肠球菌、溶血性链球菌和粪链球菌检验培养基(DOC)
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葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途:用于溶血性链球菌的增菌培养配方:(g/L)牛肉粉氯化钠蛋白胨磷酸氢二钾葡萄糖pH值7.5 ± 0.1 3.0 5.0 10.0 2.0 10.0 25℃原理:蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子;氯化钠维持均衡的渗透压;磷酸氢二钾为缓冲剂;葡萄糖提供碳源。
用法:称取本品 30.0g,煮沸溶解于 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
质量控制:在36±1℃培养24小时。
质控菌株ATCC生长情况溶血性链球菌(10-8)+++单增李斯特氏菌27853 (10-8)+++大肠杆菌25922 +/-沙门氏菌14028 +/-匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途:用于溶血性链球菌的增菌培养配方:(g/L)胰蛋白胨牛心浸粉叠氮钠结晶紫pH值7.3-7.5 10.0 20.0 0.065 0.002 25℃原理:胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;脱纤维兔血(或羊血)为溶血性链球菌提供大量生长因子;结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法:称取本品 30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌 15 分钟, 冷至 50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。
质量控制:在36±1℃培养18-24小时。
质控菌株ATCC生长情况溶血现象溶血性链球菌+++ +(大)单增李斯特氏菌27853 ++ +(小)大肠杆菌25922 - -沙门氏菌14028 - -肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途:用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养(GB标准)配方:(g/L)牛肉粉氯化钠蛋白胨磷酸氢二钾pH值7.5 ± 0.1 3.0 5.0 12.0 2.0 25℃原理:蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;氯化钠可维持均衡的渗透压。
肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出,单独成为一个菌属,包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。
临床上常见的菌株为粪肠球菌。
2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌,单个、成双或短链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色,有a 溶血或β溶血环的菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
3.3 生化反应触酶试验阴性,分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长,多数菌株PYR试验阳性,对杆菌肽耐药。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌,触酶试验阴性,在65g/L 氯化钠中生长,胆汁、七叶苷试验阳性,45℃中生长。
3.4.2与屎肠球菌的鉴别:粪肠球菌不分解阿拉伯糖,而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别:见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别:见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定从血平板上挑取纯菌落,用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中,氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。
青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。
粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。
对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌,需做β-内酰胺酶检测,β-内酰胺酶阳性,则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途:用于溶血性链球菌的增菌培养匹克氏肉汤基础APick’s Broth BaseA用途:用于溶血性链球菌的增菌培养肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth用途:用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养(GB标准)叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途:用于链球菌的增菌培养乙基紫叠氮钠肉汤用途:用于链球菌的增菌培养KF链球菌琼脂KF Streptococcus Agar 用途:用于链球菌的选择性分离及计数(GB、SN标准)肠球菌琼脂(胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂)Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途:用于食品和水中肠球菌的计数CATC琼脂CATC Agar 用途:用于食品和饮料肠球菌的分离培养胆盐七叶苷琼脂Bile Esculin Agar用途:用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养哥伦比亚血琼脂基础Columbia Blood Agar Base 用途:营养非常丰富,用于各种细菌的基础培养基LIM培养基LIM Medium 用途:用于链球菌的分离培养(Japan方法)BETA-SSA琼脂BETA-SSA Agar用途:用于链球菌的选择性分离培养粪肠球菌琼脂Enterococcus faecalis Agar 用途:用于粪肠球菌的选择性分离缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water 用途:用于阪崎杆菌前增菌培养(GB2008标准)胆汁液态培养基Bile broth用途:用于粪链球菌的胆汁耐受试验。
M-肠道菌琼脂M-Enterococcus Agar用途:用于水中或其它物质中肠球菌分离培养和计数(滤膜法或划线法)THB培养基THB Medium 用途:用于链球菌增菌培养PS琼脂PS Agar 用途:用于消化球菌的培养肠球菌肉汤Enterococcus Broth 用途:用于肠球菌增菌培养脑心浸液肉汤(BHI)Brain Heart Infusion Broth 用途:用于细菌的增菌培养脑心浸萃液肉汤Brain Heart Infusion Broth 用途:用于营养苛求细菌的增菌培养脑心浸液琼脂(BHIA)Brain Heart infusion Agar 用途:用于营养苛求细菌的增菌培养Pfizer肠球菌选择性琼脂(PSE琼脂)Pfizer Enterococcus Selective Agar 用途:用于粪链球菌的选择性分离和计数(SN标准)MEI培养基MEI Medium 用途:用于一步滤膜法显色检测或计数水中的肠球菌。
中文名称: 肠球菌显色培养基英文名称:Enterococcus faecium chromogenic medium产品规格:1000ml用途:用于肠球菌的显色培养,肠球菌显红色至紫红色作用:肠球菌显色培养基是公司改良的培养基,用于快速检测食品、水质和环境中的肠球菌。
菌落显红色至紫色,其它菌显无色、黄色或被抑制。
肠球菌显色培养基是用于快速检测食品、水质和环境中的肠球菌。
菌落显红色至紫色,其它菌显无色、黄色或被抑制。
成份(g/L)此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
用法称取本品56.4g,水浴加热溶解于1000ml 蒸馏水中,冷却至45-50℃时,倾入无菌平皿,备用。
无需高压灭菌;操作步骤使用前,把制备好的培养基放置室温10-20 分钟。
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;2、取样品液1ml加入冷却至45-50℃肠球菌显色培养基中混匀或涂布于平板上;或取样品液划线接种于肠球菌显色培养基上;3、36℃培养24~48h,选用有30~200 个菌落的平板,计数平板上出现的红色至紫色菌落。
质量控制1、外观此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈淡黄色至乳白色。
制备好的平板呈透明淡黄色培养基。
2、微生物试验在36℃培养24-48h:典型特征典型菌落为红色至紫色。
贮存制备好的平板应立即使用,应避免光线直接照射。
干燥培养基应放置于阴暗干燥处,保存温度2-8℃,注意避光保存。
失效干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意此培养基仅供实验室使用。
肠球菌显色培养基的微生物灵敏度试验:按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养24-48小时。
注:回收率计算时,用TSA琼脂做对照培养基。
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途:用于溶血性链球菌的增菌培养Pick ' s Broth BaseA用途:用于溶血性链球菌的增菌培养pH 值7.3-7.5 25 C原理:胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;脱纤维兔血〔或羊血〕为溶血性链球菌提供大量生长因子;结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。
用法:称取本品,加热溶于1000ml蒸馏水中,分装,121 C高压灭菌15分钟,冷至50C左右时,参加脱纤维羊血,混匀。
质量控制:在36 ±1 C培养18-24小时。
Meat Infusion Broth用途:用于溶血性链球菌、蜡样芽抱杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养〔GB标准〕配方:〔g/L〕原理: 蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;磷酸氢二钾为缓冲剂;氯化钠可维持均衡的渗透压。
用法:称取本品,溶解于1000ml蒸馏水中,121C高压灭菌15分钟,备用质量控制:在36 ±1 C培养18-24小时。
Azide Dextrose Broth 用途:用于链球菌的增菌培养用途:用于链球菌的增菌培养KF Streptococcus Agar 用途:用于链球菌的选择性别离及计数〔GB、SN标准〕肠球菌琼脂胆盐-七叶苷-叠氮钠琼脂Enterococcus Agar(Bile Esculin Azide Agar) 用途:用于食品和水中肠球菌的计数CATC Agar用途:用于食品和饮料肠球菌的别离培养Bile Esculin Agar 用途:用于肠球菌和肠道致病菌的别离培养配方:〔g/L〕Columbia Blood Agar Base 用途:营养非常丰富,用于各种细菌的根底培养基用法:称取本品39克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121 C高压灭菌15分钟,冷至45-50'C左右时, 参加相当于20mg庆大霉素的无菌硫酸庆大霉素,混匀,倾入无菌平皿。
粪链球菌及检验一、生物学性状依据最新分类原则,粪链球菌又叫粪肠球菌。
应用C多糖抗原,依据兰氏(Lancefield)血清学分类,可将链球菌分成很多群。
粪链球菌属于D群。
D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。
前者包括粪链球菌(S.faecalis)、屎链球菌(S.faecium)和坚忍链球菌(S.durans),后者有牛链球菌(S.bovis)和马肠链球菌(S.equinus)。
粪链球菌菌形圆或椭圆,可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。
在丰富培育基上菌落大而光滑,直径1-2mm,全缘,罕见色素。
其养分要求低,在一般养分琼脂上也可生长。
能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培育基中生长,并能耐65℃ 30分钟。
它可利用精氨酸为能源,发酵山梨醇,不发酵阿拉伯糖。
在简洁的培育基上生长不需叶酸。
近年来,DNA-DNA杂交结果显示,肠球菌与链球菌属同源程度低,故有学者建议另立肠球菌属,与人类有关者为粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(E.faecium)。
二、致病性粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。
其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染,皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。
从自然乳清培育物中分别的菌株,能产生一种细菌素,叫肠球菌素(Enterocin),对单增李斯特氏菌有杀灭作用。
三、流行病学粪链球菌为条件致病菌,它来源于人和温血动物的粪便,间或消失于感染的尿道及急性心内膜炎。
它能够通过食品对人类造成感染,因而常见于很多食品,如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等,粪链球菌进入食物链的主要缘由是不卫生的加工条件所致的,一般与直接的粪便感染无关。
粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成,感染剂量较高,一般大于107个细菌。
人、禽感染率最高,亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。
四、检验与掌握1、检验:样品制备取25g或25mL样品,放入225mL灭菌生理盐水中,充分混匀,制成1:10样品稀释液。