凝集反应(肥达反应、血型鉴定)
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一、实验目的1. 了解肥达反应的基本原理和方法。
2. 掌握肥达反应的操作步骤和注意事项。
3. 通过实验验证肥达反应在细菌鉴定中的应用。
二、实验原理肥达反应是一种细菌凝集反应,是利用细菌的特异性抗原与其相应的抗体结合后,在一定条件下形成肉眼可见的凝集现象,从而对细菌进行鉴定。
该实验主要针对沙门氏菌属和副伤寒氏菌属进行鉴定。
三、实验仪器与试剂1. 仪器:显微镜、恒温箱、离心机、试管、吸管、滴管等。
2. 试剂:肥达反应抗原、肥达反应抗体、生理盐水、细菌培养液、生理盐水等。
四、实验步骤1. 将待检菌液与肥达反应抗原进行混合,置于37℃恒温箱中培养1小时。
2. 将培养后的菌液用生理盐水进行稀释,制备成适当浓度的菌液。
3. 取两支试管,分别加入等量的肥达反应抗体和生理盐水作为对照。
4. 将制备好的菌液分别加入两支试管中,分别标记为“实验组”和“对照组”。
5. 将两支试管放入37℃恒温箱中培养1小时。
6. 观察实验组和对照组的试管,若实验组出现明显的凝集现象,而对照组无凝集现象,则表明待检菌为沙门氏菌属或副伤寒氏菌属。
五、实验结果1. 实验组出现明显的凝集现象,对照组无凝集现象。
2. 根据实验结果,可以初步判断待检菌为沙门氏菌属或副伤寒氏菌属。
六、实验讨论1. 肥达反应是一种简单、快速、灵敏的细菌鉴定方法,适用于沙门氏菌属和副伤寒氏菌属的鉴定。
2. 在实验过程中,应注意以下几点:(1)实验操作要规范,避免污染。
(2)菌液浓度要适宜,过高或过低都会影响实验结果。
(3)观察结果时要细心,以免误判。
七、实验结论通过本次实验,我们掌握了肥达反应的基本原理和方法,验证了肥达反应在细菌鉴定中的应用。
实验结果表明,待检菌为沙门氏菌属或副伤寒氏菌属。
八、实验反思1. 在实验过程中,发现部分操作步骤不够熟练,导致实验结果不够理想。
2. 通过本次实验,认识到自己在实验操作和理论理解方面的不足,需要进一步加强学习和实践。
3. 在今后的实验中,将更加注重实验操作的规范性,提高实验结果的准确性。
临床医学检验技术(师):凝集反应考试试题1、单选引起冷凝集素综合征的自身抗体主要是()A.IgAB.IgGC.IgMD.IgEE.IgD正确答案:C参考解析:本题要点是冷凝集素综合征的特点。
冷凝集素综(江南博哥)合征是免疫球蛋白M(IgM)抗体引起的自身免疫性疾病,其特点是在较低的温度下,这种抗体能作用于患者自己的红细胞,在体内发生凝集,阻塞末梢微循环,发生手足发绀症或溶血。
在体外,抗体与抗原发生作用的最适宜温度是0~4℃,在37℃或30℃以上的温度,抗体与红细胞抗原发生可逆的分解,症状迅速消失。
2、单选根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝聚反应方式,间接凝集反应不包括()A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.间接凝集抑制反应D.协同凝集反应E.间接血细胞凝集反应正确答案:E参考解析:根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝聚反应的方式,间接凝集反应可分为正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应。
3、单选Coombs试验的直接法和间接法的主要区别是()A.前者是检测完全抗体,后者是检测不完全抗体B.前者是凝集反应,后者是沉淀反应C.两者判断结果的方法不同D.前者是检测IgG型抗体,后者是检测IgM型抗体E.前者是检测在体内已致敏的红细胞上的不完全抗体,后者是检测游离在血清中的不完全抗体正确答案:E参考解析:抗人球蛋白参与的血凝试验包括直接Coombs试验和间接Coombs试验,分别检测红细胞上的不完全抗体和游离在血清中的不完全抗体。
4、单选冷凝集试验使用的红细胞是()A.O型红细胞B.AB型红细胞C.A型红细胞D.B型红细胞E.绵羊红细胞正确答案:A参考解析:由肺炎支原体感染引起的原发性非典型肺炎患者的血清中常含有较高的冷凝集素,它能与患者自身红细胞或O型人红细胞于4℃条件下发生凝集,在37℃时又呈可逆性完全散开。
5、单选将红细胞悬液分别加到血型卡的两个区域内,再分别加入抗"A"和抗"B"血清,检测结果:血"AB"型。
肥达氏反应肥达试验是一种试管凝集反应。
用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。
[项目名称]肥达氏反应这项化验是检查患者是否被伤寒或副伤寒杆菌感染。
[别名]伤寒杆菌凝集试验[英文缩写]WR[参考值]伤寒杆菌凝集价H<1:160,O<1:80;副伤寒凝集价A<1:80,B<1:80,C<1:80[临床意义]机体感染伤寒、副伤寒杆菌后会产生相应抗体,正常人因隐性感染或预防接种,血清中可含有一定量的抗体。
一般当H≥1:160,O≥1:80,副伤寒凝集价≥1:80时,才有诊断意义。
病程中应每周复查一次,如病人H与O的凝集价均高于参考值或较原凝集价升高4倍以上,则患伤寒的可能性很大。
若H凝集价高而O低于正常值,则可能是以往预防接种疫苗的结果或非特异性回忆反应所致。
伤寒、副伤寒血清凝集试验(肥达氏试验)正常范围:0<1:80 H<1:160A、B、C均<1:80检查介绍:本试验(又称肥达Widal试验)可协助诊断伤寒、副伤寒。
一般病人抗体多在发病后1周出现,以后逐渐上升。
临床意义:O、H凝集价均有增高者可诊断伤寒;O及A、B、C(其中之一项)凝集价增高时,可诊断甲、乙、丙的某一种。
最有意义者系其凝集价逐渐上升并超过参考值。
三、肥达反应【原理】肥达试验是一种试管凝集反应。
用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的【材料】1.患者血清1:10稀释2.伤寒杆菌O菌液、H菌液、甲、乙型副伤寒H菌液3.生理盐水、试管、吸管、56【方法】1.取清洁小试管32支,分成4排,每排8支,依次编号。
2.于小试管内各注入0.5ml生理盐水。
3.于每一排第一管内加入1:10稀释的患者血清0.5ml,用1ml吸管吹吸三次,混匀,吸出0.5ml注入第二管作对倍稀释,……依次稀释至第7管,弃去0.5ml,第8管为对照。
生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后,在适量电解质存在的条件下,可逐渐聚集,出现肉眼可见的凝集现象,成为凝集反应。
直接凝集试验病原菌(如细菌、螺旋体等)颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后,在适量电解质存在的条件下,经过一定的反应时间后,出现肉眼可见的凝集现象,称为直接凝集反应。
试验中的抗原称为凝集原;抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。
1、玻片法:——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内,自加入待检病原体悬液混合均匀,同时做生理盐水或正常血清对照。
放置室温内数分钟后即可观察实验结果,出现颗粒状凝集者为阳性反应。
优点:其操作简便、迅速,适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。
特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。
细菌薄片凝集试验:(1)实验目的:该试验用于菌种的鉴定及分型.(2)实验材料:待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清(3)实验过程:1.取洁净玻片一张,用蜡笔画为四格。
2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。
3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。
4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀,随即转移1环于第1格中混匀。
5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀,然后移一环菌液于第3格中混匀。
灼烧灭菌。
6.结果:已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集,若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集,表明两种菌为同一种或属。
2、试管法:——肥达试验(试管凝集实验)将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合,39℃温育2~24h后观察结果。
生理盐水加抗原作为对照,应用非特异性自凝现象。
以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。
试管凝集实验为半定量试验,常用于某病原微生物感染的免疫学诊断,亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。
(1)材料:病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。
肥达氏反应肥达试验是一种试管凝集反应。
用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。
[项目名称]肥达氏反应这项化验是检查患者是否被伤寒或副伤寒杆菌感染。
[别名]伤寒杆菌凝集试验[英文缩写]WR[参考值]伤寒杆菌凝集价H<1:160,O<1:80;副伤寒凝集价A<1:80,B<1:80,C<1:80[临床意义]机体感染伤寒、副伤寒杆菌后会产生相应抗体,正常人因隐性感染或预防接种,血清中可含有一定量的抗体。
一般当H≥1:160,O≥1:80,副伤寒凝集价≥1:80时,才有诊断意义。
病程中应每周复查一次,如病人H与O的凝集价均高于参考值或较原凝集价升高4倍以上,则患伤寒的可能性很大。
若H凝集价高而O低于正常值,则可能是以往预防接种疫苗的结果或非特异性回忆反应所致。
伤寒、副伤寒血清凝集试验(肥达氏试验)正常范围:0<1:80 H<1:160A、B、C均<1:80检查介绍:本试验(又称肥达Widal试验)可协助诊断伤寒、副伤寒。
一般病人抗体多在发病后1周出现,以后逐渐上升。
临床意义:O、H凝集价均有增高者可诊断伤寒;O及A、B、C(其中之一项)凝集价增高时,可诊断甲、乙、丙的某一种。
最有意义者系其凝集价逐渐上升并超过参考值。
三、肥达反应【原理】肥达试验是一种试管凝集反应。
用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。
【材料】1.患者血清1:10稀释2.伤寒杆菌O菌液、H菌液、甲、乙型副伤寒H菌液3.生理盐水、试管、吸管、56℃水箱等【方法】1.取清洁小试管32支,分成4排,每排8支,依次编号。
2.于小试管内各注入0.5ml生理盐水。
3.于每一排第一管内加入1:10稀释的患者血清0.5ml,用1ml吸管吹吸三次,混匀,吸出0.5ml注入第二管作对倍稀释,……依次稀释至第7管,弃去0.5ml,第8管为对照。
外斐氏反应[定义]外斐氏反应:用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌OXl9、OX2、OXK进行非特异性凝集反应,检测病人血清中有无立克次体抗体。
外-斐氏反应亦称变形杆菌凝集试验,用以诊断流行性斑疹伤寒,恙虫病等急性传染病.[英文缩写]WFR[标本采集]静脉血2ml,不抗凝,分离血清进行测定。
[正常参考值]变形杆菌O X19、O X2、OX K凝集价<1:80。
[临床意义]人体被立克次体感染后,血清中逐渐产生相应抗体,该抗体在发病后5~12天出现,至数月后基本消失,一般凝集价在1:160以上或病程中效价明显上升有诊断意义。
我国常见的立克次体病上要为斑疹伤寒和恙虫病,流行性斑疹伤寒主要为OX19凝集价升高,恙虫病主要表现为OX K升高明显。
流行性斑疹伤寒(OX19阳性率100%);地方性斑疹伤寒(OX19部分可在1:200~1:800);恙虫病患者(患病后第一周Oxk有14%在1:80以上,第4周可达80%);布氏杆菌病、回归热病人;孕妇稍有增高。
恙虫病又称丛林斑疹伤寒,是由恙虫病立克次体(亦称东方立克次体)所致的急性传染病。
其基本病变为全身性小血管炎、血管周围炎及网状内皮细胞增生。
临床上以发热、焦痂(或溃疡)、淋巴结肿大、皮疹和肝脾肿大等为特征。
本病是一种自然疫源性传染病,在我国东南、西南地区的沿海岛屿发病率较高。
鼠类是主要传染源,通过恙J叮咬而传播给人。
发病季节多见于临床表现1.起病急,有畏寒或寒战、高热、全身酸痛、疲乏、食欲减退等急性感染症状。
2.颜面潮红、结膜充血、焦痂或溃疡、淋巴结肿大、皮疹、肝脾肿大等。
【名称】肥达反应【英文名】Widal test【别名】肥达氏反应【概述】伤寒、副伤寒患者发病12天后血清中可产生特异性抗体,并逐渐上升,至第4周达高峰,以后逐渐下降。
肥达反应,又称伤寒血清凝集试验,是诊断伤寒和副伤寒的血清学试验,以检查血清中抗体效价及其增长幅度。
【原理】人类感染伤寒或副伤寒沙门菌后,约经1~2周即可在血清中出现抗体(凝集素),此种抗体与伤寒、副伤寒沙门菌相混合,在适当电解质参加下可出现凝集现象。
肥达反应是用伤寒沙门菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)与乙型(B)副伤寒沙门菌的标准液与病人血清做凝集试验,常用于伤寒、副伤寒的辅助诊断。
【试剂】(1)诊断菌液:生物制品研究所有商品供应。
一般包括伤寒沙门菌H、O,副伤寒沙门菌A、B。
用前按使用说明稀释至适当浓度(一般为每毫升含10亿菌体)。
但应注意有效期限,如出现自凝者不应使用。
(2)被检血清(可以不加温灭能)。
(3)生理盐水(8.5g/L)。
【操作方法】(1)准备4排小试管,每排7支,标明记号。
(2)另取中号试管1支,加入生理盐水3.8ml及被检血清0.2ml(吸注液应将吸管外壁拭净,注液时把吸管插至管底,以防过多沾于试管内壁)。
(3)用吸管将上述二者混匀(需用吸管连续吸注3次,吸时深入液面下,注时离开液面)使成1∶20的血清稀释液。
(4)吸取上述1∶20血清稀释液2ml,按每管0.5ml液量分别加入各排之第1管。
(5)于上述中号试管内加入生理盐水2ml并混匀,此种血清经2倍稀释(由1∶20稀释成1∶40)。
(6)再吸取此1∶40血清稀释液2ml,按每管0.5ml液量分别加入各排之第2管。
(7)如此连续稀释到各排第6管为止。
各排的第7管只加生理盐水0.5ml,不加血清,作为抗原对照。
此时各排第1至第6管的血清稀释度依次为1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。
(8)将前述的四种诊断菌液分别加于1、2、3、4各排的每一试验管及抗原对照管内,每管0.5ml。
外斐氏反应[定义] 外斐氏反应:用与立克次体有共同菌体抗原的变形杆菌OXl9、OX2、OXK进行非特异性凝集反应,检测病人血清中有无立克次体抗体。
外-斐氏反应亦称变形杆菌凝集试验,用以诊断流行性斑疹伤寒,恙虫病等急性传染病. [英文缩写] WFR [标本采集] 静脉血2ml,不抗凝,分离血清进行测定。
[正常参考值] 变形杆菌OX19、OX2、OXK凝集价<1:80。
[临床意义] 人体被立克次体感染后,血清中逐渐产生相应抗体,该抗体在发病后5~12天出现,至数月后基本消失,一般凝集价在1:160以上或病程中效价明显上升有诊断意义。
我国常见的立克次体病上要为斑疹伤寒和恙虫病,流行性斑疹伤寒主要为OX19凝集价升高,恙虫病主要表现为OXK升高明显。
流行性斑疹伤寒(OX19阳性率100%;地方性斑疹伤寒(OX19部分可在1:200~1:800;恙虫病患者(患病后第一周Oxk有14%在1:80以上,第4周可达80%;布氏杆菌病、回归热病人;孕妇稍有增高。
恙虫病又称丛林斑疹伤寒,是由恙虫病立克次体(亦称东方立克次体)所致的急性传染病。
其基本病变为全身性小血管炎、血管周围炎及网状内皮细胞增生。
临床上以发热、焦痂(或溃疡)、淋巴结肿大、皮疹和肝脾肿大等为特征。
本病是一种自然疫源性传染病,在我国东南、西南地区的沿海岛屿发病率较高。
鼠类是主要传染源,通过恙J叮咬而传播给人。
发病季节多见于临床表现 1.起病急,有畏寒或寒战、高热、全身酸痛、疲乏、食欲减退等急性感染症状。
2.颜面潮红、结膜充血、焦痂或溃疡、淋巴结肿大、皮疹、肝脾肿大等。
3.在病程的第2周,病情常会加重,可有表情淡漠、重听、谵妄甚至抽搐或昏迷,并可有脑膜刺激征或心肌炎症状,或有咳嗽、胸痛、气促等肺炎症状。
诊断依据 1.流行病学资料:起病前3周内有野外接触鼠类活动或恙虫孳生环境史。
2.临床表现:突起畏寒,持续高热,伴结膜充血、皮疹、淋巴结肿大尤其是局部淋巴结明显肿大压痛、肝脾肿大。
临床医学检验临床免疫技术:凝集反应考真题一1、单选下列哪一项不是为促进凝集现象的出现而采取的措施()A.增加溶液的离子强度B.用胰酶或神经氨酸酶处理C.增加试液的黏度D.增加蛋白质或电解质E.离心使复合物(江南博哥)沉淀正确答案:A参考解析:为促进凝集现象的出现可采用增加电解质或蛋白质以降低溶液中离子强度从而缩短颗粒间的距离;增加溶液的黏度;用胰酶或神经氨酸酶处理,改变细胞表面化学结构;用离心的方法克服颗粒间的排斥力。
2、单选外斐试验最常采用的方法是()A.正向间接凝集反应B.反向间接凝集反应C.玻片凝集反应D.试管凝集法E.间接凝集抑制反应正确答案:D参考解析:试管凝集反应是用定量抗原悬液与一系列递度倍比稀释的待检血清混合,保温静置后,根据每管内颗粒凝集的程度,以判断待检血清中有无相应抗体及其效价,可以用来协助临床诊断或流行病病原调查研究。
例如Widal反应、Well-Felix反应、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。
3、单选自身红细胞凝集试验主要的单克隆抗体为()A.抗人A型红细胞单抗B.抗人B型红细胞单抗C.抗人AB型红细胞单抗D.抗人O型红细胞单抗E.抗红细胞不完全抗体正确答案:D参考解析:自身红细胞凝集试验基本原理是抗人O型红细胞的单克隆抗体能与任何种血型的红细胞结合,但不引起凝集反应,这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体,可用于检测标本中的抗原。
4、单选间接凝集试验和被动凝集试验()A.是同义词B.是完全不同的两种试验C.二者均属凝集试验,但有区别D.前者属玻片凝集反应范畴,后者属试管凝集反应范畴E.是近义词正确答案:A5、单选凝集反应形成的反应现象()A.肉眼可见B.必须用精密仪器测定C.肉眼不可见D.必须染色才可见E.必须借助显微镜正确答案:A6、单选间接血凝试验阳性,则()A.红细胞不溶解B.红细胞溶解C.红细胞凝集D.红细胞不凝集E.乳胶颗粒不凝集正确答案:C7、单选冷凝集素在以下哪一温度时与红细胞结合最好()A.4℃B.22℃C.32℃D.37℃E.42℃正确答案:A参考解析:冷凝集素(cold agglutinin)是冷反应型抗红细胞抗体,在0~4℃时最易和红细胞膜抗原结合。
凝集反应原理
凝集反应是一种在化学反应中形成或聚集更大分子或物质的过程。
在这种反应中,小分子或物质通过化学键的重组,结合在一起形成较大的分子或物质。
这种过程通常涉及到原子或分子之间的电子转移或共享。
凝集反应在化学合成、生物学和材料科学中起着重要的作用。
凝集反应通常需要特定条件下的加热或提供适当的催化剂。
在加热的过程中,分子或物质之间的能量增加,使得它们更容易发生结合和聚集。
催化剂则可以提供一个合适的环境,使得反应更加迅速和高效。
凝集反应在有机化学中被广泛应用。
例如,酸催化的酯化反应就是一种凝集反应。
在这个反应中,酸催化剂将醇和酸酐反应,生成酯这个较大的分子。
另一个例子是烯烃的聚合反应,其中烯烃单体分子通过共享电子键连接在一起形成高分子聚合物。
生物学中的凝集反应常常涉及蛋白质或多肽之间的结合。
例如,抗体和抗原之间的结合就是一种凝集反应。
在相应的条件下,抗原和抗体可以通过电子转移或共享来形成一个稳定的复合物。
材料科学中的凝集反应可以用于制备纳米颗粒、薄膜或其他复杂结构。
例如,溶胶-凝胶法可以通过控制溶胶粒子的凝结过
程来制备高质量的纳米颗粒或薄膜。
总而言之,凝集反应是一种常见的化学过程,通过将小分子或
物质结合在一起形成较大分子或物质。
这种反应在化学合成、生物学和材料科学中具有广泛应用。