凝集反应、双扩

第十章凝集性试验学习要点：凝集试验的概念、原理、分类，以及常用的凝集试验类型。

沉淀试验的概念、原理、分类，以及常用的沉淀试验类由于所用抗原的性状不同，出现的现象也不同：1、细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等不溶性颗粒抗原,当与相应抗体结合，抗原与抗体结合形成凝集团块，即(agglutination)。

2、病毒、蛋白质等可溶性抗原与抗体结合，在两者比例合适时,可形成较大的不溶性免疫复合物，在反应体系中出现不透淀反应(precipitation reaction)。

第一节凝集试验（agglutination test）细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等不溶性的颗粒抗原,当与相应抗体结合，在有电解质存在时,抗原与抗体结合形凝集试验。

凝集试验中的抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin）一、凝集试验的一般原理通常，细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷,周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负子层，使颗粒相互排斥。

当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的电位，而使颗粒聚集在一起。

二、凝集试验的发生分两阶段1、抗原抗体的特异结合；2、在电解质的参与下，出现可见的凝集颗粒。

三、凝集试验的用途凝集试验方法简便，敏感度高，因而在临床检验中被广泛应用。

1、可用于定性的检测，即根据凝集现象的出现与否判定结果阳性或阴性。

2、也可进行定量检测，即将标本作一系列倍比稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度。

四、凝集试验的分类1、直接凝集试验（direct agglutination）细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。

直接凝集试验分为：玻板凝集试验和试管凝集试验。

（1）玻板凝集试验：为定性试验方法①用已知抗体作为诊断血清、与待检颗粒抗原悬液各加一滴在玻板上，混匀；②数分钟后即可用肉眼观察凝集结果：出现颗粒凝集的为阳性反应此法简便、快速，适用于：细菌分离株的鉴定与分型；红细胞ABO血型的鉴定。

免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。

如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。

2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。

3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。

4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。

5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。

6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。

2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。

实验四免疫学实验一、机体体液免疫功能测定（一）凝集反应【目的】了解玻片凝集试验、试管凝集试验及胶乳间接凝集抑制试验的操作过程、结果分析和实际应用。

【原理】颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象称为凝集反应。

凝集反应既可用已知抗体检查和鉴定未知的抗原(如鉴定细菌)，也可用已知抗原检查血清中相应的抗体；既可用作定性检测，又可用于定量检测。

凝集反应分两种。

一种是颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象，称为直接凝集反应；另一种是将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载休颗粒表面，再与相应的抗体结合而出现的凝集反应，称为间接凝集反应。

如将抗体吸附于载体颗粒表面，再与相应的抗原结合而出现的凝集反应则称为反向间接凝集反应。

1、玻片凝集反应【材料】伤寒诊断血清、伤寒沙门菌及大肠埃希菌培养物、载玻片、生理盐水等。

【方法】①取载玻片1张，左侧加生理盐水1滴，中间及右侧各加伤寒诊断血清1滴；②用接种环取伤寒沙门菌培养物少许，分别与盐水及中间的伤寒诊断血清混匀。

同法取大肠埃希菌培养物与右侧伤寒诊断血清混匀；③轻轻摇动玻片1～2min后，观察结果；④观察后，将玻片直接投入消毒缸，不要冲洗，以防污染。

【结果】出现凝集物者为阳性反应，均匀混浊无凝集物者为阴性反应。

【注意事项】玻片凝集反应①用接种环取一种试剂前后均需进行烧灼，不可有杂菌污染以及前一试剂残留。

②用接种环取细菌时应先烧灼灭菌，待冷却后方可挑取细菌。

③用接种环加细菌于血清中后，应先烧灼接种环，再取细菌加入另一血清中。

【结果分析】左：中：右：应用：2、试管凝集反应试管凝集反应为半定量试验，常用已知抗原检测患者血清中相应抗体的效价。

【材料】伤寒诊断血清(抗体)、伤寒菌液(抗原)、生理盐水(NS)、刻度吸管、试管等。

【方法及结果】见表试管凝集反应的方法试管 1 2 3 4 5 67生理盐水(ml) 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 弃去0.50.5伤寒诊断血清(ml) 0.1 0.5 0.5 0.5 0.50.5 ＋NS 0.5血清稀释倍数1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320对照菌液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5血清最终稀释倍数1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640对照56℃ 4小时,4℃冰箱过夜,次日观察结果结果效价【结果判断】见表手持试管，对光观察管内液体混浊度及管底沉淀物之性状。

2017年杭州临床检验技师临床免疫学备考模拟题（6）1.抗原抗体反应的特点应除外A 专一性B 特异性C 可见性D 预见性E 可逆性分析：考查要点：抗原抗体反应的特点。

常见错误：选E。

抗原与抗体的结合为非共价的可逆结合，所以选E错。

D不符合题意，是抗原抗体反应不具备的特点，所以D是本题答案。

答案：D2.下列哪种方法可用于检测体液6A 直接凝集反应B 沉淀反应C E花环形成试验D 淋巴毒素测定E 移动抑制试验分析：考查要点：沉淀反应的用途。

常见错误：选A。

学生没有掌握A和B的用途。

直接凝集用于ABO血型鉴定和细菌鉴定，所以A错。

E花环形成试验用于检测细胞免疫，所以C不正确。

B正确，因为沉淀反应是用于检测Ig含量的，即检测体液免疫。

其余答案与本题不符。

答案：B3.抗原抗体结合包括A 共价键的作用B 通过Fc段的固定作用C 通过C2、C4的固定作用D 疏水作用和静电作用E 以上都对分析：考查要点：抗原抗体的结合特点。

常见错误：选A。

学生没有仔细审题而选A。

抗原抗体的结合是一种非共价键的结合，所以A错。

抗原抗体结合包括疏水作用和静电作用等，所以D对。

答案：D4.以下叙述不正确的是A 用已知抗原免疫人或动物可以产生一抗B 在检测标本中的某种细菌时，可单独使用一抗C 天然抗原分子表面可有多种表位，每种表位只有一个D 天然抗原分子可提供多个抗体分子结合的部位E 抗原抗体结合力的大小，常用亲和力或亲合力来表示分析：考查要点：抗原抗体反应的原理(特点)。

常见错误：选E。

抗原抗体结合力的大小，常用亲和力或亲合力来表示，前者指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度，后者指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度，其与抗原决定基即表位的数目有关。

所以选E不对。

应选C，因为天然抗原分子表面一般有多种表位，每种表位又可有多个，而不只一个，所以C的叙述错误。

答案：C5.体外可溶性抗原抗体结合出现可见反应的条件是A 抗体多于抗原B 抗原多于抗体C 抗原抗体比例适当D 共价键形成E 抗体是IgM类分析：考查要点：抗原抗体出现可见反应的条件。

医学免疫学实验报告
免疫考试终于结束了，终于可以和补体抗体抗原细胞因子适应性免疫应答固有免疫应答say goodbye了，真的是好开心，在持续一天的开心快乐之后，莫名觉得好空虚，可能长大了，发现快乐没有来得那么容易，像是被掏空了自己，但是还是要坚持，毕竟真的不是小孩子了，要对自己做的事情负责，感觉我又开始废话连篇了，还是直接进入主题吧
我们这学期做了三个免疫实验，实验内容、实验原理相对简单，其中两个实验是关于免疫学检验技术的，
1、补体介导的细胞毒试验：
2、沉淀反应与凝集反应（凝集与双扩）
3、酶联免疫吸附测定（ELISA）
在写实验报告时的一些建议：
1、写实验步骤时，尽量使用流程图的方式来展示，这样可以使自己的实验步骤简洁、明了；
2、在实验过程中，尽管实验比较简单，但是还是要注意记录好实验的数据（实验时间、实验药剂用量）、实验现象，并在实验报告中记录出来；
3、在写实验结果、结论的时候，对实验过程、实验结果要有所思考，可以采用问答的方式展现自己的思考（这是最重要的，含金量最重）。