黄芪甲苷(AST-Ⅳ)对小鼠肺12C6+辐照损伤的防护效应及作用机理

黄芪甲苷对小鼠糖尿病肾病（ DN）的保护作用研究1#李旭1周巍1*1山东第一医科大学(山东省医学科学院) 基础医学院，山东济南 250000摘要：目的：研究黄芪甲苷（AS-IV）对小鼠糖尿病肾病（DN）的保护机制。

方法：使用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射诱导I型糖尿病小鼠模型，实验小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪甲苷治疗组。

连续灌胃小鼠黄芪甲苷8周后，观察小鼠肾功能指数以及肾脏抗氧化能力并对小鼠肾脏组织进行病理检测等。

结果：AS-IV治疗组与模型组相比较，血糖、尿微量白蛋白、血肌酐、血尿素氮显著性下降。

此外，黄芪甲苷治疗组还能显著性增加肾脏组织中Nrf2、HO-1基因表达，降低活性氧生成相关的Nox4基因表达。

结论：AS-IV对DN小鼠的肾脏有明显保护作用，其作用机制可能是通过激活Nrf2/HO-1抗氧化信号通路，并抑制活性氧生成来减缓DN的发病进程。

关键词：糖尿病肾病；黄芪甲苷；氧化应激糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy，DN）是糖尿病常见的慢性并发症之一，发病机制尚未完全阐明，可能与糖代谢异常、炎症反应、氧化应激等相关[1]。

目前西医治疗DN主要以降糖、降压、调脂以及控制蛋白尿为主，但其副作用亦影响了药物的长期应用。

近年来，黄芪在防治DN的发生和发展、延缓进行性恶化等方面取得了一定的临床疗效[2]。

黄芪甲苷（Astragaloside IV，AS-IV）是黄芪主要活性成分，有研究发现AS-IV对糖尿病肾病有一定保护作用[3]，但是具体机制尚不完全清楚。

本研究旨在观察黄芪甲苷在I型糖尿病小鼠肾病小鼠的干预作用，探讨具体保护机制，为其临床应用提供基础实验依据。

1.材料和方法1.1 实验动物8周龄雄性C57BL/6小鼠购自北京华阜康生物科技股份有限公司。

1.2 药物与试剂黄芪甲苷（成都康邦生物科技有限公司，纯度98%HPLC，CAS号：84687-43-4），链脲佐菌素（streptozotocin，STZ，批号Sigma S0130）购自Sigma公司。

黄芪甲苷对D—半乳糖诱导原代培养心肌细胞凋亡的保护作用及机制研究作者：王晓霞刘天龙刘晶刘小玲张勇肖云峰刘小雷来源：《中国药房》2018年第09期中图分类号 R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2018）09-1189-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.09.09摘要目的：研究黄芪甲苷对D-半乳糖（D-gal）誘导原代培养心肌细胞凋亡的保护作用及机制。

方法：分离和培养Wistar乳鼠原代心肌细胞，将细胞分为正常对照组（无血清DMEM 高糖培养基）、D-gal组（含5 g/L D-gal的无血清DMEM高糖培养基）和黄芪甲苷低、中、高质量浓度组（分别先以含25、50、100 µg/mL黄芪甲苷的无血清DMEM高糖培养基培养1 h，然后换为含有相应质量浓度黄芪甲苷和5 g/L D-gal的无血清DMEM高糖培养基）。

采用CCK-8法检测培养48 h后细胞活性，分别采用Hoechst染色法（培养24 h）和流式细胞术（培养48 h）考察细胞凋亡情况，采用实时荧光定量-聚合酶链式反应法检测培养24 h后细胞中凋亡相关因子（Bcl-2、Bax、Caspase-3）和心房钠尿肽（ANP） mRNA表达水平。

结果：与正常对照组比较，D-gal组细胞的活性以及细胞中Bcl-2 mRNA水平、Bcl-2/Bax比值降低，细胞凋亡率和细胞中Bax、Caspase-3、ANP mRNA水平升高，差异均有统计学意义（P关键词黄芪甲苷；D-半乳糖；原代心肌细胞；凋亡；保护作用ABSTRACT OBJECTIVE： To study the protective effect and mechanism of astragaloside Ⅳon D-galactose （D-gal）-induced primary cardiomyocytes apoptosis. METHODS： Wistar neonatal rat primary cardiomyocytes were isolated and cultured. The cardiomyocytes were divided into normal control group （DMEM high glucose medium without serum）， D-gal group （DMEM high glucose medium without serum containing 5 g/L D-gal） and astragaloside Ⅳ low-concentration，medium-concentration and high-concentration groups （after cultured with DMEM high glucose medium without serum containing 25， 50， 100 µg/mL astragaloside Ⅳ for 1 h， and then replaced with DMEM high glucose medium without serum containing corresponding concentration of astragaloside Ⅳ and 5 g/L D-gal）. Cardiomyocytes activity was detected by CCK-8 kit after cultured for 48 h. The apoptosis level was detected by Hoechst staining （cultured for 24 h） and flow cytometry （cultured for 48 h）. The mRNA expressions of apoptosis related factors （Bcl-2，Bax， Caspase-3） and ANP in cardiomyocytes were detected by RT-PCR after cultured for 24 h. RESULTS： Compared with normal control group， the activity of cardiomyocytes， mRNA level of Bcl-2 and ratio of Bcl-2/Bax were decreased in D-gal group， while apoptosis rate and mRNA levels of Bax， Caspase-3 and ANP were increased， with statistical significance （PKEYWORDS Astragaloside Ⅳ； D-galactose； Primary cardiomyocytes； Apoptosis；Protective effect黄芪（Astragalus membranaceus）为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，是中蒙医临床处方中较重要的药材，而黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ）是黄芪的主要有效成分之一[1]。

安徽科技学院学报,２０１９,３３(６):３３~３７㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀J o u r n a l o fA n h u i S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y U n i v e r s i t y ㊀㊀收稿日期:２０１９Ｇ０７Ｇ１０基金项目:国家自然科学基金项目(３１８０２２４２);安徽省高校自然科学研究重点项目(K J ２０１７A ５０３,K J ２０１７A ５０４);安徽科技学院引进人才项目(Z R C ２０１４４４７).作者简介:孙克诚(１９９７－),男,安徽阜阳人,在读本科生,主要从事兽医药理与毒理学研究.∗通信作者:李磊,副教授,E Ｇm a i l :l e i l e e _１９８４＠１６３．c o m .黄芪甲苷对扑热息痛诱导肝损伤小鼠炎症因子表达的影响孙克诚,㊀何亚兰,㊀张㊀乐,㊀朱耀辉,㊀张文雪,㊀陈㊀超,㊀刘㊀畅,㊀李㊀磊∗(安徽科技学院动物科学学院,安徽凤阳㊀２３３１００)摘㊀要:目的:研究黄芪甲苷(A s t r a ga l o s i d e I V ,A S －I V )对扑热息痛诱导肝损伤小鼠炎症因子表达的影响.方法:I C R 清洁级小鼠４０只,随机分为４组:即空白对照组㊁模型组㊁低剂量组(A S －I V２０m g /k g)组㊁高剂量线(A S －I V４０m g /k g ),采用扑热息痛诱导建立小鼠急性肝损伤模型,H E 染色检测肝脏组织病理学变化,E L I S A 法检测血清肿瘤坏死因子α(T u m o rn e c r o s i s f a c t o r α,T N F－α)㊁白细胞介素１β(I n Ｇt e r l e u k i n１β,I L －１β)㊁白细胞介素６(I n t e r l e u k i n －６,I L－６)水平,比较各组间炎症因子表达的差异.结果:A S －I V 低㊁高剂量组(２０㊁４０m g /k g )均能显著减轻扑热息痛诱导的小鼠肝损伤程度,与模型组相比,A S －I V (２０㊁４０m g /k g )组T N F －α㊁I L －１β㊁I L －６水平显著降低(P ＜０．０１).结论:A S －I V 能显著降低扑热息痛所致肝损伤小鼠炎症因子的表达,对肝损伤可起到一定治疗作用.关键词:A S －I V ;扑热息痛;药物性肝损伤;炎症因子中图分类号:S ８５９．７文献标志码:A文章编号:１６７３Ｇ８７７２(２０１９)０６Ｇ００３３Ｇ０５开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):D O I :１０．１９６０８/j ．c n k i ．１６７３－８７７２．２０１７．０７０７E f f e c t o fA s t r a g a l o s i d e I Vo nE x p r e s s i o no f I n f l a m m a t o r y C y t o k i n e s i nA c e t a m i n o p h e n Ｇi n d u c e dL i v e r I n j u r yi n M i c e S U N K e c h e n g ,㊀H EY a l a n ,㊀Z H A N GL e ,㊀Z HU Y a o h u i ,Z H A N G W e n x u e ,㊀C H E N C h a o ,㊀L I U C h a n g ,㊀L IL e i (C o l l e g e o fA n i m a l S c i e n c e ,A n h u i S c i e n c e a n dT e c h n o l o g y U n i v e r s i t y ,F e n g y a n g ２３３１００,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e :T o s t u d y t h e e f f e c t o fA s t r a g a l o s i d e I V (A S －I V )o n t h e e x p r e s s i o n o f i n f l a m m a t o r y c y t o k i n e s i n a c e t a m i n o p h e n Ｇi n d u c e d l i v e r i n j u r y i nm i c e ．M e t h o d s :F o r t y I C Rm i c ew e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o f o u r g r o u p s (b l a n kc o n t r o l g r o u p ,m o d e l g r o u p ,A S －I Vl o wd o s e g r o u p ２０m g /k g a n dA S －I V h i g hd o s e ４０m g /k gg r o u p )．A c u t eh e p a t i c i n j u r y m o d e l i nm i c ew a s i n d u c e db y a c e t a m i n o p h e n ．H e m a Ｇt o x y l i ne o s i n (H&E )s t a i n i n g w a su s e dt od e t e c t t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e so f l i v e r t i s s u e ．E L I S A w a s u s e d t od e t e c t s e r u mt u m o rn e c r o s i s f a c t o rα(T N F－α),i n t e r l e u k i n１β(I L－１β)a n d i n t e r l e u k i n－６４３㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽科技学院学报㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０１９年(I L－６)l e v e l st h ei n f l a m m a t i r y c y t o k i n e s．R e s u l t s:A S－I V(２０m g/k g,４０m g/k g)s i g n i f i c a n t l y r eＧd u c e d t h e d e g r e e o f l i v e r i n j u r y i nm i c e i n d u c e db y a c e t a m i n o p h e n c o m p a r e dw i t h t h em o d e l g r o u p,i nA S －I V(２０,４０m g/k g)g r o u p T N F－α,I L－１β,a n d I L－６l e v e l sw e r e s i g n i f i c a n t l y r e d u c e d(P＜０．０１)．C o n c l u s i o n:T h i s s t u d y d e m o n s t r a t e d t h a tA S－I V c a n s i g n i f i c a n t l y r e d u c e t h e e x p r e s s i o no f i n f l a m m a t oＧr y f a c t o r s i nm i c ew i t hh e p a t i c i n j u r y c a u s e d b y a c e t a m i n o p h e n a n d p l a y a t h e r a p e u t i c r o l e i n l i v e r i n j u r y．K e y w o r d s:A S－I V;P a r a c e t a m o l;D r u gＧi n d u c e d l i v e r i n j u r y;I n f l a m m a t o r y f a c t o r肝脏是人体最大的解毒和代谢器官,易受到各种药物及代谢产物的影响进而导致肝损伤[１].药物性肝损伤(D I L I)是指在使用治疗剂量药物时,由于特殊机体对药物的敏感性增强或耐受性降低[２－３],或是由于服用保健品,膳食补充剂等及其代谢产物,所致肝细胞损伤坏死,肝脏内酶表达量异常及引起的其它相关临床症状[４－５].据世界卫生组织统计,D I L I已上升为全球死亡原因的第５位,严重影响人类健康.近年来相当数量的新药在投放市场后短期内由于其肝毒性而撤回[６－８].D I L I可表现为各类急慢性肝脏疾病,以急性肝损伤最为普遍.D I L I是一个多因素多机制的复杂过程,其发病机制不仅与氧化应激有关,炎症反应在其发生㊁发展进程及预后中也起到重要作用[９].扑热息痛也称对乙酰氨基酚(A P A P),是一种常用的解热镇痛药,广泛用于临床,治疗剂量范围内无毒性[１０],但长期或过量服用则会造成严重的D I L I[１１－１４],国内外常见急性肝损伤成因多为A P A P的过量使用[１５].目前普遍认为,氧化应激以及随后的炎症反应在A P A P诱导的急性肝损伤过程中起着重要作用[１６].黄芪甲苷(A S－I V)为中药黄芪的主要活性成分之一,具有提高免疫力㊁抗自由基㊁抗炎㊁抗氧化㊁降低血糖与心血管保护等药理作用[１７－２０].本试验通过建立A P A P急性药物性肝损伤模型,检测小鼠血清炎症因子水平,探讨A S－I V对A P A P诱导急性肝损伤小鼠炎症因子表达的影响,为将来进一步研究A P A P诱导肝损伤机制,研发新型预防治疗肝损伤药物提供借鉴.１㊀材料与方法１．１㊀材料１．１．１㊀实验动物㊀清洁级I C R小鼠４０只,雌雄各半,体重２０ʃ２g,购自于南京青龙山动物繁殖场动物合格证编号N O．２０１７１０２４１,试验期间自由摄食㊁饮水.１．１．２㊀实验试剂㊀A S－I V㊁A P A P均购于上海阿拉丁生化科技股份有限公司;羧甲基纤维素钠购于国药集团化学试剂有限公司;小鼠T N F－α㊁I L－１β㊁I L－６E L I S A试剂盒购于欣博盛生物科技有限公司.１．１．３㊀实验器材㊀电热恒温培育箱购于上海一恒科学仪器有限公司;１５１０酶标仪和高速冷冻离心机均购于赛默飞世尔(上海)仪器有限公司;高速组织研磨器套装购于天根生化科技(北京)有限公司.１．２㊀方法１．２．１㊀分组与给药㊀取４０只清洁级I C R小鼠适应性喂养１周,随机分为空白对照组㊁模型组(４００m g/k g)㊁A S－I V２０m g/k g组㊁A S－I V４０m g/k g组.空白对照组和模型组每日给予０．５％羧甲基纤维素钠,给药组分别给予相应剂量的A S－I V,连续灌胃１周.末次给药后２h后,除空白对照组灌胃生理盐水外,其余组均灌胃４００m g/k g A P A P,建立急性肝损伤模型.１．２．２㊀小鼠血清炎症因子的测定㊀采用E L I S A法检测小鼠血清中T N F－α㊁I L－１β㊁I L－６炎症因子水平.１．２．３㊀肝组织病理学检查㊀摘取小鼠左肝叶片,经过４％甲醛溶液固定,乙醇脱水后石蜡包埋切片,将切片放入二甲苯中脱蜡３０m i n,用浓度由高至低的酒精水化切片,随后蒸馏水冲洗１m i n,将切片放入苏木精中染色５m i n,流水稍洗去苏木精后采用１％的盐酸乙醇溶液进行分化和漂洗,促蓝液返蓝,返蓝后依次放入７５％㊁８５％酒精中各２m i n,０．５％伊红乙醇溶液复染１m i n后依次放入９５％㊁１００％酒精中各１０m i n 进行脱水,加入二甲苯中保持１０m i n,滴加中性树胶封片,观察肝组织切片的病理变化.１．３㊀数据统计实验数据以平均值ʃ标准误表示,采用S P S S２０．０软件进行处理,采用单因素方差分析,多重比较采用L S D 检验,P ＜０．０５表示差异显著,P ＜０．０１表示差异极显著.２㊀结果与分析２．１㊀A S －I V 对A P A P 致肝损伤小鼠肝组织病理学影响空白对照组小鼠肝细胞排列整齐,肝细胞以中央静脉为中心呈放射性排列,肝窦清晰,肝索分界明显,肝小叶结构完整(图１A ).A P A P 使小鼠肝细胞出现空泡和灶性坏死,肝索边界不清晰(图１B ),表明急性肝损伤模型建立成功.给予A S －I V 治疗后可改善A P A P 引起的小鼠肝组织细胞形态变化(图１C ㊁图１D ).图１㊀A S －I V 对A P A P 致急性肝损伤小鼠肝组织病理学影响(ˑ４００)F i g ．１㊀E f f e c t s o fA S －I Vo n l i v e r h i s t o p a t h o l o g y o fA P A P Ｇi n d u c e d a c u t e l i v e r i n j u r y m i c e 注:A 为空白对照组;B 为模型组;C 为A S －I V２０m g /k g 组;D 为A S －I V４０m g /k g 组２．２㊀A S －I V 对小鼠血清T N F －α表达的影响如图２所示,模型组T N F －α水平对比空白对照组明显上升(P ＜０．０１).给药组小鼠血清T N F－α水平均低于模型组,且差异具有统计学意义(P ＜０．０５).其中A S －I V４０m g /k g 组小鼠血清T N F －α水平降低极显著(P ＜０．０１),表明A S －I V 对A P A P 诱导的急性肝损伤小鼠T N F －α表达有显著影响.图２㊀A S －I V 对小鼠血清T N F －α表达的影响F i g ．２㊀E f f e c t o fA S －I Vo n t h e e x p r e s s i o no f s e r u m T N F －αi nm i c e 注:∗∗表示与空白组比较P ＜０．０５;＃＃表示与模型组比较P ＜０．０５,＃＃＃表示与模型组比较P ＜０．０１.下同.２．３㊀A S －I V 对小鼠血清I L －１β表达的影响如图３所示,空白对照组㊁模型组与给药组相互比较显示,灌胃A P A P 的小鼠其血清中I L－１β表达量极显著升高(P ＜０．０１),给予A S －I V 治疗的小鼠血清中I L－１β表达量均极显著低于模型组,结果显示,A S －I V 能极显著降低急性肝损伤小鼠I L －１β表达量.５３第３３卷第６期㊀㊀㊀孙克诚,等:黄芪甲苷对扑热息痛诱导肝损伤小鼠炎症因子表达的影响２．４㊀A S －I V 对小鼠血清I L －６表达的影响图４表明空白对照组,模型组与给药组间小鼠血清中I L －６表达量的差异.对比空白组,模型组小鼠血清I L －６表达量极显著上升(P ＜０．０１),给药组中小鼠I L －６表达量均有显著下降(P ＜０．０５),A S －I V４０m g /k g 组降低极显著(P ＜０．０１).图４显示,急性肝损伤会使小鼠I L －６表达量显著上升,A S －I V 能显著降低因急性肝损伤导致小鼠I L －６表达量异常升高.图３㊀A S －I V 对小鼠血清I L －１β表达的影响F i g ．３㊀E f f e c t o fA S －I Vo n t h e e x p r e s s i o n o f s e r u mI L －１βi nm i ce 图４㊀A S －I V 对小鼠血清I L －１β表达的影响F i g ．４㊀Ef f e c t o fA S －I Vo n t h e e x p r e s s i o n o f s e r u mI L －６i nm i c e３㊀结论与讨论A S －I V 是中草药黄芪的主要活性成分,常用于治疗糖尿病,改善免疫系统.目前越来越多的研究表明A S －I V 可用于治疗器官纤维化㊁炎性损伤㊁氧化损伤[１９－２１].氧化应激是A P A P 诱导肝损伤的主要机制[２２].当机体摄入过量的A P A P 时,其代谢过程中产生的大量N Ｇ乙酰基Ｇ对苯醌亚胺超过了谷胱甘肽(G S H )的解毒能力,大量消耗肝脏内G S H ,破坏氧化还原过程,导致氧化应激[１５].过度的氧化应激会导致肝组织炎症反应[２３],过量的活性氧刺激单核细胞与巨噬细胞,促进各种促炎细胞因子的合成和释放.其中T N F－α㊁I L－１β是早期炎症反应中变化最显著的炎症因子,参与多种肝脏疾病进程[２４];I L －６主要由单核巨噬细胞㊁血管内皮细胞㊁成纤维细胞产生,研究表明I L －６在多种肝损伤进程具重要作用[２５].炎症反应参与A P A P 诱导的急性肝损伤发生㊁发展过程,肝损伤严重程度也取决于炎症因子的释放程度[２６－２７].本实验通过E L I S A 法检测血清中T N F －α㊁I L－１β㊁I L －６表达量以判断肝损伤发生㊁发展进程及严重程度,通过给予A S －I V 治疗,观察T N F －α㊁I L －１β㊁I L －６表达量判断A S －I V 是否具有抗炎和治疗A P A P 诱导肝损伤作用.结果显示A S －I V (２０㊁４０m g /k g )能显著降低A P A P 诱导肝损伤小鼠T N F －α㊁I L－１β㊁I L－６表达量,给予A S －I V 治疗的肝损伤小鼠肝细胞形态有明显改善.A P A P 诱导肝损伤过程是一个多因素多机制的复杂过程,多种细胞和通路参与其中,炎症因子是其中一个重要参与者.本研究讨论了炎症因子在A P A P 诱导小鼠肝损伤的含量变化,实验结果表明A S －I V 可显著下调A P A P 诱导肝损伤小鼠血清中T N F －α㊁I L －１β㊁I L －６表达量,可明显改善A P A P 诱导肝损伤肝细胞形态,表明A S －I V 具抗炎与治疗A P A P 诱导肝损伤作用.参考文献:[１]㊀王萌,王帅伟,隋欣儒,等．蒲公英水提物对小鼠应激性肝损伤的保护作用研究[J ]．延边大学农学学报,２０１８,４０(４):２２－２５．[２]㊀黄茸茸,卢万鹏,马凤余．决明子乙酸乙酯提取物对肝纤维化小鼠脂质过氧化水平的影响[J ]．赤峰学院学报(自然科学版),２０１７,３３(１９):７２－７５．[３]㊀杨威,徐闯,陈媛媛,等．大鼠非酒精性脂肪肝模型的建立[J ]．黑龙江八一农垦大学学报,２０１７,２９(３):１５－１９．[４]㊀鄂文君,张艳芬,马丽杰．蒙药额力根－７对急性肝损伤小鼠模型影响的研究[J ]．内蒙古民族大学学报(自然科学版),６３㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽科技学院学报㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０１９年２０１７,３２(３):２５８－２６２．[５]㊀于传科,戈宏焱．肝纤维化的影像诊断进展[J 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a c o l ,２０１７,４８:９１－９５．[１７]㊀C h e nP ,X i eY ,S h e nE ,e t a l ．A s t r a g a l o s i d e I Va t t e n u a t e sm y o c a r d i a l f i b r o s i s b y i n h i b i t i n g T G F －β１s i g n a l i n gi n c o x Ｇs a c k i e v i r u sB ３Ｇi n d u c e d c a r d i o m y o p a t h y [J ]．E u r JP h a r m a c o l ,２０１１,６５８(２/３):１６８－１７４．[１８]㊀K o JKS ,L a nFYL ,C h e u n g APL ,e t a l ．A m e l i o r a t i o no f e x p e r i m e n t a l c o l i t i s b y A s t r a g a l u sm e m b r a n a c e u s t h r o u gh a n t i －o x i d a t i o na n d i n h i b i t i o no f a d h e s i o nm o l e c u l e s y n t h e s i s [J ]．W o r l d JG a s t r o e n t e r o l ,２００５,１１(３７):５７８７－５７９４．[１９]㊀Q iQ ,M a oY ,Y i J ,e t a l ．A n t i Ｇf i b r o t i c e f f e c t s o f a s t r a g a l o s i d e I Vi n s y s t e m i c s c l e r o s i s [J ]．C e l l P h ys i o l B i o c h e m ,２０１４,３４(６):２１０５－２１１６．[２０]㊀Z h a n g W D ,Z h a n g C ,W a n g X H ,e t a l ．a s t r a g a l o s i d e I Vd i l a t e s a o r t i cv e s s e l s f r o mn o r m a l a n ds p o n t a n e o u s l y h y p e r Ｇt e n s i v e r a t st h r o u g he n d o t h e l i u m Ｇd e p e n d e n ta n de n d o t h e l i u m Ｇi n d e p e n d e n tw a y s [J ]．P l a n t a M e d ,２００６,７２(７):６２１－６２６．[２１]㊀曹玉冰．黄芪甲苷的药理作用及其机制的研究进展[J ]．现代药物与临床,２０１７,３２(５):９５４－９６０．[２２]㊀王建臻,孙洪涛,王洪军．氧化应激与心房颤动[J ]．内蒙古民族大学学报(自然科学版),２０１６,３１(１):７７－８０．[２３]㊀Z h uR ,Z e n g G ,C h e nY ,e t a l ．O r o x y l i n Aa c c e l e r a t e s l i v e r r e g e n e r a t i o n i nC C l ４Ｇi n d u c e da c u t e l i v e r i n j u r y m i c e [J ]．P L o SO n e ,２０１３,８(８):e ７１６１２．[２４]㊀M a JQ ,D i n g J ,Z h a n g L ,e t a l ．U r s o l i c a c i d p r o t e c t sm o u s e l i v e r a g a i n s tC C l ４Ｇi n d u c e do x i d a t i v e s t r e s s a n d i n f l a m m a Ｇt i o nb y t h eMA P K /N F －κB p a t h w a y [J ]．E n v i r o nT o x i c o l P h a r m a c o l ,２０１４,３７(３):９７５－９８３．[２５]㊀叶红球,卿笃信．酒精性肝病中免疫机制的研究进展[J ]．国际消化病杂志,２０１１,３１(５):２８３－２８６．[２６]㊀金宇霆,李大伟,明雅南,等．对乙酰氨基酚肝损伤时炎性因子㊁趋化因子以及T o l l 样受体表达的动态变化[J ]．肝脏,２０１６,２１(１):２４－２７,３８．[２７]㊀李艳云,史秋梅,王晓珊,等．紫锥菊多糖对内毒素血症小鼠炎症的保护作用[J ]．河北科技师范学院学报,２０１５,２９(３):８－１１．(责任编辑:顾文亮)７３第３３卷第６期㊀㊀㊀孙克诚,等:黄芪甲苷对扑热息痛诱导肝损伤小鼠炎症因子表达的影响。

黄芪提取物对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用
邱季;桂双英
【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2009(013)006
【摘要】目的探讨黄芪提取物(AE)对CCl4致小鼠急性化学性肝损伤模型的保护作用.方法采用CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,HE染色法对肝脏作病理检查.结果 AE 能显著降低小鼠血清ALT、AST、肝匀浆MDA水平,升高SOD和GSH-Px酶活性,减轻肝细胞损伤.结论 AE对CCl4致小鼠急性化学性肝损伤模型具有保护作用.【总页数】3页(P603-605)
【作者】邱季;桂双英
【作者单位】合肥市第一人民医院药学部,安徽,合肥,230061;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.三七总皂苷对急性化学性肝损伤小鼠的保护作用 [J], 黄玉霞
2.相思藤总黄酮对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及机制 [J], 陈红霞;吴咖;黄仁彬;冯艺萍;焦杨
3.救必应对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用 [J], 陈壮;肖刚
4.玄参提取物对小鼠急性化学性肝损伤保护作用的研究 [J], 吴亚辉;陈志鹃;杨玲玲;冯成;龙霞;高平
5.赶黄草总黄酮对四氯化碳所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用 [J], 付满玲;九红;袁叶飞
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233第15卷 第5期 2013 年 5 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 5 May，2013肥胖是一种严重危害人类健康的流行病，极易引发如糖尿病、高血压以及其他严重的并发症。

中国疾病预防控制中心资料表示中国平均肥胖率为7.1%。

但这在大城市更为常见，几乎达到12%。

同时，儿童肥胖率几乎达到8.1%[1]。

最近的治疗趋势包括手术、运动、饮食控制、针灸和药物治疗。

然而许多的减肥方式并没有长期很好的疗效而且可能会引起副作用，例如人们往往会在3年内肥胖反弹，因此需要改进治疗方式以减少副作用并提高疗效。

黄芪甲苷IV 是提取于常见中药黄芪中的活性物质[2]。

脂联素是脂肪组织细胞特异性分泌的一种细胞因子，能够调控生物体的能量稳态、糖类和脂类代谢、肥胖、抵抗炎症反应等，具有多种生物学功能，在人类健康方面发挥着重要作用[3]。

1 实验过程及方法1.1 肥胖老鼠造模所有的实验老鼠均被培养在上海中医药大学动物实验中心且被诱导肥胖造模。

将5周大雄鼠均分为3组。

模型组给予高脂饲料和同剂量生理盐水。

实验组给予高脂饲料和同剂量黄芪甲苷IV。

空白组给予普通饲料，灌胃试剂为生理盐水。

1.2 指标测定1.2.1 形态观察分别记录老鼠的每周体重和每日食物摄入量。

1.2.2 样品收集2个月之后，老鼠将通过注射过量巴比妥酸盐处死并收集其血清以及血浆并存放于-20 ℃保存，但应避免反复冻融，于数天后进行脂联素含量检测。

1.2.3 生化试剂盒分析该试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中脂联素水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂联素抗原、生物素化的抗人脂联素抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的脂联素呈正相关。

黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠内质网应激介导影响张吉;臧东钰【摘要】目的：探讨黄芪甲苷（ASIV）对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）的保护作用，并初步探讨其抑制内质网应激介导的细胞凋亡的作用。

方法：随机将50只SD大鼠分成5组，每组10只。

对照组（静注生理盐水1mg/kg），ALI组（静注LPS，5mg/kg）， ASIV组（注射LPS前，给药3、6、12mg/kg ASIV 连续灌胃7天）。

观察注射12h后肺组织湿干重（W/D）、western blotting检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）的蛋白表达。

结果：ALI组W/D值较对照组上升（P＜0.01），GRP78、ChOP蛋白表达较对照组升高（P＜0.01）；ASIV组W/D值较ALI组下降（P＜0.01），GRP78、ChOP蛋白表达较ALI组降低（P＜0.01），并呈一定的剂量依赖性。

结论：黄芪甲苷对急性肺损伤大鼠有保护作用，其作用机制可能与内质网应激有关。

%Objective To explore the effect of Astragaloside IV on apoptosis mediated by endouplasmic reticulum stress (ERS)in a rat model of acute lung injury (ALI)induced by lipopolysaccharide (LPS). Methods Fifty SD rats were randomly divided into con-trol group,ALI group,and ASIV group,10 in each group. The rats in the control group were treated with normal saline. The rats in the ALI group were treated with LPS(5mg/kg). The rats in the ASIV groups were pretreated with ASIV(3,6,12mg/kg)for 7days.After 12h injection,the change of wet -dry weight (W/D)were determined. The expressions of glucose -regulated protein 78 (GRP78)and C/EBP homologous protein (CHOP)were determined by Western blot. Results Compar2ed with the control group,the W/D wasincreased (P#0.01),the expression ofGRP78 and CHOP were increased in the ALI group (P#0.01). Compared with ALI group,the W/D was decreased (P # 0.01 ),the expression of GRP78 and CHOP were decreased in the ASIV groups (P # 0.01). Conclusion Astragaloside IV has a protective effect on LPS-induced acute lung injury,which is partially via endouplasmic reticulum stress.【期刊名称】《中国民族民间医药》【年(卷),期】2014(000)015【总页数】2页(P19-20)【关键词】黄芪甲苷;急性肺损伤;内质网应激;葡萄糖调节蛋白78 (GRP78);C/EBP 环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)【作者】张吉;臧东钰【作者单位】辽宁医学院附属第三医院胸外科，辽宁锦州 121000;辽宁医学院附属第三医院胸外科，辽宁锦州 121000【正文语种】中文【中图分类】R285.5严重的创伤、外伤及大手术易并发有革兰阴性菌感染所产生的内毒素血症，肺部是最易受累的器官，容易引发急性肺损伤(actue lung injury，ALI)，进一步发展可致急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)，甚至多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)[1]。

黄芪甲苷对低氧诱导小鼠血管损伤的保护作用及其机制王玥;鲁美丽;王洪新【期刊名称】《吉林大学学报:医学版》【年(卷),期】2022(48)5【摘要】目的:探讨黄芪甲苷(ASⅣ)对低氧诱导的小鼠血管损伤的保护作用,并阐明其可能的作用机制。

方法:60只雄性健康昆明小鼠随机分为对照组,低氧组,低、中和高剂量(40、80和120 mg·kg-1) ASⅣ组。

低氧组和不同剂量ASⅣ组小鼠在低氧舱(氧浓度10%)中饲养,连续4周,低、中和高剂量ASⅣ组小鼠于低氧第2天灌胃给药,连续4周。

离体血管环实验检测各组小鼠血管张力,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组小鼠血清中白细胞介素6 (IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,免疫组织化学法检测各组小鼠胸主动脉组织中骨膜蛋白(POSTN)阳性细胞率,Western blotting法检测各组小鼠胸主动脉组织中POSTN、细胞间黏附分子1 (ICAM-1)、血管细胞黏附分子1 (VCAM-1)和磷酸化核因子κB (p-NF-κB) p65蛋白表达水平。

结果:与对照组比较,低氧组小鼠乙酰胆碱(Ach)最大舒张率明显降低(P<0.01);与低氧组比较,低剂量ASⅣ组小鼠Ach最大舒张率差异无统计学意义(P>0.05),中和高剂量ASⅣ组小鼠Ach最大舒张率明显升高(P<0.01)。

ELISA法检测,与对照组比较,低氧组小鼠血清中IL-6和TNF-α水平明显升高(P<0.01);与低氧组比较,低、中和高剂量ASⅣ组小鼠血清中IL-6和TNF-α水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。

免疫组织化学法,对照组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率极低;与对照组比较,低氧组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率明显升高(P<0.01);与低氧组比较,低剂量ASⅣ组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率差异无统计学意义(P>0.05),中和高剂量ASⅣ组小鼠胸主动脉组织中POSTN阳性细胞率明显降低(P<0.01)。

黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制目的：研究黄芪甲苷（astragalosideⅣ，ASⅣ）对H2O2诱导肾小球系膜细胞（human mesangial cells，HMC）氧化应激损伤的保护作用，并进一步探讨其分子机制。

方法：将培养的肾小球系膜细胞随机分为5组：正常对照组、H2O2模型组、ASⅣ（12.5，100 nmol·L-1）组、阳性药（Tempol，1×105nmol·L-1）组。

采用MTT法观察细胞活力；Hoechst 33258染色检测细胞凋亡；DHE染色检测胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生；流式细胞术检测细胞周期变化情况；Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1，Cyclin A及磷酸化p38，T-p38的表达。

结果：1×105，2×105，3×105，4×105 nmol·L-1 H2O2均能诱导肾小球系膜细胞发生氧化应激损伤：细胞存活率明显降低，细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势。

100 nmol·L-1黄芪甲苷能够显著减轻H2O2（3×105 nmol·L-1）诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤：提高细胞存活率及细胞活力，抑制细胞凋亡，降低胞内ROS产量；恢复细胞周期蛋白Cyclin D1表达及各细胞周期的百分比，恢复细胞的正常增殖；降低磷酸化p38的表达。

结论：黄芪甲苷对H2O2诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。

其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路，影响细胞周期蛋白Cyclin D1的表达及降低H2O2诱导的细胞内ROS氧化应激损伤有关。

标签：黄芪甲苷；过氧化氢；氧化应激；ROS；Cyclin D1；肾小球系膜细胞糖尿病肾病（diabetic nephropahty，DN）作为糖尿病最常见的并发症之一，已成为导致糖尿病终末期肾病维持透析的主要病因，给社会和家庭带来了沉重的经济负担和精神压力[1]。

黄芪甲苷对心肌细胞保护作用机制的研究进展张博雅，高晟△摘要：黄芪是一种传统中药材，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、托毒生肌等功效，在中国已经被广泛用于治疗心血管疾病，其中黄芪甲苷（AS-Ⅳ）是其重要的有效成分之一。

黄芪甲苷的主要药理作用包括增强免疫力、抗炎、抗氧化、抗病毒等。

近年开展的AS-Ⅳ相关研究表明，黄芪甲苷通过调节细胞内钙稳态、抗氧化反应、改善心肌能量代谢、抑制细胞凋亡、抗细胞毒性作用等多种机制参与心脏保护作用。

本文就相关研究内容进行综述，以期对临床研究提供参考。

关键词：黄芪；肌细胞，心脏；钙；活性氧；线粒体；黄芪甲苷中图分类号：R777.1+2文献标志码：ADOI ：10.11958/20192266The research on mechanism of the protective effect of astragaloside Ⅳon cardiomyocytesZHANG Bo-ya,GAO Sheng △Department of Cardiovascular,Tianjin Nankai Hospital,Tianjin 300100,China△Revisor and Corresponding Author E-mail:gaosheng6747@Abstract:Astragaloside Ⅳ(AS -Ⅳ)is an active ingredient from a kind of traditional Chinese herbal medicineastragalus membranaceus,which has the functions of invigorating and promoting yang,fixing surface and relieving sweat,diffusing edema and detoxifying muscles.Chinese herbal medicine astragalus membranaceus has been widely used in the treatment of cardiovascular diseases in China,and AS -Ⅳis one of its important active ingredients.The main pharmacological effects of AS-Ⅳinclude the enhancement of immunity,anti-inflammatory,anti-oxidation and anti-virus.Recent studies on AS-Ⅳdemonstrated that AS-Ⅳcan participate in cardioprotection by regulating intracellular calcium homeostasis,anti-oxidation interaction,improving myocardial energy metabolism,inhibiting apoptosis and anti-cytotoxicity.This article concludes the relevant researches in order to provide reference for clinical study.Key words:astragalus membranaceus;myocytes,cardiac;calcium;reactive oxygen species;mitochondria;astragaloside Ⅳ基金项目：中西结合医学科研课题（2017037）作者单位：天津市南开医院心内一科（邮编300100）作者简介：张博雅（1977），女，硕士，副主任医师，主要从事心脏病的临床和基础研究△审校者及通讯作者E-mail ：gaosheng6747@黄芪甲苷（Astragaloside Ⅳ，AS-Ⅳ）是中药材黄芪的重要有效化学成分之一，具有抗氧化、抗癌、抗老化、抗炎症等多种效应［1］。

［１９］ＫｉｓｈｉｍｏｔｏＴ．ＩＬ ６：ｆｒｏｍｉｔｓｄｉｓｃｏｖｅｒｙｔｏｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＩｎｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１０，２２（５）：３４７ ３５２．［２０］江宏志，吴为群，严英硕，等．几种常见呼吸道疾病行气道反应性检测的临床意义［Ｊ］．新医学，２００４，３５（１１）：６８３ ６８４．［２１］ＲｉｎｃｏｎＭ，ＩｒｖｉｎＣＧ．ＲｏｌｅｏｆＩＬ ６ｉｎａｓｔｈｍａａｎｄｏｔｈｅｒｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＢｉｏｌＳｃｉ，２０１２，８（９）：１２８１ １２９０．黄芪甲苷对辐射诱发肾损伤的干预作用及其机制刘淑宁１，丁艳平１△，徐郁琴１，康　洁１，张晋平１，邵宝平２（１．西北师范大学生命科学学院，甘肃兰州７３００７０；２．兰州大学生命科学学院，甘肃兰州７３００００）【摘要】　目的：探讨黄芪甲苷（ＡＳ ＩＶ）对辐射诱导的小鼠肾脏损伤的防护作用及其硫氧还蛋白相互作用蛋白（ＴＸＮＩＰ）／ＮＯＤ样受体蛋白３（ＮＬＲＰ３）通路机制。

方法：将小鼠分为正常对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶剂组、辐射组（ＩＲ）、２０ｍｇ／ｋｇＡＳ ＩＶ预防组（ＩＲ＋ＡＳ ２０ｍｇ／ｋｇ）和４０ｍｇ／ｋｇＡＳ ＩＶ预防组（ＩＲ＋ＡＳ ４０ｍｇ／ｋｇ），每组各２０只。

ＩＲ＋２０ｍｇ／ｋｇ和ＩＲ＋４０ｍｇ／ｋｇ组小鼠每天分别于腹腔注射２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ的ＡＳ ＩＶ；ＤＭＳＯ组和ＩＲ组于腹腔注射体重对应的ＤＭＳＯ；Ｃｏｎｔｒｏｌ组腹腔注射生理盐水。

腹腔注射一个月后，ＩＲ、ＩＲ＋２０ｍｇ／ｋｇ和ＩＲ＋４０ｍｇ／ｋｇ组小鼠接受８Ｇｙ的６０Ｃｏγ辐射，总时长７ｍｉｎ，并于辐射完５ｄ后采集肾脏组织，检测其形态学变化、活性氧（ＲＯＳ）水平、ＴＸＮＩＰ和ＮＬＲＰ３蛋白的表达部位及ＴＸＮＩＰ／ＮＬＲＰ３信号通路相关蛋白的表达情况。

结果：与ＤＭＳＯ组相比，辐射组小鼠肾小球和肾小管表现出明显的病理学特征，ＲＯＳ水平显著升高，ＴＸＮＩＰ及ＮＬＲＰ３蛋白阳性表达于各级肾小管上皮细胞且ＴＸＮＩＰ／ＮＬＲＰ３信号通路相关蛋白ＴＸＮＩＰ、ＮＬＲＰ３、半胱氨酸天冬酶１（Ｃａｓｐａｓｅ １）、白介素 １β（ＩＬ １β）、肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ ɑ）的表达显著升高（Ｐ＜０．０１）；与ＩＲ组相比，４０ｍｇ／ｋｇ的ＡＳ ＩＶ预防能明显改善辐射所致的病理反应，显著降低ＲＯＳ水平和ＴＸＮＩＰ、ＮＬＲＰ３的阳性表达，ＴＸＮＩＰ／ＮＬＲＰ３信号通路相关蛋白的表达显著减少（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。