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免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
SPA:葡萄球菌A蛋白,是一种具有种属特异性的完全抗原,从人体分离出的金黄色葡萄球菌几乎都含有SPA.表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌则不具有.SPA可与IgG的Fc段能非特异的结合而不影响Fab段的免疫活性,故可用作检测各种抗原或抗体的实验诊断试剂.MRSA:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,对甲氧西林等常表现出异质耐药性.能产生b-内酰胺酶而使青霉素失效而表现出耐药性。
胆汁溶菌试验: 胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌,可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺链本身的自溶过程。
因此主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。
凝固酶试验:血浆凝固酶是金葡菌产生的一种主要致病物质，能使含抗凝剂的人或兔血浆凝固，致病株大多数能产生，是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，能使细菌抵抗体内吞噬细胞的吞噬；保护细菌不受血清中杀菌物质的破坏；并使感染易于局限化和形成血栓。
组织培养：将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养基中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称之为组织培养。
包涵体：包涵体是病毒在增殖的过程中，常使寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构，在光学显微镜下可见。
多为圆形、卵圆形或不定形。
TCID50：50%组织细胞感染的病毒剂量，将待测病毒液作10倍系列稀释，分别接种单层细胞经培养后观察CPE等指标，以能感染50%细胞的最高稀释度的病毒量为终点，经统计学处理计算出TCID50。
抗酸染色法：用石碳酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石碳酸复红的红色，分歧杆菌为阳性。
BCG:卡介苗，即将有毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油胆汁马铃薯培养基上长期培养传代，得到减毒菌株，可用于预防结核菌感染。
郭霍现象（Koch phenomenon）:有毒TB初次感染GP，10－14天后注射局部溃烂、坏死，附近LN肿大，细菌扩散漫延至全身，甚至死亡。
医学免疫学实验指导：凝集反应内容：四、直接凝集反应（一）玻片凝集反应—细菌的鉴定、ABO血型鉴定（二）试管凝集反应五、间接凝集反应（一）正向间接凝集反应—间接凝集乳胶试验、间接血凝试验（二）反向间接凝集反应—反向间接血凝试验、协同凝集试验（三）间接凝集抑制试验试验、直接凝集反应（Direct agglutination reaction）细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下直接与相应的抗体结合形成肉眼可见的凝集块，称为直接凝集反应。
常用的直接凝集试验有玻片法和试管法两种。
㈠玻片凝集反应（Slide agglutination test）玻片凝集反应是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质（如细菌，红细胞等）在玻片上混合，在有适当的电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合，形成肉眼可见凝集物，即为阳性；如两者不对应，便无凝集物出现，即为阴性。
此法属定性试验，主要用于细菌鉴定和分型、人类红细胞ABO血型的鉴定等。
⒈细菌的鉴定：【材料】⑴1∶20稀释的伤寒杆菌的诊断血清。
⑵伤寒杆菌、大肠杆菌18~24小时培养物、生理盐水。
⑶洁净载玻片、接种环、酒精灯、记号笔等。
【方法】⑴取洁净载玻片一张，用记号笔划分为三格，并依次编号为1、2、3。
⑵用灭菌的接种环取生理盐水于玻片的三格内，各加2~3环。
⑶将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后自平皿挑取少量大肠杆菌置于第2格生理盐水中混匀。
然后，同法分别取少许伤寒杆菌于第1格及第3格，与生理盐水混匀。
⑷用灭菌接种环于第2格加伤寒杆菌诊断血清2~3环并混匀，同法取伤寒杆菌诊断血清2~3环，加于第1格中混匀。
⑸轻摇玻片，静置1~2分钟后，观察结果，【结果】如上述混合悬液由均匀混浊状变为澄清透明，并出现大小不等的乳白色凝集块者为阳性；如混合物仍呈均匀混浊，无凝集物者为阴性。
【注意事项】⑴每一待检菌均须作生理盐水对照，如对照凝集则表示细菌发生自凝，试验无效。
葡萄球菌葡萄球菌属（Staphylococcus）是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。
多数为非致病菌，少数可导致疾病。
葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，是医院交叉感染的重要来源，菌体直径约0.8μm，小球形，但在液体培养基的幼期培养中，常常分散，细菌细胞单独存在。
代表种有金黄色葡萄球菌（S-taphyloc occusaureus）（黄色）、白色葡萄球菌（S．albus）（白色）、柠檬色葡萄球菌（S．citreus）（橙色）。
S．aureus是各种脓疡（abscess）的病原菌，S．albus和S．citreus在人的健康体表上为半腐物营养型。
由于在普通肉汁培养基中能很好地发育，所以培养比较简单，但刚从动物体上分离的，对各种氨基酸和生长因子的要求较高，特别是对烟酸、硫胺素的要求更为明显。
在自然界已发现许多介于S．aureus与S．albus中间型的种类。
葡萄球菌是柯赫（R．Koch．1878年）、巴斯德（L．Pasteur，1880年）和奥格斯顿（A．Og-ston，1881年）从浓液中发现的，但通过纯培养并进行详细研究的是F．J．Rosenbach（1884年）。
在生理学上显有许多与大肠杆菌——产气杆菌群（coli-aerog-enes group）、乳酸菌共同的性质，但其毒性非常强，移植于动物血管中可引起动物体各处发生脓疡，而表现出严重的症状以至死亡。
然而与人皮肤脓疡类似的种类不易在动物体上发生，只有极少数的可在类人猿和兔发生类似的症状。
因乳制品和肉类的腐败而出现的中毒，认为多由此类细菌引起，原因是葡萄球菌在增殖过程中可产生肠毒素（enterotoxin）。
这种毒素的生物活性在于能刺激呕吐中枢产生催吐作用。
该细菌是抗菌物质中毒和一般营养不良时成为次级的微生物区系的主要细菌。
从黄色葡萄球菌的细胞壁分离出的蛋白质A可与免疫球蛋白（主要为IgG）进行特异的结合，这是由K．Jensen氏（1 959年）发现的，现已被应用于各种免疫反应。
实验八协同凝集试验(Coagglutination assay)【实验原理】葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白(SPA)能与人及多种哺乳动物(如猪、兔、豚鼠等)血清中的IgG 类抗体的Fc段结合，成为致敏的载体颗粒。
IgG的Fc段与SPA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍保持其正常的抗体活性和特异性，当与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。
【主要试剂与器材】1.金黄色葡萄球菌Cowan I株。
2.变形杆菌OX l9株18～24h琼脂斜面培养物。
3.SPA菌液、SPA菌诊断液(制备见免疫血清的制备)。
4.无菌生理盐水。
5.载玻片、滴管、接种环、牙签等。
【操作方法】1.将载玻片分成3格，编号为l、2、3，于第1、2格分别加1滴SPA菌诊断液，第3格加1滴未致敏的SPA菌液。
2.于第3、1格分别加1滴接种环变形杆菌OX l9株18～24h琼脂斜面培养物，第2格加1滴生理盐水，分别用牙签混匀，2～3min内观察结果。
【结果判断】第1格内金黄色葡萄球菌凝集成清晰可见的颗粒，液体澄清，为阳性反应结果；第2、3格为对照，应无凝集。
可根据下面标准确定凝集的强弱，以“2+”以上凝集判断为阳性。
“4+”：很强，液体澄清透明，金黄色葡萄球菌凝集成粗大颗粒。
“3+”：强，液体透明，金黄色葡萄球菌凝集成较大颗粒。
“2+”：中等强度，液体稍透明，金黄色葡萄球菌凝集成小颗粒。
“+ ”：弱，液体稍混浊，金黄色葡萄球菌凝集成可见颗粒。
“- ”：不凝集，液体混浊，无凝集颗粒可见。
【注意事项】1.试验前仔细检查所用试剂本身有无自凝现象或出现细小颗粒，以免影响结果观察或导致错误结果。
2.加变形杆菌OX l9株培养物时应先加第3格，再加第1格，以免将SPA菌诊断液带入到SPA菌液中影响试验结果。
3.协同凝集试验的特异性取决于致敏免疫血清的特异性，其凝集反应的强度取决于免疫血清效价。
故因选择特异性强和效价高的免疫血清制备SPA菌诊断液。
