HPLC测定糕点类食品中的苯甲酸[1]

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高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂

高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂张　丰（萍乡市食品药品检验所，江西萍乡 337000）摘　要：以从市场购买的15种月饼样品为研究对象，采用高效液相色谱法测定月饼中3种常见防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）的含量。

结果表明，3种防腐剂的标准曲线方程线性相关系数均在0.99以上，说明该方法可以应用于月饼中防腐剂的检测。

15种月饼样品中，有8种检出山梨酸，含量为0.016 2～0.746 0 g·kg-1；有9种检出脱氢乙酸，含量为0.080 3～0.250 0 g·kg-1；有3种未检出防腐剂；15种月饼样品中均未检出苯甲酸。

市售的15种月饼样品中3种防腐剂含量均符合最新的食品安全国家标准。

关键词：高效液相色谱法；月饼；苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸Determination of Three Preservatives in Mooncakes by HPLCZHANG Feng(Pingxiang Food Medicines Inspection Office, Pingxiang 337000, China) Abstract: Using 15 mooncake samples purchased from the market as the research object, the content of three common preservatives (benzoic acid, sorbic acid, dehydroacetic acid) in mooncakes was determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear correlation coefficients of the standard curve equations of the three preservatives were all above 0.99, indicating that the method could be applied to the detection of preservatives. Among the 15 kinds of moon cake samples, 8 kinds of sorbic acid were detected, and the content was 0.016 2～0.746 0 g·kg-1; 9 kinds of dehydroacetic acid were detected, and the content was 0.080 3～0.250 0 g·kg-1; three preservatives were not detected; benzoic acid was not detected in 15 kinds of moon cake samples. The contents of three preservatives in 15 kinds of moon cake samples sold in the market all met the latest national food safety standards.Keywords: high performance liquid chromatography; mooncake; benzoic acid; sorbic acid; dehydroacetic acid月饼又称月团、丰收饼、团圆饼等，是中秋节不可或缺的美食[1]。

22151252_糕点中防腐剂的测定方法及使用现状

T logy科技分析与检测本文使用高效液相色谱法对测定分析糕点中的防腐剂（苯甲酸、山梨酸），主要依据GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》中的第一法液相色谱法，并对此方法进行精简和优化，对糕点中的苯甲酸、山梨酸进行检测分析[1]。

1　实验过程1.1　溶液的配制苯甲酸、山梨酸混合标准系列工作溶液的配制：分别准确称取苯甲酸和山梨酸标准品固体粉末各0.100 0 g （精确到0.000 1 g），用水溶解定容至10.0 mL，浓度为10 000 mg/L；取浓度为10 000 mg/L的标准储备液 1 mL稀释至10 mL，得到浓度为 1 000 mg/L的混合标准储备液。

用储备液配制浓度为1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 mg/L与 100.0 mg/L的混合标准系列工作溶液。

乙酸锌溶液（220 g/L）的配制：准确称取220 g乙酸锌溶于少量超纯水中，再加入30 mL冰乙酸，加水定容至1 000 mL，备用。

亚铁氰化钾溶液（106 g/L）的配制：准确称取106 g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，再加水定容至1 000 mL，备用。

乙酸铵溶液（0.02 mol/L）的配制：准确称取1.54 g乙酸铵固体，加水溶解，再加入200 μL乙酸，转移至 1 000 mL容量瓶中，定容，再经0.22 μm水相微孔滤膜过滤后备用[2]。

1.2　主要设备实验过程中使用的主要仪器以及其型号、厂家信息等。

其它设备： 10 mL容量瓶、50 mL容量瓶、1 000 mL 容量瓶；1mL一次性注射器若干；50 mL 离心管、配套离心管盖若干；2 mL液相进样瓶、配套瓶盖若干。

1.3　样品来源样品来源于公司各个地市、县市、区域客户送检的各种糕点。

1.4　分析步骤1.4.1 样品制备本实验中所用的样品均为固体样品，参照国抽细则和测试标准中对制样的要求对样品进行制备。

HPLC法检测食品中苯甲酸的含量,紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂

根据样品中苯甲酸含量，取第二次蒸馏液5～20mL，置于50mL容量瓶中，用0.01mol﹒L-1NaOH定容，以0.01mol﹒L-1NaOH作为对照液，于紫外分光光度计225nm处测定吸光度。
2、标准曲线的制作
取苯甲酸标准溶液2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL，分别置于50mL容量瓶中，用0.01mol﹒L-1NaOH溶液稀释至刻度。以0.01mol﹒L-1NaOH溶液为对照液，测定其中5号标准溶液的紫外可见吸收光谱（测定波长范围为200~350nm），找出λmax，然后在λmax处测定五个标准溶液的吸光度Ai，绘制标准曲线。
湖南生物机电职业技术学院学生课堂内实验报告
姓名__陈艳龙__学号___11_____专业班级___生技09311_____
课程名称
仪器分析
实验名称
紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂
实验目的及要求：
1．掌握蒸馏操作；
2．掌握紫外可见分光光度法测定苯甲酸的方法和原理。
实验原理：
由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验采用蒸馏法对鲜橙多中的苯甲酸进行了测定，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。
w=
式中m —样品的质量（mg）；
V —样品测定时所取的第二次蒸馏液体积（mL）；
cx—从标准曲线上查得样品溶液中苯甲酸钠的质量浓度（mg · mL－1）。
成绩：
指导教师签名：
年月日
吸取上述蒸馏液25mL，置于另一个250mL蒸馏瓶中，加入25mL 0.033mol﹒L-1K2Cr2O7溶液,6.5mL 2mol﹒L-1H2SO4溶液，连接冷凝装置，水浴上加热10min，冷却，取下蒸馏瓶，加入1mL H3PO4、20g无水Na2SO4、40mL水和三颗玻璃珠，进行第二次蒸馏，用预先加有的5mL 0.1mol﹒L-1NaOH的50mL容量瓶接收蒸馏液，当蒸馏瓶收集到45mL左右时，停止蒸馏，用少量洗涤冷凝器，最后用水稀释至刻度。

HPLC_MS测定食品中的苯甲酸_山梨酸_甜蜜素_糖精钠

当提取液中 4种添加剂浓度为 2 ng /mL 时, 对应的食品中含量为 0 1 m g / kg, 此时各组分信噪比
62
S /N 均大于 10, 考虑到此含量可满足所有食品中 4 种添加剂的检测要求, 因此本文将此含量作为 4 种添加剂的检出限。
表 3 4种添加剂标准曲线方程和相关系数
添加剂名称
除由配料合理带入食品的情况外, 4种添加剂在食品中使用量通常在 0 01 ~ 1 00 g / kg 范围内, 本方法线性范围最高可达 0 25 g /kg, 对于含量更高的样品, 必须对样品溶液进行稀释。这是由本方法采用的电喷雾接口的特性决定的: 当样品溶液中浓度过高时, 在离子源内会产生离子抑制, 高浓度时不成线性。 2. 2 测定时间对甜蜜素的影响
测定时间 1h 4h 1d 2d 3d 4d 5d
响应值 346 005 348 278 346 524 344 997 343 782 335 007 330 241
2. 3 线性范围和检出限配制 4种添加剂浓度在 10~ 5 000 ng /mL范围
内的系列标准溶液, 按本文所述方法测定。将各组分的峰面积对相应的浓度绘制工作曲线, 曲线方程和相关系数见表 3。
H u M e,i W ang Jun, Zhu Jianhua
Shandong Superv ision and Inspection Institu te for P roduct Qua lity ( Jinan 250100 )
Abstract: A m ethod o f determ ination for benzoic acid、sorb ic acid、sod ium cyc lam ate and saccharin sod ium in foods by H PLC /M S is estab lished. T he food additivesw ere ex tracted from the sam ple by w ater, after separated w ith a H PLC colum n, detected under ESI negative ion m odes. The ca libration curves of th is four food additives are linear in the range of 10~ 5 000 ng /mL, and the detection lim its are all be tter than 0 1 mg /kg, the average recoveris are 92 1% ~ 96 7% ( benzo ic ac id) , 92 3% ~ 94 4% ( sorbic acid) , 94 0% ~ 97 3% ( saccharin sodium ) and 95 1% ~ 96 9% ( sod ium cyc lam a te).

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证

066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。

苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。

GB2760－2016《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。

GB5009.28－2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。

国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。

本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。

一、仪器与试剂1.仪器。

高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。

2.试剂。

苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。

二、实验与方法1.色谱条件。

（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。

（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。

准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。

高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤.docx

高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤1材料与方法：1.1仪器：(1)高效液相色谱仪(2) 分析天平，(3 )酸度计，(4)离心机，(5 )振荡器，(6)超纯水仪；试剂：(1)苯甲酸，(2) 山梨酸，(3) 脱氢乙酸，(4) 甲醇；提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液，(2) 0.02mol/L磷酸氢二钾溶液1.2标准溶液的配制精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml 的标准储备溶液。

1.3色谱参数和条件(1)色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18(4.6*250mm,5 ^m)(2)流动相：甲醇一0.02mol/L磷酸氢二钾溶液(10:90)(3)流速：1.0ml/min(4)进样量：10丄(5)检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm (脱氢乙酸)1.4样品处理1.4.1固体样品(如熟肉制品.豆制品及糕点类)(1)称取捣碎混匀的样品5g (精确至0.01g )于具塞三角瓶中，(2)精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4C放置24h，(3)离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 ym滤膜过滤,(4)进液相色谱仪分析。

1.4.2液体样品(如冷冻饮品)(1)将样品于室温下解冻后，称取10g (精确至0.001g )于25ml量瓶中，(2)用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4C放置24h，(3)离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 ym滤膜过滤,(4)进液相色谱仪分析。

2数据处理2.1标准曲线与检出限精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml中含0.1旧,0.5血,1血,4旧,8旧,12旧,16旧,20旧的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定，且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(g/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标制作标准曲线；以浓度C( pg/ml)对峰面积A进行线性回归，按信噪比3,计算检出限2.2精密度和方法回收率试验(1)精密度实验：取同一对照品溶液(各浓度均为10^/ml )，重复进样，测出各峰面积的RSD值。

食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸同时测定的HPLC方法

苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸是目前国家允许使用的食品添加剂[1]，它们的分子结构如图1—4所示。

但此类物质摄入过多会造成潜在的健康风险[2]，所以同时准确高效地检测变得愈发重要。

现有的国家标准中，同时测定多种添加剂的方法较少，这给实际检验工作（需要满足高效准确的要求）带来了一定难度。

所以，需要开发改进同时检验上述4种添加剂的方法[3-6]。

图1　苯甲酸分子结构（CAS：65-85-0）图2　山梨酸分子结构（CAS：110-44-1）图3　糖精钠分子结构（CAS：128-44-9）图4　脱氢乙酸分子结构（CAS：520-45-6）目前，同时测定上述4种添加剂的国家标准尚未发布，部分地标采用磷酸盐缓冲液-甲醇体系的方法，虽然通过增加离子强度实现了分析目的，但对色谱柱寿命存在一定影响且对色谱柱要求较高[7]。

为此本文通过对苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的化学特征和性质的分析，通过选择合适的色谱条件及样品前处理方法，提出改进方法，尽可能地达到稳定准确分析的目的。

1　实验部分1.1　仪器与试剂高效液相色谱仪：安捷伦1260型，配有二极管阵列检测器。

万分之一天平： EL204-IC，瑞士梅特勒。

千分之一天平：ML503/02，瑞士梅特勒。

离心机：10 000 r/min，TGL-16a高速离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司。

酸度计：梅特勒320型，瑞士梅特勒。

甲醇：色谱纯，德国默克进口。

苯甲酸标准品、山梨酸标准品、糖精钠标准品、脱氢乙酸标准品：美国sigma公司。

其他试剂均为优级纯。

实验用水为满足GB/T 6682-2008的一级水。

1.2　标准溶液的配置苯甲酸储备液（1.0 mg/mL）：精密称取苯甲酸标准品100 mg至100mL容量瓶，用50%甲醇溶解并定容。

4 ℃保存，3个月有效。

山梨酸储备液（1.0 mg/mL）：精密称取山梨酸标准品100 mg至100mL容量瓶，用50%甲醇溶解并定容。

4 ℃保存，3个月有效。

高效液相色谱测定食品中的苯甲酸盐

(三)薄层色谱法原理样品酸化后,用乙醚提取
苯甲酸, 和糖精) 苯甲酸,山梨酸 (和糖精).
(四)紫外分分光度法测定苯甲酸原理性溶液中可以随水蒸气蒸馏出来, 样品中苯甲酸在酸性溶液中可以随水蒸气蒸馏出来,与样成分分离, 吸收苯甲酸, 品中非挥发性成分分离,用碱液吸收苯甲酸,然后溶液在加热的条件下进行激烈氧化, 用重铬酸钾和硫酸溶液在加热的条件下进行激烈氧化, 使除苯甲酸以外的其它有机物氧化分解, 使除苯甲酸以外的其它有机物氧化分解,将此氧化后的溶液再次蒸吸收苯甲酸, 馏,用碱液吸收苯甲酸,第二次所得的蒸馏液中基本不含除苯甲酸以外的其它杂质.根据苯甲酸钠在225nm有最大吸收,故有最大吸收, 除苯甲酸以外的其它杂质.根据苯甲酸钠在有最大吸收测定吸光度可计算出苯甲酸含量. 测定吸光度可Байду номын сангаас算出苯甲酸含量. (P220:适用于牛奶等有机物含量高 :
(一)高效液相色谱法 3,仪器试剂
(一)高效液相色谱法 4,测定
准确称取酱油5g,用氨水(1:1)调pH至7,加水定容至50mL,混匀,用滤膜(0.45um)过滤.滤液备用.
(一)高效液相色谱法 5,结果计算 6,讨论比较高效液相色谱法与其他方法的原理; 讨论高效液相色谱法测定苯甲酸的注意事项.
(二)气相色谱法
请比较( 请比较(二)
原理样品酸化后,用乙醚提取苯甲酸,山梨酸,用带氢火焰离子化检测样品酸化后,用乙醚提取苯甲酸,山梨酸, 器的气相色谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量.测出苯甲酸, 器的气相色谱仪进行分离测定,与标准系列比较定量.测出苯甲酸, 山梨酸量后,再分别乘以适当的相对分子质量比,求出苯甲酸钠, 山梨酸量后,再分别乘以适当的相对分子质量比,求出苯甲酸钠, 山梨酸钾量. 山梨酸钾量. 说明本法为国家标准方法,可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量, 本法为国家标准方法,可同时测定食品中苯甲酸和山梨酸的含量, 山梨酸保留时间为173 173秒苯甲酸保留时间为368 368秒适用于酱油, 山梨酸保留时间为173秒,苯甲酸保留时间为368秒.适用于酱油, 科学的,但单位有误!), !),用于果汁,果酱.最低检出限为1 果汁,果酱.最低检出限为1ug(科学的,但单位有误!),用于色谱分析的样品为1g 1g时最低检出浓度为1mg/kg 色谱分析的样品为1g时,最低检出浓度为1mg/kg (采用相同的提取方法). 取方法).

高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠

将上述混合标准溶液进行测定，
根据待测物质峰面积和浓度关系绘图，
得到标准曲线回归方程。苯甲酸、山
梨酸和糖精钠在 0.2 ～ 200 mg/L 范围
内线性关系良好，苯甲酸在 0.25 mg/L
时，线性方式 y=31 991.7x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.006 g/kg；山
1.2.1 配制混合标准溶液精密称取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准物质各 4.0 mL 于 20 mL 容量瓶中，
用水配制成 200 μg/mL 的标准混合储备液，再用水稀释成 100 μg/mL、50 μg/ mL、25 μg/mL、12.5 μg/mL、2.5 μg/ mL、0.5 μg/mL、0.2 μg/mL 的系列标准工作液，由低浓度到高浓度依次进样。
梨酸在 0.20 mg/L 时，线性方式 y=60
861.2x，相关系数 r=0.999 8，检出限
为 0.005 g/kg；糖精钠在 0.50 mg/L
时，线性方式 y=21521.4x，相关系数
r=0.999 7，检出限为 0.012 5 g/kg。

（下转 132 页）
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1.2.2 样品处理称取 2.0 g 果酱样品于 50 mL 比色管中，加 30 mL 水和 0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液 1.0 mL，摇匀后置于超声清洗器中提取 15 ～ 20 min，直至被测组分完全溶解。然后再添加 0.42 mol/L 的硫酸锌溶液和 0.5 mol/L 的氢氧化铵溶液各 1.5 mL，加水定容到 50 mL 后摇匀，静置，然后用双层滤纸过滤上层清液，将最初过滤的 5 mL 液体丢弃，并采用 0.45 μm 的滤膜对滤液再次过滤，进样 5 μL 开展色谱分析。如果液体样品不包含蛋白质，则不需要蛋白质沉淀过程，直接取样后用水定容，超声提取后过滤进样即可；如果是固体样品，则需要将固体样品研磨粉碎，然后进行样品处理 [2]。 1.2.3 检测精确称取处理液和混合标准溶液各 20 μL 放置于高效液相色谱仪中进行分离，以标准溶液的固定峰值为依据，根据峰面积计算样液中的被测物质含量，计算公式为：，其中 X 表示样品中待测组分的含量，单位为 g/ kg；C 表示由标准曲线得出的样液中待测物质的量浓度，单位为 mg/mL， V 表示样品定容的体积，单位 mL；m 表示样品的质量，单位为 g。

HPLC测定糕点类食品中的苯甲酸

HPLC测定糕点类食品中的苯甲酸
徐宁
【期刊名称】《光谱实验室》
【年(卷),期】2005(022)005
【摘要】以亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂对糕点类食品进行预处理,并用HPLC 法测定处理后样品溶液中苯甲酸的含量.方法加标回收率为91.52%-103.20%,相对标准偏差小于2.25%,苯甲酸检出限为0.50mg/L.该方法操作方便,分析速度快,结果准确.
【总页数】3页(P1105-1107)
【作者】徐宁
【作者单位】汕头质量计量监督检测所,广东省汕头市金砂路中段,515041
【正文语种】中文
【中图分类】O657.7+2
【相关文献】
1.RP-HPLC法同时测定糕点中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和脱氢乙酸 [J], 徐渊金;陈含笑;张婷;卜慧斐
2.同位素稀释-气相色谱-串联质谱法快速测定糕点类食品中邻苯二甲酸酯 [J], 卢俊文;李蓉;杨芳;黄志强;陈丽斯;黄思允
3.超声提取HPLC法测定糕点中苯甲酸、山梨酸和糖精钠方法 [J], 张立军;李世文;曹克广
4.HPLC测定各类食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠 [J], 李薇;阎震
5.HPLC测定各类食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精钠 [J], 李薇;阎震
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第22卷,第5期光　谱　实　验　室
Vol .22,No .5
2005年9月
Chinese J ournal of Spectrosco py Labora tory
September ,2005
HPLC 测定糕点类食品中的苯甲酸
¹联系人,电话:(0754)8674054;E-mail:ywfang @
作者简介:徐宁(1975—),男,广东省汕头市人,助理工程师,主要从事化学分析检测和质量检验工作。

收稿日期:2005-07-09
徐宁
¹
(汕头质量计量监督检测所　广东省汕头市金砂路中段　515041)
摘要
以亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂对糕点类食品进行预处理,并用HP LC 法测定处理后样品溶液中苯甲酸的含量。

方法加标回收率为91.52%—103.20%,相对标准偏差小于2.25%,苯甲酸检出限为0.50mg /L 。

该方法操作方便,分析速度快,结果准确。

关键词　高效液相色谱,苯甲酸,糕点类食品。

中图分类号:O 657.7+2 文献标识码:A 文章编号:1004-8138(2005)05-1105-03
1　引言
糕点类食品的主要原料是面粉,奶油。

我国食品卫生标准明文规定,糕点类食品不能添加苯甲酸[1],但为了颜色的美观,一些面粉厂商仍在面粉中添加过氧化苯甲酰,该物质最终以苯甲酸的形式存在。

一些奶油厂家也可能为节约成本而在奶油中添加苯甲酸。

因此,准确测定糕点类食品中苯甲酸的含量,对于保护人们身体健康有重要意义。

目前,食品中苯甲酸的检验方法主要有薄层色谱法[2]、气相色谱法[3],液相色谱法[4]等。

其中薄层色谱法和气相色谱法都是将样品酸化后用有机溶剂多次萃取,这种方法费时费力,苯甲酸的损耗较大。

液相色谱法主要用于汽水饮料、果汁及酒类等食品中苯甲酸含量的测定,而用于糕点类这种高蛋白高脂肪食品中苯甲酸的测定,还鲜见文献报道。

本文采用亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂,用以去除糕点类食品中的蛋白质和油脂等杂质,并用HPLC 测定苯甲酸的含量,取得了满意的结果。

2　实验部分
2.1　样品与试剂
糕点类食品:市售蛋糕类食品。

试剂:甲醇,专用试剂;乙酸铵,优级纯;亚铁氰化钾,分析纯;乙酸锌,分析纯;碳酸氢钠,分析纯(广州化学试剂厂)。

苯甲酸标准溶液,1.0mg/mL(国家标准物质研究中心)。

实验用水为蒸馏水。

1106光谱实验室第22卷
2.2　仪器及分析条件
1100型液相色谱仪(带紫外检测器,美国Agilent公司);
仪器工作条件:色谱柱为ODS(200mm×4.5L m),流动相为甲醇和0.02mol/L乙酸铵混合溶液(V甲醇∶V乙酸铵=5∶95),流速为1.0mL/min,波长为230nm,定量杯为20L L。

CQ-250型超声仪(上海船舶电子研究所)。

2.3　标准溶液的配制
取购置的苯甲酸标准溶液逐级稀释配成标准溶液系列,浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0mg/L。

2.4　样品预处理[5]
准确称取糕点类食品10.00g左右样品于250mL锥形瓶中,加入少量热水溶解,经超声仪处理30min后,加入10mL饱和碳酸氢钠,再加入质量比为10.6%的亚铁氰化钾溶液和质量比为21.9%的乙酸锌溶液各5mL,充分混合后,用蒸馏水定容于250mL容量瓶中。

沉淀后先用普通滤纸过滤,再用4.5L m水相微孔滤膜过滤,收集滤液于样品瓶中。

3　结果与讨论
3.1　样品预处理方法的选择
糕点类食品中含有较多的脂肪和蛋白质,用水直接溶解提取时,样品液为粘稠状,较难过滤。

采用有机溶液提取,是将样品酸化后用乙醚分几次提取,吸取提取液经洗涤脱水后,水浴蒸干,最后用乙醚-石油醚溶解定容后进行检测。

这种方法耗时较长,且苯甲酸的损耗也较大。

本文采用超声波溶解样品,并加入沉淀剂,不需要有机溶剂,能使糕点类食品中的油脂和蛋白质沉淀,容易过滤,大大缩短了检测时间。

3.2　沉淀剂用量的确定
在糕点类食品中加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液作为沉淀剂,实验表明,当亚铁氰化钾和乙酸锌溶液的加入量各为5mL时,溶液澄清,沉淀完全,固本实验选用的沉淀剂用量为5mL。

3.3　校准曲线和检出限
按选定的仪器操作条件对已配制的标准溶液中的苯甲酸进行测量,以组分的色谱峰面积为纵坐标,组分的质量浓度为横坐标绘制校准曲线,曲线的回归方程为:y=0.3065x+0.0044,相关系数为0.9998,按S/N=3计算苯甲酸的检出限[6],结果为0.50mg/L。

3.4　分析结果及方法精密度试验
按选定的仪器操作条件对样品进行6次重复测定,并计算相对标准偏差,结果如表1所示。

表1　分析结果及相对标准偏差
样品编号123456含量(mg·kg-1)46.5049.5152.0850.3651.7547.50 RSD(%) 1.98 2.25 1.90 2.20 2.10 2.03 3.5　标准加入回收试验
在预处理之前,将一定量的标准溶液加入到样品中,按既定的方法进行预处理,测定样品中苯甲酸的含量,计算回收率,结果如表2所示。

4　结论
以亚铁氰化钾和乙酸锌作为沉淀剂对糕点类食品进行预处理,并用HPLC法测定处理后样品
溶液中苯甲酸的含量,方法操作简单,效率高,结果准确。

方法可用于质量检测部门对糕点类食品中苯甲酸含量的监测。

表2　标准加入回收试验结果
样品原测定量(mg ·k g -1)
加入量(m g ·kg -1)
加标后测定值(mg ·kg -1)
回收率(%)1
46.501056.68101.80249.512572.3991.52352.0850101.2598.34450.3675127.76103.20551.75100147.0795.326
47.50
200
251.82
102.16
参考文献
[1]中华人民共和国国家标准.食品中山梨酸、苯甲酸的测定[S].GB/T 5009.29-2003.北京:中国标准出版社,2004.233—239.[2]杨祖英.食品检验[M].北京:化学出版社,2001.30—31.
[3]翟永信.现代食品分析手册[M ].北京:北京大学出版社,1988.379—393.
[4]中华人民共和国国家标准.食品添加剂使用卫生标准[S ].GB /T 2760-1996.北京:中国标准出版社,1997.15—17.[5]林奕芝,刘奋,戴京晶等.高效液相色谱法测定蜜饯食品中防腐剂、甜味剂[J].食品科学,2000,21(9):47—48.[6]于世林.高效液相色谱方法及应用[M].北京:化学工业出版社,2001.85—87.
Determination of Benzoic Acid in Cake by HPLC
X U Ning
(Pr od uct Quality Monitor I ns titu te ,Shantou ,Guang dong 516002,P .R .China )
Abstr act
The amount of benzoic acid in cake pretreated using ferrocyanic cyano-potassium and acetic acid znic as precipitating agent was deter mined by HPLC .The recovery of standar d addition is 91.52%—103.20%with r elative standard deviation(n =6)less than 2.25%and detection limit of 0.50mg /L .T he method is efficient ,accurate and easy to operate .
Key wor ds HPLC,Benzoic Acid,Cake.
1107
第5期徐宁:HPLC 测定糕点类食品中的苯甲酸。