细胞化学染色检验方法和要求
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临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标一、引言骨髓细胞学检验作为临床诊断和治疗领域的重要手段,对医疗机构和临床实践者提出了较高的素质要求。
本文将从多个方面分析临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标。
二、医学知识1. 确保具备扎实的医学基础知识,包括解剖学、生理学、病理学等相关专业知识。
2. 熟悉骨髓细胞学检验的基本原理和技术方法,包括骨髓细胞的形态学特征、染色技术、免疫学检测等。
3. 掌握常见疾病的临床表现和相关的骨髓细胞学检验结果,能够准确判断疾病类型和严重程度。
三、实验操作技能1. 熟练掌握骨髓采集、制片和染色技术,能够获得高质量的骨髓涂片和染色切片。
2. 具备独立判断和筛选骨髓细胞学检验结果的能力,能够准确识别异常细胞,并及时向临床医生提出建议。
3. 熟练掌握各种仪器设备的操作和维护方法,确保设备正常工作和维持高水平的实验质量。
四、思维能力1. 具备良好的分析和解决问题能力,能够准确理解和解释骨髓细胞学检验的结果,为临床诊断提供有力支持。
2. 能够深入思考和探讨骨髓细胞学检验相关的学术问题,不断提升自己的专业水平和学术造诣。
3. 具备良好的沟通能力和团队合作精神,能够与临床医生、实验室技术人员和其他相关人员有效沟通和协作。
五、职业道德1. 遵守医学伦理和职业道德准则,保护患者隐私和权益,谨慎处理骨髓细胞学检验相关的信息和数据。
2. 严格执行实验室标准操作规程,确保实验过程的安全和准确性,杜绝实验操作中的不端行为。
3. 不断学习和提升自己的专业水平,积极参加相关的学术交流和培训活动,为患者提供更好的医疗服务。
六、结论骨髓细胞学检验作为临床医学领域中至关重要的检验手段,其要求的素质目标不仅仅是为了保障实验数据的准确性和临床诊断的正确性,更重要的是为了保障患者的生命健康和医疗权益。
临床专业骨髓细胞学检验要求达到的素质目标不仅是医疗从业者的责任所在,更是医疗机构和整个医疗体系的责任所在,务必引起广泛重视。
细胞化学染色细胞化学染色是将形态和功能相结合的细胞科学。
它是在保持完整的细胞形态和细胞结构的前提下,运用化学反应将被检细胞内的各类化学成分和细胞结构及生理活性物质原位地显示。
因而对于探索细胞内的化学成分、生理功能、新陈代谢及细胞生理和病理改变有着重要意义。
血液细胞化学染色的范围一般可分为:蛋白质类(氨基酸、酶)、核酸类、多糖类、脂类、盐类或金属类,采用的方法通常为化学结合和物理溶解及酶-底物反应。
临床评价:1.细胞化学染色的开展,已有数十年的历史。
其在结合细胞形态学的基础上对各类白血病的确诊,对许多血液疾病鉴别诊断中的帮助,对各种良、恶性血液系统疾病疗效和预后估计提供一定的信息。
2.血液系统各种恶性疾病,特别是急性白血病,因其多为早期分化较差的病理细胞增殖,客观上存在着形态变异、畸形发育,即使是有经验的检验人员仅凭细胞形态也难以避免错误诊断的发生。
如将细胞形态和细胞化学染色相结合,能提高急性白血病的诊断和较正确地对其分型及亚型分型,即为急性白血病FAB 分型。
3.近年来,由于细胞免疫学、细胞遗传学、分子生物学和细胞超微结构等迅速发展,进一步推动了细胞化学染色这一领域的进展,并出现了细胞免疫组织化学染色、细胞超微化学染色等更新、更准确的检验方法与手段,对探讨各类血液疾病发病原理和观察治疗反应及预后起了极其重要的作用。
如将细胞免疫化学、细胞遗传学、分子生物学这三者与细胞化学染色及细胞形态学相结合,对各种白血病进行分型,即成为白血病的MICM分型诊断。
4.细胞化学染色通常应用在各种血液系统疾病特别是对各种急性白血病的诊断与鉴别诊断中。
但白血病细胞因其呈高度的异质性和多态性,有时即使是同一类型的白血病也可在细胞形态、细胞化学染色结果、细胞免疫表型及分子生物学等方面存在较大的差异。
所以对各类型白血病作一套较完整的细胞化学是补充了单凭形态对细胞辨认的不足。
因此我们在实际工作中若要对各类型白血病作出比较准确的诊断与鉴别诊断,应尽可能采用多项细胞化学染色或双(多)重染色。
高中生物课程中常见染色剂染色原理及使用注意事项朱秋霖,马天兵兰州二中,兰州 730000 摘要:目的:探究高中生物试验中常见染色剂的使用方法及常见问题与注意事项方法:通过一些简单的实验验证与参考文献得出结论。
结果:验证与总结出生物试验中常见染色剂的染色原理及所遇到的染色问题的原因。
关键词:高中生物学实验染色剂显色原理注意事项The common dye staining principle and precautions in the highschool biology curriculumZhu Qiulin,Ma TianbingLanzhou NO.2 middle secondary school class8 grade2,lanzhou 730000Abstract:Objective: To explore the use of high school biology test stains and FAQs Notemethod: through some simple experiments verify references concluded.Results:Validation andsummed up a common biological test stain dyeing principle and coloring problem encountered byreason.Keywords:high school biology experiment stain color rendering principle Precautions1.常见染色剂常见的高中生物染色显色反应,其实质是化学反应或者物理反应,按照其反应本质,可分为下列几类[5]:1.1 氧化还原反应类染色剂通过氧化还原反应生成某些具有特殊颜色的物质,利用其与生物组织中某些具有还原性的物质或代谢产物进行化学反应,宏观上产生颜色变化,通过颜色变化,鉴别某些生物组织中的目标物质。
TUNEL染⾊相关疾病:产品名称:罗⽒(Roche)公司Tunel试剂盒英⽂名称:Tunel产品货号:11684817910产品规格:50T试剂级别:试剂级产品产地:USA产品商标:RocheIn situ cell death detection kit-POD法⼀、原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是⽤来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作⽤下,可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3‘-OH末端,并与连接辣根过氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的荧光素抗体特异性结合,后者⼜与HRP底物⼆氨基联苯胺(DAB)反应产⽣很强的颜⾊反应(呈深棕⾊),特异准确地定位正在凋亡的细胞,因⽽在光学显微镜下即可观察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞⼏乎没有DNA断裂,因⽽没有3?-OH形成,很少能够被染⾊。
本试剂盒适⽤于组织样本(⽯蜡包埋、冰冻和超薄切⽚)和细胞样本(细胞涂⽚)在单细胞⽔平上的凋亡原位检测。
还可应⽤于抗肿瘤药的药效评价,以及通过双⾊法确定细胞死亡类型和分化阶段。
⼆、器材与试剂器材:光学显微镜及其成像系统、⼩型染⾊缸、湿盒(塑料饭盒与纱布)、塑料盖玻⽚或封⼝膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等;试剂:试剂盒含TdT 10×、荧光素标记的dUTP 1×、标记荧光素抗体的HRP;⾃备试剂:PBS、双蒸⽔、⼆甲苯、梯度⼄醇(100、95、90、80、70%)、DAB⼯作液(临⽤前配制,5 µl 20×DAB+1µL 30%H2O2+94 µl PBS)、Proteinase K⼯作液(10-20µg/ml in 10 mM Tris/HCl,pH 7.4-8)或细胞通透液(0.1% Triton X-100 in 0.1% sodium citrate,临⽤前配制)、苏⽊素或甲基绿、DNase 1(3000 U/ml– 3 U/ml in 50 mM Tris-HCl,pH 7.5,10 mM MgCl2,1 mg/ml BSA)等。
细胞生物学实验报告脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法)1.实验目的:用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色,观察细胞颜色,掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法.2.实验用品:(1)仪器及器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管(2)实验药品:蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液(3)实验材料:小鼠3.实验原理:(1)由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类,这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物.脂类是机体内的一类有机大分子物质,它包括范围很广,大体上可以分为类脂和油脂两大类。
类脂包括磷脂(phospholipids),糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三类。
而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类.这几种脂类化学结构有很大差异,生理功能各不相同.其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂,在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。
(2)在固定细胞时,通常使用脂溶性固定液。
然而,鉴定的材料是脂肪时,脂溶性的固定液会溶解脂肪,致使把切片放到显微镜下观察时,观察不到被染色的脂肪,只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。
最好的固定材料是甲醛类的固定液.如医学上保存尸体采用的是福尔马林,即40%的甲醛水溶液,本次实验采用的则是甲醛钙溶液。
(3)光学显微镜的切片多是石蜡切片.在熔接石蜡时,需要用到脂溶性溶剂,而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪,因此本次实验不可采用石蜡切片。
但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂,可以采用石蜡切片.(4)制作切片有多种方法,如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。
(5)脂类染色的原理是,染料溶于脂类显色。
选择溶剂时应注意,溶剂必须既溶解的染料,又不溶解掉脂类。
4.实验步骤:(1)用断头法处死小鼠,置于解剖盘中。
剪开腹腔,用镊子提起小肠,使盖玻片紧贴于肠系膜.用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下,反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上,固定15分钟,(2)吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗,用滴管不断吸取液体以去除固定液.(3)用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤,进行冲洗。
细胞(组织)化学和免疫化学染色技术细胞化学(cytochemistry)或组织化学(histochemistry),是细胞学(cytology)或组织学与生物化学(biochemistry)相结合的一门科学。
细胞化学染色(cytochemical staining)是在血细胞的原位上研究其化学成分的性质,包括蛋白、脂类、糖类、无机盐和酶等,在保持细胞形态的基础上进行化学的定位、定性及半定量的观察,是血液病形态学诊断中的一个重要手段。
细胞免疫化学(immunocytochemistry)又称免疫细胞化学或免疫组织化学(immunohistochemistry)染色,是鉴定某些细胞或组织的病态细胞(如微小巨核细胞)和白血病的重要的辅助性检验技术。
一、涂片细胞化学和免疫化学染色技术(一)细胞化学染色1.铁染色正常骨髓中存在一定量的贮存铁,以含铁血黄素的形式贮存,多分布在巨噬细胞内,称为贮存铁。
骨髓中幼红和晚幼红细胞含有铁颗粒,为细胞内铁,含内铁的细胞称为“铁粒幼细胞”,少数成熟红细胞也含有小的铁颗粒,称为“铁粒红细胞”。
以上铁质均可用普鲁士蓝反应加以显示。
(1)原理:骨髓内含铁血黄素的铁离子和幼红细胞内的铁颗粒,在盐酸环境下与亚铁氰化钾作用,生成蓝色的亚铁氰化铁沉淀(普鲁士蓝反应),定位于含铁粒的部位。
(2)试剂:铁染色液(临用时配制):200g/L亚铁氰化钾溶液5份加浓盐酸1份混合;复染液:1g/L沙黄溶液。
(3)操作:取新鲜含骨髓小粒的骨髓涂片,于铁染色架上,滴满铁染色液;室温下染色30分钟,流水冲洗,复染液复染30秒;流水冲洗,晾干后镜检。
(4)结果判定1)细胞外铁:细胞外铁呈蓝色的颗粒状、小珠状或团块状,细胞外铁主要存在巨噬细胞胞质内,有时也见于巨噬细胞外。
“-”为涂片骨髓小粒全无蓝色反应;“+”为骨髓小粒呈浅蓝色反应或偶见少许蓝染的铁小珠;“++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的片状或弥散性阳性物;“+++”为骨髓小粒有许多蓝染的铁粒、小珠和蓝色的密集小块或成片状;“++++”为骨髓小粒铁粒极多,密集成片。
项目名称:碱性磷酸酶染色法检验标本:外周血涂片收费标准: 50元检验方法:细胞化学染色原理:在PH9.5时,底物被白细胞的酶水解,释出磷酸根和芳香萘胺,后者与偶氮盐偶合,形成有色沉淀。
试剂:1.固定液(保存于4℃)冰箱2. 0.05缓冲液(PH9.4~9.6)保存于4℃冰箱3.底物4.二甲基甲酰胺5.固紫B操作步骤:1.血片或髓片放置4C固定液中30秒,流水冲洗,空气晾干2.工作液:(1)用二甲基甲酰胺溶解底物后,倒入缓冲液中(2)再加入固紫B混匀3.把固定后的玻璃片放入工作液中,置37C水温箱45分钟4.流水冲洗5.苏木精复染6.流水洗,晾干7.直接油镜观片结果:酶活动处呈亮红颗粒正常参考值:积分10~100分/100个中性分叶核细胞意义:NAP活性增高见于细菌性感染、类白反应、再障、某些肿瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病急性变等。
NAP活性减低见于慢性粒细胞白血病、急性粒细胞白血病、绿色瘤、红白血病、PNH、病毒感染等。
注意事项:1.外周血涂片标本需新鲜,收到标本后需立即用专用固定液固定。
2.试剂需防在4℃冰箱内,临用前拿出,试剂打开后需立即应用,最长不得超过30min。
项目名称:过氧化物酶染色法检验标本:骨髓涂片收费标准:50元检验方法:细胞化学染色检验原理:过氧化物酶在细胞内的颗粒从H2O2中释放出氧,氧化联苯胺,引起在过氧化酶活性处,沉积棕黑色的化合物。
试剂:1.0.3%联苯胺酒精溶液2.H2O2溶液(3%H2O2+蒸馏水5ml)操作步骤:1.骨髓涂片加0.3%联苯胺酒精溶液10-15滴2.一分钟后,加H2O2溶液10-15滴3.五分钟后,流水冲洗4.再用瑞氏染液复染5.水洗,晒干结果:酶活力处呈棕黑色。
意义:急性白血病中可借过氧化物酶染色区蓓别急淋与急非淋。
急淋POX呈阴性反应,FAB分型规定阳性率<3%。
急非淋呈阳性反应,阳性率≥3%。
注意事项:1.骨髓涂片标本需新鲜,收到标本后需立即染色。