丹参多糖体外抗氧化抗肿瘤研究
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丹参的化学成分及其药理作用研究进展徐怡,陈途,陈明(咸宁市公共检验检测中心,湖北咸宁987700)摘要:民族药丹参(OOu rnilOorrhiza Buago)药用历史悠久,首载于《神农本草经》,常以根及根茎入药,味苦,性微寒,入心、肝经,具有活血通经、祛瘀止痛、清心除烦等功效⑴。
丹参主要化学成分为脂溶性的二萜醌类、水溶性酚酸类化合物,其他类型化合物等。
现代药理研究表明,丹参具有增加冠脉流量,降低心肌兴奋性和传导性,对心肌缺血性损伤有保护作用,此外还有抗氧化、保护心血管、改善肾功能,抗菌消炎、抗肿瘤等作用。
临床多用于冠心病、心肌梗死、消化性溃疡、缺血性中风、抗肿瘤〔6〕。
本文对丹参化学成分、药理作用及其临床应用进行系统综述,为进一步合理开发利用丹参的药用资源提供参考。
关键词:丹参;化学成分;二萜醌类;酚酸类;药理作用;抗氧化;抗炎;抗癌中图分类号:R251文献标识码:A文章编号:1006-3765(2601)-25-2645-24Research Pregress of Chemicai Constituents and Pharmacological Effocta of Salvia miltiorrhiza BungeXU Yi,CHEN Tu,CHEN MCg(Public Inspection and Testing Center of XivnNing,XivnNing987700,China) ABSTRACT:Salvia miltiorrhiza Bunge has a long histou of medicinal application in China,/was first be recorUed in Shynong's classic of MateUo MePica,the mot ant rUizoma have the functions of invigoraUng the circclation of bloop ant res/Ung mexstmal flow,removing bloop stasis ant pain,cmaUny away the OeaU-fire.The main cCemical compocyts of Salvia miltiorrUizo are PposomUla ditemexoid quinones,water-soluUla phenolic acids and other types of componnts.AccorUing to the ppamlpcomxe researcC,Salvia miltiovUizo has the significant ebects of increase coronau flow,Utehtata myocarUial excitaki/ty ant conCuctivita, protect myocarUial iscCemic injuu,in akdition to antioxidant, carUiovescclar protection,improve renal function,anti-bacteUal anti-inflamma/m,anti-tumor ant other fecctiocs.It is mainly used in coronau heaU disease,myocarUial infarction,peptic ulcer,iscCemic stroPa ant anti-tumor.Ic this pyt par i we reviewed the cCemical composition;phamiacomxical activity and clinical application of Salvia1000x720to provid reference for further rational dyCopmyt ant utilization of Salvia mbtiooUiza.KEYWORDS:Salvia milPorrhiza;Chemical coxstituexts;Citeme/oik qui/oxes;Phe/oOc aciks;Pharmacolooicyi act/x;Antioxida-tiox;人!1/0018]11]118/^p Anb-ca/cer丹参(aalviu miltiorrhiza Bunge)是唇形科(Labiatao)鼠尾草属(Salvia)植物,在我国主要分布于河北,山西,陕西,山东,河南,江苏,浙江,安徽,江西及湖南等地,湖北也有丹参分布;多生于海拔1400米以下山坡、林下草丛或溪谷旁。
丹参的化学成分及药理作用研究进展丹参是一种常用中药材,也是中药丹参注射液的主要成分之一、经过多年的研究,已经发现丹参中存在有多种活性化学成分,具有广泛的药理作用。
下面将对丹参的化学成分及药理作用研究进展进行详细介绍。
1.化学成分:丹参中的活性成分主要包括:丹参酮、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C、丹酚酸D、绿原酸、丹参素等。
其中,丹参酮是丹参的主要成分,具有抗炎、抗凝血、抗肿瘤等多种生物活性。
2.药理作用:(1)抗炎作用:丹参中的丹参酮、丹酚酸等成分能够通过抑制炎症介质的释放,减轻炎症反应,从而发挥抗炎作用。
研究表明,丹参能够显著抑制炎性物质的产生,减轻炎症反应,并且具有很好的治疗风湿和炎症相关疾病的效果。
(2)抗凝血作用:丹参中的活性成分能够通过抑制血小板的聚集和血栓的形成,减轻血液凝结,从而发挥抗凝血作用。
丹参还可以促进血液循环,改善微循环障碍,减少心肌梗死的发生。
(3)抗肿瘤作用:丹参中的丹参酮等成分具有明显的抗肿瘤作用。
丹参酮可以直接作用于肿瘤细胞,抑制其增殖和分化,诱导肿瘤细胞的凋亡,从而抑制肿瘤生长。
(4)抗氧化作用:丹参中的活性成分具有明显的抗氧化作用,可以清除自由基,减轻氧化损伤,保护细胞免受损害。
研究表明,丹参具有抗氧化应激和增强免疫功能的作用。
(5)保护心脑血管作用:丹参中的活性成分可以扩张血管,改善血液循环,降低血压,保护心脑血管功能。
丹参还具有增强心肌收缩力,改善心肌供血,抑制心肌细胞凋亡等作用。
(6)调节免疫作用:丹参中的活性成分可以调节免疫系统功能,增强免疫力,促进巨噬细胞的吞噬作用,增强抗体产生,提高机体的抗病能力。
总的来说,丹参具有抗炎、抗凝血、抗肿瘤、抗氧化、保护心脑血管、调节免疫等多种药理作用。
这些作用使得丹参广泛应用于心脑血管疾病、肿瘤、炎症等疾病的治疗和预防。
但是,丹参的作用机制还需要进一步研究,以及其临床应用的优化和安全性评价也需要进一步探讨。
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丹参为常用中药,《中华人民共和国药典》(2000年版,一部)规定丹参为唇形科植物丹参Salxia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎。
具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效,其有效成分为脂溶性的二萜化合物和水溶性的酚酸类化合物。
其化学成分主要包括:丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、二氢丹参酮、水溶性成分丹参素、丹酚酸以及脂溶性成分丹参酮,另含丹参新酮及鼠尾草酚等。
二、丹参的化学成分丹参的有效成分主要分为脂溶性和水溶性两类。
脂溶性方面,现已得到40余中化合物,这些化合物可以分为两类,即丹参酮类和罗列酮类。
丹参酮类化合物多数属于二萜化合物,其中大部分是二萜醌类化合物,如丹参酮I、丹参酮Ⅱ-A、丹参酮Ⅱ-B、丹参酮Ⅲ、异丹参酮、异隐丹参酮、羟基丹参酮Ⅱ-A、二氢丹参酮I、丹参新醌甲、左旋二氢丹参酮I、丹参新醌乙、丹参新醌丙等。
另外有新的二萜醌结构的新丹参酮类化合物及其他类型的化合物,如新隐丹参酮Ⅱ,环酚乳酰胺、油酰新隐形丹参酮和油酰丹参新醌A等。
丹参的水溶性成分均具有酚酸性结构,其中最早发现的丹山素,化学名称为3,4-二羟基苯乳酸。
此后发现了一系列酚酸类化合物,命名为丹酚酸并按照英文字母排序,主要水溶性成分有丹参酚酸A、B、C、D、E、F、H、I、J,四甲基丹参酚酸C,还有迷迭香酸、紫草酸等。
丹参及其主要成分抗肿瘤作用的研究进展张红【摘要】@@ 中药丹参为唇形科鼠尾草属的多年生草本植物,具有活血化瘀,凉血消痈,安神等功能.现代主要用于冠心病、缺血性脑血管病的预防和治疗.丹参的活性成分可分为脂溶性成分和水溶性成分.脂溶性成分主要为二萜类化合物:隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA等;水溶性成分主要为酚酸类化合物:丹参素、咖啡酸、原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸以及紫草酸和迷迭香酸等.近年来细胞及动物实验研究表明,丹参、丹参提取物及丹参与其他药物组成的复方制剂具有一定的抗肿瘤作用,临床应用前景较好.本文就丹参及其主要成分抗肿瘤作用的机制加以总结概况.【期刊名称】《滨州医学院学报》【年(卷),期】2012(035)002【总页数】3页(P143-145)【关键词】丹参;成分;抗肿瘤;进展【作者】张红【作者单位】滨州医学院附属医院妇产科,滨州,256603【正文语种】中文【中图分类】R730.5中药丹参为唇形科鼠尾草属的多年生草本植物,具有活血化瘀,凉血消痈,安神等功能。
现代主要用于冠心病、缺血性脑血管病的预防和治疗。
丹参的活性成分可分为脂溶性成分和水溶性成分。
脂溶性成分主要为二萜类化合物:隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA等;水溶性成分主要为酚酸类化合物:丹参素、咖啡酸、原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸以及紫草酸和迷迭香酸等。
近年来细胞及动物实验研究表明,丹参、丹参提取物及丹参与其他药物组成的复方制剂具有一定的抗肿瘤作用,临床应用前景较好。
本文就丹参及其主要成分抗肿瘤作用的机制加以总结概况。
1 对肿瘤细胞的细胞毒作用丹参及其主要成分对细胞具有杀伤作用,能有效抑制肿瘤细胞的增殖。
罗厚蔚等[1]研究表明丹参的脂溶性成分——丹参酮类的菲醌结构,是其细胞毒作用的基础。
该菲醌结构可以通过抑制小鼠淋巴白血病细胞DNA的合成,完成杀伤作用。
吴杲等[2]进一步研究表明丹参酮类化合物的菲环结构与DNA分子相结合,呋喃环、醌类结构产生自由基,引起DNA损伤;同时可以抑制 PCNA等基因表达,从而影响DNA多聚酶D活性,抑制肿瘤细胞DNA合成,抑制肿瘤细胞增殖。
丹参的生物学特性研究丹参,作为一种具有悠久药用历史的植物,其在中医药学中具有广泛的应用。
为了更好地了解丹参的生物学特性,本文将从形态特征、生态环境、分布区域、药用价值和研究现状等方面进行阐述,并展望丹参生物学特性研究的未来发展。
1、引言丹参,学名Salvia miltiorrhiza,属于唇形科植物。
丹参具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功效,广泛应用于治疗冠心病、心绞痛、心梗等疾病。
现代药理学研究表明,丹参还具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性。
因此,对丹参生物学特性的研究具有重要的理论和实践意义。
2、形态特征丹参为多年生草本植物,主根粗壮,分枝有时有极狭的翅。
茎直立,四棱形,具槽,密被长硬毛,多分枝。
叶状枝窄长圆形,上部渐尖,下部渐狭,基部具浅齿,两面密被柔毛,绿色或稍带紫色。
总状花序很短,具2-4朵花;花梗很短;花萼钟状,绿色;花冠蓝紫色,檐部微呈二唇形。
浆果熟时红色。
3、生态环境丹参生长于海拔1200-1700米的山沟、溪旁、山坡等生境中,适应性较强。
适宜生长的气候条件为温带和亚热带气候,喜欢凉爽、湿润的环境,耐寒、耐旱、喜肥沃的土壤。
4、分布区域丹参主要分布于我国安徽、山西、陕西和甘肃等地,以及其他亚洲国家和地区。
目前,已经有许多地方开始进行丹参的大规模人工栽培,以满足中药材市场的需求。
5、药用价值丹参具有广泛的药用价值,其根部和地上部分均可入药。
丹参含有多种化学成分,包括黄酮类、酚酸类、二萜类等。
药理研究表明,丹参具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性,对于心血管系统、神经系统、免疫系统等疾病均有良好的治疗作用。
在临床应用方面,丹参常用于治疗冠心病、心绞痛、心梗等疾病,以及慢性肝炎、肝硬化等消化系统疾病。
此外,丹参在美容、保健品等领域也有广泛应用。
6、研究现状近年来,国内外学者对丹参的生物学特性进行了深入研究。
在基因组学方面,通过对丹参基因组的测序和分析,发现了许多与丹参药用功能相关的基因及其作用机制。
丹参的药理作用研究进展丹参是一种传统中药,从事药理作用的研究已有数十年的历史。
丹参在中医传统中被认为具有活血化瘀、舒展经络、抗炎镇痛等作用,被广泛用于治疗心脑血管疾病等病症。
随着现代技术的进步,丹参的药理作用也得到了许多研究机构和学者的关注和深入研究。
目前,对丹参的药理作用已有较为全面的认识,并取得了一些重要的研究进展。
首先,丹参的主要成分是丹参素。
丹参素是一种水溶性糖苷类化合物,具有抗凝血、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、调节免疫、降脂血管扩张等多种药理活性。
研究表明,丹参素通过抑制血小板聚集、降低血浆纤维蛋白原水平、增加内皮细胞释放一氧化氮等方式,对心血管系统有保护作用,能够预防和治疗心脑血管疾病。
此外,丹参素还能够通过清除自由基、减轻炎症反应、调节免疫功能等机制,对炎症性疾病和肿瘤具有一定的干预作用。
丹参素还能够改善脑缺血损伤、抑制神经炎症反应、促进神经细胞再生等,对神经系统保护也具有一定的疗效。
其次,丹参还含有多种生物活性成分,如黄酮类、生物碱类、酚酸类等。
黄酮类成分具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗凝血等作用,能够提高心脑血管系统的功能和抵抗能力。
生物碱类成分具有镇静、镇痛、抗癫痫、抗心律失常等作用,对中枢神经和心脏等器官有一定的调节作用。
酚酸类成分具有抗炎、抗菌、抗氧化等作用,能够减轻炎症反应和预防疾病的发生。
这些成分的共同作用对丹参的药理活性起到了协同增效的作用。
再次,丹参还能通过调节细胞信号转导途径和基因表达,发挥其药理作用。
丹参素能够通过激活蛋白激酶C(PKC)途径、细胞内钙离子浓度增加等方式,调节细胞的信号传导和基因表达,从而发挥抗衰老、抗心肌梗死、抗肿瘤等作用。
丹参还能通过抑制线粒体氧化应激、调节线粒体呼吸链、减轻线粒体损伤等方式,保护细胞免受氧化应激的伤害。
这些机制的研究为丹参药理作用的深入理解提供了重要的证据。
总结起来,丹参作为一种传统中药,在药理作用的研究中已取得了较大的进展。
对丹参素的研究表明,其具有抗血栓、抗炎、抗肿瘤、调节免疫等多种药理活性,能够预防和治疗心脑血管疾病、炎症性疾病和肿瘤等病症。
基于网络药理学研究丹参治疗作用机制一、概括丹参(Salvia miltiorrhiza)作为中国传统中草药的代表,具有悠久的历史和丰富的药用价值。
近年来随着对中药的研究不断深入,丹参在治疗心血管疾病、糖尿病等疾病方面的潜在作用得到了广泛关注。
网络药理学作为一种新兴的研究领域,为揭示丹参治疗作用机制提供了新的视角。
本研究旨在通过网络药理学方法,探讨丹参在不同疾病状态下的作用靶点及其相关通路,以期为丹参的临床应用提供理论依据和新思路。
1.1 研究背景和意义随着全球人口老龄化趋势的加剧,心血管疾病、脑血管疾病等慢性病的发病率逐年上升,给人类健康带来了严重的威胁。
丹参作为一种广泛应用于中医药领域的传统药材,具有活血化瘀、抗氧化、抗炎等多种药理作用,已被证实对多种心血管疾病和脑血管疾病具有良好的治疗作用。
然而目前关于丹参治疗作用机制的研究尚不完善,尤其是在分子水平上的探讨较为有限。
因此深入研究丹参的治疗作用机制对于指导临床用药、提高治疗效果具有重要的理论和实践意义。
网络药理学作为一种新兴的药物发现方法,通过整合大量公开发表的文献资料,建立药物与靶点之间的网络关系,从而揭示药物的作用机制。
近年来网络药理学在中药研究领域取得了显著的成果,为揭示丹参等中药的治疗作用机制提供了有力的理论支持和技术手段。
本研究基于网络药理学的方法,旨在深入探讨丹参治疗心血管疾病的分子机制,为临床用药提供科学依据。
1.2 研究目的和方法本研究旨在通过网络药理学方法,探讨丹参治疗作用的机制。
首先我们收集了大量关于丹参的临床文献、实验研究和网络资源,以便对丹参的药理活性进行全面了解。
然后我们利用网络药理学软件(如Web of Science、PubMed等)对这些数据进行筛选、整理和分析,以确定丹参的主要活性成分及其作用途径。
在分析过程中,我们采用了多种统计方法,如关联规则挖掘、网络聚类、路径分析等,以揭示丹参治疗作用的关键环节。
同时我们还结合了实验数据和临床资料,对丹参的有效成分进行了验证。
丹参的药用价值与炮制方法丹参(学名:Salvia miltiorrhiza)是一种常见的药用植物,其具有丰富的药用价值。
丹参在中医药学中应用广泛,并已被现代药理学研究证实了其药物活性和作用机制。
本文将探讨丹参的药用价值及其炮制方法。
一、丹参的药用价值1. 循环系统保护丹参具有活血化瘀、舒张血管、抗血小板聚集等作用,能够改善血液循环,预防和治疗心脑血管疾病。
丹参中含有的活性成分丹酚酸B,可促进血管生成,促进心肌细胞再生,有助于修复心肌损伤,提高心脏功能。
2. 抗炎作用丹参中的多种化学成分具有明显的抗炎作用。
研究表明,丹参具有抑制炎性介质的产生,抑制炎症反应的能力,可用于治疗感染性疾病、炎症性疾病等病症。
3. 抗氧化作用丹参中富含的黄酮类、酚酸类等化合物是有效的抗氧化物质,能够清除自由基,减轻氧化应激造成的损伤,保护细胞免受自由基的侵害,延缓衰老过程。
此外,丹参还能提高自身的抗氧化能力,增强免疫力。
4. 抗肿瘤作用丹参中的可溶性红花苷等成分具有抑制肿瘤细胞生长和复制的能力,可用于预防和治疗肿瘤。
临床研究发现,丹参具有对多种肿瘤细胞株具有抑制作用的效果,且对放化疗后的免疫系统恢复具有协助作用。
二、丹参的炮制方法丹参的炮制方法主要有鲜丹参、生丹参、红丹参等。
1. 鲜丹参鲜丹参是指新鲜采收的丹参根和根茎,经清洗后晒干。
此种炮制方法得到的丹参具有较高的药效,并可保留丹参中的水分和挥发性成分。
2. 生丹参生丹参是指新鲜采收的丹参根,经清洗后晒干,但不进行日光浴。
生丹参相对于鲜丹参而言,虽然药效稍差,但在一些特定病症中使用效果更好,如内出血、痈疽等。
3. 红丹参红丹参是通过将鲜丹参进行蒸煮、晾晒等工艺处理得到的,具有形态红、色泽鲜艳的特点。
炮制过程中,鲜丹参经过一定的加热处理,使其内部物质发生变化,以提高药效。
总结起来,丹参作为一种重要的中草药材,具有循环系统保护、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药用价值。
丹参的炮制方法多样化,鲜丹参、生丹参和红丹参等都有其特定的应用范围和适用病症。
丹参多糖体外抗氧化与抗肿瘤研究焦亚东1杨兴斌2* †(1•陕西师范大学教育部药用资源与天然药物化学重点实验室,陕西西安710062; 2.陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西西安710062)摘要:采用水提醇沉法制备丹参多糖(SMP)。
通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP )柱前衍生化HPLC-UV法表征SMP的单糖组成。
通过DPPH •自由基、超氧阴离子、羟自由基、还原能力体系评估SMP的抗氧化能力。
采用MTT法、LDH法和流式细胞术(FCM )评价SMP的抗肿瘤活性。
结果表明,SMP主要由半乳糖醛酸(GalUA )、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gla)组成,其摩尔百分含量分别为 4.36%、31.11%和65.52%。
SMP 具有一定的抗氧化活性,且呈现量效关系。
同时,SMP对人结肠癌细胞(LoVo )的生长具有显著的抑制作用,并且表现出一定的剂量依赖性,流式细胞术的分析结果表明SMP能显著地诱导LoVo细胞凋亡并能将LoVo细胞抑制在S期。
关键词:丹参多糖;抗氧化;抗肿瘤Antioxidant, Antineoplastic activity of PolysaccharideExtract from Salvia miltiorrhiza Bge.1 2*JIAO Ya-dong , YANG Xing-bin(1 Key Laboratory of Mi nistry of Educatio n for Medici nal Pla nt Resource and Natural Pharmaceutical Chemistry, Shaanxi Normal University, Xi'an 710062, China;2 College of Food Engin eeri ng and Nutriti onal Scien ce, Shaa nxi Normal Un iversity,Xi'a n 710062, Chi na )Abstract: SMP was extracted by the method of water boiling and ethanol precipitation. The mono saccharide compositi ons of SMP was characterized by PMP precolu mn derivatizati on procedure with HPLC-U V. In additi on, the an tioxida nt pote ntial of SMP was evaluated using the method of reducing power, and scavenging DPPH? radical, superoxide radical and hydroxyl radical. Moreover, the antin eoplastic activity of SMP was evaluated by MTT assay, LDH assay and flow cytometry1作者简介:焦亚东(1985—),男,硕士生,主要从事天然药物化学方面的研究。
†通讯作者:杨兴斌(1969—),男,副教授,硕士生导师,主要从事食品药品质量标准、食品分子营养学以及生化药理方面的科研工作。
Email: xbyang@(FCM). The results showed that SMP was composed of galacturonic acid (GalUA), glucose (Glc) and galactose (Gal) in the mole percents of 4.36%, 31.11% and 65.52%. The antioxidative experiment of SMP indicated that it exhibited various degrees of antioxidant activities in a dose-dependent manner. In addition, SMP exhibited significant antiproliferative activity against LoVo cell line in a dose- and time-dependent manner. Moreover, FCM analysis demonstrated that SMP significantly induced the apoptosis of LoVo cell and caused cell cycle arrest at S phase.Key words: SMP; Antioxidant activities ; Antineoplastic activity丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)为唇形科植物丹参的干燥根和根茎⑴,是著名的活血化瘀药,临床广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞和脑血管疾病的治疗[2]。
人们在研究中发现从丹参根中提取到的多糖,经口服和肌注,用于氨基核苷诱导的实验性肾病模型和四氯化碳引发的肝损伤模型时能减少尿蛋白的排泄,抑制血清胆固醇和脂质过氧化物浓度的提高,降低肝损伤引起的丙氨酸转氨酶ALT 升高,并改善血清白蛋白与球蛋白的比值(A/G)[3],丹参多糖能降低LPS 诱导的急性肝损伤模型小鼠肝组织中MDA 含量,升高GSH 含量,降低血清ALT 含量[4],且具有明显的抗免疫性肝损伤的作用[5]。
然而,对丹参多糖的抗氧化、抗肿瘤的研究报道较少,本实验通过评估丹参多糖体外抗氧化及抗肿瘤活性,为丹参多糖的进一步开发及临床应用提供依据。
1 仪器、材料与试剂仪器AL104 电子天平,PL2002 电子天平(Mettler Toledo); RE-52AA 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);恒温水浴锅,LGJ-10 冷冻干燥机(巩义市予华仪器有限公司);H2050R-1 高速离心机(湖南湘仪集团);透析袋(截留分子量为8000-10000)(华美生物工程公司);723 型可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司);LC-2010A 高效液相色谱仪,Class-VP 6.1 色谱工作站(日本Shimadzu公司);MILLI-Q 超纯水仪(美国Millipore公司);RT6000 酶标仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司);FAC SCalibur 流式细胞仪(美国BD 公司);TS 100 倒置显微镜(Nikon 公司);IX 71 倒置荧光显微镜(OLYMPUS 公司);SW-CJ-2FD 超净工作台(苏净集团);Megafuge 1.0R冷冻离心机,二氧化碳培养箱(美国Thermo公司)。
材料购买于西安市场,经陕西师范大学田先华教授鉴定为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.),洗净后在室温下自然风干。
试剂D-甘露糖(Man), D-核糖(Rib), L-鼠李糖(Rha), D-葡萄糖醛酸(GlcUA), D-半乳糖醛酸(GalUA), D-葡萄糖(Glc), D-木糖(Xyl ), D-半乳糖(Gal), L-阿拉伯糖(Ara), D-岩藻糖(Fuc),抗坏血酸(Vc)均购自Sigma公司(St. Louis, USA),铁氰化钾([K3Fe(CN)6])和三氯乙酸(TCA)购自Sigma公司(Sigma-Aldrich GmbH , Sternheim, Germany), 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、氮蓝四唑(NBT)、还原型辅酶(NADH )和吩嗪甲硫酸盐(PMS)购自Applichem (Darmstadt,Germany),浓硫酸,重蒸苯酚,三氟乙酸(TFA),三乙胺(TEA )和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)分别购自德国Merck公司和北京化学试剂公司。
色谱甲醇和乙腈均购自美国Honeywell 公司。
其他试剂均为分析纯,实验用水为蒸馏水。
2 实验方法2.1 MSP 的制备取丹参药材,粉碎,过80目筛,加入适量无水乙醇,80 C水浴回流脱脂2 次,残渣晾干,加入10倍体积的水,80 C水浴,搅拌浸提4 h,过滤,残渣加水反复浸提 3 次,合并滤液。
浓缩至适宜体积,加入无水乙醇至终浓度为80%,醇沉3次。
收集沉淀,反复冻融10次除蛋白,3000 r/min , 10 min,收集上清,透析3 d,冷冻干燥,得SMP粗品⑹。
2.2总糖含量的测定采用苯酚-硫酸法⑺测定SMP中总糖含量。
2.3单糖组成表征参照文献[8]的方法,对SMP的单糖组成进行表征。
2.4 体外抗氧化活性测定2.4.1清除DPPH •自由基作用的测定⑶精确称取4 mg的DPPH •,用甲醇100 mL溶解并。
将1 mL不同浓度的待测液与3 mL DPPH •溶液依次加入试管中,摇匀,黑暗处理20 min,于517 nm处测定吸光度A i (本底组以甲醇代替DPPH •),蒸馏水代替待测液为阴性对照,以Vc 作阳性对照。
根据下列公式计算清除率:清除率(%)= [1- (Ai —Ac)/ Aj] 100%式中Ai 为样品管的吸光值;Aj 为样品本底的吸光值;Ac 为本底的吸光值。
2.4.2 总还原力的测定[10]将 1 ml 不同浓度的待测液分别与 2.5 mL 磷酸盐缓冲液(0.2 mol/LNa2HPO4/NaH2PCH, pH6.6)及2.5 mL 铁氰化钾(1%)混合,混合物在50 C 水浴中孵育20 min,然后加入2.5 mL的TCA (10%)终止反应,3000 r/min离心10 min,取上清液2.0 mL,依次加入2.0 mL水和0.5 mL FeCb (0.1%),混匀后于700 nm处测定吸光度。
Vc做阳性对照。
2.4.3清除超氧阴离子(O2?-)作用的测定[11]试管中依次加入 1 mL NBT (81 ^M)溶液,1 mL NADH (468 ^M)溶液,1 mL 多糖溶液,0.4 mL PMS (88 ^M )溶液,混匀后静置 5 min,于560 nm 处测其吸光值。
用水代替多糖溶液做阴性对照,水代替PMS 做本底组对照,Vc做阳性对照。
按以下方程计算清除率:清除率(%) = [1- (Ai —Ac)/ Aj] x 100%式中Ai 为样品管的吸光值;Aj 为样品本底的吸光值;Ac 为本底的吸光值。
2.4.4清除羟自由基(OH)活性测定用2-脱氧-D-核糖法测定样品对羟自由基的清除活性[12]。