艾滋病实验室检测
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艾滋病的实验室检测流程中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心继发布《全国艾滋病检测技术规范(xx 年版)》后,近日即将发布 xx 年版《全国艾滋病检测技术规范》,此规范堪称艾滋病检测实验室的「红宝书」,适用于疾病控制中心艾滋病确认实验室和医疗机构的艾滋病初筛实验室的 HIV 检测技术操作。
下面是为大家带来的艾滋病的实验室检测流程的知识,欢迎阅读。
检测项目的样品种类1 HIV 抗体检测:全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。
2 HIV 抗原检测:全血、血清、血浆、病毒培养上清液。
3 T 淋巴细胞亚群测定:EDTA 或肝素抗凝全血。
4 HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测:血浆、滤纸干血斑(DBS)。
5 HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养:淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞(PBMC)及全血。
当然,实验室最常用的仍然是血液标本,其他只作为补充样本。
HIV 抗体检测HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目,在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。
1 初筛方法(1)酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法,目前检测试剂已经发展到 * ,即同时检测血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗体,秉承「宁可错杀一千,不可漏网一个」的革命精神,其灵敏度远高于特异性,直叫 HIV 抗体无处遁形。
(2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法,其采用发光或荧光底物,既可检测抗体,也可联合检测抗原抗体,用发光或荧光仪测定结果,其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高,同时带来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。
(3)快速检测(RT)方法此类方法操作简便快速,适用于应急检测、门诊急诊检测,但灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法,但是经济实惠,也有一定的市场影响力。
艾滋病的实验室检查一、概述艾滋病一词系获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)英文名词缩写的音译,由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的。
该病毒主要侵犯人体的免疫系统,尤其是破坏辅助性T淋巴细胞(TH或T4),使患者细胞免疫功能明显低下,失去对外界感染的抵抗力,容易发生各种顽固感染和恶性肿瘤,艾滋病缺乏有效的治疗,死亡率高,预后很差。
艾滋病已成为当今世界严重危害人类健康和生命的烈性传染病。
本病主要通过性接触传播,生殖器皮肤粘膜有破损的受染机会大大增加;其次通过血液、血液制品、组织器官的移植而传播,输入含艾滋病毒的血液或血液制品,静脉吸毒者共用未经消毒的注射器,针头上带有的微量血液足以使人染上艾滋病毒;再次为母婴传播,受艾滋病毒感染的孕妇可通过胎盘的脐带血将病毒传染至胎儿,也可在分娩时及产后传染给婴儿。
国外研究报道,大约1/4的HIV 感染儿童在生后一年发展为艾滋病,HIV感染儿童5年存活率为70%。
二、实验室检查1.HIV病原学检查从患者体液或组织中分离HIV是确定HIV感染最可靠的证据,分离HIV的技术要求高,仅在少数有特殊装备的实验中才能作。
常用的有抗体检测法,可用免疫荧光法,酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白印迹法等。
也可作抗原检测,如检测HIV P24抗原等。
2.免疫学检查做末梢淋巴细胞计数显示淋巴细胞数量呈进行性下降,做亚形计数主要是CD4细胞(辅助性T细胞,TH)及CD8细胞(抑制性T细胞,Ts)。
在急性期TH计数是正常的,早期TH计数在400/mm3以上,中期降至200~400/mm3以下,晚期降至200/mm3以下,且TH/Ts比值小于1。
3.机会性感染的病原学检查包括病毒、细菌、真菌及原虫等的检测。
早期HIV感染的诊断主要靠检出HIV抗体。
对一些高危人群如发生传染性单核细胞增多症的表现应常规作HIV抗体检测。
(三)诊断标准我国于1990年8月在“中华人民共和国传染病防治法”中规定艾滋病属乙类传染病,并提出试验诊断标准。
实验室艾滋、梅毒和乙肝相应项目的标准化操作程序实验室是进行各类病原微生物检测的重要场所,包括艾滋病、梅毒和乙肝等项目的标准化操作程序也是实验室工作的核心。
标准化操作程序的制定,旨在确保实验室工作的准确性、可靠性和连续性,最大程度地减少误差和风险。
下面将详细介绍实验室艾滋病、梅毒和乙肝项目的标准化操作程序。
一、艾滋病检测项目的标准化操作程序:1.标本采集:按照规定的采样方法采集血液标本,包括静脉血和采血盒采集的血液。
2.样本处理:收到标本后,首先检查样本标签和申请单上的信息是否一致,然后进行样本分装和保存,确保样本的完整性和稳定性。
3.样本检测:使用艾滋病抗体检测试剂盒进行检测。
按照检测试剂的说明书,将样本和试剂按照比例混合并孵育一定时间,然后进行洗涤和显色。
4.结果判断:根据试剂盒的说明书,根据显色反应的强度和比色卡提供的判断标准,判断样本阴阳性。
5.结果记录和报告:将检测结果记录在检验记录中,并生成相应的实验报告,确保结果能够及时准确地传达给临床医生。
二、梅毒检测项目的标准化操作程序:1.标本采集:按照规定的采样方法采集血液标本,包括静脉血和采血盒采集的血液。
2.样本处理:收到标本后,首先检查样本标签和申请单上的信息是否一致,然后进行样本分装和保存,确保样本的完整性和稳定性。
3.样本检测:使用梅毒抗体检测试剂盒进行检测。
按照检测试剂的说明书,将样本和试剂按照比例混合并孵育一定时间,然后进行洗涤和显色。
4.结果判断:根据试剂盒的说明书,根据显色反应的强度和比色卡提供的判断标准,判断样本阴阳性。
5.结果记录和报告:将检测结果记录在检验记录中,并生成相应的实验报告,确保结果能够及时准确地传达给临床医生。
三、乙肝检测项目的标准化操作程序:1.标本采集:按照规定的采样方法采集血液标本,包括静脉血和采血盒采集的血液。
2.样本处理:收到标本后,首先检查样本标签和申请单上的信息是否一致,然后进行样本分装和保存,确保样本的完整性和稳定性。
艾滋病检测筛查实验室基本标准艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)引起的一种免疫系统疾病,严重威胁人类的健康与生活。
为有效控制艾滋病的传播,艾滋病检测筛查工作的准确性和标准化非常重要。
本文将介绍艾滋病检测筛查实验室的基本标准,以确保检测结果的可靠性。
一、实验室基本建设1. 实验室环境:实验室应设置在独立、封闭的区域内,具备良好通风、充足的阳光照射和患者与外界隔离的条件,确保病毒不会泄露和传播。
2. 设备设施:实验室应配备先进的设备和仪器,如荧光显微镜、PCR仪等,以确保检测的准确性和灵敏度。
3. 安全防护:实验室必须采取严格的生物安全措施,包括实验室人员必须穿戴合适的防护服,使用一次性手套等,以避免病毒的传播。
二、实验室人员要求1. 资质要求:实验室人员需具备相关医学或生物学专业背景并取得相关资质证书,熟悉艾滋病检测筛查的理论和实践操作。
2. 培训和定期考核:实验室人员应定期接受相关培训和考核,保持技能的更新和提高。
3. 团队合作:实验室人员需要具备团队合作精神,有效沟通和协作,以确保实验室工作的顺利进行。
三、标本采集和处理1. 采样器具:艾滋病标本采集应使用一次性器具,以避免交叉感染的发生。
2. 标本种类:常见的标本种类包括血液、唾液等,根据实际需要选择合适的标本类型。
3. 采集操作规范:标本采集操作应符合相关的操作规范,采集时需注意无菌操作和避免污染。
四、实验室操作流程1. 样本登记:在样本送检前,必须进行准确的样本登记和信息记录,包括患者的姓名、年龄、性别等。
2. 样本保存:样本在采集后应妥善保存,并按照规定的时间安排进行检测,以确保结果的准确性。
3. 检测方法:艾滋病检测方法包括酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)、免疫荧光法等,实验室应选择准确可靠的方法进行检测。
艾滋病实验室检测HIV/AIDS 的实验室检测主要包括HIV抗体检测、HIV核酸定性和定量检测、CD4+ T淋巴细胞计数、HIV耐药检测等。
HIV⁃1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准,HIV核酸检测(定性和定量)也用于HIV 感染诊断;HIV 核酸定量(病毒载量)和CD4+ T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV 耐药检测可为HAART方案的选择和更换提供指导。
1.HIV⁃1/2 抗体检测:包括筛查试验和补充试验。
HIV⁃1/2抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光或免疫荧光试验、快速试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒、免疫层析等)、简单试验(明胶颗粒凝集试验)等。
补充试验方法包括抗体确证试验(免疫印迹法,条带/线性免疫试验和快速试验)和核酸试验(定性和定量)。
筛查试验呈阴性反应可出具HIV⁃1/2抗体阴性报告, 见于未被HIV感染的个体,但窗口期感染者筛查试验也可呈阴性反应。
若呈阳性反应,用原有试剂双份(快速试验)/双孔(化学发光试验或ELISA)或两种试剂进行重复检测,如均呈阴性反应,则报告为HIV抗体阴性;如一阴一阳或均呈阳性反应,需进行补充试验。
补充试验:抗体确证试验无HIV特异性条带产生,报告HIV⁃1/2抗体阴性;出现条带但不满足诊断条件的报告不确定,可进行核酸试验或2~4周后随访,根据核酸试验或随访结果进行判断。
补充试验HIV⁃1/2 抗体阳性者,出具HIV⁃1/2抗体阳性确证报告。
核酸试验:核酸定性检测结果阳性报告HIV⁃1核酸阳性,结果阴性报告HIV⁃1核酸阴性。
病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml 报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测,临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。
2.CD4+T淋巴细胞检测CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞,HIV感染人体后,出现CD4+T淋巴细胞进行性减少,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置,细胞免疫功能受损。
HIV实验室检测方法和步骤HIV,也称为人类免疫缺陷病毒,是一种能导致艾滋病的病毒。
HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。
以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。
1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前,需要对样本进行预处理和登记。
预处理包括标识样本的相关信息,如样本编号和患者信息。
这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。
此外,还需检查样本的适应性和完整性。
2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。
这可以通过离心来分离血液的不同成分,例如血红蛋白和血清。
离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。
4.酶联免疫吸附测定法(ELISA)最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。
这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。
根据ELISA方法的不同,可检测HIV抗原或抗体。
实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中,然后根据试剂盘的建议操作,包括孵育时间、温度和洗涤步骤。
任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变,都可作为阳性结果。
否则,结果被视为阴性。
5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后,通常会进行一个或多个确认试验。
确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。
常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验(IFA)和西方印迹法(Western blot)。
这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体,以确保先前的结果的准确性。
6.分子检测有时,为了获得更加可靠和敏感的结果,实验室会使用分子检测方法,例如聚合酶链式反应(PCR)。
PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸,以确定HIV感染的存在和病毒的数量。
7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后,实验室技术人员需要解读并记录结果。
阳性结果意味着存在HIV感染,而阴性结果则表示未检测到HIV感染。
针对不同的检测方法和样本类型,结果的解释可能有所不同。
因此,在结果解读和记录时,实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程(SOP)。
艾滋病初筛实验室检测样品的规范化要求艾滋病检测最常用的样品是血液,包括血清、血浆、全血和用全血制备的细胞、干血斑。
唾液或尿液有时也可以作为测试样品,但目前极少使用。
样品采集、运送和保存涉及面较广,与检测结果有一定关系,所以制定规范化要求是非常必要的。
血清样品采集和处理对于艾滋病和HIV感染的诊断,主要采用血清样品检测HIV抗体。
可用一次性注射器(或真空采血管)无菌抽取5~10ML(根据需要确定采样量)静脉血,室温下自然放置1~2h,,待血液凝固、血块收缩后用3000rpm,离心15分钟,吸取血清进行HIV抗体检测。
如果当天不能进行检测,应将血清样品置2~8℃冰箱保存备用。
快速检测试剂检测HIV抗体,也可以用末梢全血:成人和1岁以上儿童可选择中指、无名指或食指采集;1岁以下儿童可采用足踵采血。
用75%医用酒精或碘伏消毒采血局部皮肤,用无菌纱布擦掉第一滴血。
用EDTA毛细管吸取血样时避免气泡进入毛细管。
采血结束后,局部必须认真消毒,彻底止血,采血完成后的穿刺针头必须丢弃在利器盒里,严防职业损伤。
根据实验项目要求选用适当的抗凝剂,采集用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品,可选用EDTA或肝素或柠檬酸钠;HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用EDTA或柠檬酸钠。
样品采集后应在规定时间及时送到实验室,避免因采集不当、时间延缓等因素而影响检测结果的真实性,采集的抗凝全血应在4-8h以内分离。
分离后将样品放在﹣20或﹣70℃冷冻。
对所有样品进行编号,写明日期和收集时间。
样品的保存用于抗体检测的血清或血浆样品,应存放于﹣20℃以下,短期(1周)内进行检测的样品可存放于2~8℃.HIV检测阳性反应血清样品保存时间至少十年。
HIV检测的阴性血清样品是否需要保存和保存要根据不同情况而定。
用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存,样品采集时间超过48h则不可检测。
由于HIV检测阳性反应血清样品都保存在艾滋病检测确认实验室,因此,在HIV检测阳性反应血清样品较多的地区,艾滋病检测确认实验室应根据需要配备﹣20℃以下的低温冰箱和﹣80℃的超低温冰箱,设置血清库。
艾滋病的实验室常规检验项目
艾滋病检测,是指采用实验室方法对人体血液、其他体液、组织器官、血液衍生物等进行艾滋病病毒、艾滋病病毒抗体及相关免疫指标检测。
艾滋病的检测方法有:抗体检测,抗原检测,核酸检测,病毒分离。
(1)主要是中度以上细胞免疫缺陷包括:CD4+T 淋巴细胞耗竭:T淋巴细胞功能下降,外周血淋巴细胞显著减少,CD4<;200/μl,CD4/CD8<;1.0,(正常人为1.25—2.1),迟发型变态反应皮试阴性,有丝分裂原刺激反应低下。
(2)B淋巴细胞功能失调:多克隆性高球蛋白血症,循环免疫复合物形成和自身抗体形成。
(3)NK细胞活性下降。
(4)各种致病性感染的病原体检查如PCR。
组织学证实的恶性肿瘤,如KS。
(5)HIV抗体检测:
1.酶联免疫吸附法(ELISA);
2.明胶颗粒凝集试验(PA);
3.免疫荧光检测法(IFA);
4.免疫印迹检测法(Western Blot,简称WB法);
5.放射免疫沉淀法(RIP)。
其中前三项常用于筛选试验,后二者用于确证试验。
(6)PCR技术检测HIV病毒。