。

ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成L-谷氨酸和丙酮酸。

丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（PNP）。

PNP在碱性条件下呈棕色，其最大吸收峰在520nm处，通过测定520nm处的吸光度，可以计算出ALT的活力。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡肝- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 0.1mol/L丙氨酸- 0.1mol/Lα-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- 30%氢氧化钠溶液- 碘化钾溶液- 硫代硫酸钠溶液- 酶活力测定试剂盒2. 实验仪器：- 酶标仪- 电子天平- 移液器- 离心机- 恒温水浴箱- 试管四、实验步骤1. 样品制备：将鸡肝剪碎，加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4），匀浆，离心取上清液。

2. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液，在520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。

3. 样品测定：将样品溶液、底物溶液、2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液加入试管，混匀，在520nm处测定吸光度。

4. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中ALT的活力。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：在520nm处，吸光度与丙酮酸浓度呈线性关系。

一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的重要作用及其在临床诊断中的意义。

2. 学习转氨酶活性测定的原理和方法。

3. 掌握分光光度法在测定转氨酶活性中的应用。

二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。

其中，谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）是两种常见的转氨酶。

当肝细胞受损时，ALT和AST会释放到血液中，导致血液中这两种酶的活性升高。

因此，测定血液中ALT和AST的活性可以反映肝脏的功能状况。

本实验采用分光光度法测定血液中ALT的活性。

在实验中，ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸反应生成丙酮酸和谷氨酸，丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，丙酮酸2,4-二硝基苯腙在碱性溶液中呈棕红色，通过测定其吸光度可以计算出ALT的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜动物肝脏、血清、丙氨酸、α-酮戊二酸、2,4-二硝基苯肼、磷酸盐缓冲液、NaOH、蒸馏水等。

2. 实验仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。

四、实验步骤1. 准备工作：将新鲜动物肝脏和血清分别置于冰浴中，制备肝匀浆和血清样品。

2. 样品处理：将肝匀浆和血清样品按照一定比例加入反应体系中，加入丙氨酸、α-酮戊二酸和磷酸盐缓冲液，混匀后置于恒温水浴锅中反应。

3. 测定吸光度：在反应结束后，取出反应体系，加入2,4-二硝基苯肼和NaOH，混匀后立即在分光光度计上测定吸光度。

4. 标准曲线绘制：以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

5. 计算ALT活性：根据样品的吸光度，从标准曲线上查出对应的丙酮酸浓度，再根据公式计算ALT活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制标准曲线后，发现线性关系良好，相关系数R²>0.99。

2. 样品处理：实验过程中，肝匀浆和血清样品均未出现明显的分层现象，说明样品处理得当。

3. 吸光度测定：实验过程中，分光光度计的吸光度读数稳定，说明仪器性能良好。

生化实验报告血清转氨酶实验背景转氨酶（transaminase）是一类存在于细胞中的酶，主要存在于肝脏、心脏、骨骼肌等组织中。

转氨酶在氨基酸代谢中起着重要的作用，能够催化氨基酸之间的氨基基团转移。

转氨酶主要包括天冬氨酸氨基转移酶（AST，aspartate aminotransferase）和丙氨酸氨基转移酶（ALT，alanine aminotransferase），它们的活性在体内存在着一定的平衡。

血清转氨酶的检测可以用于评估肝功能，尤其是肝细胞受损程度。

因此，本次实验旨在通过检测血清中AST和ALT的活性，了解肝功能的情况。

实验材料与方法材料- 血清样品（待检测）- Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）- 天冬氨酸（AST底物）- 丙氨酸（ALT底物）- NADH（辅酶）- α-酮戊二酸（酶促进剂）方法1. 取一支离心管，标明为“AST底物”，加入5ml Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）；2. 加入2ml 10mM天冬氨酸溶液，并充分混合均匀，形成AST底物溶液；3. 取一支离心管，标明为“ALT底物”，加入5ml Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）；4. 加入2ml 10mM丙氨酸溶液，并充分混合均匀，形成ALT底物溶液；5. 取出待检测的血清样品，用离心机离心5分钟，得到血清；6. 取两个比色管，标明为“AST样品”和“ALT样品”，分别加入待检测的血清样品；7. 在AST样品管中，加入0.1ml AST底物溶液，并充分混合；8. 在ALT样品管中，加入0.1ml ALT底物溶液，并充分混合；9. 将AST样品管和ALT样品管分别放入37C水浴中孵育30分钟；10. 在AST样品管中，加入0.1ml NADH溶液，并充分混合；11. 在ALT样品管中，加入0.1ml NADH溶液，并充分混合；12. 同时开始计时，并记录每分钟NADH吸光度的变化；13. 通过计算AST和ALT的活性，得到相应的结果。

测定转氨酶活力的实验报告测定转氨酶活力的实验报告引言：转氨酶是一类重要的酶，广泛存在于生物体内，参与多种生物化学反应。

通过测定转氨酶的活力，可以了解生物体内的代谢情况，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。

本实验旨在通过测定转氨酶的活力，探究其在生物体内的作用及其相关机制。

材料与方法：1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象。

2. 试剂：包括转氨酶检测试剂盒、生理盐水、麻醉剂等。

3. 仪器：分光光度计、离心机等。

实验步骤：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 实验组小鼠经过麻醉后，采集血液样本，离心分离血清。

3. 对照组小鼠同样采集血液样本，离心分离血清。

4. 使用转氨酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定血清中转氨酶的活力。

5. 使用分光光度计，测定各组样本的吸光度值，并计算相应的转氨酶活力。

6. 对实验结果进行统计学分析。

实验结果：实验组小鼠的转氨酶活力明显高于对照组小鼠。

经过统计学分析，两组之间的差异具有显著性。

讨论：转氨酶活力的测定结果表明，在实验组小鼠中，转氨酶的活力明显增强。

这可能是由于实验组小鼠受到了某种刺激，导致转氨酶的合成和释放增加。

转氨酶在生物体内参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢等重要过程，其活力的增强可能与这些代谢通路的活跃有关。

转氨酶活力的测定对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。

例如，肝功能异常常常伴随着转氨酶活力的改变。

通过测定转氨酶活力，可以及早发现肝脏疾病，并进行相应的治疗。

此外，转氨酶活力的测定还可以用于评估药物的肝毒性，指导药物的使用和剂量调整。

然而，需要注意的是，转氨酶活力的测定结果受到多种因素的影响。

例如，实验条件的控制、样本的保存和处理等都可能对结果产生影响。

因此，在进行转氨酶活力的测定时，需要严格控制实验条件，并进行多次重复实验，以确保结果的准确性和可靠性。

结论：通过测定转氨酶的活力，我们可以了解生物体内的代谢情况，并对疾病的诊断和治疗提供重要参考。

实验十、血液转氨酶（谷丙转氨酶）活力的测定（实验：肝脏谷丙转氨酶活力测定）（本实验分2个实验完成：一、制作标准曲线二、测酶活力和总结。

或就做二就可以）【目的和要求】1、了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，2、学习转氨酶活力测定的原理和方法。

3、熟悉分光光度计的使用。

【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。

转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。

它们催化的反应如下。

正常人血清中只含有少量转氨酶。

当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。

测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。

谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。

丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉可用分光光度法测定。

从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。

【试剂和器材】一、试剂1.试管及试管架2.吸管3.恒温水浴4.分光光度计5、移液管6、电子天平7、研钵8、容量瓶9、冰箱二、器材1、标准丙酮酸溶液[标准丙酮酸（500μg/ml）]：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于pH7.4 0.1M 的PBS中，定容到100ml。

现用现配。

2、谷丙转氨酶底物：0.90g L-丙氨酸，29.2mg α-酮戊二酸，先溶于pH7.4 0.1M 的PBS中。

然后用1M NaOH调节pH到7.4，再用pH7.4 0.1mol/L的PBS定容到100ml，贮存于冰箱中，可使用1周。

生化实验_转氨酶（GPT）活性的测定报告实验二（2）转氨酶（GPT）活性的测定一．研究背景及目的转氨酶是生物体内重要的一类酶。

转氨酶催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间的相互转化而生成一种新的氨基酸与一种的新的酮酸，这种作用被称为转氨基作用[1]。

转氨酶种类很多，体内除了赖氨酸、苏氨酸外，其余α-氨基酸都可参加转氨基作用并各有其特异的转氨酶。

其中以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为重要。

GPT与GOT活性的测定在临床上有着重要应用，可作为一些疾病诊断的指标。

GPT催化的是谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用，GOT催化的是谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用，草酰乙酸在柠檬酸苯胺溶液中可以转变为丙酮酸与二氧化碳。

由于都有丙酮酸的生成，所以可以通过实验测定一定时间内丙酮酸的生成量而计算这两种转氨酶的活性。

本实验以动物的新鲜肝脏和血清为材料，分别测定其中的GTP的活性，以此来研究该转氨酶活性的测定方法。

二．原理由于动物肝脏和血清中的转氨酶活性较高，易于测得，且动物或人的转氨酶活性的测定应用广泛、技术成熟，因此本试验选取家兔的新鲜肝脏和血清为实验材料，对其中的一种重要转氨酶——GTP的活性进行测定。

转氨酶活性测定的历史沿革建立了金氏法、穆氏法及赖氏法等较成熟的基本方法，本实验采用的是金氏法。

该方法对转氨酶活力的定义是：血清在37℃，pH7.4条件下，与底物作用60min后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。

丙酮酸含量的测定运用的是比色法。

丙酮酸可与2,4-二硝基苯肼反应，生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，所以通过测定溶液在520nm下的光吸收值并与标准溶液比色便可计算出丙酮酸的含量，丙酮酸的含量对应于一定的转氨酶活力单位。

三．材料、试剂与仪器材料：新鲜家兔肝脏和血清试剂[1]：① 磷酸盐缓冲液（pH7.4）甲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液乙液：1/15 mol/L磷酸氢二钾溶液取甲液825ml，乙液175ml，混合，测得pH为7.4即可。

一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。

2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。

3. 掌握分光光度法测定转氨酶活力的操作步骤。

二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶。

它们在生物体内广泛存在，尤其在肝脏、心肌等组织中活性较高。

转氨酶在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中发挥着重要作用。

本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶（ALT）活力。

谷丙转氨酶催化丙氨酸（Ala）与酮戊二酸（α-KG）之间的氨基转移反应，生成丙酮酸（Pyruvate）和谷氨酸（Glu）。

生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-Pyruvate），加碱处理后呈棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算酶的活力。

三、实验材料与仪器1. 材料：血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等。

2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。

四、实验方法1. 准备工作：将血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等实验材料准备好。

2. 标准曲线绘制：以不同浓度的丙酮酸为标准品，按实验步骤进行测定，绘制标准曲线。

3. 样本测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，计算酶的活力。

五、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 取一系列不同浓度的丙酮酸标准品，加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；b. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；c. 以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样本测定：a. 取一定量的血清样本，加入底物溶液，混匀；b. 于37℃水浴中反应一定时间；c. 加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；d. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；e. 根据标准曲线，计算酶的活力。

六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验结果，绘制标准曲线，并计算相关系数。

血清转氨酶（GPT、GOT）活性的测定【原理】酶的活性即酶的催化效能，在一定条件下酶活性的高低代表酶的含量的多少，故酶活性的测定也即相当于酶含量的测定。

酶的活性通常都是在一定条件下（最适温度、最适的pH、必要的激动剂等），一定的时间内，测定该酶所催化的反应系统中底物的消耗量或产物生成量来确定的。

血清谷丙转氨酶（SGPT）及血清谷草转氨酸（SGOT）分别以丙氨酸和α-酮戊二酸；天冬氨酸和α-酮戊二酸为底物，催化它们进行如下反应：在SGOT催化下所生成的草酰乙酸又可在β脱羧酶和枸橼酸苯胺作用下脱羧，生成丙酮酸，而丙酮酸则可与2，4二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈棕色，在520nm比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙之光吸收远丙酮酸二硝基苯腙为低。

在反应后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，故520nm处光密度增加之程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸之克分子比例成线性关系。

一般临床上用以测定SGPT及SGOT活性的方法有改良的穆氏法、金氏法及赖氏法，这些方法都是基于上述原理而设计的，操作也基本相同，只是这些实验的某些条件、活性单位的规定和计算有所差异。

改良的穆氏法（Mohun）规定血清在37（pH7.4）的条件下，与底物作用30分钟后，每生成2.5μg丙酮酸为一个转氨酶活性单位。

金氏法（King）则规定在同上条件下，与底物作用60分钟后，每生成1μM丙酮酸为一个转氨酶活性单位。

赖氏法（Reitman）本身并未对转氨酶活性单位提出规定，他是用卡门氏法（Karman）来定单位的。

卡门氏法是在紫外分光光度计中用1毫升血清，反应溶液总量为3毫升，在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，25℃ 1分钟内所产生的丙酮酸，在乳酸脱氢酶作用下，使NADH变成NAD+，而引起光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。

而赖氏法则是用卡门氏法所测出的单位数相当于赖氏法所产生的丙酮酸量的相关系数，套用卡门氏单位而来。