大豆蛋白的提取与与含量测定(精)

一、实验目的1. 掌握凯氏定氮法的原理和操作步骤。

2. 学会使用凯氏定氮仪进行蛋白质含量的测定。

3. 了解大豆蛋白质含量的测定方法及其在食品分析中的应用。

二、实验原理凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法，其原理是将样品中的蛋白质与浓硫酸共热，使蛋白质中的氮元素转化为无机氮，即硫酸铵。

通过测定硫酸铵中的氮含量，即可计算出样品中蛋白质的含量。

实验过程中，样品的消化、蒸馏、吸收和滴定是关键步骤。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：大豆样品、浓硫酸、30%氢氧化钠溶液、克氏催化剂、2%硼酸、指示剂、0.1M HCl、蒸馏水等。

2. 实验仪器：凯氏定氮仪、凯氏烧瓶、电炉、锥形瓶、100mL容量瓶、酸式滴定管、电子天平、移液管等。

四、实验步骤1. 样品消化：准确称取0.5g大豆样品（精确至0.0001g），置于凯氏烧瓶中，加入5mL浓硫酸，再加入2g硫酸钾、0.1g硫酸铜和0.5mL过氧化氢，充分混合后，置于电炉上加热消化，直至样品完全消化。

2. 蒸馏：将消化后的溶液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，加热蒸馏，使氨气释放。

3. 吸收与滴定：将蒸馏出的氨气导入装有2%硼酸溶液的锥形瓶中，待吸收完全后，用0.1M HCl标准溶液滴定，直至溶液由蓝紫色变为红紫色为止。

4. 计算蛋白质含量：根据滴定消耗的HCl标准溶液的体积，计算出样品中氮含量，再根据氮含量计算出蛋白质含量。

五、实验结果与分析1. 实验结果：本次实验测得大豆样品中的蛋白质含量为37.2%。

2. 结果分析：凯氏定氮法是一种准确、可靠的蛋白质含量测定方法。

实验过程中，样品的消化、蒸馏、吸收和滴定等步骤严格按照操作规程进行，确保了实验结果的准确性。

本次实验测得的大豆蛋白质含量与文献报道基本一致，表明实验方法可靠。

六、实验总结1. 凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法，具有操作简便、结果准确等优点。

2. 实验过程中，严格遵循操作规程，注意样品的消化、蒸馏、吸收和滴定等步骤，确保实验结果的准确性。

黑豆、黄豆、红豆、绿豆中的蛋白质含量比较作者：罗诗茹蔡玉莲朱冠琳曾宝珠李江滨来源：《科技视界》2014年第20期【摘要】目的：测定并比较黑豆、黄豆、红豆、绿豆四种豆中的蛋白质含量。

方法：豆子加水匀浆后，离心收集上清，用双缩脲法测定蛋白质含量。

结果：黑豆组蛋白质含量为（176.52±3.04）mg/g、黄豆组蛋白质含量为（127.27±1.39）mg/g、红豆组蛋白质含量为（74.90±1.53）mg/g；绿豆组蛋白质含量为（123.03±4.86）mg/g。

结论：四种豆中蛋白质含量差异显著，黑豆中最高，黄豆与绿豆相近，红豆中最低。

【关键词】黑豆；黄豆；红豆；绿豆；蛋白质Comparison of Protein Content in Black Beans， Soyabean， Red Bean and Mung BeanLUO Shi-ru CAI Yu-lian ZHU Guan-lin ZENG Bao-zhu LI Jiang-bin（Guangdong Medical College， Dongguan Guangdong 523808，China）【Abstract】Objective To detect and compare protein concentration in black beans，soya beans，red beans，mung beans. Method Beans with water and homogenized， collected by centrifugation， protein content was determined using the biuret method. Result The protein content of black bean group， soybean group， red bean group， mung bean group were （176.52 ± 3.04）mg/g，（127.27 ± 1.39） mg/g，（74.90 ± 1.53） mg/g，（123.03 ± 4.86） mg/g. Conclusion Four kinds of protein content of bean were significantly different， black group was the highest，soybean and mung bean group， red beans Group was the lowest.【Key words】Biuret method；Black beans；Soya beans；Red beans；Mung beans；And proteins0 引言黑豆、黄豆、红豆和绿豆是人们生活中常食用的豆类，豆类含有丰富的蛋白质、必需脂肪酸、硫胺素、核黄素，还有磷脂和豆固醇等，且含糖低，对降低血胆固醇和血糖有一定益处，是肥胖者、老年人、糖尿病和心血管疾病患者的理想食品[1]。

大豆蛋白大豆蛋白，顾名思义就是从大豆中提取出来的蛋白质, 是经过一系列加工步骤得到的近乎纯化的蛋白质。

大豆蛋白是公认的最优良植物蛋白，其氨基酸组成与牛奶蛋白质相近，在营养价值上可与鸡蛋、牛奶等动物蛋白相同，同时具有植物蛋白安全的优点，属于天然绿色食品。

大豆蛋白是唯一植物来源的完全蛋白质。

所谓“完全蛋白质”，是指该蛋白质不仅提供人体必需的从食物中摄取的氨基酸，而这些氨基酸也处于良好的平衡状态来满足人体的需要。

大豆蛋白不仅是营养高的天然绿色食品，而且还具有多种对人体有益的生理功能，包括降低血浆胆固醇水平、促进骨质健康、促进肾功能等。

如今，国内外有很多生产大豆蛋白的企业，并形成了相应的行业标准和国家标准。

大豆蛋白已被广泛应用在各种食品中，如果汁、奶酪、面包、食品棒、火腿肠、方便面等等，渗透到生活各个角落。

但由于大豆蛋白是大分子物质，存在不易溶解及不易消化吸收等缺点，限制了其应用领域，并使其营养价值和应用价值大打则扣。

如何克服大豆蛋白不易溶解及不易消化吸收等缺点，增加其营养价值和应用价值，从而增加大豆蛋白的附加值，成为当前的热点。

二、大豆多肽、大豆肽肽是氨基酸的线性聚合物，通常把含氨基酸残基50 个以上的称为蛋白质，低于50 个氨基酸残基的称为肽（国家大豆肽粉的标准中将大豆肽的分子量定为不大于10000，10000分子量的肽链含氨基酸残基约90个）。

大豆多肽与大豆肽是利用现代生物技术将大豆蛋白水解而获得的，其氨基酸的组成与大豆蛋白相同。

一般而言，没有严格区分大豆多肽与大豆肽。

与传统大豆蛋白相比，虽然大豆肽的生产工艺较复杂，成本价格较高，但其具有易溶解、消化吸收，能迅速供给机体能量，无蛋白变性、无豆腥味、无残渣、液体黏性小和受热不凝固等特性，尤其是具有降低血清胆固醇、降血压和促进脂肪代谢等独特的生理功能。

因此大豆肽是比大豆蛋白更为优质的、新型的大豆深加工产品及营养品，已在食品、医药、日用化工等领域中显示出了诱人的开发应用前景。

实验一低温豆粕提取大豆分离蛋白一、原理大豆分离蛋白的提取是根据大豆中所含的蛋白质在不同的pH时有不同的溶解度的特性而实现的。

大豆粕中所含的蛋白质大部分都能溶解在水中，在pH6.5的蒸馏水中有很高的溶解度，且都能溶解于0.2%的碱液中，相反，在pH4.5时，蛋白质的溶解度非常小。

所以大豆分离蛋白的提取是先用水或稀碱液从低温豆粕中萃取可溶物，用离心机分离出不溶物（豆粕渣）然后在萃取液（豆乳）中加酸（盐酸、磷酸、醋酸等）调节pH到4.2-4.5，于是蛋白质即从萃取液中沉淀出来，倾除清夜（即乳清、主要是低分子糖类、蛋白质等），将下层的蛋白质凝聚物进行水洗、浓缩、干燥即可得到等电点分离蛋白。

二、试剂及仪器1）氢氧化钠AR级2）盐酸AR级3）电热恒温水浴锅4）电热恒温干燥箱5）离心沉淀机6）酸度计7）多功能电动搅拌器三、实验步骤在1000ml烧杯中将50克豆粕按料液比1：10的比例与水混合，温度50℃，低速搅拌30-35rpm，用1N氢氧化钠pH调至7.5，继续搅拌30分钟。

悬浮液在2000 rpm转速下离心15分钟，回收上清液，沉淀（豆渣）弃去。

上清液边搅拌边加入1NHCl（30-35rpm），将pH调至4.5，温度30℃，继续搅拌10分钟。

将悬浮液在2000 rpm离心15分钟，弃去上清液（大豆乳清），回收沉淀（凝乳）并称重。

称取5克（精确到0.001克）于表面皿中，在105℃烘箱内烘干至恒重，测定凝乳的水分含量，烘干后的凝乳存放于干燥器内保藏。

其余湿凝乳置于-15℃下冷冻储藏备用。

习题1.求凝乳分离蛋白产品的含水量、蛋白含量2.求分离蛋白生产过程的提取率、蛋白回收率、蛋白纯度一般是多少3.为了提高蛋白提取率，在萃取、浆渣分离等操作中可采取什么措施？实验二凯氏定氮法测定大豆分离蛋白中蛋白质的含量一、原理浓硫酸和样品及催化剂一起加热沸腾，样品中蛋白质分解，其含的N 变成（NH4）2SO4,碱化并蒸馏使NH3放出，将NH3蒸入酸溶液，在以标准酸来滴定，测得样品中的含氮量，从而得出样品中蛋白质含量，其反应式如下：24242244333234424424424423222320222HBOCL NH HCL BO NH OH BO NH BO H NHNH H NHOH NH SO Na OH NH NaOH SO NH SO NH SO H NHO H CO SO NHCOOH NH RCH +→++→+↑+↑−−→−+→+→+↑+↑+↑+↑−−−−→−−−−−→−=被硼酸或标准盐酸吸收馏出的）（）（（过量））（蛋白质加热浓硫酸催化剂浓硫酸催化剂二、仪器1）万分之一分析天平 2）饱和氢氧化钠溶液 3）2%硼酸溶液4）溴甲酚绿-甲基红混合指示剂5）催化剂：CuSO 4•5H 2O―K 2SO 4（1：10） 6）浓硫酸：比重1.84、无氮 7）蔗糖：分析纯8）双氧水硫酸混合溶液 9）大豆粕、大豆分离蛋白 四、实验步骤1）称样：称取约0.1克试样（烘干凝乳）准确到0.0001克。

实验八大豆蛋白的提取及浓度测定实验目的1．掌握大豆蛋白提取的原理和方法。

2．学习Folin—酚法测定蛋白质含量的原理及方法。

3.制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。

4．学习计算蛋白质收率。

实验原理榨油工业的副产品——豆粕中含有丰富的蛋白质，依其性质的不同，可分为水溶蛋白，盐溶蛋白，碱溶蛋白，醇溶蛋白。

将豆粕依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的干粉。

Folin—酚试剂由甲试剂和乙试剂组成。

甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜及酒石酸钾钠组成。

蛋白质中的肽键在碱性条件下，与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用，生成紫红色络合物。

乙试剂是由磷钼酸和磷钨酸、硫酸、溴等组成。

此试剂在碱性条件下，易被蛋白质中酪氨酸的酚基还原呈蓝色反应，其色泽深浅与蛋白质含量成正比。

此法也适用于测定酪氨酸、色氨酸含量。

用Folin酚法可测出蛋白制品的含量，已知原料的重量，可以求出蛋白质的收率。

本法可测定范围是25—250µg蛋白质试剂和器材（一）、试剂1.标准蛋白质溶液结晶牛血清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮的含量，根据其纯度配制成150µg/mL蛋白溶液。

2.Folin—酚试剂（见Folin-酚法测蛋白质）3．其他试剂(1)10％NaCl (2)0．2％ NaOH (3)75％乙醇(4)丙酮(5)6mol／L HCl (6)蒸馏水4测试样品使用前稀释100倍。

（二）、器材试管及试管架，0.5，1及5mL吸量管，恒温水浴，722型分光光度计电动搅拌器，离心机，烧瓶，水泵，吸滤瓶， pH试纸，研钵操作方法（一）大豆蛋白的提取1．将豆粕掰成小块，用研钵磨碎。

2．水的抽提将磨碎之豆粕20g用5～6倍的蒸馏水浸泡，调pH为7．0，在10℃下搅拌抽提15min，离心15min，3500r／min，取上清液，如上清液不清澈再经吸滤(沉淀留下步抽提)。

清液加入等体积在冰箱中预冷的丙酮，用6mol／L HCl调pH4．5～5．0，3000r／min，离心15min，收集沉淀物，反复用丙酮洗涤，得到粉末状蛋白质干粉，待用。

大豆蛋白质检测方法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以按照以下方式进行编写：在此文中，我们将关注大豆蛋白质的检测方法。

大豆蛋白质是一种重要的植物蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用领域。

因此，准确、快速地检测大豆蛋白质的含量和质量对于农业生产、食品工业以及药品生产等领域非常关键。

随着科学技术的不断发展，大豆蛋白质检测方法也得到了不断完善和创新。

文章将介绍两种主要的大豆蛋白质检测方法，并详细阐述它们的原理和步骤。

在第一种方法中，我们将了解到它基于某种特定的原理来进行大豆蛋白质的检测，通过特定的步骤来获取准确的结果。

而在第二种方法中，我们将探讨它采用的另一种不同原理来进行大豆蛋白质的检测，并且与第一种方法进行对比，分析它们各自的优缺点。

通过对这两种方法的介绍和比较，我们希望能提供给读者们一个全面了解大豆蛋白质检测方法的视角，以便在实际应用中选择最适合的方法。

文章的结论部分还将总结分析这两种方法的优缺点，以及它们在实际应用中的可能应用前景。

通过深入研究大豆蛋白质检测方法，我们可以更好地了解大豆蛋白质的特性和含量，为大豆相关产品的研发和质量控制提供科学依据。

同时，这也为食品安全领域和农业生产提供了重要的支持，促进了行业的健康发展。

总而言之，本文旨在探讨大豆蛋白质检测方法，既介绍了两种常用的方法，又对它们的原理和步骤进行了详细说明。

通过对这两种方法的分析和比较，我们可以更好地理解并选择最合适的方法来进行大豆蛋白质的检测。

这对于大豆相关产业的发展和食品安全具有重要意义。

1.2文章结构文章结构是指文章整体的框架和组织，它决定了文章的逻辑性和连贯性。

本文的目的是介绍大豆蛋白质检测方法，为了使读者能够清晰地了解这个主题，本文将分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分将首先对大豆蛋白质检测方法进行概述，介绍大豆蛋白质在食品工业和农业中的重要性以及对其质量检测的需求。

随后，将说明本文的结构和各部分的内容，以使读者对文章有一个整体的了解。

大豆蛋白的提取、干燥、性质测定实验摘要：以大豆为原料，采用碱提酸沉法提取大豆蛋白，以蛋白质提取率为指标，通过查阅文献确定了提取大豆蛋白的最佳工艺：35摄氏度下，pH 10 ，浸提时间40 min, 液料比20：1( mL/g）。

将提取出来的大豆蛋白用真空冷冻干燥装置进行干燥，通过前后称重，计算大豆蛋白的提取率。

利用提取出来的大豆分离蛋白进行大豆蛋白的性质测定实验。

食品体系中的大豆蛋白所具有的功能性如下：功能性质作用方式食品体系溶解度蛋白质溶解性能，与pH等相关饮料类乳化性脂肪乳状液的形成以及稳定肉类、酱类、汤类持水性游离脂肪的吸附肉类、酱类起泡性形成稳定膜、固定气体搅打奶油、甜食粘度增稠作用汤类、肉汁凝胶蛋白质基质的形成凝乳、乳酪凝聚-粘附性蛋白质作为粘附剂香肠、焙烤制品粘弹性面筋中的疏水键，凝胶中的二硫键肉类、焙烤本组决定利用提取的大豆分离蛋白测定大豆蛋白的持水性。

关键词：大豆蛋白、碱提酸沉、真空冷冻干燥、持水性正文：实验材料仪器：天平、烧杯、量筒、玻璃棒、pH试纸、Sigma离心机、4℃冰箱、1号离心管、20ml离心管、50ml离心管、真空冷冻干燥箱材料：大豆粉、蒸馏水、氢氧化钠溶液、盐酸溶液实验步骤一、大豆蛋白的提取原理：大豆分离蛋白的生产方法常见的有: 超滤膜法、离子交换法、碱溶酸沉法, 其中碱溶酸沉法是我国普遍采用的生产工艺。

此法能够有效地提高产品得率,能充分利用蛋白资源。

生产的分离蛋白不仅除去了可溶性糖类, 还除去了不溶性聚糖, 因而蛋白质含量高。

该种工艺主要是基于调解溶液的 p H 值, 从而调解蛋白质的溶解度, 在 pH 值调至 4. 5 左右时, 由于蛋白质处于等电点状态而凝集沉淀下来, 经分离后得到蛋白沉淀物, 再经洗涤、中和、灭菌、干燥即得分离蛋白产品。

1、用电子天平称取大豆粉末10.01g，加入200ml蒸馏水，即液料比为20:1，搅匀.2、取40％的氢氧化钠10ml，加入100ml蒸馏水进行稀释，配制成稀碱溶液待用。

新工艺不同处理对大豆浓缩蛋白（SPC）粗蛋白含量及提取率的影响山东省海洋水产研究所/李宝山王际英张利民王世信黄炳山摘要分别用超声波处理不同粉碎粒度的高温脱脂豆粕，然后采用醇法浸提工艺提取其中的大豆浓缩蛋白（SPC）。

结果显示：40目、60目及80目豆粕提取的大豆浓缩蛋白中粗蛋白含量分别为51.63%、53.50%和54.32%（P＜0.05），提取率分别为97.65%、97.51%和95.80%（P＜0.05）；超声波处理之后提取的大豆浓缩蛋白中粗蛋白含量分别为53.44%、55.11%和58.77%（P＜0.05），提取率分别为97.50%、96.78%和95.65%（P＜0.05）。

不同的粉碎粒度对大豆浓缩蛋白中粗蛋白的含量及提取率有显著影响，粒度越小，粗蛋白含量越高，提取率越低；在相同的粉碎粒度下，超声波处理能提高大豆浓缩蛋白中粗蛋白的含量，但是对其提取率无显著影响。

关键词大豆浓缩蛋白；高温脱脂豆粕；超声波；提取率Abstract The aim of this study that detecting the effects of ultrasonic and different grinding particle sizes on the crude protein content and extraction rate of soybean protein concentrated (SPC). The crude protein content of SPC with 40, 60 and 80 meshes high denatured defatted soybean meal were 51.63%, 53.50% and 54.32%(P<0.05), and the extraction rate were 97.65%, 97.15% and 95.80% (P<0.05), respectively. The crude protein content from ultrasonic dealt 40, 60 and 80 meshes high denatured defatted soybean meal were 53.44%, 55.11% and 58.77% (P<0.05), and the extraction rate were 97.50%, 96.78% and 95.65% (P<0.05). Different grinding particle sizes had signifi cantly effects on the crude protein content and extraction rate of SPC, the particle was smaller that the crude protein content was higher and extraction rate was lower. Ultrasonic can increase the crude protein content, but have no effects on the extraction rate to the same particle sizes soybean meal.Keywords soybean protein concentrated; high denatured defatted soybean meal; ultrasonic; extraction rate著影响[2～4]，但是不同粉碎粒度与超声波处理对SPC提取是否有影响尚未见报道。

豆渣蛋白的提取及含量测定作者：李夏来源：《科学与财富》2011年第04期[摘要] 大豆富含植物蛋白，可以增强体质和机体的抗病能力，还有降血压和减肥的功效，并能补充人体所需要的热量，可以治疗便秘，极适宜老年人食用。

目前，饮用豆浆逐渐成为一种时尚，但是打磨豆浆会产生大量豆渣，一般都用作饲料或者丢弃，造成了浪费。

对此，本课题主要以水溶剂法提取的富含大豆蛋白的豆渣为原料，进一步提取水溶、酸溶、碱溶性大豆蛋白同时采用考马斯亮蓝法对大豆蛋白的含量进行了分析，以期为将来的工业生产及科研提供科学依据。

[关键词] 大豆蛋白，提取，测定1、材料与设备1.1实验原料：市售大豆1.2实验试剂：蒸馏水(实验室自制)，HCL（分析纯），无水丙酮（分析纯），NaOH（分析纯），考马斯亮蓝G250，无水乙醇，浓硫酸1.3实验仪器：FY130型药物粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司。

真空冷冻干燥仪，北京松源华兴公司。

1610型离心机，北京康瑞名科技有限公司。

JA2003型分析天平，上海衡平仪器仪表厂。

Unic()-UV21202PC紫外一可见分光光度计。

电热恒温水浴锅，江苏常熟医疗器械厂。

2、实验方法2.1大豆蛋白的粗提将市售大豆浸泡过夜，研磨后过滤，取豆渣，冷冻干燥至恒重。

精确称取干燥为恒重的豆渣60克，过60目筛，置圆底磨口烧瓶中，用10倍蒸馏水浸提，三层纱布过滤后，4℃下于高速离心机中15 000 g离心20 min，取出的上清液即为大豆蛋白粗提液[1]．浓缩，用无水丙酮脱水，冷冻干燥，所得白色固体即为粗提大豆蛋白质。

2.2水溶性蛋白的提取精确称取干燥为恒重的豆渣60克，过60目筛，置圆底磨口烧瓶中，加入10倍体积的蒸馏水，用玻璃棒搅拌2小时。

15 000 r／rain离心15分钟，取上清液，残渣再次用10倍体积蒸馏水浸泡按上述法重复一次。

将两次上清液合并，用盐酸调酸碱值至5．0，用玻璃棒搅拌，静止过夜，15 000 r／rain 离心15分钟，取沉淀，用无水丙酮脱水，冷冻干燥，得水溶性大豆蛋白[2]。

一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。

二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。

三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。

加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。

四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。

（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。

（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。

（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。

（5）混合指标剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。

（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；①0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。

②0.02mol/L盐酸标准溶液：1.67mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。

（7）蔗糖：分析纯。

（8）硫酸铵：分析纯，干燥。

（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。

五、仪器设备(1)实验室用样品粉碎机或研钵。

(2)分样筛：孔径0.45mm(40目)。

(3)分析天平：感量0.0001g。

(4)消煮炉或电炉。

(5)滴定管：酸式，10、25mL。

(6)凯氏烧瓶：250mL。

(7)凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。

(8)锥形瓶：150、250mL。

(9)容量瓶：100mL。

(10)消煮管:250mL。

(11)定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。

六、分析步骤试样的选取和制备：选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。

黄豆中蛋白质含量测定——凯氏定氮法一、仪器和试剂主要仪器:定氮仪。

试剂（除注明外均为分析纯）：1. 浓硫酸。

2. 30%氢氧化钠溶液。

3. 2～4%硼酸溶液。

4. 0.1mol/L 盐酸溶液。

5. 催化剂：硫酸钾——硫酸铜的混合物（K 2SO 4:CuSO4·5H 2O=3.5g:0.1g ）。

二、操作步骤1. 消化准确称取粉碎均匀的黄豆粉0.5g 左右，小心移入干燥的消化瓶中（注意用称量纸将样品加入到消化管底部，勿粘附在瓶壁上），加入适量催化剂及10mL 浓硫酸，按要求安装好消化装置后,设置好消化程序,打开冷凝水, 开始消化程序。

(160℃, 40min; 250℃, 20min; 350℃, 60min; 420℃, 30min)消化程序结束后，消化至溶液透明呈蓝绿色，冷却至室温。

同时做空白对照。

2． 蒸馏、吸收及滴定按要求安装好UDK142蒸馏仪，并将蒸馏仪与自动电位滴定仪连接好。

将所需试剂装到相应的试剂瓶中。

设置好蒸馏程序及滴定程序后，将冷却好的消化管装到蒸馏仪上，打开冷凝水，然后开始程序。

三、结果计算X ——试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g ）C —— HCl 标准溶液的浓度mol/LV 1 —— 滴定样品吸收液消耗的HCl 标准溶液的体积mLV 2 —— 滴定样品空白液消耗的HCl 标准溶液的体积mL0.0140——1.0mL 盐酸（C(HCl)＝1.000mol/L ）标准滴定溶液相当的氮的质量，单位为克（g ）m ——试样的质量或体积，单位为克或mL1000140.0)(21⨯⨯⨯⨯-=F mc V V XF ——氮换算为蛋白质的系数。

一般食物为6.25，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵5.30。

计算结果保留三位有效数字。

第1篇一、实验目的1. 了解大豆品质的基本概念和测定方法。

2. 掌握使用天平和量筒测定大豆质量和体积的方法。

3. 计算大豆的密度，分析大豆品质与密度的关系。

二、实验原理大豆品质是指大豆在生长过程中形成的各种营养成分和品质指标。

大豆的密度是衡量大豆品质的一个重要指标，通常用质量与体积的比值表示。

本实验通过测定大豆的质量和体积，计算大豆的密度，从而了解大豆的品质。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：大豆、量筒、天平、砝码、水、滴管。

2. 实验仪器：天平（精度为0.1g）、量筒（50ml）、滴管。

四、实验步骤1. 使用天平测量大豆的质量：将天平放在水平桌面上，将游码移至标尺左侧的零刻度线处。

将大豆放在天平的左盘上，调整砝码，使天平平衡。

记录大豆的质量（单位：g）。

2. 使用量筒测量大豆的体积：在量筒中加入一定量的水，使水面高度为20cm。

将大豆放入量筒中，观察水面上升的高度。

记录水面上升后的高度（单位：cm）。

3. 计算大豆的密度：根据实验步骤1和2的数据，计算大豆的密度（单位：g/cm³）。

密度 = 大豆的质量（单位：g）/ 大豆的体积（单位：cm³）。

五、实验结果与分析1. 实验数据：（1）大豆的质量：12g（2）大豆的体积：10cm³（3）大豆的密度：1.2g/cm³2. 结果分析：根据实验数据，大豆的密度为1.2g/cm³。

从实验结果可以看出，大豆的密度与其品质有一定的关系。

一般来说，密度越大，大豆的品质越好。

六、实验结论通过本次实验，我们掌握了使用天平和量筒测定大豆质量和体积的方法，并计算出了大豆的密度。

实验结果表明，大豆的密度与其品质有一定的关系。

在今后的生产实践中，我们可以通过测定大豆的密度来初步判断其品质，为大豆的种植和加工提供参考。

七、实验注意事项1. 使用天平时，注意将天平放在水平桌面上，确保天平平衡。

2. 测量大豆体积时，注意观察水面上升的高度，避免误差。

大豆分离蛋白提取方法总结作者：丽水天工环保1、酸沉碱提法。

这是一种传统的分离提取方法。

该法是利用大豆中大多数蛋白质在等电点(pH415) 时沉淀的特性,与其他成分分离,沉淀的蛋白质经调节pH 后溶解,因此称之为酸沉碱提法。

酸沉碱提的缺陷是: 耗酸、耗碱量大,废水处理费用高,产品收率低。

该分离提取方法有待改进。

但目前仍然是工业化生产的基本方法。

2、膜分离法。

根据大豆蛋白的分子量大小、形状及膜与大豆蛋白的适应性,选择膜材料和不同截留分子量的膜,对大豆蛋白提取液超滤分离,超滤净化,使非截留组分排除,达到符合标准的分离大豆蛋白液,接着将净化后的大豆蛋白提取液超滤浓缩到所需的浓度后出料,喷雾干燥成粉状大豆分离蛋白。

3、反胶束萃取分离法。

反胶束是表面活性剂在有机溶剂中形成的一种聚集体,其中表面活性剂的非极性尾在外,与有机溶剂接触,极性头在内,形成极性核,该核具有包含水溶液和溶解蛋白质的能力,因而可以用此含有反胶束的有机溶剂从水相中萃取蛋白质。

利用反胶束技术从全脂豆粉萃取大豆蛋白,可一次萃取50 %左右。

大豆蛋白萃取过程非常快,用非扩散模型解释较为合理。

该法需要的主要仪器有:自动水分测定仪、气浴恒温震荡器、离心机、凯氏定氮仪、分析天平、恒温磁力搅拌器和微量进样棒等。

影响反胶束萃取过程的主要因素有表面活性剂的种类及浓度、水相的pH 值、离子强度、温度等。

反胶束萃取技术的优点是:选择性高、操作方便、放大容易、萃取剂(反胶束) 相可循环利用、分离和浓缩同步进行。

其缺点是:蛋白质在现有反胶束体系中稳定性不高,导致萃取前后蛋白质的活性损失较大,因而制约其工业化应用。

4、反相高效液相色谱法这是对大豆蛋白中7 S 和11 S 球蛋白进行快速分离的一种方法。

在分离条件为40 ℃、流速1mL/ min 的条件下,9 min 可完成相应球蛋白的分离。

具体方法为:（1）试剂与试样。

乙腈(CAN) (HPLC 级) 、三氟乙酸( TFA) (HPLC 级) 、HPLC 级水用于移动相的制备。