溶血性链球菌检验原始记录
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【GB/T 4789.11—1994】食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3.1 温箱:36±1℃。
3.2 水浴:36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管:1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子。
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂4.1 葡萄糖肉浸液肉汤:按GB 4789.28中4.1规定,在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤:按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 匹克氏肉汤:按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板:按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序(图略)6 操作步骤6.1 样品处理称取25g固体检样;称取25mL液体检样,加入225mL灭菌生理盐水,研成匀浆制成混悬液。
6.2 一般培养将上述混悬液吸取5mL,接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤;或直接划线接种于血平板,如检样污染严重,可同时按上述量接种匹克氏肉汤,经36±1℃培养24h,接种血平板,置36±1℃培养24h,挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落,在血平板上分纯,然后观察溶血情况及革兰氏染色,并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形,直径0.5~1μm,链状排列,链长短不一,短者4~8个细胞组成,长者20~30个,链的长短常与细菌的种类及生长环境有关;液体培养中易呈长链;在固体培养基中常呈短链,不形成芽孢,无鞭毛,不能运动。
一、编制目的为规范本单位β型溶血性链球菌的检测编制本作业指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中β型溶血性链球菌的测定。
三、编制依据GB/T 4789.11-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:a)恒温培养箱:36℃±1℃;b)冰箱:2℃~5℃;c)厌氧培养装置;d)天平:感量0.1g;e)均质器与配套均质袋;f)显微镜:10×~100×;g)无菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头h) 三角烧瓶;i)无菌培养皿:直径90mm;j)pH计或pH比色管或精密pH试纸;k)水浴装置:36℃±1℃;l)微生物生化鉴定系统。
五、培养基和试剂5.1.改良胰蛋白胨大豆肉汤5.2 哥伦比亚CNA血琼脂5.3 哥伦比亚血琼脂5.4 革兰氏染色液5.5 胰蛋白胨大豆肉汤5.6 草酸钾血浆5.7 0.25%氯化钙(CaCl2)溶液5.8 3%过氧化氢(H2O2)溶液5.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡六、检验程序溶血性链球菌检验程序见图1图1溶血性链球菌检验程序七、操作步骤7.1样品处理及增菌以无菌操作取样25g(ml),加入装有灭菌225mlmTSB的均质杯,用旋转刀片式均质器以8000r/min~10000 r/min均质;或加入装有225ml mTSB的均质袋中,用拍击式均质器连续均质1min~2min,液体样品振荡混匀即可。
于36℃±1℃,厌氧培养18h~24h。
7.2 分离将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂,36℃±1℃,厌氧培养18h~24h,观察菌落形态。
溶血性链球在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm~3mm,灰白色、半透明、光滑、表面凸起、圆形、边缘整齐,并产生β型溶血。
7.3 鉴定7.3.1分纯培养挑取5个(如小于5个则全选)可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液,36℃±1℃,培养18h~24h。
CZJA-JL-066 第 页共 页
溶血性链球菌检验原始记录
检验者: 审核者: 检验起止时间:
样品编号
样品名称 检验依据 《食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验》GB15982-2012
检验环境
温度: ℃ 湿度: %RH
检验日期
实验仪器及编号
DH-600A 电热恒温培养箱/JAYQ-009
样品制备 以无菌操作取检样1mL 至盛有10mL 灭菌生理盐水中,振荡混匀。
增菌培养
培养后现象
检验项目 现象
结果 分离培养 血平板培养 要求 36±1℃,24h
培养
___日___时至___日___时。
血平板
分纯 要求
36±1℃,24h
培养
___日___时至___日__时。
检验项目
现象 结果 生化试验
革兰氏染色
杆菌肽
试验 要求 36±1℃,18-24h
培养
___日___时至___日___时。
链激酶
试验
检验结
果 样品中 溶血性链球菌
备注。
新生儿溶血病产前血液学实验记录标本编号:()
姓名:科室:住院号:送检日期检测日期
本记录为科室试验原始记录本需保存十年。
检验者------------- 核对者:--------------
新生儿溶血病产前血液学实验记录标本编号:()
姓名:----------科室:----住院号:------送检日期------------- 检测日期
--------------
新生儿溶血病血清学实验记录
姓名:科室:住院号:送检日期检测日期血型:总胆红质:()
本记录为科室试验原始记录本需保存十年。
检验者核对者:
新生儿溶血病血清学实验记录
姓名:科室:住院号:送检日期检测日期血型:总胆红质:()
本记录为科室试验原始记录本需保存十年。
检验者核对者:。
血清凝集试验操作步骤及示意图1 在玻片上分出2个区域2 在一个区域内滴加1滴血清,在另一个区域内滴加1滴生理盐水3 从三糖铁斜面上用灭菌的接种环挑取1环可疑菌落4 先与盐水研成乳状液,接种环灭菌,再从TSI上挑取1环可疑菌落与血清研成乳状液5 将玻片倾斜,摇动混合1min,出现如下现象:a 菌+血清凝集,菌+生理盐水不凝集,为阳性反应;b 菌+血清不凝集,菌+生理盐水不凝集,为阴性反应;c 菌+血清不凝集,菌+生理盐水凝集,为自凝反应,粗糙型菌株,不能分型。
沙门氏菌检验程序(GB/T4789.4-2008)36℃±1℃8h-18h42℃±1℃18h-24h 36℃±1℃18h-24h36℃±1℃,40h-48h 36℃±1℃,18h-24h 36℃±1℃,40h-48h 36℃±1℃,18h-24h2 沙门氏菌检验原始记录①选用设备、培养基和试剂②实验记录单志贺氏菌检验程序(GB/T4789.5-2003)36℃±1℃ 6h-8h2 志贺氏菌检验原始记录①选用设备、培养基和试剂②实验记录单金黄色葡萄球菌检验程序(GB/T4789.10-2008)36℃±1℃ 18h-24h36℃±1℃ 18h-24h 或45h-48h 36℃±1℃ 18h-24h℃ 18h-24h2 金黄色葡萄球菌检验原始记录①选用设备、培养基和试剂②实验记录单溶血性链球菌检验程序(GB/T4789.11-2003)36℃±1℃ 24h36℃±1℃ 18h-24h2 溶血性链球菌检验原始记录①选用设备、培养基和试剂②实验记录单副溶血性弧菌检验程序36℃±1℃ 8h-18h36℃±1℃ 18h-24h36℃±1℃ 24h2 副溶血性弧菌检验原始记录①选用设备、培养基和试剂②实验记录单。
溶血性链球菌及检验一、生物学特性1、形态与染色链球菌呈球形或椭圆形,直径0.6-1.0μm,呈链状排列,长短不一,从4-8个至20-30个菌细胞组成不等,链的长短与细菌的种类及生长环境有关。
在液体培养基中易呈长链,固体培养基中常呈短链,由于链球菌能产生脱链酶,所以正常情况下链球菌的链不能无限制的延长。
多数菌株在血清肉汤中培养2-4h易形成透明质酸的荚膜,继续培养后消失。
该菌不形成芽胞,无鞭毛,易被普通的碱性染料着色,革兰氏阳性,老龄培养或被中性粒细胞吞噬后,转为革兰氏阴性。
2、培养特征需氧或兼性厌氧菌,营养要求较高,普通培养基上生长不良,需补充血清、血液、腹水,大多数菌株需核黄素、维生素B6、烟酸等生长因子。
最适生长温度为37℃,在20-42℃能生长,最适pH为7.4-7.6。
在血清肉汤中易成长链,管底呈絮状或颗粒状沉淀生长。
在血平板上形成灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5-0.75mm的细小菌落,不同菌株溶血不一。
3、生化反应分解葡萄糖,产酸不产气,对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、蕈糖、七叶苷的分解能力因不同菌株而异。
一般不分解菊糖,不被胆汁溶解,触酶阴性。
4、抗原结构链球菌的抗原构造较复杂,主要有三种:(1)核蛋白抗原或称P抗原,无特异性,各种链球菌均相同。
(2)多糖抗原或称C抗原,系群特异性抗原,是细胞壁的多糖组分,可用稀盐酸等提取。
(3)蛋白质抗原或称表面抗原,具有型特异性,位于C抗原外层,其中可分为M、T、R、S四种不同性质的抗原成分,与致病性有关的是M抗原。
5、分类根据链球菌在血液培养基上生长繁殖后是否溶血及其溶血性质分为三类。
(1)α-溶血性链球菌:菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环,也称甲型溶血,这类链球菌多为条件致病菌。
(2)β-溶血性链球菌:菌落周围形成一个2-4mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环,也称乙型溶血,因而这类菌亦称为溶血性链球菌,该菌的致病力强,常引起人类和动物的多种疾病。