黄连上清片微生物检验方法验证方案汇总

药品微生物限度检查方法适用性实验报告生产单位：********有限公司检品名称：黄连上清片检品编号：201600479检品批号：20160303试验项目：需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法和控制菌检查方法的适用性实验。

试验依据：中国药典2015年版四部1105,1106试验方法：中国药典2015年版四部1105,1106试验要求：1、需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验中，各试验菌试验组菌落减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0.5~2范围内。

2、各控制菌检查方法适用性试验中，试验组应检出试验菌。

试验结果：符合规定试验结论：根据方法适用性试验结果，本品微生物限度检查法为：需氧菌总数采用稀释-平皿倾注法（1：50供试液1ml/皿）；霉菌和酵母菌总数计数方法采用平皿倾注法；大肠埃希菌检查法：取1:10供试液10ml加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中。

沙门菌检查法：取10g，加入200ml胰酪大豆胨液体培养基中用匀浆仪1档1分混匀。

耐胆盐革兰阴性菌检查法：取1:10供试液1ml加入10ml肠道增菌液体培养基中。

黄连上清片微生物限度检查方法适用性试验检品名称：黄连上清片检品编号：201600479检品批号：20160303生产单位：********有限公司1、方法：1.1检查方法：中国药典2015年版四部1105,11061.2试验方法：中国药典2015年版四部1105,11062、计数方法适用性试验：2.1菌种：金黄色葡萄球菌〈CMCC(B)26 003〉铜绿假单胞菌〈CMCC(B)10 104〉枯草芽孢杆菌〈CMCC(B)63 501〉白色念珠菌〈CMCC(B)98 001〉黑曲霉〈CMCC(B)98 003〉2.2菌液制备：2.2.1取经35℃培养22小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌胰酪大豆胨液体培养基培养物，用0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液，做活菌计数用。

黄连上清片微生物限度计数方法适用性验证方案方案编号：VOL-QWX-003方案编号：VOL-QWX-003 版本号：00 第2 页共13页年月验证方案审批表黄连上清片微生物限度计数方法适用性验证方案目录1.概述2.目的3.依据4.范围5.验证小组人员及职责6.验证实施条件7.合格标准8.验证方法9.验证结果10.验证报告1.概述1.1样品资料品名：黄连上清片标准依据：《中国药典》2015版四部通则批号：试验日期：1.2处方：黄连上清片为《中国药典》2015版一部中药成方制剂法定标准。

由黄连、栀子、连翘、炒蔓荆子、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、大黄、黄柏、桔梗、川芎、石膏、旋覆花、甘草组成。

辅料为糊精、淀粉、蔗糖、聚维酮K30、微粉硅胶、硬脂酸镁、薄膜包衣粉。

1.3 功能主治：散风清热、泻火止痛。

用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼、牙齿疼痛、口舌生疮、咽喉肿痛、耳痛耳鸣、大便秘结，小便短赤。

1.4 有效期：18个月。

1.5依据《中国药典》2015版四部通则“非无菌含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准”，根据剂型与产品处方判断，黄连上清片微生物限度检查内容包括需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数，控制菌检查大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌、沙门菌；拟采用“平皿法-培养基稀释法”进行微生物计数方法检查，采用“常规法”进行控制菌检查。

2.目的：确认所采用的方法适用于该产品的微生物计数和控制菌检查，以确保测定方法的可靠性，确保检验结果的准确性。

若检验程序或产品发生变化，可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。

3.依据《中国药典》2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查——微生物计数法”《中国药典》2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查——控制菌检查法”《中国药典》2015年版四部——“非无菌产品微生物限度标准”4.范围：本验证方案适用于？？制药有限公司黄连上清片微生物限度检查检验方法的适用性试验。

黄连上清片检验记录一、性状：本品为（糖衣片，除去糖衣后显黄棕色至棕褐色）,气香，味苦。

结论：□符合规定□不符合规定。

二、鉴别：2.1、薄层鉴别：2.1.1、供试品溶液：取本品（10片）片,除去包衣，研细，加甲醇30ml，加热回流分钟，滤过,滤液蒸干，残渣加1%盐酸溶液（25ml) ml，加热回流（1小时），放冷，用乙醚振摇提取2次，每次(20ml) ml，合瓶乙醚液，蒸干，残渣加甲醇(2ml) ml使溶解，作为供试品溶液。

2.1.2、对照药材溶液：取大黄对照药材(0.1g) g，加甲醇(10ml) ml，同法制成对照药材溶液。

2.1.3、对照品溶液：取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml中含(1mg) mg，作为对照品溶液。

2.1.4、点样：照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述三种溶液各(2~4ul) ul，分别点于同一硅胶G薄层板上。

2.1.5、展开：以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。

2.1.6、结果：置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，(显相同顔色的荧光斑点），置氨蒸汽中熏后，斑点变为（红色）。

2.2、薄层鉴别：2.2.1、供试品溶液：取本品（5片）片，除去包衣，加甲醇(10ml) ，超声处理(30分第 1 页共6 页检验人：日期：复核人：日期：钟）分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.2、黄连对照药材溶液：取黄连对照药材（0.1g) g，同法制成对照药材溶液。

2.2.3、对照品溶液：取盐酸小檗碱对照品，甲醇制成每1ml含(0.2mg) mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.4、点样、展开：照薄层色谱法试液，吸取上述三种溶液，各(2ul) ul，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以甲苯-异丙醇-乙酸乙酯-甲醇-水（6：1.5：3：1.5：0.3）为展开剂，置氨蒸汽饱和的展开缸内，展开，取出，晾干。

黄连上清片中土大黄苷的检查发表时间：2013-03-26T14:27:18.390Z 来源：《医药前沿》2013年第3期供稿作者：丁蓉康红英吴华东[导读] 黄连上清片为临床常用中成药，大黄是其中主要药味之一，且处方量较大，为了保证临床用药的准确。

丁蓉1 康红英2 吴华东2（1三峡大学第一临床医学院/湖北省宜昌市中心人民医院湖北宜昌 443003)(2湖北省宜昌市食品药品检验所湖北宜昌 443005）【摘要】目的：建立黄连上清片中土大黄苷的检查。

方法：采用薄层色谱的方法快速检查样品中是否有土大黄苷，以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（100:30:2:3）为展开剂，点样量各2ul，置紫外光灯（365nm）下检视。

结果：供试品色谱中，在与土大黄苷对照品色谱相应的位置上不得显相同颜色的的荧光斑点。

结论：该方法快速简便可靠，可用于黄连上清片中是否有土大黄苷的检查。

【关键词】黄连上清片土大黄苷薄层色谱法检查【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）03-0366-02黄连上清片为临床常用中成药，收载于《中国药典》2010年版一部，具有清风清热，泻火止痛的功效。

用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼、牙齿疼痛、口舌生疮、咽喉肿痛、耳痛耳鸣、大便秘结、小便短赤。

处方为十七味中药组成的复方制剂，大黄是其中主要药味之一[1]。

《中国药典》2010年版收载为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根及根茎为正品大黄[1]，除上述三种正品大黄外，另有藏边大黄、河套大黄、华北大黄、天山大黄的干燥根和根茎为伪品大黄与正品大黄混淆[2]。

大黄作为常用中药，用量较大，当药源供不应求时，有的厂家用含有土大黄苷伪品大黄代替正品大黄使用。

黄连上清片在药典标准中没有土大黄苷的检查方法，为了保证临床用药的准确、安全和有效，特制定本方法，对处方中使用的大黄是否是用土大黄代替建立了快速薄层鉴别检查方法。

高效液相色谱法在黄连上清片中有效成分的含量测定【摘要】目的：建立黄连上清片中大黄素、大黄酚的含量测定方法。

方法：采用高效液相色谱法、色谱柱为Diamonsi C18(250mm×4.6mm,5μm)，流动相为乙腈-甲醇-0.1%磷酸溶液测定成分取样量g 样品含量μg加入量μg测得量μg回收率% 平均回收率% RSD%大黄素 0.22760.22560.22680.22810.2286 70.556069.936070.308070.711070.8660 70.650070.650070.650070.650070.6500 140.0905139.1380140.2955140.9370140.5537 99.2198.9799.7099.32 99.35 0.28 大黄酚 0.22760.22560.22680.22810.2286 281.7688 279.2928280.7784282.3878283.0068 280.75 280.75280.75280.75280.75 568.8190 567.0433569.0529570.2333570.6346 101.12 101.25101.34101.22 101.24 0.082.9样品含量测定取不同批号的3份样品，按供试品溶液制备项下的方法制成供试品溶液，按原色谱条件测定大黄素、大黄酚的含量。

结果见表2。

表2 样品含量测定结果测定成分批号含量大黄素 101208101207101106 0.1410.1400.138大黄酚 101208101207101106 0.5650.5580.5613讨论3.1大黄的主要化学成分为大黄素、大黄酚，具有导滞通便，利水通淋，舒肝利胆，泻火解毒，祛瘀消微，止血，止吐，止痛等功效。

为了更好控制药品的质量，本文采用高效液相色谱法测定制剂中大黄素、大黄酚的含量。

3.2参照《中国药典》2010年版一部大黄素、大黄酚在254nm处有较好的吸收度。

微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。

3.规性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。

4.验证实施：4.4.1 试验前的准备:4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天使用。

4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。

4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释：4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。

中国药典微生物限度检查方法验证方案一、引言药品的质量与安全性是保障患者用药安全的重要方面。

微生物限度检查是药品质量控制的重要环节，用于评价药品中微生物的污染情况。

为确保检测结果的准确性和可靠性，本文旨在制定中国药典微生物限度检查方法验证方案。

二、背景微生物限度检查方法验证是指确定某一方法在特定条件下的适用性，方法验证的结果直接影响到药品生产和品质控制。

为了保证方法验证的可靠性，必须按照一定的规范和要求进行操作。

三、验证目的验证中国药典中所规定的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性，以确保药品的微生物限度符合国家及相关法规的要求。

四、验证程序1. 确定验证方法：根据中国药典中规定的微生物限度检查方法，选择合适的验证样品和验证条件。

2. 准备验证样品：从实际生产过程中随机选取药品样品，确保样品的代表性。

3. 执行验证实验：按照中国药典中的方法操作，对验证样品进行微生物限度检查。

4. 数据分析和评估：根据验证实验的结果，进行数据分析和评估，评估方法的准确性和可靠性。

5. 结果判定：根据数据评估结果，对微生物限度检查方法进行判定，判断方法是否适用于实际生产中的微生物限度检查。

6. 验证报告编制：根据验证实验的结果和结论，编制验证报告。

五、验证内容本次验证主要包括如下内容：1. 对选择的验证样品进行微生物限度检查。

2. 对验证样品进行菌落计数。

3. 对验证样品进行培养方法的验证。

4. 对不同微生物种类的检查方法进行验证。

5. 对不同微生物菌株的适应性进行验证。

六、风险评估在验证过程中，存在一定的风险因素，需进行风险评估，确保验证结果的可靠性和准确性。

风险评估主要包括验证样品来源的可靠性、实验操作的准确性、验证条件的合理性等。

七、验证结果与讨论根据验证实验的结果和数据分析，可以得出下列结论：1. 所验证的微生物限度检查方法在实际应用中的准确性和可靠性较高。

2. 所验证的微生物限度检查方法适用于不同药品制剂类型的微生物限度检查。

工艺验证文件黄连上清片工艺验证方案验证方案的起草：日期：验证方案的审核：日期：验证方案的审核：日期：验证方案的批准：日期：1.概述黄连上清片工艺验证是在各种设备能正常运行的情况下，对工艺规程规定的工艺处方、工艺参数进行验证，以证实所设定的工艺路线和控制参数能确保黄连上清片的质量。

现以黄连上清片[规格：糖衣片（片心重0.3g，相当于饮片0.65g）]为验证对象。

2.验证目的证明设定的工艺路线和控制参数能确保产品的质量，按确定的工艺规程生产，能够很好的保证产品质量稳定性及重现性。

3.职责车间：负责起草验证方案和报告，并负责本方案的实施。

负责跟踪所有偏差缺陷均已整改。

生产部：负责该方案和报告审核。

质量部：负责验证方案、验证报告的审核，负责对验证过程的监控和检验，负责对偏差作出处理意见。

验证总负责人：负责方案、偏差和报告的最后批准。

4.培训在本方案实施前，对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附表1。

5.黄连上清片工艺流程图及质量控制点示意图5.1.浸膏提取、生药粉粉碎灭菌工艺流程图及质量控制点示意图5.2.制剂工艺流程图及质量控制点示意图6.根据《工艺验证操作规程》的要求，工艺验证的范围应通过风险分析确定，本次验证的风险分析按照《药品生产质量失败模式与影响分析（FMEA)操作规程》进行,详见《黄连上清片工艺验证风险评估报告》 FX-QA-GYYZ-2018-19。

7.验证内容 7.1.提取工序处方中的药材均指饮片（或净药材），饮片（或净药材）规格应符合实际工艺的要求。

7.1.2.提取7.1.2.1.配料：配料操作员首先检查计量器具是否清洁，核对零点是否正确，检查无误后，按生产处方量称取中药净药材，在称量过程中，实行称量复核制。

7.1.2.2.提取挥发油：操作工按照生产指令给定处方量将荆芥穗、连翘、薄荷净药材投入提取罐中，开启蒸汽阀门，加热提取1.5小时，收集挥发油。

一、引言黄连作为一种重要的中药材，被广泛用于中医药中。

对于黄连的质量检验，微生物的检定是非常重要的一部分。

对黄连微生物检定法的方法学进行考察具有十分重要的意义。

二、黄连微生物检定法的研究背景黄连作为一种中药材，其微生物污染对于药材的质量具有重要影响。

针对黄连微生物检定法的研究显得尤为迫切。

目前，关于黄连微生物检定法的研究已经取得了一定的进展，但仍然存在方法选择不当、操作流程繁琐等问题。

三、黄连微生物检定法的方法学1. 样品的选取在黄连微生物检定法中，样品的选取是非常关键的一环。

合理选取样品可以有效保证检定结果的准确性。

一般来说，选取新鲜、无明显病虫害的黄连作为检定样品较为合适。

2. 准备工作在黄连微生物检定法的方法学中，准备工作是必不可少的。

包括洗净黄连样品、研磨制成适量的样品粉末等。

3. 反应体系的优化在具体的黄连微生物检定法中，反应体系的构建是非常重要的。

在菌落计数法中，需要优化培养基的配方、培养温度和培养时间等参数。

4. 检测方法的选择在黄连微生物检定法的方法学中，选择合适的检测方法是必不可少的。

目前常用的检测方法包括菌落计数法、膜过滤法、光学显微镜法等。

5. 结果的分析和判定在获得检定结果之后，需要进行结果的分析和判定。

例如对于菌落计数法获得的菌落数量，需要进行合理的统计分析并与标准进行比较，以确定样品是否符合质量标准。

四、黄连微生物检定法的现状分析目前，关于黄连微生物检定法的研究已经取得了一定的进展。

采用菌落计数法、膜过滤法等方法对黄连中的微生物进行检定已经取得了一定的成果。

然而，仍然存在一些问题，如方法的选择不当、操作流程繁琐等。

五、展望随着中医药的发展，对于黄连微生物检定法的研究将会更加深入。

未来，有望开发出更加简便、准确的黄连微生物检定法，为黄连及其他中药材的质量检验提供更多的选择和支持。

六、结论黄连微生物检定法的方法学考察对于提高黄连的质量检验水平具有重要意义。

在今后的研究中，需要进一步优化检定方法，完善检定标准，提高检定效率，为中药材的质量控制提供更为可靠的保障。

HPLC测定黄连上清片中有效成分的含量摘要：目的：建立多波长HPLC同时测定黄连上清片中三种成分含量的方法。

方法：采用Eclipse XDB-C18色谱柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），以A（0.1%磷酸水溶液（0.1%三乙胺））-B（甲醇）为流动相进行梯度洗脱；检测波长分别为238 nm、230 nm、278 nm。

结果：栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷质量浓度分别在各自浓度与峰面积线性关系良好；结论：该方法准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

关键词：多波长HPLC；栀子苷；盐酸小檗碱；黄芩苷；含量测定材料与方法1 仪器与试药1.1 仪器 Agilent 1200系列高效液相色谱仪；真空抽滤泵（大连依利特公司）；涡旋混合器（XW-80A上海医科大学仪器厂）；Sartorius CP225D电子天平（德国Sartorius公司）；数控系列超声处理器FS-150N（上海生析超声仪器有限公司）。

1.2试药栀子苷对照品（97.5%，批号：110749-201316）；盐酸小檗碱对照品（98.1%，批号：110713-200208）；黄芩苷对照品（批号：110715-200514），来源都是中国食品药品检定研究院；色谱纯甲醇（天津市协和昊鹏色谱科技有限公司）；磷酸（分析纯）；三乙胺（分析纯）2 色谱条件2.1色谱柱 Eclipse XDB-C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流动相为A（0.1%磷酸水溶液（0.1%三乙胺））-B（甲醇）；梯度洗脱（0 ～ 6 min，70% A；6 ～ 15 min，70% A ～60% A；15 ～ 25 min，60% A；25 ～ 30 min，60% A ～70% A）；流动相体积流量1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样量5 μL；检测波长为230 nm（小檗碱）、238 nm（栀子苷）、278 nm（黄芩苷）。

2.2溶液的制备2.2.1对照品混合溶液的制备分别称取栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷适量于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，制成对照品贮备液。

微生物限度检查方法验证方案微生物限度检查方法验证方案编码：表一、验证方案的起草与批准1.验证方案起草起草人：起草时期：年月日2.验证小组成员：3.验证方案审核4.验证方案批准批准人：批准日期：二、验证方案1.验证目的和原理1.1验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。

1.2原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。

2.验证方法步骤2.1验证前的准备：进行微生物限度检查方法验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

试验菌应包括G—、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。

2.2验证试验的操作计划：用3个不同批号产品微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断限度检查方法是否对产品有影响。

2.3试验结果可接受标准：用标准菌株评价方法“”的微生物限度检查对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组回收率也不低于70%。

3.试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：恒温培养箱、生化培养箱、电子天平、高压蒸汽灭菌器、净化工作台。

3.1.2操作环境：操作间应该安装空气除菌过滤层装置。

环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

操作间或净化工作台的洁净空气应该保持对环境形成正压，不低于4.9pa。

3.1.3试验样品：批号：批号：批号：3.1.4培养基：3.1.5稀释液：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以上经115℃高压蒸汽灭菌30min。

3.1.6验证用微生物名称及其编号编号由菌名首字母—传代代数—制备日期组成。

3.1.7器具：无菌薄膜过滤器：（孔径0.45um直径50mm）、无菌移液管（5ml）4.验证方法4.1菌液的制备将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种至10ml的无菌营养肉汤中在30～35℃下培养18～24小时，将白色念珠菌接种至改良马丁液体培养基中，在23～28℃下培养24～48小时。

黄连上清丸微生物限度检查验证试验资料陕西香菊药业集团有限公司黄连上清丸微生物限度方法验证资料1、样品：黄连上清丸陕西香菊药业集团有限公司生产；批号：20101101；规格：6g×20袋/盒。

2、培养基：（由北京三药科技开发公司生产）营养琼脂培养基批号090526改良马丁培养基批号090302营养肉汤培养基批号091203改良马丁琼脂培养基批号090302胆盐乳糖增菌液（BL）批号090927曙红亚甲蓝培养基（EMB）批号091101胆盐乳糖发酵培养基批号0902234-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基批号1003233、稀释液：为pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液。

4、试验用菌种：（均由中国医学细菌保藏中心提供）枯草芽胞杆菌[CMCC（B）63501]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]大肠埃希菌[CMCC（B）44102]白色念珠菌[CMCC（F）98001]黑曲霉菌[CMCC（F）98003]5、菌液制备：取以上各标准菌株第二代的新鲜培养物，接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌至营养琼脂培养基中，30-35℃培养18-24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23-28℃培养24-48小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成50-100cfu/ml的菌悬液，接种黑曲霉至改良马丁琼脂斜面23-28℃培养5-7天，加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细管）至无菌试管内，用0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成50-100cfu/ml孢子悬液。

结果见表16、供试液制备：取供试品10g，加稀释液100ml，制备成1:10供试液。

7、方法验证试验：7.1计数方法验证7.1.1细菌数测定：取供试液，按培养基稀释法（每皿0.5ml）用营养琼脂培养基皿测定7.1.2霉菌数及酵母菌测定，取供试液，按常规法测定。

黄连上清片微生物限度计数方法适用性验证方案方案编号：VOL-QWX-003年月方案编号：VOL-QWX-003 版本号：00 第 2 页共13页验证方案审批表黄连上清片微生物限度计数方法适用性验证方案目录1.概述2.目的3.依据4.范围5.验证小组人员及职责6.验证实施条件7.合格标准8.验证方法9.验证结果10.验证报告1.概述1.1样品资料品名：黄连上清片标准依据：《中国药典》2015版四部通则批号：试验日期：1.2处方：黄连上清片为《中国药典》2015版一部中药成方制剂法定标准。

由黄连、栀子、连翘、炒蔓荆子、防风、荆芥穗、白芷、黄芩、菊花、薄荷、大黄、黄柏、桔梗、川芎、石膏、旋覆花、甘草组成。

辅料为糊精、淀粉、蔗糖、聚维酮K30、微粉硅胶、硬脂酸镁、薄膜包衣粉。

1.3 功能主治：散风清热、泻火止痛。

用于风热上攻、肺胃热盛所致的头晕目眩、暴发火眼、牙齿疼痛、口舌生疮、咽喉肿痛、耳痛耳鸣、大便秘结，小便短赤。

1.4 有效期：18个月。

1.5依据《中国药典》2015版四部通则“非无菌含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准”，根据剂型与产品处方判断，黄连上清片微生物限度检查内容包括需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数，控制菌检查大肠埃希菌、耐胆盐革兰阴性菌、沙门菌；拟采用“平皿法-培养基稀释法”进行微生物计数方法检查，采用“常规法”进行控制菌检查。

2.目的：确认所采用的方法适用于该产品的微生物计数和控制菌检查，以确保测定方法的可靠性，确保检验结果的准确性。

若检验程序或产品发生变化，可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。

3.依据《中国药典》2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查——微生物计数法”《中国药典》2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查——控制菌检查法”《中国药典》2015年版四部——“非无菌产品微生物限度标准”4.范围：本验证方案适用于？？制药有限公司黄连上清片微生物限度检查检验方法的适用性试验。

黄连上清片微生物限度检查方法验证
程红杰
【期刊名称】《广州医药》
【年(卷),期】2010(041)002
【摘要】目的建立黄连上清片微生物限度检查方法并对其进行验证.方法采用培养基稀释法,测定5种阳性对照菌回收率.结果 5种菌株的回收率均高于70%,且控制菌检查具有专属性.结论可以采用培养基稀释法检查黄连上清片微生物限度.【总页数】2页(P61-62)
【作者】程红杰
【作者单位】河南省安阳市食品药品检验所,455000
【正文语种】中文
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4.20种医院制剂微生物限度检查方法验证及应用 [J], 金文丽;王艳;隆旭红;刘光斌;谢静;董玉兰
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高效液相色谱法在黄连上清片中有效成分的含量测定
李静;蔡旭升
【期刊名称】《中国中医药咨讯》
【年(卷),期】2011(3)17
【摘要】目的:建立黄连上清片中大黄素、大黄酚的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法、色谱柱为DiamonsiC18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.1％磷酸溶液(42∶ 23∶ 35),检测波长为254nm.结果:大黄素和大黄酚分别在3.85μg -61.60μg (r=0.9998)和6.30μg -100.80μ9 (r=0.9997)之间线性关系良好,大黄素的平均加样回收率为99.35％,RSD为0.28％；大黄酚的平均加样回收率为101.24％,RSD为0.08％.结论:该方法准确可靠,分离度好,可用于黄连上清片的质量控制.
【总页数】2页(P55-56)
【作者】李静;蔡旭升
【作者单位】河南三门峡市食品药品检验所,河南三门峡,472000;河南三门峡市食品药品检验所,河南三门峡,472000
【正文语种】中文
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