红细胞手工计数检查标准操作程序

实验一红细胞计数一、实验目的：掌握红细胞计数原理及技术。

二、实验原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。

三、实验器材及试剂：显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。

四、实验操作：1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。

2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。

3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。

4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。

5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。

6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。

五、计算N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数× 106：1ul换算为1升内红细胞数× 200：稀释倍数六、正常参考值正常参考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升成年女性：3.50-5.00×1012/升新生儿： 6.00-7.00×1012/升实验二血红蛋白测定一、实验目的：掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。

二、实验原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。

HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。

三、实验操作：1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。

血常规标准操作流程前言血常规是临床常用的一项常规检查，通过检测患者血液中各种细胞及相关参数的变化情况，辅助医生判断患者的病情。

血常规包括红细胞计数（RBC）、血红蛋白浓度（Hb）、红细胞压积（HCT）、白细胞计数（WBC）、血小板计数（PLT）以及分类计数等项目。

本文将分步介绍血常规的标准操作流程。

一、准备工作1. 检验仪器和设备：保证血常规分析仪器日常维护和校准正常，确保仪器的正常使用；2. 样本采集工具：准备好采血针、采血管、消毒棉球等样本采集工具；3. 样本采集标本管：标注好采集的标本管，并按照标本采集时间顺序排列，确保标本的准确性；4. 个人防护：穿戴好手套、口罩和实验服，保证操作人员和患者的安全。

二、样本采集1. 与患者沟通：在开始采集血样之前，应与患者进行充分的沟通，向患者解释样本采集的目的、过程以及可能的不适感；2. 采集位置：选择合适的采血位置，常用的有手指末梢、耳尖、脚趾末梢等；3. 采集流程：a. 采血针的抽血针头应朝上，避免空气进入采血管；b. 选择适当的采血针，并在采血部位做好局部消毒；c. 用采血针刺破静脉或毛细血管，将血液顺利抽入采血管中；d. 采完血后，应当轻轻拔除采血针，并用干净的棉球或绷带做好止血处理。

三、样本处理1. 样本标注：将采集好的样本标本管放入适当的位置，标注好样本信息，包括患者姓名、年龄、性别、采集时间等；2. 样本保存：将采好的样本摆放在适当的环境中保存，避免受到外界的不利影响，保证样本的稳定性；3. 样本运输：将采好的样本按照规定的程序送至检验科进行分析，确保样本的准确性和及时性。

四、实验操作1. 仪器开机：开机前应检查仪器状态、试剂存量、管路连接情况等；2. 仪器调试：根据仪器操作手册进行仪器的校准和调试，确保仪器的准确性；3. 样本准备：将标本管放入样本架，准备好进行检测；4. 检测操作：按照仪器操作流程，将样本放入仪器中进行检测，根据检测结果进行合理的质控和质量管理。

网织红细胞计数操作规程目的：本实验旨在规范网织红细胞计数的标准操作，以确保实验数据的准确性。

原理：网织红细胞是未完全成熟的红细胞，其包体较一般红细胞稍大，胞浆中尚有嗜碱性残留物质，可被煌焦油蓝等染成蓝色颗粒状、线状及网状结构物。

网织红细胞的数量可用百分率或每立方毫米血液中的绝对值数来表示。

材料：煌焦油蓝（灿烂甲酚蓝）、枸橼酸钠、生理盐水、香柏油、载物片（玻璃片）、推片（磨去边的玻璃片）、试管（2ml）、毛细吸管或枪头（200微升）、光学显微镜。

操作规程：染色液配制：将煌焦油蓝0.4g和3.5%枸橼酸钠20ml研磨溶解后加入生理盐水至100ml，过滤备用。

室温下可保存6个月。

血膜片制备：1.染色：取试管一支，用毛细管或枪头于其中加入染液2～5滴，然后再加入新鲜血液1滴轻摇混合，染色10～15min。

2.制片：取载物片一片，用毛细管或枪头吸取血液染色液1小滴于载物片上，并用推片约45度角推制成舌型血膜片，自然干燥备用。

3.观察：用显微镜观察，取血膜片滴入香柏油1滴，将血膜片置于显微镜载物台，用油镜观察网织红细胞。

4.计数：取计数器在油镜下检查计数红细胞，即计数红细胞中网织红细胞的数量，检查计数1000个红细胞中网织红细胞的数量，并得出千分率再除以10即为百分率。

计算公式：百分率=1000个红细胞中网织红细胞的数量/1000注意事项：1.载物片使用前必须经过酸或碱液浸泡脱脂处理后方可使用。

2.血膜片制备需要反复练推片，熟练推制血膜片的技巧。

3.血膜片的厚薄要适中，过厚或过薄均无法进行观察。

4.室温过低时，血液染色时间要适当延长，以确保细胞着色更充分。

5.血膜片需在3天内检查计数，否则其网状结构会褪色，不易观察清晰。

SOP_09-7 网织红细胞手工计数标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：嗜酸粒细胞计数检查的操作及临床三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构。

2 试剂：煌焦油蓝生理盐水溶液：煌焦油蓝1g、枸椽酸钠0.4g、氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml 中，过滤后备用。

3 操作方法：3.1于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液。

3.2加入末稍血2滴于上述试管中，混匀。

3.3静置15～20分钟后，取用1滴制成薄片。

3.4油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率报告。

4 参考值：成人：0.5%～1.5%；新生儿：0.3%～6%5 附注：5.1活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。

5.2最好制片二张，每张片计数500个红细胞，避免分布不均引起的误差。

涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。

5.3为计数方便，可于目镜中放一中间有孔之纸片，缩小视野，便于计数。

5.4试剂应定期重配，以免变质沉淀。

5.5用瑞-姬氏染液复染后可使网织红细胞计数减少。

5.6网织红细胞绝对值计算网织红细胞数/ul=（网织红细胞%×红细胞数/ul）÷1006 参考值：2.4～8.4万/ul（24～84×109/L）㈦、临床意义：增加：表示骨髓造血功能旺盛，各型贫血均可增多，溶贫增加尤为显著，恶贫缺铁贫应用维生素Ｂ12或供铁质后显著增多，表示有疗效。

减少见于再生障碍性贫血。

血细胞计数操作方法
1. 准备工作：准备好血细胞计数仪器、计数盘、稀释液、采血针、试管、棉球、4％甲醛溶液等。

2. 取血：用采血针在病人的手臂上取血，通常需要取5—10ml左右。

3. 稀释：将取得的血液加入稀释液中，混合均匀，使得液体中的血细胞数量降低到计数盘能够准确测量的范围内。

4. 填充计数盘：将稀释液和血液混合物填充到计数盘中，注意保持样品均匀填充。

填充后在计数盘表面积约为0.9^2的区域内形成一个单层细胞密度。

5. 计数：将计数盘放入血细胞计数仪器中，启动计数程序。

计数完成后，记录结果。

6. 后续处理：先用棉球沾满4%甲醛溶液擦拭计数盘上的细胞密度区域，然后用稀释液清洗计数盘，保证精度和重复性。

最后清洗所有使用过的器具，包括采血针和试管等。

7. 结果分析：根据计数结果，可得知血液细胞的某些参数如红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度、平均红细胞体积等，这些参数能够帮助医生诊断患者的
病情并制定相应的治疗方案。

血球计数法的操作方法血球计数法是一种用来测量血液中不同类型血细胞数量的方法。

它主要包括以下的操作方法：1. 准备工作：- 准备必要的实验器材，如装有抗凝剂的采血管、血细胞计数盘、显微镜等。

- 了解和掌握相关实验步骤和操作规范。

2. 血液采集：- 选择合适的采血部位，通常是在患者的指尖、耳垂或掌侧腕部。

- 使用无菌的针头和注射器，将适量的血液抽取到装有抗凝剂的采血管中。

注意要充分混匀抗凝剂和血液。

3. 稀释血液：- 在血细胞计数盘的计数室中，加入适量的稀释液（如伊林液）。

- 迅速而充分地混合计数室的血液和稀释液，使其充分均匀。

4. 放置计数盘：- 将混合后的血液稀释液溢出计数室外。

- 按照计数盘的规定方法，使用吸血球计数盘量取稀释液，填满计数室。

5. 计数：- 放置计数盘的计数室下显微镜，调整放大倍数和焦距。

- 观察计数室内的血细胞，进行计数，并根据不同的血细胞类型分别记录数量。

- 注意遵守计数规则，如只计数计数盘中的一行或一个角落等。

6. 计算结果：- 根据计数得到的不同血细胞类型的个数，按照一定的比例计算出相应的绝对值或百分比。

- 结果通常会包括白细胞计数、红细胞计数、血红蛋白浓度、血细胞比容等。

7. 清洁和记录：- 将使用过的实验器材进行清洁和消毒，避免污染。

- 将计数结果记录在相应的实验记录表中，并保存好。

需要注意的是，在进行血球计数法时，需要严格遵守操作规范，保持实验环境的清洁和无菌，以确保实验结果的准确性。

同时，术前应向医患咨询或阅读相关实验指南，了解具体和详尽的操作方法以及安全事项。

网织红细胞计数标准操作程序1.检验目的通过对网织红细胞计数，判断机体造血功能的旺盛程度。

2.检验原理网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质内尚有嗜碱性的RNA物质，经新亚甲蓝或煌焦油蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色网状结构。

3.标本ETDA-K2抗凝血或新鲜外周血。

4.试剂新亚甲蓝枸橼酸氯化钠染色液。

5.操作步骤5.1在小试管中加入染色液2滴；再加入静脉血（或末梢血）2滴，混匀后放置37℃恒温水箱中。

5.2 温育15分钟后取1滴混悬液制成涂片。

5.3在油镜下直接观察1000个红细胞中Ret数。

6.结果计算直接观察法：网织红细胞比例=计数1000个红细胞中的网织红细胞数/10007.生物学参考区间网织红细胞比例：成年人：0.005~0.015；新生儿：0.03~0.06；儿童:0.005~0.015。

8.实验室解释8.1增加表示骨髓造血功能旺盛。

见于各类增生性贫血，溶血性贫血增加尤为显著；巨幼细胞贫血、缺铁性贫血分别应用维生素B12、叶酸或铁剂治疗后显著增多，表示有治疗效果；也是放疗和化疗以及骨髓移植和EPO治疗后骨髓造血功能恢复的指标。

8.2减少常见于骨髓增生受抑抑制、再生障碍性贫血和纯红细胞再生障碍。

9.变异的潜在来源标本应在4小时内进行处理。

置于清洁的棕色瓶中保存，染色液应无沉淀。

新亚甲蓝染料为WHO所推荐，着色强且稳定，背景清晰，利于计数；室温<15℃时，放37℃恒温水箱；用瑞士-吉姆萨染液复染后，可使Ret计数结果减少。

10.参考文献10.1尚红、王毓三、申子瑜《全国临床检验操作程序》，第四版，人民卫生出版社。

总结rbc计数引言rbc计数（red blood cell count）是一项常见的血液检查指标，用于评估患者的红细胞数量。

红细胞是负责输送氧气和二氧化碳的主要细胞组成部分，其数量对于身体的正常功能至关重要。

本文将对rbc计数的相关知识进行总结，并介绍其临床应用。

rbc计数的原理rbc计数是通过显微镜观察进行的。

简单来说，就是将一定量的血液放置在显微镜下，通过计算红细胞的数量来得出rbc计数。

通常使用的方法有两种：手工计数和自动计数。

手工计数手工计数是一种传统的方法，需要经过专业人士进行。

具体操作步骤如下：1.取一定量的全血样本。

2.用稀释液将全血样本稀释。

3.将稀释后的样本放入计数室中，调整显微镜，以便进行观察。

4.使用显微镜观察视野内的红细胞数量，并记录下来。

5.根据所观察到的红细胞数量和稀释倍数，计算出rbc计数。

手工计数的优点是操作简单，成本较低，适用于一些小型实验室。

但它需要专业人员进行，并且可能存在一定的人为误差。

自动计数自动计数是一种现代化的方法，借助仪器设备进行。

这种方法可以大大提高计数速度和准确性，减少了人为操作的误差。

具体操作步骤如下：1.取一定量的全血样本。

2.将样本放入自动血球仪中。

3.仪器通过光学传感器等技术，自动检测并计算血样中的红细胞数量。

4.仪器根据算法和内置的标准，得出rbc计数结果。

自动计数的优点是高效、准确。

同时，自动计数对于大规模的检测需求也更加适用。

然而，仪器设备的购买和维护成本较高，对于一些小型实验室可能不太实用。

rbc计数的临床应用rbc计数是评估和监测许多疾病和病症的重要指标之一。

下面将介绍一些常见的临床应用：贫血贫血是指体内红细胞数量或质量不足所导致的疾病。

rbc计数可以用来评估患者的红细胞数量，从而帮助确定贫血的程度和类型。

通常来说，贫血患者的rbc计数会明显低于正常范围。

炎症和感染炎症和感染会引发机体的免疫反应，其中之一就是影响红细胞的生成和功能。

一、目的细胞计数法是细胞学实验中进行细胞计数的基本方法，通过细胞计数，能够保证实验的准确性、稳定性和可重复性。

二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行细胞计数的操作。

三、定义细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。

一般利用计数板（红细胞计数板）进行。

即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。

不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。

四、程序（一）生物安全要求实验室生物安全级别：BSL-2（二）材料1．生长成片的MDCK 细胞2．血细胞计数板3．1mL 、10mL 无菌移液管4．台盼蓝（0.4% PBS 溶液）建议：经常检查试剂使用的有效期（三）实验步骤1．消化细胞（方法见MDCK 细胞培养标准操作规程）。

2．用血细胞计数板来计算细胞悬液中的细胞数，需要充分分散细胞。

3．在18μL 台盼蓝（0.4% PBS 溶液）中加入2μL 细胞悬液，混匀，成10倍标准操作规程（SOP稀释。

死细胞被染成蓝色。

4．将以上细胞悬液加入到血球计数板的载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下计数。

5．计算计数室四个角上三线包围的正方形中的活细胞，压线的细胞计数遵循计数原则，数上不数下，数左不数右。

如果观察到成片或者成团的细胞，应重新悬浮细胞液，重新计数。

用以下公式计算每毫升悬液中活细胞的数量。

C=4个角正方形内的活细胞总数/4×104×10C：每毫升活细胞数；五、参考文件《流行性感冒诊断标准》。