大肠菌群快速纸片法原始记录

水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法征求意见稿
为了保证水质安全，控制疫情传播，本文介绍一种快速测定水质中总大肠菌群和粪大肠菌群的纸片快速法。

一、原理
本方法采用四氯化钴染色，将水样中的大肠杆菌转化为深蓝色紫色的水溶液中的杆菌，然后用过滤纸吸取样品中大肠杆菌杆菌的胞外成分，与专门的涂层结合，形成深紫色的杆菌珠，并进行定量比色分析。

二、材料和方法
1. 带有蓝色涂层的滤纸一支
2. 四氯化钴溶液
3. 水样
方法：
1. 取一片纸片，将其放入含有四氯化钴溶液的水样中，搅拌均匀。

等待5分钟。

2. 用净水彻底清洗纸片，并在滤纸周围波动，使大肠菌群在水中更容易分散。

3. 在处理好的样品中取一滴，用滤纸吸取。

4. 将纸片放入合适的容器中(如管子或托盘)，等待5分钟，直到纸片上形成紫色的结晶。

5. 用比色板或显微镜进行分析测量。

三、结果
根据纸片上杆菌珠的形成特征，可以快速测定水样中的大肠杆菌群和粪大肠菌群含量。

四、注意事项
1. 纸片处理过程中要严格保持无菌，避免外源菌污染。

2. 样品选择要具有代表性，尽量选取水流清澈，色泽透明，入口甜润的水源，避免河流污染或废水回流。

3. 纸片使用后应当严格清洗，避免杆菌珠继续生长。

4. 此方法仅适用于快速初步筛查水质安全，不适用于作为严格的水质监测标准。

微生物实验原始记录
粤珍小厨餐饮管理有限公司
编号：
放入时培养
℃样品名称样品编号
箱温度
取出时培养
设备名称电热恒温培养箱(±1℃)设备编号DHP-9082
℃
箱温度
检验依据GB/T4789.2-2010 GB/T4789.3-2010样品状态
一、菌落总数（cfu/g）
以无菌操作将检样25g于225ml灭菌生理盐水中，均质后充分振摇做成1：10的均匀稀释
液。

取1ml灭菌吸管吸取上述稀释液1ml，加入9ml灭菌生理盐水中，混合均匀，做成1：100
的稀释液，按上述方法操作，做10倍递增稀释。

每个稀释度吸取1ml于灭菌培养皿内，注入凉至46℃的营养琼脂15ml，混匀。

待营养琼
脂凝固后，翻转平板于36℃培养48h。

同时做空白对照。

样品匀液
10-110-210-3（10-i）
观察结果（C）
计算结果N
报告结果
CFU/g
主检：审核：检验日期：年月日
邹平县产品质量监督检验所检验原始记录
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主检：校核：检验日期：年月日
邹平县产品质量监督检验所检验原始记录
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主检：校核：检验日期：年月日
如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！。

大肠菌群计数（法一）原始记录
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样品编号：环境温湿度：℃ %RH
检验依据：GB 4789.3-2016 检测地点：微生物室
检验日期：检毕日期：
培养开始时间：培养终止时间：
仪器设备：培养箱ZYXYJC/S- □天平ZYXYJC/S-
□pH计ZYXYJC/S-
检测过程：以无菌操作取样品□g或□mL，用□生理盐水或□磷酸盐缓冲液制成10倍梯度稀释液。

选择3个适宜连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），
每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mL（如接种
量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃培养h进行初发酵试验，未产气
者为大肠菌群阴性，产气者进行复发酵试验。

用接种环从产气试管中取培养物1
环，移种于BGLB内，36℃培养h，根据复发酵产气试管数查MPN表，
上报结果。

大肠菌群快速纸片法原始记录
开封县疾病预防控制中心大肠菌群快速纸片法原始记录
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受检单位?供样单位?
检测环境温度（T）：℃；相对湿度（RH）：%样品接收日期、测试地点-测试依据
检测起止日期
具体日期
年月日～月日
□ 《餐具消毒卫生标准》（gb14934-94）
□《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》gb4789.3-2021
测试仪器□ 电动恒温培养箱（型号：dnp-9272）36±1℃号。

□ 04-15 □ 04-24 □ 05-11中等□ LST肉汤毫升□ bglb肉汤毫升□ 其他培养条件培养温度℃，培养时间h
纸片颜色及结果样品编号及样品名称均匀紫色（未检出）黄色背景上有红点或片状红晕（检出）异常显色反应（可疑）可疑结果确证（发酵法）?样品编号1??样品名称1??样品编号2??样品名称2??样品编号3??样品名称3??样品编号4??样品名称4??样品编号5??样品名称5?检测者：审核者：。

方法验证报告项目名称：总大肠菌群和粪大肠菌群的测定方法名称：水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定快速纸片法报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况表1参加验证的人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2使用仪器情况登记表1.3 检测用试剂情况表3使用试剂登记表1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。

另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。

2 实验室检测技术能力2.1方法适用范围本方法适用于地表水、废水中总大肠菌群和粪大肠菌群的快速测定。

2.2 检测步骤2.2.1. 接种水样的准备当每张纸片接种水样量为10ml或1ml 时，充分混匀水样备用即可。

当每张纸片接种水样量小于1ml时，水样应制成稀释样品后使用。

接种量为0.1ml、0.01ml 时，分别制成1：10稀释样品、1：100稀释样品。

其他接种量的稀释样品依次类推。

1：10稀释样品的稀释方法为：吸取1ml水样，注入盛有9ml无菌水的试管中，混匀，其他稀释度的样品同法制作。

2.2.2水样接种2.2.2.1接种量每个样品按三个10倍递减的不同接种量接种，每个接种量分别接种5张纸片，共接种15张纸片.根据水样的污染程度确定接种量，应尽可能使5个接种量最大的纸片为阳性，5个接种量最小的纸片为阴性，避免出现所有3个不同接种量共15张纸片全部阳性或全部阴性。

清洁水样的参考接种量分别为10ml、1ml、0.1ml。

2.2.2.2接种清洁水样，接种水样总量为55.5ml,10ml水样量纸片5张，每张接种水样10ml，1ml水样量纸片10张，其中5张各接种水样1ml,另5张各接种1：10的稀释水样1ml。

受污染水样，接种3个不同稀释度的1ml稀释水样各5张。