大豆蛋白的提取与含量测定

大豆蛋白的功能性测定专业：生物工程班级：08一班学号：060508131 姓名：戴璐成绩：摘要：利用考马斯亮蓝G250测定样品中蛋白含量为百分之十左右远不及样品包装上所说的82%的含量；紫外分光光度计测定大豆蛋白紫外吸收特征，其紫外光谱显示含较多无法除尽的杂质，荧光光度计观察其荧光效应，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其相对分子质量关键词：大豆蛋白蛋白含量测定紫外吸收电泳功能性1.概述蛋白质是组成人体的重要物质。

是人体生命活动的物质基础，是食品的第一大营养素。

大豆是重要的粮油兼用作物，它富含蛋白质、脂肪，是一种营养平衡的食物。

其籽粒含蛋白质一般为40%左右，比一般谷物高2-4被，也比牛奶、鸡蛋和瘦猪肉的蛋白质含量高。

大豆是豆科植物中最有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。

另外，大豆蛋白不含淀粉，氨基酸也组成比较平衡。

所以，目前许多蛋白质营养品都是用的大豆蛋白。

2.材料与方法1.考马斯亮蓝G250测定蛋白含量【材料】标准蛋白液，样品蛋白，722型分光光度计【方法】1>.标准曲线的制作取7支干净试管，按表一进行编号并加入试管混匀，室温静置3分钟，以第1管委空白，于波长595nm处比色，读取吸光度，以吸光度为纵坐标，各标准浓度作为横坐标作图的标准曲线2>.样液的测定另一支干净试管，加入样液1.0ml及考马斯亮蓝染液4.0ml，混匀，室温静置3min，于波长595nm处比色，读取吸光度，由样液的吸光度查标准曲线即可求出蛋白含量2.大豆蛋白质的紫外吸收特征【材料】标准蛋白液，样品蛋白，UV-9100型紫外分光光度计【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成2.0mg/mL的蛋白质溶液，以对应的Tris-HCl作参比，做紫外-可见扫描，速度10nm/s，范围200-400nm 之间3.大豆蛋白质的疏水性及荧光光谱【材料】标准蛋白液，样品蛋白，日本岛津RF-5310PC型荧光光度计，离心机，100mL 烧杯2个，玻璃棒1个【方法】将大豆蛋白溶于1mol/L PH值为8.0的Tris-HCl溶液中，配制成0.5，1.0，2.0mg/mL的蛋白质溶液，3000r/min离心10min，以以相对应的Tris-HCl作参比，采用日本岛津RF-5310PC型荧光光度计进行荧光测定，激发波长280nm,发射波长300-800nm之间4.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳【材料】直流稳压电泳仪，垂直平板电泳槽⑴分离胶缓冲液 1.5mol/L Tris-HCl (pH8.8)取18.15g Tris, 加80ml重蒸水，用1mol/L的HCL调pH至8.8，用重蒸水稀释至最终体积为100ml，4℃冰箱保存。

大豆中蛋白质含量的测定实验报告大豆是一种富含蛋白质的植物，因此对大豆中蛋白质含量的测定非常重要。

本实验旨在通过化学方法测定大豆中蛋白质的含量，并对结果进行分析和讨论。

实验材料和仪器：1. 大豆样品2. 硫酸钠溶液3. 氢氧化钠溶液4. 酸性消化液5. NaOH溶液6. 氮气吹扫装置7. 精密天平8. 恒温水浴9. 离心机10. 紫外分光光度计实验步骤：1. 准备大豆样品：将大豆磨成粉末，并将其过筛以获得均匀的颗粒大小。

2. 水解反应：取一定量的大豆样品加入酸性消化液中，放入恒温水浴中进行水解反应，使蛋白质完全水解为氨基酸。

3. 碱解反应：将水解后的溶液中加入适量的NaOH溶液，使溶液呈碱性，以便将其他干扰物质转化为不溶性沉淀。

4. 沉淀处理：将碱解后的溶液进行离心处理，将沉淀分离出来。

5. 沉淀洗涤：用硫酸钠溶液对沉淀进行洗涤，去除杂质。

6. 干燥：将洗涤后的沉淀放入烘箱中干燥，直至恒定质量。

7. 称重：使用精密天平称取干燥后的沉淀质量。

8. 光度计测定：将一定量的沉淀溶解于适量的NaOH溶液中，使用紫外分光光度计测定溶液的吸光度。

9. 蛋白质含量计算：根据标准曲线，计算出大豆中蛋白质的含量。

实验结果与分析：根据实验测定，我们得到了大豆样品中蛋白质的含量。

通过对标准曲线的分析，我们可以得知大豆样品中蛋白质的浓度。

从实验结果中可以看出，大豆中蛋白质的含量较高，这也符合我们对大豆富含蛋白质的认识。

在实验中，我们采用了水解和碱解的方法，这是常用的蛋白质测定方法之一。

水解反应将蛋白质水解为氨基酸，使其更容易测定；碱解反应则将其他干扰物质转化为不溶性沉淀，方便后续步骤的进行。

为了准确测定大豆中蛋白质的含量，我们进行了沉淀处理和洗涤步骤，以去除杂质。

这些步骤的目的是提高测定的准确性和精确度。

同时，干燥步骤的进行可以保证质量的恒定，进一步提高测定结果的可靠性。

通过紫外分光光度计的测定，我们可以得到溶液的吸光度，进而计算出蛋白质的浓度。

大豆分离蛋白标准大豆分离蛋白是一种优质的植物蛋白，其蛋白含量高，氨基酸组成均衡，且易于消化吸收。

在食品加工行业中，大豆分离蛋白被广泛应用于肉制品、调味品、乳制品等产品中，以提高其蛋白质含量，改善口感和营养价值。

本文将对大豆分离蛋白的标准进行介绍，以便生产加工企业和相关研究人员了解其质量要求和技术规范。

一、外观特征。

大豆分离蛋白的外观呈淡黄色至浅棕色粉末状，无异物和明显气味。

其颜色应均匀，无结块和异物，符合食品卫生标准要求。

二、蛋白含量。

大豆分离蛋白的蛋白含量应不低于90%，通过蛋白质测定方法进行检测，确保产品的蛋白质含量符合标准要求。

三、氨基酸组成。

大豆分离蛋白的氨基酸组成应符合国家食品安全标准，特别是必需氨基酸的含量要达到一定比例，保证产品的营养价值和生理功能。

四、水分含量。

大豆分离蛋白的水分含量应控制在一定范围内，一般不超过8%，以确保产品的稳定性和保存期限。

五、微生物指标。

大豆分离蛋白产品应符合国家相关的微生物指标标准，包括总菌落数、大肠菌群和霉菌、酵母菌等指标，保证产品的卫生安全。

六、重金属和有害物质。

大豆分离蛋白产品中的重金属和有害物质含量应符合国家相关标准，特别是铅、镉、汞等重金属的含量要符合食品安全标准，保证产品的安全性和可持续发展。

七、储存和包装。

大豆分离蛋白产品在储存和包装过程中，应采取适当的措施，防止产品受潮、变质和污染，保证产品质量的稳定性和持久性。

综上所述，大豆分离蛋白作为一种重要的植物蛋白资源，在食品加工行业中具有广阔的应用前景。

生产加工企业在生产过程中，应严格按照相关标准和技术规范进行生产，确保产品质量符合国家食品安全标准，为消费者提供安全、营养、健康的食品产品。

同时，相关研究人员也应加强对大豆分离蛋白的质量研究和控制技术，推动行业的可持续发展和创新。

希望本文所述的大豆分离蛋白标准能够为相关行业提供参考，促进行业的健康发展和科技进步。

1、适用范围本标准适用于分离蛋白的检验验收,适用品项：高凝胶蛋白、普通分离蛋白。

2、要求2.1本标准参照GB/T 20371-2006《食品工业用大豆蛋白》要求，产品应符合该标准中大豆分离蛋白的指标要求，另有指标﹡根据公司质量要求修订而成。

2.2感观要求 2.2.1感观要求外观呈淡黄色或乳白色粉末，具有产品应有的滋味和气味，无异味；不含有正常视力可见的外来杂质。

2.2.2理化指标水份≤10％；蛋白质含量（以干基计）≥90％ 灰分（以干基计）≤8％粗纤维含量（以干基计）≤0.5％菌落总数≤30000cfu/g 大肠菌群≤30MPN/100g 致病菌不应检出 总砷（以As 计）≤0.5mg/kg 铅（Pb ）≤1.0mg/kg 2.2.3凝胶强度指标普通分离蛋白，凝胶值>40g.cm 高凝胶分离蛋白，凝胶值>80g.cm2.3符合技术部提出的其它要求；有合同要求的，符合合同附加的合同条款要求。

3、检验方法3.1抽样：3.1.1每批次/货柜随机抽取3～5个样本 3.2理化指标根据GB/T 20371-2006《食品工业用大豆蛋白》测定。

3.2 凝胶强度指标3.2.1用电子称准确称取样品100g ，溶于500g 冰水，稍搅拌均匀；4标签、包装、运输、贮存4.1标签、包装符合GB/T 20371-2006《食品工业用大豆蛋白》要求。

4.2运输运输工具应采用清洁、干燥的车箱，不得与有毒、有害物品混装。

4.3贮存产品贮存于干库中阴凉干燥处。

5、检验要求5.1原料检验合格后，质量部出具检验报告单，方可办理入库。

否则走异常原料处理流程。

5.2厂家变更或有其它大的变更因素时，应填写《样品确认记录表》重新确认样品。

泰州安井食品有限公司编 制 葛真 审 核 类 型 受控文件 批 准 标 题 大豆分离蛋白检验标准版 本 1.0 修改状态 / 编 号TZAJ/FSMS-WP-D001页 数1发布日期201303203、入厂必检3.1检查供应商三证资料是否过期（营业执照，生产许可证，型式检验）；3.2批次检验报告是否合格。

大豆品质分析摘要：大豆是豆科大豆属的一年生草本植物，原产于中国，在中国各地均有栽培，同时广泛栽培于世界各地。

大豆是中国重要粮食作物之一，已有五千年栽培历史是一种其种子含有丰富植物蛋白质的作物，大豆用处很广泛，大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。

是数百种天然食物中最受营养学家推崇的食物。

而大豆的品质对大豆的价值起了决定性作用。

关键词：大豆品质、蛋白质含量测定、脂肪含量测定论文主体内容一、研究背景及意义大豆是我们常见的农作物。

作为食品，大豆富含蛋白质和氨基酸，可提供人们必须的营养物质。

除了直接食用，大豆还可以加工成豆腐、豆浆、豆干、腐竹，酿造酱油、制作豆豉，极大丰富了人们的餐桌。

除此之外大豆用来榨油，加工成饲料，在工业上也是重要的原材料。

大豆的品质和大豆的价值息息相关，只有提升大豆的品质、了解大豆品质的测定方法以选择出优质的大豆，才能让大豆更好的发挥作用。

二、优质大豆品质分析测定指标大豆的测定指标有很多，包括大田产量及各类物质含量，以下几点就是1、蛋白质含量高，则大豆蛋白质含量达45%以上，产量比当地同类品种增产5%。

2、脂肪含量高，则大豆脂肪含量23%以上，产量比当地同类品种增产5%。

3、双高含量的大豆，蛋白质含量42%以上，脂肪含量21%以上，产量比当地同类品种增产5%。

4、适于菜用的大粒品种大豆鲜荚长5.3 cm，宽1.3 cm，含糖量7%，蛋白质36%～37%。

5、外观光滑整洁，无畸形，种脐颜色淡的大豆商品价值最高。

三、大豆品质分析方法（一）、大豆蛋白质的测定（凯氏定氮法）1、把大豆用粉碎机粉碎,取3-5g于已经称量好的皿盒中,在120度的烘箱中烘30分钟。

拿出等待凉后称重,减去皿盒重量，计算水分的百分比。

2、称取0.2gH2SO4，6gK2SO4，把0.5g粉碎好的大豆（不用测量水分的）用滤纸包好放入定氮瓶中，加20ml硫酸,（瓶口上放一个小漏斗,防止蛋白跑掉）开小火在电炉子上消化,等没有碳化颗粒,并处于澄清状态时,拿下来凉一会，再加过氧化氢直到把瓶颈上的蛋白冲洗干净为止，再消化30min，拿下来，等凉.。

实验八大豆蛋白的提取及浓度测定实验目的1．掌握大豆蛋白提取的原理和方法。

2．学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理及方法。

3.制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。

4．学习计算蛋白质收率。

实验原理榨油工业的副产品——豆粕中含有丰富的蛋白质，依其性质的不同，可分为水溶蛋白，盐溶蛋白，碱溶蛋白，醇溶蛋白。

将豆粕依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的干粉。

Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。

甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜及酒石酸钾钠组成。

蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。

乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。

此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。

此法也适用于测定酪氨酸、色氨酸含量。

用Folin酚法可测出蛋白制品的含量，已知原料的重量，可以求出蛋白质的收率。

本法可测定范围是25—250µg蛋白质试剂和器材（一）、试剂1.标准蛋白质溶液结晶牛血清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮的含量，根据其纯度配制成150µg/mL蛋白溶液。

2.Folin—酚试剂（见Folin-酚法测蛋白质）3．其他试剂(1)10％NaCl (2)0．2％ NaOH (3)75％乙醇(4)丙酮(5)6mol／L HCl (6)蒸馏水4测试样品使用前稀释100倍。

（二）、器材试管及试管架，0.5，1及5mL吸量管，恒温水浴，722型分光光度计电动搅拌器，离心机，烧瓶，水泵，吸滤瓶， pH试纸，研钵操作方法（一）大豆蛋白的提取1．将豆粕掰成小块，用研钵磨碎。

2．水的抽提将磨碎之豆粕20g用5～6倍的蒸馏水浸泡，调pH为7．0，在10℃下搅拌抽提15min，离心15min，3500r／min，取上清液，如上清液不清澈再经吸滤(沉淀留下步抽提)。

清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用6mol／L HCl调pH4．5～5．0，3000r／min，离心15min，收集沉淀物，反复用丙酮洗涤，得到粉末状蛋白质干粉，待用。

大豆蛋白提取方法的比较总结1、酸沉碱提法大豆分离蛋白是一种传统的分离提取方法。

大豆分离蛋白法是利用大豆中大多数蛋白质在等电点(pH415)时沉淀的特性,与其他成分分离，沉淀的蛋白质经调节pH后溶解，因此称之为酸沉碱提法。

酸沉碱提的缺陷是：耗酸、耗碱量大，废水处理费用高，产品收率低。

该分离提取方法有待改进。

但目前仍然是工业化生产的基本方法。

2、膜分离法根据大豆蛋白的分子量大小、形状及膜与大豆蛋白的适应性，选择膜材料和不同截留分子量的膜，对大豆蛋白提取液超滤分离，超滤净化，使非截留组分排除，达到符合标准的分离大豆蛋白液，接着将净化后的大豆蛋白提取液超滤浓缩到所需的浓度后出料，喷雾干燥成粉状大豆分离蛋白。

3、反胶束萃取分离法反胶束是表面活性剂在有机溶剂中形成的一种聚集体，其中表面活性剂的非极性尾在外，与有机溶剂接触，极性头在内，形成极性核，该核具有包含水溶液和溶解蛋白质的能力，因而可以用此含有反胶束的有机溶剂从水相中萃取蛋白质。

利用反胶束技术从全脂豆粉萃取大豆蛋白，可一次萃取50%左右。

大豆蛋白萃取过程非常快，用非扩散模型解释较为合理。

该法需要的主要仪器有：自动水分测定仪、气浴恒温震荡器、离心机、凯氏定氮仪、分析天平、恒温磁力搅拌器和微量进样棒等。

影响反胶束萃取过程的主要因素有表面活性剂的种类及浓度、水相的pH值、离子强度、温度等。

反胶束萃取技术的优点是：选择性高、操作方便、放大容易、萃取剂(反胶束)相可循环利用、分离和浓缩同步进行。

其缺点是:蛋白质在现有反胶束体系中稳定性不高,导致萃取前后蛋白质的活性损失较大，因而制约其工业化应用。

4、反相高效液相色谱法这是对大豆蛋白中7S和11S球蛋白进行快速分离的一种方法。

在分离条件为40℃、流速1mL/min的条件下,9min可完成相应球蛋白的分离。

具体方法为:(1)试剂与试样。

乙腈(CAN) (HPLC级)、三氟乙酸(TFA) (HPLC级)、HPLC级水用于移动相的制备。