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248科技资讯 SC I EN C E & TE C HN O LO G Y I NF O R MA T IO N 学 术 论 坛全世界食品因腐烂变质而引起的经济损失巨大，为了保证食品的品质，防止腐败变质，添加防腐剂是一个重要的手段。
目前被批准可用于食品中防腐剂的种类很多,包括苯甲酸、山梨酸等共三十几类[1]，但使用过量会对人体有害，GB2760-2012对食品中的防腐剂的最大允许使用量作了规定[2]，因此，建立快捷、准确的测定方法很有必要。
气相色谱法是近年来迅速发展的一种新技术，其应用非常广泛[3]。
下面介绍程序升温气相色谱法测定食品中多种防腐剂及抗氧化剂具有简便、准确、实用性强的特点。
1 实验部分1.1色谱条件载气：氮气，流量为300mL/min；燃烧气：氢气，流量为30mL/min；助燃气：空气，流量为400m L /m i n 。
色谱柱：H P -55%Phenyl Methyl Siloxan （30m×320μm×0.25μm）。
进样体积为1μL,分流比10∶1；进样口温度：250℃；检测器温度250℃。
1.2标准溶液配制准确称取上述防腐剂和抗氧化剂各0.1000g，用乙酸乙酯定容至100mL，浓度均为1m g /m L 。
用乙酸乙酯稀释,配制成浓度分别为4、20、50、100、200μg/mL的系列混合标准溶液。
各取1μL 进样，以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标绘制标准曲线。
1.3样品前处理称取样品5.00g事先混合均匀的样品，置于50m L 具塞比色管中，加1m L 盐酸(1+1)酸化，加入10mL饱和氯化钠溶液，用15、10、10mL乙醚三次提取，每次混旋震荡1min，超声10min，静置分层，提取上层有机溶剂于三角瓶中。
加入无水硫酸钠5g脱水，震荡，过滤，滤液置于40℃水浴锅上蒸至近干，用乙酸乙酯定容至2mL。
2 结果与讨论2.1分析条件及色谱图对非极性柱H P -5和极性柱C P -W a x52 CB进行了考察，发现非极性柱HP-5拥有非常好的分离效果及重现性，且所需的分析时间较短，所以选定择了非极性柱HP-5，克服了极性柱无法很好分离苯甲酸和山梨酸以及谱峰严重拖尾的问题，同时提高了样品的分析速度。
气相色谱法测定食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾及注意事项吴惠丽【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)021【总页数】1页(P79-79)【作者】吴惠丽【作者单位】焉耆回族自治县质量与计量检测所【正文语种】中文食品试样酸化后，利用苯甲酸、山梨酸易溶于乙醚的性质，用乙醚将食品中的苯甲酸、山梨酸提取出来，在气相色谱仪上进行分离测定，根据标准曲线求出食品中苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸和山梨酸钾的含量。
乙醚：不含过氧化物；石油醚：沸程30～60 ℃；盐酸；无水硫酸钠；盐酸（1∶1）：量取100 mL水，一边摇动，一边缓缓加入100 mL盐酸，混匀，冷却至室温备用。
氯化钠酸性溶液（40 g/L）：称取4.0 g氯化钠，加水溶解，并定容至100 mL，然后加数滴盐酸（1∶1）酸化。
色谱柱：固定液AT添加剂玻璃毛细柱，柱长15 m，内径0.53 mm，液膜厚度：1.00 μm；柱温：150 ℃、汽化温度：250 ℃、检测温度260 ℃。
苯甲酸、山梨酸溶液标准物质食品防腐剂苯甲酸溶液标准物质，标准值1.00 mg/mL。
食品防腐剂山梨酸溶液标准物质，标准值1.00 mg/mL。
制备苯甲酸、山梨酸混合标准使用液分别准确吸取0.4 mL苯甲酸溶液标准物质和0.4 mL山梨酸溶液标准物质混合置于1个10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶剂稀释至刻度，此标准混合使用液含苯甲酸或山梨酸为40 μg/mL。
以此类推，再分别准确吸取0.8、1.2、1.6、2.0 mL和2.4 mL苯甲酸溶液标准物质和山梨酸溶液标准物质，混合后置于一组10 mL容量瓶中，用石油醚_乙醚(3∶1)混合溶剂稀释并定容至刻度，混匀备用。
盖好瓶塞，防止溶剂挥发造成浓度变化，同时控制实验室温度为20 ℃。
此标准混合使用液系列中，苯甲酸或山梨酸的浓度分别为40、80、 120、160、200μg/mL和240μg/mL。
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解(转自仪器信息网色谱论坛)苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-1996，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-1996，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-1996和GB/T5009.29-1996 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-1996使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1m ol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。
食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。
目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。
食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。
如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。
特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。
另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。
在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。
苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。
日本的进口食品中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。
但因价值低廉，在中国仍作为主要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。
但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。
因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M．Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测，实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法，但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。
食品中苯甲酸和山梨酸的分析苯甲酸和山梨酸是食品中常见的有机酸,它们可以提供食品的酸味和调味。
但这两种酸也有一定的毒性,因此在食品中的含量是有限制的。
为了对食品中苯甲酸和山梨酸进行分析,通常使用一些常见的分析方法,例如色谱分析、光度分析和红外光谱分析等。
具体来说,色谱分析是一种常用的分离和测定有机物的方法,可以将混合物中的各组分分离出来,并对各组分进行测定。
苯甲酸和山梨酸可以通过色谱分析进行测定,例如可以使用液相色谱法（HPLC）或气相色谱法（GC）等。
光度分析是另一种常用的分析方法,可以通过检测物质吸收光谱来测定有机物的浓度。
苯甲酸和山梨酸都可以通过光度分析进行测定,可以使用吸光度测定法或比色法等。
红外光谱分析是另一种常用的分析方法,可以通过检测物质吸收红外光谱来测定有机物的结构和浓度。
苯甲酸和山梨酸也可以通过红外光谱分析进行测定。
这些分析方法都具有一定的优点和局限性,在实际应用中,需要根据实际情况选择合适的分析方法进行分析。
通常,在对食品中苯甲酸和山梨酸进行分析时,需要结合多种分析方法的优势,以便提高分析的准确性和灵敏度。
此外,在进行食品中苯甲酸和山梨酸的分析时,还需要注意样品的前处理和样品的储存方式,以便保证分析的准确性。
苯甲酸和山梨酸在食品中的含量是有限制的,因为这两种酸都有一定的毒性。
例如,苯甲酸可能会对人体的呼吸系统和神经系统造成危害,而山梨酸可能会对人体的消化系统造成危害。
因此,在食品中苯甲酸和山梨酸的含量一般都有严格的限制。
通过进行食品中苯甲酸和山梨酸的分析,可以了解食品中这两种酸的含量,从而保证食品的质量和安全。
因此,食品中苯甲酸和山梨酸的分析是食品质量控制和食品安全管理中的重要环节。
气相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸
邓燕
雅安职业技术学院
【摘要】本文介绍了采用氢火焰离子检测器及毛细管柱气相色谱测定食品中山梨酸、苯甲酸的快速检测方法。
采用无水乙醚提取样品中的山梨酸、苯甲酸，反复振荡提取两次，经氯化钠酸性溶液盐析，无水硫酸钠脱水，旋转蒸发仪蒸干，丙酮定容后待测。
用外标法定量，取1ul待测样，HP-FFAP石英毛细管柱内分离后进入FID检测器验证。
结果表明100ug/ml浓度与峰面积有着良好的线性关系，相关系数大于0.999，山梨酸、苯甲酸的检出限为 1.0mg/kg，回收率为82.4%~92.0%，相对偏差为6.1%。
此方法具有检出限低，检测快速，定量准确，操作性强，适用于山梨酸、苯甲酸的检测工作。
【关键词】气相色谱；山梨酸；苯甲酸；食品；测定
食品的保鲜和保存通常主要依赖于防腐剂，山梨酸又是被国际粮农组织和世界卫生组织重点推荐的，低毒、高效的防腐剂，主要用于儿童食品等新兴食品领域，而传统领域还在大量使用苯甲酸及其钠盐[1]。
并且，每年山梨酸的需求量可达6500t,苯甲酸的需求也很可观[2]。
并且，大量的毒理学试验表明：防腐剂成分用量过多会对人体肝脏产生危害，甚至致癌。
因此，对山梨酸、苯甲酸的检测技术的研究已成为一种必然。
目前，对其进行检测主要方法有气相色谱法、高效液相色谱法及毛细管电泳法等。
[3]]本文选用气相色谱法测定食品中的山梨酸、苯甲酸，探求有效提取食品中的山梨酸、苯甲酸的有效方法，确定检测的最佳线性关系及最低检测限值。
1实验方法
1.1主要仪器和试剂
美国Agilent7890A气相色谱仪，配置有自动进样器，附有FID检测器，选配Agilent的HP-FFAP(30m×0.32mm×0.25um)毛细柱。
瑞士旋转蒸发仪、50ml 的比色管。
丙酮（色谱纯）、无水乙醚（分析纯）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、浓盐酸、山梨酸、苯甲酸的标准品均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。
1.2 试剂配制及前期处理
6mol/ml的盐酸配制：用浓盐酸的浓度12mol/l，稀释至6mol/ml备用
5%氯化钠酸性溶液的配制：在5%的氯化钠溶液中，加入10ml的冰醋酸，使其呈酸性(PH=4.5)。
无水硫酸钠（分析纯）:在700摄氏度下烧灼4小时，密封瓶中备用。
1.3 GC条件
选配毛细柱HP-FFAP（30m×0.32mm×0.25um），载气为高纯氮气（纯度≧99.9%），进样方式：分流进样（分流比=10:1）。
进样器温度：200℃检测器温度：250℃
柱温： 150℃→220℃（3min）,以30℃/min的速率升温
载气流速（氮气）：2.0ml/min
氢气流速：30ml/min
空气流速：400ml/min
1.4标准溶液的配制;
储备液的配制：
1.4.1山梨酸储备液的配制：称取0.050g的山梨酸的标准品，于50ml的容量
瓶中，用丙酮定容至50ml.浓度为1000ug/ml。
苯甲酸储备液的配制：称取0.050g的苯甲酸标准品，于50ml的容量瓶中，丙酮定容至50ml,浓度为：1000ug/ml。
1.4.2上机液的配制：
用移液管分别从山梨酸、苯甲酸的储备液中，各移取0.5ml，于10ml的容量瓶中，配制山梨酸、苯甲酸的混标，丙酮定容至10ml，浓度为100ug/ml。
上机液浓度100ug/ml，进样量为1.0ul,以标准液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，将上机液浓度稀释成40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、100ug/ml绘制标准曲线。
1.5样品的前处理
称取(2.5～5.0)g的样品于50ml的比色管中，加入1ml的6mol/ml的盐酸，起酸化作用。
每次加入约25ml的无水乙醚两次。
振摇提取两次（注意在提取中放气）。
合并两次提取液于另一支备好的50ml的比色管中，加入5ml的氯化钠酸性溶液（盐析）分层，保留有机相，弃去水相，加入无水硫酸钠脱水，将液体移进250ml 的锥形瓶中，采用旋转蒸发仪蒸干，5ml丙酮定容。
0.45um滤膜过滤后，采用气相色谱进行测定。
2结果与分析
2.1色谱图分析
在本实验中，GC-FID方法条件下，通过程序升温，使得山梨酸、苯甲酸的标样得到很好的分离（见图一）。
色谱峰的出峰时间，是一个定性指标，反映了被分析组分与色谱柱固定相发生的相互作用。
由图可见，山梨酸出峰时间比苯甲酸的出峰时间更短，即说明
了，山梨酸在气相色谱中与固定相相互作用的时间更短，是定性的一个重要依据。
色谱峰峰面积的大小系定量分析指标，表示被测组分在样品中含量的高低。
从图中可以看出，山梨酸的峰面积更大，也就是山梨酸的含量越高。
从色谱峰的宽窄而言，山梨酸和苯甲酸的标准色谱峰都很窄，即使用GC-FID法的7890A气相色谱仪的柱效很高。
图一 GC-FID法的山梨酸、苯甲酸的标样图谱
2.2线性关系测定结果
由上机液浓度100ug/ml，稀释成浓度为40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml、100ug/ml,绘制标准曲线，有着良好的线性关系，并且可以得知标准曲线的回归方程(表一).根据检测限的计算公式可以算出，山梨酸、苯甲酸的检测限为1.0mg/kg,相关系数为0.999.
表一两种防腐剂的保留时间、线性方程和检出限
防腐剂保留时间线性方程相关系数检出限
(min) (mg/kg)
山梨酸 2.633 A=2.03C+1.38 0.9995 1.0
苯甲酸 3.742 A=3.61C+2.02 0.9992 1.0
2、3 加标回收实验
回收率即在没有被测物质的空白样品基质中，加入定量的标准物质，按样
品的处理步骤进行，所得的结果与理论值的比值。
相对标准偏差（RSD）又称变
异系数(CV)，表示单次测定标准偏差对测定平均值相对偏差，用百分率表示。
在样品中加入0.05、0.1、0.2mg/kg浓度的山梨酸、苯甲酸的标准物质，
按事先的样品前处理步骤，GC-FID法得到的回收率及相对偏差，如表二
表二气相色谱法测定样品中的加标回收率及精密度
加标量平均回收率相对标准偏差
（mg/kg）（%）（%）
0.05 83.5 5.9 0.1 82.7 6.3
0.2 86.3 6.1
由表二可以看出，GC-FID法测定出的样品收回率都在82.4%～92%，相对
标准偏差6.1%，收回率高，方法可靠，适合实验室分析。
3 小结
随着人们生活水平的提高，人们更加提倡的是“回归自然，享受绿色与
健康”,化学合成品越来越受到排斥。
苯甲酸，因其毒性较大，对人体伤害较大，
不宜继续发展。
而山梨酸及其钠盐、钾盐能抑制细菌、霉菌、酵母菌的生长，且
效果显著，对食品风味无不良影响，能参与人体新陈代谢，生理安全性高，应加快应用领域的拓展。
本文采取的是用气相色谱测定食品中的山梨酸、苯甲酸，方法准确可靠，重现性好，回收率较高，检出限较低，可用于食品中山梨酸、苯甲酸含量分析的推广。
参考文献：
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