药品生物检定技术(B)

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门冬酰胺酶（抗肿瘤药） Ch.P（2005）二部 本品系自埃希大肠杆菌（E.coli ASI.357）
或欧文菌（Er-winia casotovora）中提取制备的 具有酰氨基水解作用的酶。
肝素钠（抗凝血药） Ch.P（2005）二部 本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨
基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质。
小包装容器的数量。
例：2支（瓶）/2板×12粒
检查量：指一次试验所用供试品的总量
（g 或 ML）
例： 2×10=20ML
24×0.25=6g
2、对照试验： 阳性对照
阴性对照
9
3、检查方法：
a、薄膜过滤法：应用广、准确性高，适用 于任何药品、尤其是具有抑菌作用的
。
b、直接接种法：操作简便，适用于无 抑菌 作用的供试品。
中文名称
英文名或缩写
适应症
重组人干扰素a1b
rhuIFNaIb
上皮生长因子
(EGF)
粒细胞集落刺激因子
(GCSF)
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)
红细胞生成素
(EPO)
溶栓药物链激酶
(SK)
重组人胰岛素
Humulin
Novolin
Humalog
白细胞介素-2
rhuIL-2
治疗病毒性角膜炎 烧伤或创伤治疗外用药物
细胞因子类（重组人干扰素）
生长因子类（重组人表皮生长因子）
激素类（重组人胰岛素）
酶类（重组链激酶）
疫苗（重组乙型肝炎疫苗）
单克隆抗体
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重组DNA技术
38
国外重组DNA制品
中文名称
英文名或缩写
适应症
胰岛素

1168 20222判断题1、由于使用和要求不同，标准品可分为国际、国家、工作用三级标准。

( ). A.√. B.×2、实验动物的分组不管采用什么方法，重要的是不要受到主观愿烈的影响。

（）. A.√. B.×3、处于未完全密封状态下产品的操作和转运，如产品灌装（或灌封）、分装、压塞、轧盖等应在A级或B级背景下局部A级环境下完成。

（）. A.√. B.×4、在破伤风梭菌毒力实验中，小白鼠强直性痉挛，抽搐。

呈现弓背反张，腿部强直，尾巴竖立等症状，最后死亡，即为阳性反应。

（）. A.√. B.×5、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

（）. A.√. B.×6、在药品的微生物检验中，若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌。

（）. A.√. B.×7、微生物限度检查应在环境洁净度为不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行，检验全过程需严格遵守无菌操作,防止再污染。

（）. A.√. B.×8、在控制菌检查中，白色念珠菌和黑曲霉均接入玫瑰红钠琼脂培养基中，作适应性检查。

（）. A.√. B.×9、药物微生物总数检测时，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35 ℃培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25 ℃培养5〜7天。

（）. A.√. B.×10、霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28℃培养箱中培养24 h。

（）. A.√. B.×11、单向流系沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流，所以仅有垂直单向流。

（）. A.√. B.×12、空态系指洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。

（）. A.√. B.×13、IMVC试验是指靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、乙酰甲基甲醇试验(V)、枸橼酸盐试验(C)，主要用于金黄色葡萄球菌检测。

革兰氏染色 放大倍数_×__ 菌种______
Gram Stain of Staphylococcus aureus
Gram Stain of Escherichia coli
A Gram Stain of a Mixture of Gram-Positive and Gram-Negative Bacteria.
芽孢染色
方法一
1、制备菌液：加1-2滴蒸馏水于试管中，从斜面挑取2-3环的 菌苔于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。 2、加染色液：加5%孔雀绿2-3滴于试管中用接种环搅拌，使 其充分混合。 3、加热：将此试管浸于沸水浴中，加热15-20分钟。 4、涂片：从试管底部挑菌液于洁净的玻片上，涂成薄膜，晾 干。 5、固定：将涂片通过微火3次。 6、脱色：水洗，直到流出的水中无绿色为止。 7、复染：加番红染色2-3分钟后，倾去染色液，不用水洗，直 接用吸水纸吸去余水，于酒精灯火焰上烘干。 8、镜检：用油镜观察绘图。
方法二
1、 涂片、干燥及固定 2、加温染色：加5%孔雀绿染色液于玻片上，微火加 热至冒蒸汽维持5分钟。 3、水洗 将玻片冷却，水洗直到流出的水中无绿色为 止。 4、常温复染：加番红染色2分钟后，倾去染色液，水 洗，直接用吸水纸吸去余水。 8、镜检：用油镜观察绘图。
五、实验结果
记录所观察到的两种菌的革兰氏染色结果(说明各 菌的形状、颜色和革兰氏染色反应等）并绘图； 记录枯草杆菌芽孢染色结果，并判断是阳性还是 阴性，绘图。
含量较高
革兰氏染色的意义
细菌分类鉴定 指导临床用药
微生物分类鉴定的特征
❖ 形态学和生理生化特征 ❖ 血清学实验和噬菌体分型 ❖ 氨基酸序列和蛋白质分析 ❖ 核酸碱基组成和序列分析
形态学特征

关于黑曲霉
第 2天 第3～ 4天 第4～ 5天 第5～ 7天
图14 黑曲霉改良马丁琼脂斜面不同培养时间的生长形态
中国药品生物制品检定所 23
关于黑曲霉
一类新药IMM018
中国药品生物制品检定所 24
标准菌种实验用菌液
菌液检验： 结合验证实验方法进行活菌计数。 生孢梭菌可在同步硫乙醇酸盐流体培养基 灵敏度实验中计数。
中国药品生物制品检定所 4
1、认识微生物
微生物的生长（population growth）与代时（generation time） 不同微生物的代时范围是20min~10h 大肠埃希菌：20min 枯草芽孢杆菌：28min 金黄色葡萄球菌：30min 铜绿假单胞菌：35min 大肠埃希菌20min繁殖一代，繁殖13h后，其子代细胞数可 以达到1 × 1013个（约等于人体全部细胞数），培养24h后 子代细胞数则可以达到4.7 × 1021个
中国药品生物制品检定所 28
谢谢大家！
中国药品生物制品检定所
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中国药品生物制品检定所
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标准菌种的保藏与应用
菌种保藏及应用参考方法：
干菌种（0代） 100ml液体培养基复苏（1代） 100ml液体培养基复壮（2代） 加100ml 20%无菌甘 油混匀，1ml/管冻存管分装，-20℃或-80℃保存 每次使用取1支自然（室温）解冻，取0.1ml接种至10ml 液体培养基（生孢梭菌用12ml硫乙醇酸盐流体培养基） 按规定培养、稀释（3代）
注意：已经解冻的冻存管不能再冷冻保存，以免冻融！
中国药品生物制品检定所 14
标准菌种实验用菌液
菌悬液制备后应在2小时内使用，若保存在2～8℃ 的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉也可制成 稳定的孢子悬液保存在2～8℃，在验证过的贮存 期内替代对应量的新鲜孢子悬液使用。 各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可 行、快速稳定的菌液制备标准程序。

微生物生长繁殖的控制—防腐
使用同一种化学药品在低浓度时常为防腐剂， 在高浓度时为消毒剂。防腐作为一种防止或抑 制细菌生长繁殖的方法，在药品生产中得到广 泛应用。例如，非无菌药品处方中添加防腐剂。 防腐剂与消毒剂在本质上没有区别，只是浓度 不同而已。有时统称为消毒（防腐）剂。
微生物生长繁殖的控制—消毒
第三部分 药品生产中的微生物生态学分布
微生物生长繁殖的速度是十分惊人的，生态分 布是十分广泛的，这里有一组数字，可以给参 与药品生产的人们一个启迪：
每克新鲜植物叶子表面附生着大约100万个 微生物。
药品生产中的微生物生态学分布
人的皮肤上平均每平方厘米含有10万个细菌，而且 繁殖速度惊人，刚洗过的皮肤，在几小时之内细菌 就可恢复到原来的数量。人的肠道内聚集有100万 亿左右的微生物，粪便中细菌大约占粪便干重的 1/3。这就告诉人们，为什么要便后洗手，而无菌 药品车间的操作工为什么不能裸手操作。
2、制药用水中的微生物
水中的微生物种类较多见的有：假单胞菌属、产碱杆 菌属、产黄菌属、产色细菌属和沙雷菌属等。
在饮用水标准中，大肠杆菌（又称大肠埃希菌）的含 量是判断饮用水水质污染程度的指标。
大肠埃希菌 2-3 μm
2、制药用水中的微生物
垃圾和工业废液污染的水源中约98%含有革兰 阴性细菌、微球菌属、噬细胞菌属，此外还有 酵母菌、类酵母菌和放线菌。
4、人体的微生物和微粒
人体不同部位所带细菌数量
部位
细菌数量
手部
100-1000/c㎡
前额
1000-100000/c㎡
头皮
约100万/c㎡
腋窝
约1000万/c㎡
鼻腔分泌物
约1000万/g
唾液

生长激素
重法和胫骨法
重组人胰岛素 小鼠或家兔血糖法 HPLC
降钙素
大鼠血钙法
HPLC
低分子肝素 血浆凝固法或家兔 分光光度法 全血凝固法
ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 ChP2005 BP2007 BP2007
在本实验室已用理化测定代替生物测定 两种方法间具有良好相关性（P﹤0.01）的品种
活性测定分类
活性测定---定量：质量标准中生物效价 测定（HCG、HMG、肝素）
---半定量 ---定性
活性测定------半定量
半定量------当理化测定占主导地位，生物效价 测定降为辅助作用，只用于活性检查，设定限 值，采用半定量方法，不需精确的生物统计， 尽可能减少实验动物用量
如治疗二型糖尿病新药重组人胰高血糖素类多 肽-1（7-36）质量标准中采用半定量方法（限 值为小鼠血糖降低应大于20%）进行活性检查
生化药名
生物测定方法
理化测定方法 收载标准
伟素
大鼠血脂清除率法 分光光度法
(Sulodexide)
重组绒促性素 幼小鼠子宫增重法 HPLC (rHCG)
重组卵泡刺激 幼大鼠卵巢增重法 HPLC 素(rFSH)
重组黄体生成 幼大鼠精囊增重法 HPLC 素(rLH)
企业标准 企业标准 企业标准 企业标准
BP2007版胰岛素采用HPLC法
ChP2005版二部，动物胰腺提取的胰岛素定量生物测定
中国药典2010年版二部生化药品专业科研项目
1、药品中氨基酸分析方法的研究（归纳分类）。（中检所负责） 2、蛋白质含量测定方法的规范化研究，增订附录。（上海所负
责） 3、人工肠液和胃液中所用酶试剂的标准化研究。（中检所和北

胰岛素生物检定法-具体方法

本品效价测定采用生物检定法，基于其 有降低血糖的作用而采用小鼠血糖法、 小鼠惊厥法、家兔血糖法。长效制剂的 延效作用只能用血糖法。
肝素生物检定法

肝素系由健康牛、猪、羊等食用动物的 肺、肝、肠粘膜中提取的有延长凝血时 间作用的粘多糖类物质，为白色或淡黄 色无晶形粉末，有吸湿性，在水中易溶。 本品相对分子质量及抗凝血效价随动物 种属和脏器来源不同而有差异，相对分 子质量为6000-20000，由肝肺提出的 肝素，每mg不得低于110U，由肠粘膜 提出的肝素，每mg不得低于140U。* *本品在中性及微碱性中较稳定。

4、某些有害杂质的限度检查 如农药残留、热原质、抗生素及生化制 剂中降压物质的限度检查等。

标准品
生物检定法，一般需要应用标准品，以降低由 于生物差异造成的实验误差，使在不同实验室 中检定同一药物时，即使实验条件或影响因素 不尽相同，但由于同时作用于标准品和供式品， 在比检定中这些影响因素可以互相抵消，它们 之间的反应强度比例保持不变这样就大大提高 了生物检定的可靠性和精密度。 药典所采用的标准品：为参照国际标准品制备 的标准品，由中国药品与生物制品检定所发放， 单位效价相当于国际单位效价。标准品有均匀、 稳定而持久的性质，应存放于除去氧气的干燥 器中，低温处避光贮放。
（三）对比检定

生物检定的目的是将供试品（T）和已 知效价的标准品(S)进行效力对比，根 据它们的反应程度，求供试品的效力相 当于标准品效力的倍数，再从中计算出 供试品的效价，因此它属于对比检定。
胰岛素生物检定法

胰岛素是从哺乳动物胰8的胰岛口细胞 中提取的一种蛋白类激素，为六方系结 晶，相对分子量6000，易溶于80%乙 醇和酸性水溶液，在pH2.5的酸性溶液 中比较稳定。 *胰岛素主要药理作用是降低血糖， 大剂量注入可引起惊厥、休克甚至死亡。

学时分配 。
务 ， 学 生 及 社 会 反应 情 况 看 ， 从 此课 程 在 学 校 领 导 的 关 心 及 同 事 的 共 同 努 力 下 ， 得 取
如： 药品 的 染 菌量 检 查 教 学 方 法 过 程 中 ， 先 了良好的效果 。 让 学生 们观 看 由 中国 药 品 生 物 制 品 检定 所 ５综 合 实训 录 制 的 无 菌 检 查 和 微 生 物 限 度 检 查 操 作 《 品生 物 检 定 技 术 为 我院 药 物 分 参考 文 献 药 作 视 频 》 老 师 在 实 验操 作视 频 的 播 放 过 程 中 析 专业 ， ， 生物 制 药 专 业 的专 业 课 程 ， 与 课 ［】 穗 福 ． 谈 （ 品ｒ 检 定 技 术 ） 是 １汪 浅 药 生物 教材 进 行 实 验 操 作 流 程 的 介 绍 ， 及 实 验 的 原 程 设 置 中 的其 它专 业 课 一 起 完 成 学 生职 业 以 的编 写［】 中国职 业技 术 教育 ， ０ ０ ３ ： Ｊ． ２ ０ （） 理 剖析 ， 成 实 验 的介 绍 。 理 论 授 课 过 程 能 力 的 培 养 。 药 品生 物 检 定 技 术 》 生 物 完 在 《 在 ２ ０～ ２１ ． 中， 堂的气氛很关键 ， 媒体的使用 ， 课 多 提 制 药技 术专 业 中 与《 酵 工 艺 学 》 《 物 药 【】牛 四 坤 ， 榆 梅 ． 发 、生 ２ 李 高职 （ 品生 物 检 定 技 药 问 式 的 教学 ， 动 与 交流 ， 发 学 生 的 学 习 互 激 物 分 离 与纯 化 》 《 物 制 药 设 备》 同完 成 、生 一 术 ） 程 改 革 与 实 施［］ 职 业 教 育研 究 ， 课 Ｊ．
＝ 药 品 的 微 牛物 总 数枪 杏
行 实验 的 设 计 作 以及 结 果 的 评 定 。 过 操 通 此 实训 使 学 生 在 毕 业 之 前 将 专业 知 识 系 统

1.检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内 进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。 2.单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬 浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有 效性及对微生物无毒性。 4.细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌 培养温度为35～37℃。 5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最 小包装单位报告。
二、样品供试液的制备
《中国药典》现行版附录中提供了液体供试品、固体 、半固体或黏稠性供试品以及需用特殊方法制备供试 液的供试品的供试液制备方法。 需用特殊方法制备供试液的供试品有：非水溶性供试 品、膜剂供试品、肠溶及结肠溶制剂供试品、气雾剂 、喷雾剂供试品及具抑菌活性的供试品。
无菌检查法 系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。 将药品或材料，在严格的无菌操作条件下，接种于适合各种 微生物生长的不同培养基中，置于不同的适宜温度下培养一 定的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性 对照试验的结果，判断供试品是否无菌。 包括薄膜过滤法和直接接种法两种方法
四、无菌检查法
（二）对照试验 2.阴性对照 不得长菌，用以检查试验过程中使用的溶剂、稀释液 、冲洗液等对微生物生长及存活无影响
四、无菌检查法
（三）检查方法 1.薄膜过滤法 通过滤膜过滤，将供试品中可能存在的微生物富集于 滤膜上，再冲洗掉滤膜上的抑菌成分后，在薄膜过滤 器滤筒内加入培养基，在所需温度下培养，观察是否 有菌生长
一、常规技术要求

《药品生物测定技术》课程标准课程名称及代码：药品生物检定技术课程性质：专业选修课课程类别：B类学分：4.5计划学时：72适用专业：应用化工技术（药品检测方向）1. 前言1.1课程定位《药品生物测定技术》是应用化工技术专业（药品质量检测方向）重要的专业必修课程之一。

本课程是教学内容是在《中国药典》及《中国药品检验标准操作规范》的基础上将药品生物检定中将的理论知识与实践技能系统的传授给学生，其目的是使学生掌握药品生物检测的基本理论和基本技能，同时培养学生科学思维、独立思考、分析问题和解决问题的能力；培养学生相互沟通和团结协作的能力，为培养高素质高技能型人才奠定良好的基础。

1.2设计思路本课程是一门实践性较强的学科，在课程教学上不但要重视学生对理论知识的掌握，更重要的是强调课程的实践性，提高学生的动手操作能力。

贯彻以实践技能培训为主导、理论知识够用的原则，培养学生的实际操作能力以及综合分析实际问题的能力。

本课程建议课时为72学时。

2 课程目标2.1总体目标通过对《药品生物测定技术》的学习，掌握药品生物测定的基本理论和实践方法。

2.2具体目标2.2.1知识目标2.2.1.1掌握无菌检查、药品的微生物检查、控制菌检查的原理和方法；2.2.1.2掌握抗生素效价的微生物测定的原理和方法；2.2.1.3掌握药品生物测定技术的基本操作要点和操作技能。

2.2.2能力目标2.2.2.1通过课堂学习，感受药品生物检测技术在应用化工技术专业（药品检测方向）中的重要性。

激发学习兴趣，调动学习的积极性。

2.2.2.2具备药品生物检测的能力2.2.2.3参与课堂讨论，培养学生信息收集整理、知识综合运用和交流表达能力。

2.2.3素质目标2.2.3.1具有药学岗位应有的个人职业道德素养和团队合作精神，明确开展药学服务工作的责任要求，熟悉药学人员与服务对象之间和药学人员之间的道德准则；2.2.3.2具有高尚、灵活、开放的人文精神。

表现出热情、关心、爱护、尊重药学服务对象和认真、踏实、严谨、敬业的工作作风。

例2：随机分为三组
动物 编号 随机 数字 除3 余数 组别
1 08 2
2 27 0
3 01 1
4 50 2
5 15 0
6 29 2
7 39 0
8 39 0
9 43 1
10 79 1
11 69 0
12 10 1
B
C
A
B
C
B
C
C
A
A
C
A
随机分为三组，以3除各随机数字，若余数为1，则归入A组；余数为2， 则归入B组；余数为0，则归入C组。
实验动物随机分组
提纲
Hale Waihona Puke 一、随机分组的意义 二、随机数字表法
一、随机分组的意义
同一种动物即使品系、窝别、年龄、性别、生活条件完全一致，对药物的反应仍不可能完 全一致。差异是绝对的，一致是相对的。减少差异的办法除精选实验动物外，就是实行严格的 随机原则，采用严格按照机遇的顺序进行安排，使正性和负性影响随机地分配到各组，得到平 衡，而不受任何主观愿望的影响。
二、随机数字表法
随机数字表上所有的数字是按随机抽样原理编制的，表中任何一个数字出现在任何一个地 方都是完全随机的。
下图为一个典型的随机数字表。
例1：随机分为两组
动物 编号 随机 数字 组别
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
78 乙
38 乙
69 甲
57 甲
91 甲
0 乙
37 甲
45 甲
66 乙
82 乙
65 甲
41 甲
随机分为两组，以随机数字的奇数代表甲组，偶数代表乙组。

实验动物随机分组
提纲
Excel表法
Excel 是 Microsoft Office system中的电子表格程序。可以跟踪数据，生成数据分析模 型，编写公式以对数据进行计算，以多种方式透视数据，并以各种具有专业外观的图表来显 示数据。总之，Excel是用来更方便处理数据的办公软件。
可以利用Excel进行随机分组。
第六步：设置每组动物数量，18只分为三组，每组六只。
第七步：以“实验动物编号”序列为主要关键字，进行升序排列。
第八步：分组完成，即X号（实验动物编号）被编入Y组（组别）。 在本例中，即1号被编入A组，2号被编入B组，3号被编入A组。。。。。。
制作
第一步：建立一个Excel表，双击打开。
第二步：新建三列数据，并命名“动物编号”、“随机数”和“组别”。
第三步：在“随机数”这一列利用函数rand产生与实验动物只数相同数量的随机数。
第四步：采用复制——选择性粘贴——数值，固定生成的随机数。
第五步：以“随机数”序列为主要关键字，进行升序排列。

动态药品生物检定技术随着医学技术的不断发展，药品生物检定技术也在不断革新和进步。

动态药品生物检定技术作为一种新兴的检定技术，对于药品生产和质量控制起着至关重要的作用。

本文将从动态药品生物检定技术的定义、特点、应用和发展趋势等方面进行论述。

一、动态药品生物检定技术的定义动态药品生物检定技术是一种利用生物学、生物化学和分子生物学等原理和方法，对药品进行活性成分、稳定性、纯度等方面的检测技术。

它不仅可以对已有的药品进行检定，还可以对新药的研制和开发提供重要的技术支持。

动态药品生物检定技术以其敏感性高、重复性好、检测速度快等特点，逐渐成为药品生产和质量控制领域的重要手段。

二、动态药品生物检定技术的特点1. 高灵敏度：动态药品生物检定技术可以检测药品中极微量的活性成分，对于药品的有效成分含量进行准确、快速的检测。

2. 高重复性：动态药品生物检定技术具有良好的重复性，可以确保检测结果的准确性和可靠性。

3. 多样性：动态药品生物检定技术可以检测药品的活性成分、纯度、溶解度、稳定性等多个方面的指标，为药品的质量评价提供全面的信息支持。

4. 快速性：动态药品生物检定技术具有快速的检测速度，可以在较短的时间内完成对药品样品的检测，节约时间成本。

5. 应用广泛：动态药品生物检定技术不仅可以应用于已有药品的质量控制，还可以为新药的研制和开发提供技术支持，是一个非常具有潜力的检定技术。

三、动态药品生物检定技术的应用1. 药品质量控制：动态药品生物检定技术可以用于药品的活性成分、稳定性、纯度等方面的检测，为药品的质量控制提供重要的技术支持。

2. 新药研制：动态药品生物检定技术可以对新药的活性成分进行检测和评价，为新药的研制和开发提供重要的技术支持。

3. 药品工艺改进：动态药品生物检定技术可以对药品生产工艺进行监控和改进，确保药品的质量稳定性和一致性。

4. 药品安全评估：动态药品生物检定技术可以对药品的毒性和安全性进行评估，为药品的临床应用提供科学依据。