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实验一红细胞计数一、实验目的：掌握红细胞计数原理及技术。
二、实验原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。
三、实验器材及试剂：显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。
四、实验操作：1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。
2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。
3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。
6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。
五、计算N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数× 106：1ul换算为1升内红细胞数× 200：稀释倍数六、正常参考值正常参考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升成年女性：3.50-5.00×1012/升新生儿： 6.00-7.00×1012/升实验二血红蛋白测定一、实验目的：掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。
二、实验原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。
HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。
三、实验操作：1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。
血常规标准操作流程前言血常规是临床常用的一项常规检查，通过检测患者血液中各种细胞及相关参数的变化情况，辅助医生判断患者的病情。
血常规包括红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（Hb）、红细胞压积（HCT）、白细胞计数（WBC）、血小板计数（PLT）以及分类计数等项目。
本文将分步介绍血常规的标准操作流程。
一、准备工作1. 检验仪器和设备：保证血常规分析仪器日常维护和校准正常，确保仪器的正常使用；2. 样本采集工具：准备好采血针、采血管、消毒棉球等样本采集工具；3. 样本采集标本管：标注好采集的标本管，并按照标本采集时间顺序排列，确保标本的准确性；4. 个人防护：穿戴好手套、口罩和实验服，保证操作人员和患者的安全。
二、样本采集1. 与患者沟通：在开始采集血样之前，应与患者进行充分的沟通，向患者解释样本采集的目的、过程以及可能的不适感；2. 采集位置：选择合适的采血位置，常用的有手指末梢、耳尖、脚趾末梢等；3. 采集流程：a. 采血针的抽血针头应朝上，避免空气进入采血管；b. 选择适当的采血针，并在采血部位做好局部消毒；c. 用采血针刺破静脉或毛细血管，将血液顺利抽入采血管中；d. 采完血后，应当轻轻拔除采血针，并用干净的棉球或绷带做好止血处理。
三、样本处理1. 样本标注：将采集好的样本标本管放入适当的位置，标注好样本信息，包括患者姓名、年龄、性别、采集时间等；2. 样本保存：将采好的样本摆放在适当的环境中保存，避免受到外界的不利影响，保证样本的稳定性；3. 样本运输：将采好的样本按照规定的程序送至检验科进行分析，确保样本的准确性和及时性。
四、实验操作1. 仪器开机：开机前应检查仪器状态、试剂存量、管路连接情况等；2. 仪器调试：根据仪器操作手册进行仪器的校准和调试，确保仪器的准确性；3. 样本准备：将标本管放入样本架，准备好进行检测；4. 检测操作：按照仪器操作流程，将样本放入仪器中进行检测，根据检测结果进行合理的质控和质量管理。
网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。
原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。
网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。
材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。
操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。
室温下可保存6个月。
血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。
2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。
3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。
4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。
计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。
2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。
3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。
4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。
5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。
SOP_09-7 网织红细胞手工计数标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：嗜酸粒细胞计数检查的操作及临床三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构。
2 试剂：煌焦油蓝生理盐水溶液：煌焦油蓝1g、枸椽酸钠0.4g、氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml 中，过滤后备用。
3 操作方法：3.1于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液。
3.2加入末稍血2滴于上述试管中，混匀。
3.3静置15～20分钟后，取用1滴制成薄片。
3.4油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率报告。
4 参考值：成人：0.5%～1.5%；新生儿：0.3%～6%5 附注：5.1活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。
5.2最好制片二张，每张片计数500个红细胞，避免分布不均引起的误差。
涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。
5.3为计数方便，可于目镜中放一中间有孔之纸片，缩小视野，便于计数。
5.4试剂应定期重配，以免变质沉淀。
5.5用瑞-姬氏染液复染后可使网织红细胞计数减少。
5.6网织红细胞绝对值计算网织红细胞数/ul=（网织红细胞%×红细胞数/ul）÷1006 参考值：2.4～8.4万/ul（24～84×109/L）㈦、临床意义：增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶贫增加尤为显著，恶贫缺铁贫应用维生素Ｂ12或供铁质后显著增多，表示有疗效。
减少见于再生障碍性贫血。
血细胞计数操作方法
1. 准备工作：准备好血细胞计数仪器、计数盘、稀释液、采血针、试管、棉球、4％甲醛溶液等。
2. 取血：用采血针在病人的手臂上取血，通常需要取5—10ml左右。
3. 稀释：将取得的血液加入稀释液中，混合均匀，使得液体中的血细胞数量降低到计数盘能够准确测量的范围内。
4. 填充计数盘：将稀释液和血液混合物填充到计数盘中，注意保持样品均匀填充。
填充后在计数盘表面积约为0.9^2的区域内形成一个单层细胞密度。
5. 计数：将计数盘放入血细胞计数仪器中，启动计数程序。
计数完成后，记录结果。
6. 后续处理：先用棉球沾满4%甲醛溶液擦拭计数盘上的细胞密度区域，然后用稀释液清洗计数盘，保证精度和重复性。
最后清洗所有使用过的器具，包括采血针和试管等。
7. 结果分析：根据计数结果，可得知血液细胞的某些参数如红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度、平均红细胞体积等，这些参数能够帮助医生诊断患者的
病情并制定相应的治疗方案。
血球计数法的操作方法血球计数法是一种用来测量血液中不同类型血细胞数量的方法。
它主要包括以下的操作方法：1. 准备工作：- 准备必要的实验器材，如装有抗凝剂的采血管、血细胞计数盘、显微镜等。
- 了解和掌握相关实验步骤和操作规范。
2. 血液采集：- 选择合适的采血部位，通常是在患者的指尖、耳垂或掌侧腕部。
- 使用无菌的针头和注射器，将适量的血液抽取到装有抗凝剂的采血管中。
注意要充分混匀抗凝剂和血液。
3. 稀释血液：- 在血细胞计数盘的计数室中，加入适量的稀释液（如伊林液）。
- 迅速而充分地混合计数室的血液和稀释液，使其充分均匀。
4. 放置计数盘：- 将混合后的血液稀释液溢出计数室外。
- 按照计数盘的规定方法，使用吸血球计数盘量取稀释液，填满计数室。
5. 计数：- 放置计数盘的计数室下显微镜，调整放大倍数和焦距。
- 观察计数室内的血细胞，进行计数，并根据不同的血细胞类型分别记录数量。
- 注意遵守计数规则，如只计数计数盘中的一行或一个角落等。
6. 计算结果：- 根据计数得到的不同血细胞类型的个数，按照一定的比例计算出相应的绝对值或百分比。
- 结果通常会包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白浓度、血细胞比容等。
7. 清洁和记录：- 将使用过的实验器材进行清洁和消毒，避免污染。
- 将计数结果记录在相应的实验记录表中，并保存好。
需要注意的是，在进行血球计数法时，需要严格遵守操作规范，保持实验环境的清洁和无菌，以确保实验结果的准确性。
同时，术前应向医患咨询或阅读相关实验指南，了解具体和详尽的操作方法以及安全事项。
网织红细胞计数标准操作程序1.检验目的通过对网织红细胞计数，判断机体造血功能的旺盛程度。
2.检验原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色网状结构。
3.标本ETDA-K2抗凝血或新鲜外周血。
4.试剂新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液。
5.操作步骤5.1在小试管中加入染色液2滴；再加入静脉血（或末梢血）2滴，混匀后放置37℃恒温水箱中。
5.2 温育15分钟后取1滴混悬液制成涂片。
5.3在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。
6.结果计算直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/10007.生物学参考区间网织红细胞比例：成年人：0.005~0.015；新生儿：0.03~0.06；儿童:0.005~0.015。
8.实验室解释8.1增加表示骨髓造血功能旺盛。
见于各类增生性贫血，溶血性贫血增加尤为显著；巨幼细胞贫血、缺铁性贫血分别应用维生素B12、叶酸或铁剂治疗后显著增多，表示有治疗效果；也是放疗和化疗以及骨髓移植和EPO治疗后骨髓造血功能恢复的指标。
8.2减少常见于骨髓增生受抑抑制、再生障碍性贫血和纯红细胞再生障碍。
9.变异的潜在来源标本应在4小时内进行处理。
置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。
新亚甲蓝染料为WHO所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温<15℃时，放37℃恒温水箱；用瑞士-吉姆萨染液复染后，可使Ret计数结果减少。
10.参考文献10.1尚红、王毓三、申子瑜《全国临床检验操作程序》，第四版，人民卫生出版社。
![03[1].红细胞计数、血红蛋白定量](https://uimg.taocdn.com/805ad324af45b307e871973d.webp)
总结rbc计数引言rbc计数（red blood cell count）是一项常见的血液检查指标，用于评估患者的红细胞数量。
红细胞是负责输送氧气和二氧化碳的主要细胞组成部分，其数量对于身体的正常功能至关重要。
本文将对rbc计数的相关知识进行总结，并介绍其临床应用。
rbc计数的原理rbc计数是通过显微镜观察进行的。
简单来说，就是将一定量的血液放置在显微镜下，通过计算红细胞的数量来得出rbc计数。
通常使用的方法有两种：手工计数和自动计数。
手工计数手工计数是一种传统的方法，需要经过专业人士进行。
具体操作步骤如下：1.取一定量的全血样本。
2.用稀释液将全血样本稀释。
3.将稀释后的样本放入计数室中，调整显微镜，以便进行观察。
4.使用显微镜观察视野内的红细胞数量，并记录下来。
5.根据所观察到的红细胞数量和稀释倍数，计算出rbc计数。
手工计数的优点是操作简单，成本较低，适用于一些小型实验室。
但它需要专业人员进行，并且可能存在一定的人为误差。
自动计数自动计数是一种现代化的方法，借助仪器设备进行。
这种方法可以大大提高计数速度和准确性，减少了人为操作的误差。
具体操作步骤如下：1.取一定量的全血样本。
2.将样本放入自动血球仪中。
3.仪器通过光学传感器等技术，自动检测并计算血样中的红细胞数量。
4.仪器根据算法和内置的标准，得出rbc计数结果。
自动计数的优点是高效、准确。
同时，自动计数对于大规模的检测需求也更加适用。
然而，仪器设备的购买和维护成本较高，对于一些小型实验室可能不太实用。
rbc计数的临床应用rbc计数是评估和监测许多疾病和病症的重要指标之一。
下面将介绍一些常见的临床应用：贫血贫血是指体内红细胞数量或质量不足所导致的疾病。
rbc计数可以用来评估患者的红细胞数量，从而帮助确定贫血的程度和类型。
通常来说，贫血患者的rbc计数会明显低于正常范围。
炎症和感染炎症和感染会引发机体的免疫反应，其中之一就是影响红细胞的生成和功能。
一、目的细胞计数法是细胞学实验中进行细胞计数的基本方法，通过细胞计数，能够保证实验的准确性、稳定性和可重复性。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行细胞计数的操作。
三、定义细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。
一般利用计数板（红细胞计数板）进行。
即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。
不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
四、程序（一）生物安全要求实验室生物安全级别：BSL-2（二）材料1．生长成片的MDCK 细胞2．血细胞计数板3．1mL 、10mL 无菌移液管4．台盼蓝（0.4% PBS 溶液）建议：经常检查试剂使用的有效期（三）实验步骤1．消化细胞（方法见MDCK 细胞培养标准操作规程）。
2．用血细胞计数板来计算细胞悬液中的细胞数，需要充分分散细胞。
3．在18μL 台盼蓝（0.4% PBS 溶液）中加入2μL 细胞悬液，混匀，成10倍标准操作规程（SOP稀释。
死细胞被染成蓝色。
4．将以上细胞悬液加入到血球计数板的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下计数。
5．计算计数室四个角上三线包围的正方形中的活细胞，压线的细胞计数遵循计数原则，数上不数下，数左不数右。
如果观察到成片或者成团的细胞，应重新悬浮细胞液，重新计数。
用以下公式计算每毫升悬液中活细胞的数量。
C=4个角正方形内的活细胞总数/4×104×10C：每毫升活细胞数；五、参考文件《流行性感冒诊断标准》。
网织红细胞计数标准操作程序1 方法试管染色法。
2 原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构。
网织颗粒越多，表示红细胞越未成熟。
3 试剂网织红细胞染色液：3.1品牌：珠海贝索生物技术有限公司（BASO diagnostic, Inc）3.2包装规格：2瓶×100ml3.3主要成份：新亚甲蓝3.4储存条件：室温（15℃～30℃），相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和痛风良好的室内保存。
3.5使用期限：2年（开瓶后效期为6个月）。
3.6注意事项：避免高、低温环境及阳光直射。
4 实验器材显微镜、滴管、载玻片、推片、香柏油、擦镜纸、乳胶手套、试管架、移液器等。
5 标本要求5.1标本必须为末梢血或EDTA-K2抗凝的静脉血。
静脉采血后立即与抗凝剂混匀，放置室温立即送检。
5.2 标本在室温下最多保留4小时。
不能在4小时内检测的标本，放置于冷藏冰箱（2℃~8℃）中保存，8小时内标本有效，使用前从冰箱中取出回复室温后检测。
6 操作步骤6.1于0.5ml 试管内加入20μl网织红细胞染色液。
6.2取血液20μl，加入试管内，混匀，盖紧盖子，并标记相应标本号。
6.3静置20分钟或更久。
6.4推成薄片2张，待干。
6.5在油镜下选择红细胞分布均匀，染色较好部位，每张片子检查1000个红细胞中网织红细胞数，算出百分率，以均值报告。
7 计算网织红细胞数（%）= 1000个红细胞中网织红细胞的数目×1001000如：玻片1：油镜下计数1000个红细胞时见10个网织红细胞，则网织红细胞的相对比值为：网织红细胞数1（%）=10×100=1.0 % 1000玻片2：油镜下计数1000个红细胞时见12个网织红细胞，则网织红细胞的相对比值为：网织红细胞数2（%）=12×100=1.2 % 1000最终，网织红细胞数（%）= 1.0% + 1.2%×100=1.0 % 28 参考范围0.5% -1.5%9 临床意义网织红细胞的多少可反映骨髓造血功能的情况。
红细胞检测流程
红细胞检测流程：
①预约挂号：患者或医生安排预约，确定红细胞检测的具体时间和科室。
②检测前准备：患者遵循检测前的指导，如禁食、避免剧烈运动、停止某些药物等，以确保结果的准确性。
③抽血采集：由专业医护人员使用消毒的器材，从患者的肘静脉或其他适宜部位抽取一定量的血液样本。
④血液样品标记：抽血完成后，将血液样本放入带有患者信息的试管中，包括姓名、年龄、性别和检测代码。
⑤样品送检：血液样本被送往实验室，通常是在医院内的临床检验科或独立的医学检验中心。
⑥红细胞计数（RBC）：使用自动化血液分析仪或手工计数法，测定单位体积血液中红细胞的数量。
⑦血细胞比容（Hct）测定：通过离心法，如温氏法或微量法，测定红细胞在血液中所占的体积比例。
⑧红细胞平均值计算：包括平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）和平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）。
⑨红细胞形态检查：在显微镜下观察红细胞的大小、形状、染色和结构，评估是否存在异常形态的红细胞。
⑩红细胞流变特性检测：分析红细胞的变形能力、聚集性和渗透脆性等，用于研究血液流动性和疾病状态。
⑪数据分析与解读：实验室技术人员将所有检测结果输入计算机系统，生成详细的检测报告。
⑫结果审核：资深检验师或医生审核检测结果，确保数据的准确性和临床意义。
⑬报告发布：完成审核后，检测报告将被发送给患者的主治医生或直接提供给患者。
⑭医生解读：医生根据检测报告评估患者的红细胞状况，诊断潜在的疾病，如贫血、多红细胞症等。
⑮后续治疗：根据医生的诊断，可能需要进一步的检查或治疗计划，以处理红细胞相关的健康问题。
SOP_09-5 红细胞手工计数检查标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：红细胞计数检查的操作及临床三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1、原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后于显微镜下计数一定容积内的红细胞，根据稀释倍数和计数的容积，换算成单位容积内的红细胞数。
2、试剂：以下两种试剂均可应用。
2.1赫姆液氯化钠1.0g，结晶硫酸钠（Na2SO4·10H2O）5.0g（或无水硫酸钠2.5g）。
氯化汞0.5g，加水至200ml，溶解后加2%伊红水溶液1滴，过滤后备用。
2.2甲醛枸椽酸钠溶液枸椽酸钠32g，加水至500ml溶解后，加40%甲醛10ml，加水稀释至1L，过滤后备用。
3、操作：3.1取试管1支，加稀释液4ml。
3.2用校准的微量吸管吸取末梢血20ul。
3.3擦去吸管外部余血，将20ul全血吹入稀释液，并用稀释液洗尽吸管内余血，立即混凝匀。
3.4将计数板及盖玻片擦净，将盖玻片覆盖于计数板上。
3.5用滴管吸取混匀的红细胞悬液充入计数室。
3.6静置2～3min 后，用高倍镜计数中央大方格内四角和正中的5个中方格的红细胞数。
边线上的细胞按“数上不数下，数左不数右”的原则计数。
正常血液每个中方格的计数误差不大于10。
4 计算：红细胞／微升＝5个中方格内红细胞计数×10000。
红细胞/升=红细胞/微升×106/L。
5 参考值：男性：（4.4～5.7）×1012/L；女性：（3.8～5.1）×1012/L；新生儿：（6～7）×1012/L；儿童：（4.0～5.2）×1012/L。
6 临床意义增加或减少见血红蛋白测定。
一般情况下红细胞数与血红蛋白浓度之间有一定的比例关系，但在部分贫血患者同时测定二者，对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。
操作人员：经批准人授权的本院专业技术人员
部门主管：彭建宏
质量控制员：唐日升
目的：
保证红细胞计数的准确性，为临床提供准确可靠的结果。
该SOP变动程序：
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。
适用范围：
红细胞手工计数。
检测原理：
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充于红细胞计数池，在显微镜下计数一定体积的细胞数，经换算求出每升血液中的红细胞数量。
试剂：
枸橼酸钠稀释液：枸橼酸钠 1.0g+36%甲醛 1.0mL+NaCl0.6g加蒸馏水至100mL，混匀。
仪器：
双目显微镜，改良牛鲍氏窥盘，20μL微量吸管。
标本采集：
抗凝管采集的静脉血。
末梢血或用真空负压EDTA－K
2
操作：
吸取10μL全血加入2mL稀释液中，吸洗吸管数次，混匀，注满计数池，静置2-3分钟，计数中央大方格内四角和正中5个中方格（80小格）中红细胞（N），以计上不计下，数左不数右方法计数。
计算方法：
红细胞/L= N×25/5×10×200×106=N/100×1012
参考范围：
成年男性：（4-5.5）×1012/L
成年女性：（3.5-5.0）×1012/L
新生儿：（6.0-7.0）×1012/L
方法学评价：
目视计数法是传统的红细胞计数法，不需要特别设备，但操作复杂、费时。
红细胞沉降率测定（手工法）操作规程
一.项目名称：红细胞沉降率测定
二.仪器：定时钟、魏氏血沉管
三.试剂：抗凝剂109mmol/L枸橼酸钠溶液（自配）
四.方法学原理：离体抗凝血液置于魏氏血沉管内，垂直立于室温中，
一定时间内观察上层血浆高度的毫米数报告。
五.操作：
静脉采血后取下针头，加血1.8ml与0.2ml抗凝剂混合.
用血沉管吸取混匀血液至“0”刻度处，拭去管外附着的血液。
记时，室温中静置1小时，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告。
六.参考范围：男：≤15mm/L 女≤20mm/L
七.病人准备、标本要求：抗凝剂准备、及时测定。
八.操作注意事项：
1.血液与抗凝剂比例必须准确，2小时内测定。
2.标本采集时避免脂肪血。
3.血沉管的内径要清洁、放置位置要垂直。
4.室温过低或过高和贫血时，对结果都有影响。
为此应尽量置于
18--25℃测定。
九.临床意义：
增高：生理性：运动、经期、妊娠3个月至产后1个月。
病理性：急性炎症、结缔组织病、活动性结核、风湿
热活动期、组织严重破坏、贫血、恶性肿瘤、高球蛋白血症、重金属中毒等。
十.参考文献：
1.全国临床检验操作规程（第3版）
2.厂商说明书
十一.编写者：
制定日期：
修改日期：
科主任对规程认可：。
二红细胞计数一、原理用等渗稀释液将血液按一定倍数稀释，充人计数池后显微镜下计数一定体积内红细胞数，换算求出每升血液中红细胞的数量。
二、试剂与耗材1.红细胞稀释液枸橼酸钠 1.0 g;36%甲醛液 1.0 ml氯化钠 0.6 g加蒸馏水至100 ml ,混匀、过滤两次后备用。
2. 其他显微镜、改良Neubauer血细胞计数板等。
三、操作1.取中号试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。
2. 用清洁干燥微量吸管取末梢血10μl ，擦去管外余血后加至红细胞稀释液底部，再轻吸上层清洗吸管2-3次立即混匀。
3. 混匀后，用干净微量吸管将红细胞悬液充人计数池，不得有空泡或外溢，充池后静置2-3 min后计数。
4. 高倍镜下依次计数中央大方格内四角和正中共5 个中方格内的红细胞。
对压线细胞按"数上不数下、数左不数右"的原则进行计数。
四、计算红细胞数/L=5个中方格内红细胞数×5×10×200×106=5个中方格内红细胞数×1010=5个中方格内红细胞数÷100×1012式中：×5 5个中方格换算成1个大方格；×10 1个大方格容积为0.1μl，换算成1.0μl；×200 血液的实际稀释倍数应为201倍，按200是便于计算；×106 由1μl换算成1L。
五、参考区间男：（4.09～5.74）×1012/L女：（3.68～5.13）×1012/L新生儿：（5.2～6.4）×1012/L婴儿：（4.0～4.3）×1012/L儿童：（4.0～4.5）×1012/L六、附注1．采血时不能挤压过甚，因此针刺深度必须适当。
2．稀释液要过滤，试管、计数板均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为红细胞。
3. 参考范围数值内，两次红细胞计数相差不得超过5% 。
4. 不允许以血红蛋白浓度来折算红细胞数。
血细胞计数板实验步骤
血细胞计数板实验步骤如下：
1.准备样本：将待测血液样品放在离心管中。
2.离心：将离心管放入离心机中，以适当的速度和时间进行离心，以分离血细胞和血浆。
3.准备计数板：取出血细胞计数板，用酒精棉球擦拭清洁表面。
4.稀释液：根据实验要求，制备适当浓度的稀释液。
将稀释液
注入计数板上的红细胞板和白细胞板中。
5.取样：用移液管吸取一定量的离心后的血液样品，滴在红细
胞板和白细胞板的相应计数区域中。
6.观察与计数：将计数板放在显微镜下，使用10倍或40倍镜
头观察计数区域。
计数红细胞时，注意红细胞在四个计数方块中的数量，并计算平均值。
计数白细胞时，注意白细胞在五个计数方块中的数量，并计算平均值。
计数时注意避免重复计数和漏计。
7.结果计算：根据计数区域的大小和样本稀释倍数，计算出单
位体积内的红细胞和白细胞个数。
8.结果分析：根据实验目的和标准，对结果进行分析和判断。
9.清洗清理：使用结束后，用盐水或蒸馏水清洗计数板，擦干后可存放。
注意事项：
- 操作时要注意无菌操作，避免外界污染。
- 测定时要保持计数板表面的清洁，避免出现人为误差。
- 离心时应根据实验要求设定正确的离心速度和时间，以充分分离血细胞和血浆。
- 在显微镜下观察时，要注意聚焦和调整光线，以获得清晰的图像。
- 仪器使用完毕后要进行清洗和消毒，以保持实验室的卫生和安全。
SOP_09-5 红细胞手工计数检查标准操作程序
一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：红细胞计数检查的操作及临床
三、操作人员：检验科授权工作人员
四、操作步骤：
1、原理：
用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后于显微镜下计数一定容积内的红细胞，根据稀释倍数和计数的容积，换算成单位容积内的红细胞数。
2、试剂：以下两种试剂均可应用。
2.1赫姆液氯化钠1.0g，结晶硫酸钠（Na2SO4·10H2O）5.0g（或无水硫酸钠2.5g）。
氯化汞
0.5g，加水至200ml，溶解后加2%伊红水溶液1滴，过滤后备用。
2.2甲醛枸椽酸钠溶液枸椽酸钠32g，加水至500ml溶解后，加40%甲醛10ml，加水稀释至
1L，过滤后备用。
3、操作：
3.1取试管1支，加稀释液4ml。
3.2用校准的微量吸管吸取末梢血20ul。
3.3擦去吸管外部余血，将20ul全血吹入稀释液，并用稀释液洗尽吸管内余血，立即混凝匀。
3.4将计数板及盖玻片擦净，将盖玻片覆盖于计数板上。
3.5用滴管吸取混匀的红细胞悬液充入计数室。
3.6静置2～3min 后，用高倍镜计数中央大方格内四角和正中的5个中方格的红细胞数。
边
线上的细胞按“数上不数下，数左不数右”的原则计数。
正常血液每个中方格的计数误差不大于10。
4 计算：
红细胞／微升＝5个中方格内红细胞计数×10000。
红细胞/升=红细胞/微升×106/L。
5 参考值：
男性：（4.4～5.7）×1012/L；
女性：（3.8～5.1）×1012/L；
新生儿：（6～7）×1012/L；
儿童：（4.0～5.2）×1012/L。
6 临床意义
增加或减少见血红蛋白测定。
一般情况下红细胞数与血红蛋白浓度之间有一定的比例关系，但在部分贫血患者同时测定二者，对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。
