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实验六 血清ALT活性测定1

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ALT活性测定

ALT活性测定


血清中丙酮酸2,4-二硝基苯腙
505nm处有强吸光度
临床意义：
ALT在肝、肾、心和骨骼肌中含量丰富，其中ALT在肝细胞中的 浓度比血清高7 000倍，且主要位于肝细胞的可溶性部分。当肝 脏受损、肝细胞膜通透性增加时ALT或AST释放入血可导致血清 中该酶活性增加，因此，ALT常用于肝脏疾病的诊断。主要应用 于以下几种肝脏疾病的检测： 急性病毒性肝炎； 慢性活动性肝炎、脂肪肝、恢复期的急性病毒性肝炎患者； 肝硬化、肝癌；
实验八、血清丙氨酸氨基转移酶 （ALT）活性测定 ——赖氏法（比 色法）
目前测定ALT的方法主要有两大类：
分光光度法（速率法）
比色法（赖氏法）
实验目的
实验原理
实验步骤
结果分析
实验报告
实验目的：
熟悉ALT活性测定的方法
掌握ALT活性测定的临床意义
实验原理：
红棕色
丙酮酸2,4-二硝基苯腙的颜色深浅与丙酮酸的生成量成正比； 反应体系中丙酮酸的量与血清中ALT的活性成正比。
0.1
0.5
2,4-二硝基苯肼溶液 ALT 底物缓冲液
0.5 0.5
0.5 —
混匀，置37℃保温20min 0.4mol/LNaOH溶液 5.0 5.0
混匀，室温放置10min,于30min内比色(505nm)
结果分析：
1.以吸光度值为纵坐标，对应的ALT活性单位为横坐标，
作图，绘制标准曲线；
2.根据测得标本的吸光度值，从已经绘制好的标准曲 线中查得标本中ALT的卡门单位。
由其它原因引起的肝脏损害等。
实验步骤：
1.ALT标准曲线绘制
试剂(ml)/管号 0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液 ALT底物缓冲液 2,4-二硝基苯肼溶液 0 0.10 0.00 0.50 0.50 1 0.10 0.05 0.45 0.50 2 0.10 0.10 0.40 0.50 3 0.10 0.15 0.35 0.50 4 0.10 0.20 0.30 0.50
实验六-血清丙氨酸氨基转移酶的活力测定

实验六-血清丙氨酸氨基转移酶的活力测定


（2）样品测定
取2支试管，标记，按下表依次加入试剂。
管号 血清/mL 基质液/mL
2，4-二硝基苯肼/mL
基质液/mL NaOH溶液/mL
对照管 0.10 ——
混匀，37℃水浴30min 0.50
混匀，37℃水浴20min 0.50 5.00
混匀，室温放置10min
测定管 0.10 0.50
0.50
—— 5.00
在505nm波长下用对照管调零，读取测定管的吸光度值， 对照标准曲线求得ALT相应的酶活力单位。
【临床意义】
肝细胞中ALT含量最丰富，，当肝脏疾病导致肝细胞损伤后， ALT即大量释放进入血液中，导致血清中ALT活性明显增高。 故测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死； 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞； 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、
实验六
【实验目的】
掌握赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的原理及操作； 熟悉ALT标准曲线的绘制； 熟悉酶活力概念； 了解赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶的评价
【实验原理】
赖氏法：
在37℃、pH7.4的条件下，以丙氨酸和ɑ-酮戊二酸为底物，ALT 催化生成丙酮酸和谷氨酸；丙酮酸产量的多少，即反应酶活性 的大小；
试管和试管架
【实验方法】
（1试剂。
管号
空白管
1
2
3
4
5
丙酮酸标准液/mL
0
0.05 0.10
0.15
0.20
0.25
基质液/mL
0.50
0.45 0.40
0.35
0.30
实验十一--血清ALT测定

实验十一--血清ALT测定

实验十一血清ALT测定（赖氏法）【目的】1.了解血清ALT活性测定的原理及测定方法。

2.掌握血清ALT 活性测定的临床意义。

【原理】丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的作用下生成丙酮酸和谷氨酸。

在反应到达规定时间时，加入2，4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。

生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。

后者在碱性条件下显棕红色。

根据颜色的深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶的活力。

反应式如下：【器材】试管、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计。

【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）称取磷酸氢二钠(Na2HPO4，AR)11.928g，磷酸二氢钾(KH2PO4，AR)2.176g，加少量蒸馏水溶解并稀释至1 000ml。

2.ALT底物液称取α-酮戊二酸29.2mg，DL丙氨酸1.79g于烧瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml,煮沸溶解后冷却，用1mol/L NaOH调节pH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/L 磷酸盐缓冲液在容量瓶内加至100ml，混匀，加氯仿数滴，置冰箱可保存数周。

3.丙酮酸标准液（2μmol/ml）精确称取丙酮酸钠(AR)22.0mg于100ml容量瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。

4.2，4-二硝基苯肼溶液称取2，4-二硝基苯肼19.8mg，用10mol/L盐酸10 ml溶解后，加蒸馏水至100ml，置棕色瓶内，冰箱保存。

NaOH溶液称取16gNaOH溶于适量蒸馏水中，然后稀释至1 000ml。

【操作】取2支试管按下表操作：表3-15 血清ALT测定（赖氏法）操作步骤加入物（ml）测定管对照管血清0.1 0.1ALT底物液0.5 －混匀，置37 o C水浴，保温30分钟2，4－二硝基苯肼0.5 0.5 ALT底物液－0.5混匀，置37 o C水浴，保温20分钟0.4mol/L NaOH 5.0 5.0混匀，静置10分钟，用505nm 波长比色，以蒸馏水调零，读取各管吸光度，用测定管吸光度值减去对照管吸光度值，查标准曲线得ALT活力单位。

血清谷丙转氨酶alt的测定

血清谷丙转氨酶alt的测定

血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）


【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。

【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、 pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：

改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低 浓度)的改良赖氏法，对卡门氏单位的科学套用，使比色 法一些缺陷得到了卓有成效的克服，使其结果与速率法较 为一致，能较好反映酶的真实活性。 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足，反应速度 只能达到最大速度的65%；显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只 及反应液中酮酸浓度的一半；保温30min的酶促反应后， 新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控 制的竞争显色的几率问题，如此等等，使赖氏法的重现性 较差，在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。



【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman） 分光光度法，测定的是酶促反应速率性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加 成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中 生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围 内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。 据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过 标准曲线查出血清中ALT的活性。
测定转氨酶活力的实验报告

测定转氨酶活力的实验报告

测定转氨酶活力的实验报告测定转氨酶活力的实验报告引言：转氨酶是一类重要的酶，广泛存在于生物体内，参与多种生物化学反应。

通过测定转氨酶的活力，可以了解生物体内的代谢情况，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。

本实验旨在通过测定转氨酶的活力，探究其在生物体内的作用及其相关机制。

材料与方法：1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象。

2. 试剂：包括转氨酶检测试剂盒、生理盐水、麻醉剂等。

3. 仪器：分光光度计、离心机等。

实验步骤：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。

2. 实验组小鼠经过麻醉后，采集血液样本，离心分离血清。

3. 对照组小鼠同样采集血液样本，离心分离血清。

4. 使用转氨酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定血清中转氨酶的活力。

5. 使用分光光度计，测定各组样本的吸光度值，并计算相应的转氨酶活力。

6. 对实验结果进行统计学分析。

实验结果：实验组小鼠的转氨酶活力明显高于对照组小鼠。

经过统计学分析，两组之间的差异具有显著性。

讨论：转氨酶活力的测定结果表明，在实验组小鼠中，转氨酶的活力明显增强。

这可能是由于实验组小鼠受到了某种刺激，导致转氨酶的合成和释放增加。

转氨酶在生物体内参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢等重要过程，其活力的增强可能与这些代谢通路的活跃有关。

转氨酶活力的测定对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。

例如，肝功能异常常常伴随着转氨酶活力的改变。

通过测定转氨酶活力，可以及早发现肝脏疾病，并进行相应的治疗。

此外，转氨酶活力的测定还可以用于评估药物的肝毒性，指导药物的使用和剂量调整。

然而，需要注意的是，转氨酶活力的测定结果受到多种因素的影响。

例如，实验条件的控制、样本的保存和处理等都可能对结果产生影响。

因此，在进行转氨酶活力的测定时，需要严格控制实验条件，并进行多次重复实验，以确保结果的准确性和可靠性。

结论：通过测定转氨酶的活力，我们可以了解生物体内的代谢情况，并对疾病的诊断和治疗提供重要参考。

血清ALT活性检测结果及其分析

血清ALT活性检测结果及其分析

血清ALT活性检测结果及其分析作者：柴连明来源：《商情》2014年第31期【摘要】目的：了解大学生新生HBV感染情况。

方法用赖氏法（Reitman）测定ALT活性。

结果：检出ALT活性升高者157人，阳性率为2.30%，男女生差异无统计学意义。

结论：该校三年来入校新生HBV均有不同程度的感染，应重视入校后ALT活性复检和进一步进行抗乙肝病毒治疗，以预防和控制HBV在校内及社会的传播。

【关键词】入学新生 ALT活性检测ALT即谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶，简称谷丙转氨酶，ALT是诊断肝炎尤其是急性传染性肝炎的敏感性指标，也是判断疾病预后的参考指标之一。

通过对入学新生进行ALT活性检测，可以了解大学生新生HBV感染情况，为防治工作提供依据。

我校生物化学实验室从2008～2010年连续三年承担新生谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶（ALT）活性检测项目，现就检测结果作以报告和分析。

一、对象和方法（一）对象我校2008～2010年入学一月新生6852人，其中男生2225人，女生4627人。

年龄18～23岁之间，平均18.8岁。

（二）方法按照目前国家推荐的首选方法-赖氏法（Reitman）测定，仪器为722S可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司制造），试剂全部由平凉市仁和医院器械有限责任公司提供。

空腹静脉采血，分离血清，4℃保存。

采用重复实验以证实方法的可靠性及准确性。

二、结果三、分析（一）乙肝对大学生新生有较大的危害性。

ALT即谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶，简称谷丙转氨酶，广泛存在于机体各组织。

各组织器官中酶含量不等，其中以肝组织中含量最高。

正常时转氨酶主要存在于细胞内，血清中活性很低，当某种原因使细胞膜通透性增大或细胞破坏时，则酶可以大量释放入血，造成血清中酶活性明显升高。

所以，ALT升高几乎总是由肝病引起的。

一般以急性期，药物中毒性肝细胞坏死，ALT升高明显，如病毒性肝炎病人中，酶活性可以升高至1，000-4，0000单位；无黄疸和黄疸性肝炎的早期阳性率可达20%-100%；中毒性、酒精性肝炎ALT升高亦表现于其他肝功检验之前。

ALT活性测定.

ALT活性测定.


【试剂与器材】
【试剂】
1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)：将420mlNa2HPO4溶液和80ml0.1mo1/LNaH2PO4溶 液混匀，置冰箱保存。 2．基质溶液(DL-丙氨酸200mmol/L，α—酮戊二酸2mmo1/L)：精确称取DL-丙氨酸1. 79g和α—酮戊二29.2mg，溶于50ml0.1mo1/L磷酸盐缓冲液中，用1mol/LNaOH溶液 （约0.5ml）调至pH至7.4，再加磷酸缓冲液至100ml,最后加入麝香草酚（每L可加0. 9g）防腐，置冰箱中保存，可用一个月。 3．2.4—二硝基苯肼溶液(1mmol/L)：称取2.4—二硝基苯肼19.8mg,溶100ml/L盐酸 中，置室温保存。 4．0.4mol/L氢氧化钠溶液：NaOH16g溶于蒸馏水中调至1000ml。 5．丙酮酸标准液(2mol/L)：丙酮酸钠22.0mg，置于100ml容量瓶中，加0.05mol/L硫 酸至刻度。 6. 0.1mol/LNa2HPO4溶液：称取Na2HPO4·2H2O17.6g溶于少量蒸馏水中，待溶解后加 蒸馏水至1000ml，至冰箱中保存。 7. 0.1mol/LKH2PO4溶液：称取KH2PO413.6g溶于少量蒸馏水中，待溶解后加蒸馏水至 1000ml，至冰箱中保存。
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反 应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的 苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦 即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相 比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。
尽管基质液中余下的α-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)


什么是改良赖氏法？
卡门法

赖氏法


丙酮酸+α-酮戊二酸 谷氨酸+丙氨酸 丙酮酸→NAD++乳酸 在紫外分光光度法中，NADH在 340nm波长处的吸光度降低值与ALT 活性成正比。 卡门氏酶单位：1ml血清（反应溶液 总量为3ml）在340nm波长下，用内 径喂1.0cm的比色皿，在25摄氏度， 1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸脱氢 酶催化下，使NADH+H+变成NAD+， 光密度下降0.001为一个转氨酶活性 单位。
临床意种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项


1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
2.酶活性的测定：取试管2支，注明测定管及对照管，
血清谷丙转氨酶的测定实验报告

血清谷丙转氨酶的测定实验报告

一、实验目的1. 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用。

2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。

3. 掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的操作技能。

二、实验原理转氨酶是一种广泛存在于生物体内的氨基转移酶，能催化氨基酸的氨基与酮基酸的酮基互换。

在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。

其中，谷丙转氨酶（ALT）是人体内最重要的转氨酶之一，主要存在于肝脏细胞内。

当肝脏发生病变时，如肝炎、心肌梗死等，血清中ALT活力常显著增加，因此在临床诊断上，ALT活力的测定具有重要的意义。

本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力，通过检测ALT催化丙氨酸与酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，来计算酶的活力。

三、实验材料1. 仪器：分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管等。

2. 药品与试剂：丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、NaOH、标准ALT溶液、血清样本等。

四、实验步骤1. 准备工作：将所有药品与试剂按照实验要求进行配置，确保实验所需的药品与试剂质量合格。

2. 标准曲线制作：将标准ALT溶液按照实验要求进行稀释，制成一系列不同浓度的标准溶液。

分别取等体积的标准溶液和2，4-二硝基苯肼溶液，混合后加入NaOH，进行显色反应。

在560nm波长下，测定吸光度值，以ALT浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

3. 实验测定：取血清样本，按照实验要求进行稀释，分别加入丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼和NaOH，进行显色反应。

在560nm波长下，测定吸光度值。

4. 数据处理：将实验测定的吸光度值代入标准曲线，计算出血清ALT活力。

五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，线性范围为20～100U。

2. 实验测定：根据实验数据，计算血清ALT活力，结果为X U/L。

3. 结果分析：根据血清ALT活力值，判断肝脏功能是否正常。

血清转氨酶的活性测定

血清转氨酶的活性测定

血清转氨酶的活性测定
一、实验原理
转氨基作用 指的是一种氨基酸alpha-氨基 转移到一种alpha-酮酸上的过程。转氨基作用 是氨基酸脱氨基作用的一种途径。其实可以看 成是氨基酸的氨基与alpha-酮酸的酮基进行了 交换。 结果是生成了一种非必需氨基酸和一种新的 alpha-酮酸。反应由转氨酶和其辅酶磷酸吡哆 醛催化。磷酸吡哆醛是维生素B6的衍生物。人 体内最重要的转氨酶为谷丙转氨酶和谷草转氨 酶。它们是肝炎诊断和预后的指标之一。
37 ℃水浴30min 水浴30min 30
测定管
对照
0.1 0.6 （酶促反应）
0.1 0
1.0
2，4 －二硝基苯肼 1.0
ALT底物 0 水浴20分钟后加入再加入 再加入0.4MNaOH溶液2
0.6
mL，混匀，10 min/室温，于500nm处测量光吸收值。根据标准曲线查出样品的 ALT活力单位
转氨酶活力的测定 ALT作用于丙氨 酸及α－酮戊二酸基质，反应生成谷氨 酸和丙酮酸，丙酮酸可以与2，4 －二硝 基苯肼定量反应生成丙酮酸苯腙，在碱 性条件下呈红色，可以用分光光度法定 量检测（500nm)。
实验器材、试剂
仪器 722N 型分光光度计 试剂 磷酸盐缓冲液（PH7.4），ALT底 物液（含丙氨酸（过量）， α－酮戊二 酸）、 2，4 －二硝基苯肼溶液，0.4 M NaOH溶液，丙酮酸标准液。
(New amino acid)
氨基酸
(New keto acid)
α-酮酸
R2 C O COOH
H C NH2 COOH
alpha-酮戊二酸 + 丙氨酸→谷氨酸 + 丙酮酸
Байду номын сангаас
体内最常见的转氨酶有两种，谷草转氨酶（谷氨酸－ 草酰乙酸氨基移换酶（AST，GOT）、谷丙转氨酶（也 称作丙氨酸氨基移换酶，（ALT，GPT）身体内的转氨 酶不止一种。目前临床诊断中常用的有谷丙转氨酶及 谷草转氨酶等。 体内尤以骨骼肌、肝、心、脑、肾、胰、脾等转氨酶 活力最强。此外，性腺、肺、消化道、红细胞、血小 板、血清等，也含有不同活力的转氨酶。不同的组织 所含的各种转氨酶的多寡也不一致，比如谷丙转氨酶 按其含量多寡为：肝、肾、心肌、脑；而谷草转氨酶 之次序为：心肌、脑、肝、肾。当含有转氨酶的组织 细胞发生破坏或损害时，相应的转氨酶则可进入血流 引起血清内酶活力的增高，可以作为判断某一器官疾 病的指标。
实验4血清丙氨酸氨基转移酶测定

实验4血清丙氨酸氨基转移酶测定

实验六血清丙氨酸氨基转移酶测定一实验目的(1)了解血清酶活性测定的基本方法(2)掌握血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定的临床意义二实验原理丙氨酸及α-酮戊二酸在ALT作用下，生成丙酮酸及谷氨酸，丙酮酸与２,４-二硝基苯肼作COOH COOH| |COOH C=O COOH H –C–NH2| | ALT | |HC-CH3 +CH2 C=O + CH2| | | |NH2CH2NH2CH2|| |COOH COOH丙氨酸α-酮戊二酸丙酮酸谷氨酸用,生成丙酮酸２,４-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈红棕色。

于波长505nm 处读取吸光度值,计算酶活性。

三试剂与主要器材（1）0.1mol磷酸盐缓冲液（PH7.4）：将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml，0.1mol/L磷酸二氢钾80ml，混匀，即为PH7.4、0.1mol磷酸盐缓冲液，加氯仿数滴，4℃保存。

（2）ALT基质液：称DL-丙氨酸1.79g,α-酮戊二酸29.2mg,加磷酸盐缓冲液（PH7.4）约50ml煮沸溶解后，待冷，用1mol/LnaOH调整PH7.4（约加0.5ml）,缓冲液加到100ml,加氯仿数滴, 4℃保存。

该溶液可稳定2周。

（3）２,４-二硝基苯肼溶液：称取２,４-二硝基苯肼19.8mg,溶于10mol/L 盐酸10ml中,完全溶解后蒸馏水至100ml，置棕色瓶中，室温保存，若有结晶析出，应重新配置。

（4）2μmol/L丙酮酸标准溶液：精称纯丙酮酸钠22.0mg于100ml容量瓶内,加磷酸盐缓冲液（PH7.4）至刻度。

此液应新鲜配制，不能存放。

（5）0.4mol/LnaOH溶液：将16gNaOH溶液于蒸馏水中，加蒸馏水至1000ml,置塑料瓶内，可长期使用。

四实验方法（1）标准曲线的制作。

0 1 2 3 4丙酮酸标准液（ml） 0 0.05 0.10 0.15 0.20基质液（ml） 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30磷酸盐缓冲液（ml） 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1相当于酶活性单位（卡门单位） 0 28 57 97 150各管加入2，4–二硝基苯肼0﹒5 ml，混匀，37℃水浴20 min后加入0﹒4 mol/L NaOH 5﹒0 ml，混匀。

实验六血清ALT活性测定1

实验六 血清ALT活性测定
复习：
一、何谓ALT？ 谷丙转氨酶
（glutamic pyruvic transaminase，GPT） 丙氨酸氨基转移酶
（alanine aminotransferase，ALT）
二、ALT催化的化学反应:
反应式
大多数氨基酸可参与转氨基作用，但赖 氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。
波长505 nm处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度；
各管读数均减去0号管吸光度，所得差值与对应的卡门氏酶活性 单位作图即成标准曲线。
六、结果分析：
正常参考值：5～25卡门氏单位
七、注意事项：
1．一般血清标本内源性酮酸很少，血 清对照管吸光度读数接近试剂空白管 ( 以 0.1ml蒸馏水或生理盐水代替血清，其它和对 照管同样操作)，所以大批标本测定时，一般 不需要每一标本都作血清对照管，以试剂空 白管代替即可。但建议对超过正常的标本进 行复查，复查时每份标本应作对照管。
3、标准曲线的绘制：
管号
0
磷酸盐缓冲液（ml） 0.10
丙酮酸标准液（ml） —
基质缓冲液（ml）
0.50
相当于酶活性 （卡门氏单位） —
1 0.10 0.05 0.45 28
2 0.10 0.10 0.40 57
3 0.10 0.15 0.35 97
4 0.10 0.20 0.30 150
各管加 2,4-二硝基苯肼溶液0.5 ml，混匀，37℃水浴 20min； 各管加 0.4 mol/L NaOH溶液5.0 ml，混匀，室温放置10min。
丙氨酸 +α -酮戊二酸
丙酮酸 + 谷氨酸
基质液
丙酮酸 α-酮戊二酸
+ 2,4 二硝基苯肼

肝转氨酶实验报告

一、实验目的1. 了解转氨酶在肝脏代谢中的重要作用。

2. 掌握谷丙转氨酶（ALT）测定的原理和方法。

3. 通过实验，了解ALT在肝脏疾病诊断中的临床意义。

二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶。

肝脏中主要存在两种转氨酶：谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。

其中，ALT 主要存在于肝细胞质中，当肝细胞受损时，ALT会释放到血液中，使血液中的ALT 活性升高。

谷丙转氨酶活性测定采用连续监测法，通过检测ALT催化丙氨酸和α-酮戊二酸反应生成的丙酮酸，计算ALT的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样本- 丙氨酸- α-酮戊二酸- 2,4-二硝基苯肼- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 氯化钠- 碳酸氢钠- 碘化钠- 硫代硫酸钠- 酚酞指示剂- 756型紫外可见分光光度计2. 实验仪器：- 电子天平- 移液器- 容量瓶- 烧杯- 恒温水浴箱- 移液管四、实验方法1. 标准曲线的绘制：- 配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液。

- 将标准溶液加入反应体系中，在37℃水浴中反应一定时间。

- 加入2,4-二硝基苯肼，混匀。

- 加入碘化钠和硫代硫酸钠，滴加酚酞指示剂。

- 在756型紫外可见分光光度计上，于540nm波长处测定吸光度。

- 以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样本测定：- 按照上述步骤，将血清样本加入反应体系中。

- 在37℃水浴中反应一定时间。

- 加入2,4-二硝基苯肼，混匀。

- 加入碘化钠和硫代硫酸钠，滴加酚酞指示剂。

- 在756型紫外可见分光光度计上，于540nm波长处测定吸光度。

- 根据标准曲线，计算血清样本中ALT的活性。

五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：标准曲线线性范围为0.1-1.0mmol/L，相关系数R²=0.998。

2. 样本测定：本实验所测得的血清ALT活性为80U/L，参考范围为0-40U/L。

血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定


器材：分光光度计、半自动生化分析仪、恒温水浴箱、微量进样
器、移液管等。
待测标本：血清
2020/3/23
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标准曲线的绘制（改良赖氏法）
❖ 取干净试管5支标明管号，按下表所示操作。
加入物（ml）
0
1
2
3
4
0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液
基质缓冲液 2,4二硝基苯肼溶液
0.4mol/L NaOH溶液
二硝基苯肼溶液，氢氧化钠溶液（0.4mol/ L），丙酮酸标准液
（2.0mmol/L ）
连续监测法用试剂盒。
试剂1：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，NADH（0.2mmol/L）， LDH （＞1350U/L）；
试剂2：Tris缓冲液【100mmol/L（pH7.5）】，α-酮戊二酸 （50mmol/L），L-丙氨酸（400mmol/L）。
完全。加入NaOH溶液的方法和速度要一致，不同的
方法及速度也会导致吸光度读数的差异。
5、底物中的α-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼均为呈色物
质，称量必须很准确，每批试剂的空白管吸光度上下
波动不应超过0.015，如超出次范围，应检查试剂及
仪器等方面的问题。
6、当血清标本酶活力超过150卡门氏单连续监测法）
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+NADH
ALT 丙酮酸+L-谷氨酸
LD L-乳酸+NAD+
在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力。
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主要试剂、材料与仪器
改良赖氏法试剂：0.1mol/ L磷酸盐缓冲液、基质缓冲液、2,4-

血清ALT活性检测及其分析

血清ALT活性检测及其分析作者：柴连明来源：《商情》2014年第31期【摘要】ALT即谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶，简称谷丙转氨酶，ALT是诊断肝炎尤其是急性传染性肝炎的敏感性指标，也是判断疾病预后的参考指标之一。

通过对入学新生进行ALT 活性检测，可以了解大学生新生HBV感染情况，为防治工作提供依据。

【关键词】入学新生 ALT活性检测根据教育部的有关规定，要求学校每年对入学新生进行相应的健康体检，以对新生的健康状况有大致了解，并能对某些传染性疾病进行早期预防和治疗。

我校是一所医学专科学校，师资力量雄厚，校领导也非常重视学生体检工作。

根据学校的发展，结合实际，学校决定2012年入学新生的体检工作在校内开展，并成立了体检小组，由校领导直接负责。

体检工作于2012年11月10日开始，23日结束。

按照要求生物化学实验室承担谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶（ALT）活性检测项目，现就ALT检测结果作以报告和分析。

一、对象和方法2012年入学新生1605人，其中男316人，女1289人。

年龄18～21岁之间，平均18.8岁。

按照目前国家推荐的首选方法-赖氏法（Reitman）测定，仪器为722S可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司制造），试剂全部由平凉市仁和医院器械有限责任公司提供。

空腹静脉采血，分离血清，4℃保存。

采用重复实验以证实方法的可靠性及准确性。

二、结果检测结果ALT活性最小值为2单位，最高值有2人，分别为98单位和119单位。

三、分析检测结果表明2012年入学新生 1605人中98.38%的学生ALT活性在正常值范围内。

ALT 超过正常值范围的有26人，占1.62%。

其中，22人在60单位以下；2人高于60单位，但小于80单位；2人ALT最高，分别为98单位及119单位，说明酶活性中度增高。

一般来说，ALT 超过正常值一倍以上，临床上才认为有参考意义。

ALT即谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶，简称谷丙转氨酶，广泛存在于机体各组织。

血清谷丙转氨酶活性的测定改良赖氏法

蒸馏水至200mL。
试剂二
取0.1mol/L的磷酸缓冲液50mL， 加入0.5%的溴麝香草酚蓝溶液 1.5mL，用0.1mol/L的氢氧化钠 溶液调节pH至7.4，最后加蒸馏 水至100mL。
试剂三
取0.1mol/L的磷酸缓冲液50mL， 加入4%的碳酸氢钠溶液5mL， 用0.1mol/L的氢氧化钠溶液调节
ALT催化反应
在37℃水浴中，将混合液加入含有ALT催化底物的反应体系中，启动催化反应。
NADH消耗检测
通过分光光度计在340nm波长处监测反应体系中NADH的吸光度变化，记录数据。
数据处理与结果计算
根据吸光度变化计算ALT活性，并给出结果报告。
02 实验材料
CHAPTER
试剂准备
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）
实验过程中产生的废液应按照实验室规定正确处理，避免对环境造 成污染。
遵守实验室安全规定
实验人员应严格遵守实验室安全规定，确保实验过程的安全性。
误差控制
保证试剂质量
01
使用高质量的试剂，确保试剂的准确性和稳定性，降低误差。
标准化操作
02
实验人员应遵循标准化操作流程，避免因操作不当引起的误差。
定期校准仪器
用于配制磷酸盐缓冲液，提供反应所需的pH环境。
赖氏试剂（Reitman-Frankel reage…
由NAD+、赖氏酸和缓冲液组成，用于提供反应所需的辅酶和还原剂。
血清样本
用于测定谷丙转氨酶活性，应确保血清中无细菌污染和溶血现象。
仪器设备
分光光度计
用于测定反应过程中吸 光度的变化，进而计算 酶活性。
恒温水浴
用于维持反应温度，通 常设定在37°C。

ALT检测操作规程

ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。

ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。

本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。

一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。

二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。

2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。

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丙酮酸 α-酮戊二酸
+ 2,4 二硝基苯肼 丙酮酸丙酮酸-2,4 二硝基苯腙 α-酮戊二酸-2,4二硝基苯腙 酮戊二酸-2,4二硝基苯腙
两者在 碱性条件下 呈 红棕色 ，等摩尔浓度条件 下，丙酮酸 OD 值 大 a-酮戊二酸 3倍。
四、试剂：省略 试剂：
℃ 五、操作步骤：1、将 基质缓冲液 和 血清 在 37℃ 水浴箱 操作步骤： 、 2、按下表操作： 按下表操作： 预温5min。 预温 。 加入物 （ml） ml） 对照管 (B) 测定管 (U) 血清 0.1 0.1 基质缓冲液 — 0.5 混匀，37℃水浴30min 准确记时） 30min（ 混匀，37℃水浴30min（准确记时） 2,4— 2,4—二硝基苯肼溶液 基质缓冲液 0.5 0.5 0.5 —
四、ALT测定的临床意义： ALT测定的临床意义 测定的临床意义：
作为（肝脏）疾病诊断和预后判断的指 作为（肝脏） 标之一。 标之一。
五、测定血清ALT的方法： 测定血清ALT的方法 的方法：
King法 金氏法） King法（金氏法） Reitman法 赖氏法） Reitman法（赖氏法） Mohun法 穆氏法） Mohun法（穆氏法） 1981年全国生化检验方法学讨论会确定 1981年全国生化检验方法学讨论会确定 用赖氏法（改良）作为临床首选，单位为： 用赖氏法（改良）作为临床首选，单位为： 卡门氏单位 。
பைடு நூலகம்
八、实验报告： 实验报告：
1、实验目的及要求： 、实验目的及要求： 2、实验原理： 、实验原理： 3、材料与方法：只写自己所完成的操作 、材料与方法： 4、实验结果：原始结果、计算结果、标准曲线 、实验结果：原始结果、计算结果、 5、体会：结合具体情况 、体会：
九、思考题： 思考题：
2．严重脂血症或黄疸、溶血的血清可 ．严重脂血症或黄疸、 能会引起测定管吸光度增加， 能会引起测定管吸光度增加，因此检测此类 标本时，应作血清对照管。 标本时，应作血清对照管。
3．赖氏法原法标准曲线只到97卡门 赖氏法原法标准曲线只到97卡门 氏单位，直线关系很好。 氏单位，直线关系很好。超过此活力的标本 应稀释后再测，临床上应用甚为不便， 应稀释后再测，临床上应用甚为不便，故卫 生部临检中心推荐法建议标准曲线延长到 150卡门氏单位 实际已不完全成直线了， 150卡门氏单位，实际已不完全成直线了， 卡门氏单位， 只能大致反应酶活性的大小、 只能大致反应酶活性的大小、当血清标本酶 活性超过150卡门氏单位时 卡门氏单位时， 活性超过150卡门氏单位时，应将血清用生 理盐水或缓冲液稀释5 理盐水或缓冲液稀释5倍后再进 行测定。 行测定。
混匀，37℃水浴20min； 20min； 混匀，37℃水浴20min 各管加入0.4 各管加入0.4 M NaOH 5.0 ml，室温放置10 min； ml，室温放置10 min； 在波长505 在波长505 nm 处，以蒸馏水校正零点，读取各管吸光 蒸馏水校正零点， 校正零点 度；根据 (AU--AB) 标准曲线，得到酶活性的卡门氏单位数。 --A 标准曲线，得到酶活性的卡门氏单位数。
实验六 血清ALT活性测定 血清ALT活性测定
复习： 复习：
一、何谓ALT？ 何谓ALT？ 谷丙转氨酶
（glutamic pyruvic transaminase，GPT） transaminase，GPT） 丙氨酸氨基转移酶 （alanine aminotransferase，ALT） aminotransferase，ALT）
二、ALT催化的化学反应: ALT催化的化学反应 催化的化学反应:
反应式
大多数氨基酸可参与转氨基作用， 大多数氨基酸可参与转氨基作用，但赖 氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。 氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。
丙氨酸 +α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸 + 谷氨酸
三、ALT的分布: ALT的分布 的分布:
主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等， 主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等，血 清中的含量很低。 清中的含量很低。 病变时，细胞受损，血清ALT含量升高。 ALT含量升高 病变时，细胞受损，血清ALT含量升高。
实验六
血清ALT活性测定 血清ALT活性测定
---改良赖氏法 ---改良赖氏法
一、实验性质：分析性 实验性质： 二、目的及要求
1、掌握ALT测定的原理及临床意义 掌握ALT测定的原理及临床意义 2、熟习测定的操作方法。 熟习测定的操作方法。
三、原理 ：
在一定反应条件下 ( pH7.4，37℃ ) , pH7.4， ℃ min： 作用 30 min： ALT（ ALT（血清） 丙氨酸 +α-酮戊二酸 基质液 丙酮酸 + 谷氨酸
4．加入2,4-二硝基苯肼溶液后需充分 ．加入 二硝基苯肼溶液后需充分 振荡混匀，否则会影响重复性； 振荡混匀，否则会影响重复性；加氢氧化 钠溶液方法要一致 方法要一致， 钠溶液方法要一致，不同方法也会导致吸 光度读数的差异。 光度读数的差异。 5．基质缓冲液和 2,4-二硝基苯肼溶液 ． 二硝基苯肼溶液 配制必须准确， 配制必须准确，每次测定时空白管吸光度 上下波动不应超过0.015，如超出此范围应 上下波动不应超过 ， 检查试剂及仪器等方面的问题。 检查试剂及仪器等方面的问题。
3、标准曲线的绘制： 、标准曲线的绘制：
管号 磷酸盐缓冲液（ml） 磷酸盐缓冲液（ml） 丙酮酸标准液（ml） 丙酮酸标准液（ml） 基质缓冲液（ml） 基质缓冲液（ml） 0 0.10 — 0.50 相当于酶活性 （卡门氏单位） — 卡门氏单位） 1 0.10 0.05 0.45 28 2 0.10 0.10 0.40 57 3 4 0.10 0.10 0.15 0.20 0.35 0.30 97 150
六、结果分析： 结果分析：
正常参考值： ～ 卡门氏单位 正常参考值：5～25卡门氏单位
七、注意事项： 注意事项： 1．一般血清标本内源性酮酸很少，血 一般血清标本内源性酮酸很少， 清对照管吸光度读数接近试剂空白管 清对照管吸光度读数接近试剂空白管 ( 以 0.1ml蒸馏水或生理盐水代替血清 0.1ml蒸馏水或生理盐水代替血清，其它和对 蒸馏水或生理盐水代替血清， 照管同样操作) 所以大批标本测定时， 照管同样操作)，所以大批标本测定时，一般 不需要每一标本都作血清对照管， 不需要每一标本都作血清对照管，以试剂空 白管代替即可 代替即可。 白管代替即可。但建议对超过正常的标本进 行复查，复查时每份标本应作对照管。 行复查，复查时每份标本应作对照管。
2,4-二硝基苯肼溶液0.5 ml，混匀，37℃ 20min； 各管加 2,4-二硝基苯肼溶液0.5 ml，混匀，37℃水浴 20min； NaOH溶液 溶液5.0 ml，混匀，室温放置10min 10min。 各管加 0.4 mol/L NaOH溶液5.0 ml，混匀，室温放置10min。
波长505 nm处比色 处比色， 蒸馏水调零点 读取各管吸光度； 调零点， 波长505 nm处比色，以蒸馏水调零点，读取各管吸光度； 各管读数均减去0号管吸光度 吸光度， 各管读数均减去0号管吸光度，所得差值与对应的卡门氏酶活性 单位作图即成标准曲线。 单位作图即成标准曲线。