昆虫杆状病毒载体研究

昆虫杆状病毒表达载体系统的应用与展望作者：宋姗姗来源：《中国科技纵横》2017年第22期摘要：昆虫杆状病毒表达载体系统具有生物安全性高、能容纳较大外源基因片段并实现多基因共表达、有完备的翻译后加工修饰系统等特点，因而得到广泛的应用。

近年来，随着重组杆状病毒构建技术、昆虫细胞培养技术的不断发展和改进，加大了昆虫杆状病毒表达载体系统在疫苗制备、治疗性抗体、药物研发和基因治疗中的应用力度。

本文综述了杆状病毒表达载体的研究现状和应用范围，讨论了目前杆状病毒表达载体重组蛋白易降解的问题。

随着科技的进步，对杆状病毒载体的研究与优化会更加深入，昆虫杆状病毒表达载体系统的应用研究尤为重要。

关键词：杆状病毒；疫苗；治疗性抗体；基因治疗中图分类号：Q789 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）22-0209-01昆虫杆状病毒表达载体系统（Baculovirus expression vector system，BEVS）是当今基因工程四大表达系统之一，具有生物安全性高、能容纳较大外源基因片段、可实现多基因共表达、具有完备的翻译后加工修饰系统、无内毒素污染等优点[1-3]。

同时，由于宿主细胞系的建立和优化、细胞培养基成分的不断改进，使得细胞生存率达到95%，基本可实现大规模培养[1]。

因此，昆虫杆状病毒表达系统越来越广泛的应用于疫苗制备、药物研发、农林牧渔等领域。

1 昆虫杆状病毒表达载体系统的研究进展Kitts等在1990年提出了线性技术，并设计了重组-救活方法，提高了杆状病毒基因组同源重组能力，将其设计的BacPAK6的重组效率提到80%以上，有较强的应用价值[4]。

但由于DNA酶切消化效率影响，重组病毒的获得仍需通过噬斑纯化过程。

Bac-to-Bac技术的出现避免了噬斑纯化步骤，缩短了重组杆状病毒的周期，同时，此方法在大肠杆菌中进行，非常便捷，不需要空斑纯化，较为节省时间。

但由于鳞翅目昆虫细胞系缺乏功能性糖基转移酶和唾液酸生物合成与利用途径，其产生的糖基化修饰缺乏末端唾液酸化，影响糖蛋白的整体性质，因此研究人员设计出转基因昆虫细胞系，使昆虫细胞对重组蛋白的糖基化修饰更加接近哺乳动物细胞，更利于昆虫杆状病毒表达载体系统的研究。

昆虫杆状病毒表达系统研究进展昆虫杆状病毒表达系统研究进展摘要：昆虫杆状病毒表达载体系统具有安全性好、重组蛋白表达量高、能同时表达多个基因、重组蛋白翻译后加工完整等特点，因而得到了广泛的应用。

随着重组杆状病毒构建技术的不断发展，昆虫杆状病毒表达载体系统的操作在逐渐简化，重组杆状病毒获得的效率也在不断提高。

昆虫细胞培养技术的改进和转基因昆虫细胞系的发展，进一步推动了昆虫杆状病毒表达载体系统在商品化药物、治疗性抗体、生物农药研发和基因治疗中的应用。

尽管仍存在着重组蛋白降解的问题，但随着分子生物学技术的发展，对杆状病毒载体的研究与改造也会更加深入，未来昆虫杆状病毒表达载体系统的应用将更为广泛。

关键词：杆状病毒；多角体启动子；转基因昆虫细胞系；疫苗；治疗性抗体。

前言作为当今基因工程四大表达系统之一，昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(Insect cell baculovirus ex． pression vector system，IC-BEVS)的应用变得越来越广泛。

它不仅具有真核表达系统所具有的传统优势，同时兼具原核表达系统重组蛋白表达量高的特点，且能同时在一个载体上表达多种蛋白。

由于昆虫细胞易于悬浮培养，细胞培养基的改进也使得悬浮培养的细胞活率不断提高，最终得以实现昆虫细胞的大规模培养，这使得其在商业领域如生物医药、农业、疫苗研发等方面均获得了广泛的应用[1]。

1 杆状病毒的分类与分子生物学杆状病毒属于杆状病毒科(Baculoviridae)，分为核多角体病毒属和颗粒体病毒属，病毒粒子呈杆状，是一类专一性感染节肢动物并具有囊膜的DNA病毒。

基因组DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90～180 kb之间。

杆状病毒基因组可在昆虫细胞核复制和转录，DNA复制后组装在杆状病毒的核衣壳内，因其具有较大的柔韧性，可容纳较大片段的外源DNA插入而成为表达大片段DNA的理想载体。

其中，目前用作外源基因表达载体的杆状病毒主要为核型多角体病毒(Nuclear polyhedrosis virus，NPV)。

河南农业科学ꎬ２０１８ꎬ４７(９):１￣７ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｄｏｉ:１０.１５９３３/ｊ.ｃｎｋｉ.１００４￣３２６８.２０１８.０９.００１收稿日期:２０１８－０３－２９基金项目:国家自然科学基金项目(３１５７０１５１ꎬ３１２７２０９４)ꎻ河南省高校科技创新人才支持计划项目(１７ＨＡＳＴＩＴ０３９)ꎻ河南省高等学校重点科研项目(１５Ａ２１００３９)作者简介:梁振普(１９７６－)ꎬ男ꎬ河南濮阳人ꎬ副教授ꎬ博士ꎬ主要从事病毒分子生物学研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｌｚｐｂｉｏ＠１２６.ｃｏｍ∗通讯作者:张小霞(１９７３－)ꎬ女ꎬ河南济源人ꎬ教授ꎬ博士ꎬ主要从事病毒分子生物学研究ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｌｚｐｚｘｘ＠１２６.ｃｏｍ昆虫杆状病毒基因组学研究进展梁振普ꎬ刘雅静ꎬ张小霞∗ꎬ李鹏娟ꎬ王㊀亮ꎬ张俊庆(河南农业大学生命科学学院ꎬ河南郑州４５０００２)摘要:杆状病毒(Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ)是一类在自然界中专一性感染节肢动物的共价闭合双链环状ＤＮＡ病原微生物ꎮ由于杆状病毒的宿主特异性高ꎬ其作为无公害生物杀虫剂在生物防治方面发挥重大作用ꎮ此外ꎬ杆状病毒已被开发成为高效的真核表达载体ꎬ广泛应用于药物研发㊁疫苗生产等领域ꎬ并作为基因治疗载体用于疾病的基因治疗ꎮ综述了获得全基因组序列的昆虫杆状病毒类别及其序列特征ꎬ以及昆虫杆状病毒基因组中的主要功能基因ꎬ包括ＲＮＡ转录相关基因㊁ＤＮＡ复制相关基因㊁结构蛋白基因等ꎬ也对其应用做了较为详尽的阐述ꎮ关键词:昆虫杆状病毒ꎻ基因组学ꎻ功能基因ꎻ应用中图分类号:Ｓ４７６.１３㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀文章编号:１００４－３２６８(２０１８)０９－０００１－０７ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＧｅｎｏｍｉｃｓＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＩｎｓｅｃｔＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＬＩＡＮＧＺｈｅｎｐｕꎬＬＩＵＹａｊｉｎｇꎬＺＨＡＮＧＸｉａｏｘｉａ∗ꎬＬＩＰｅｎｇｊｕａｎꎬＷＡＮＧＬｉａｎｇꎬＺＨＡＮＧＪｕｎｑｉｎｇ(ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＺｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｉｓａｋｉｎｄｏｆｃｏｖａｌｅｎｔｌｙｃｌｏｓｅｄｄｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｅｄｃｉｒｃｕｌａｒＤＮＡｉｎｓｅｃｔｖｉｒｕｓ.Ｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｈｏｓｔｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓꎬｉｔｐｌａｙｓａｍａｊｏｒｒｏｌｅｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｔｒｏｌａｓａｐｏｌｌｕｔｉｏｎ￣ｆｒｅｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ.Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎꎬｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｈａｓｂｅｅｎｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｓａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｓｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｄｒｕｇｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔꎬｖａｃｃｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｓｏｏｎꎬｍｅａｎｗｈｉｌｅｕｓｅｄｉｎｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｄｉｓ￣ｅａｓｅａｓａｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｖｅｃｔｏｒ.Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｒｅｖｉｅｗｓｒｅｃｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃｓｏｆｉｎｓｅｃｔｂａｃｕ￣ｌｏｖｉｒｕｓꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇｉｔｓｓｅｑｕｅｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｍａｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓｓｕｃｈａｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓꎬＤＮＡｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓꎬａｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓꎬａｎｄａｌｓｏｇｉｖｅｓａｄｅｔａｉｌｅｄｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓꎻＧｅｎｏｍｉｃｓꎻＦｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｓꎻＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ㊀㊀杆状病毒属于杆状病毒科(Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ)ꎬ是一类寄生于节肢动物(Ａｒｔｈｒｏｐｏｄａ)的专一性病原微生物ꎬ其宿主主要是鳞翅目(Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ)㊁膜翅目(Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａ)和双翅目(Ｄｉｐｔｅｒａ)的昆虫ꎮ已经完成测序的基因组大小为８０~１８０ｋｂ不等ꎬ编码８９~１８１个开放阅读框(ＯＲＦ)[１]ꎬ被包裹在长度为２３０~３８５ｎｍ㊁直径为４０~６０ｎｍ的杆状核衣壳中[２￣３]ꎮ目前已从８００多种昆虫中分离鉴定出６００多种杆状病毒[４]ꎮ杆状病毒在其复杂的复制周期中产生２种不同类型的病毒粒子:出芽型病毒(ＢｕｄｄｅｄｖｉｒｕｓꎬＢＶ)和包涵体型病毒(Ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ￣ｄｅｒｉｖｅｄｖｉｒｕｓꎬＯＤＶ)[５]ꎮ２种病毒粒子在病毒感染过程中的作用存在明显差异ꎬＢＶ是杆状病毒在昆虫体内传播或在培养细胞中传播所必需的ꎬ而ＯＤＶ在杆状病毒经口感染宿主过程中发挥重要作用[６]ꎮ杆状病毒可根据包涵体的形态特征分为２类:多角体病毒(Ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏ￣ｖｉｒｕｓꎬＮＰＶ)和颗粒体病毒(ＧｒａｎｕｌｏｖｉｒｕｓꎬＧＶ)[７]ꎮＮＰＶ和ＧＶ形态存在明显差异ꎬＮＰＶ包涵体包埋多个病毒粒子ꎬ呈不规则多角体形状ꎬ而ＧＶ仅仅包埋１个病毒粒子ꎬ呈圆形或卵圆形ꎮ其中ꎬＮＰＶ根据病河南农业科学第４７卷毒粒子囊膜内核衣壳的数目又划分为单粒包埋型核型多角体病毒(ＳＮＰＶ)和多粒包埋型核型多角体病毒(ＭＮＰＶ)ꎮ感染鳞翅目昆虫的ＮＰＶ又根据ＢＶ中是否含有ＧＰ６４蛋白分为２类:ＧｒｏｕｐⅠ和ＧｒｏｕｐⅡ[８]ꎮＧｒｏｕｐⅠ的ＮＰＶ利用ＧＰ６４作为ＢＶ的融合蛋白ꎬ而ＧｒｏｕｐⅡ的ＮＰＶ由于缺少ｇｐ６４基因ꎬ由Ｆ蛋白代替作为ＢＶ的融合蛋白ꎮ２００６年Ｊｅｈｌｅ等[９]基于基因组特征将杆状病毒分为４个属:α杆状病毒属(Ａｌｐｈａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓꎬ感染鳞翅目昆虫的ＮＰＶ)㊁β杆状病毒属(Ｂｅｔａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓꎬ感染鳞翅目昆虫的ＧＶ)㊁γ杆状病毒属(Ｇａｍｍａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓꎬ感染膜翅目昆虫的ＮＰＶ)㊁δ杆状病毒属(Ｄｅｌｔａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓꎬ感染双翅目昆虫的ＮＰＶ)ꎮ杆状病毒杀虫剂与传统农药相比ꎬ有着宿主专一性强㊁环境兼容性好㊁对人畜无害㊁同时在环境中存活时间长等优势ꎬ是未来农药理想的发展方向[１０]ꎮ除了在生物农药中的应用ꎬ昆虫杆状病毒表达系统已经被广泛应用于外源基因的表达ꎬ相对于原核表达系统和真核表达系统具有产物后加工好㊁成本低廉等优点ꎬ因而广泛应用于商业领域如生物医药㊁疫苗研发等方面ꎮ杆状病毒除了以上２个方面的应用ꎬ还可以应用于哺乳动物基因转移载体㊁表面展示系统以及病毒样颗粒疫苗制备ꎮ鉴于此ꎬ综述了杆状病毒基因组学研究进展ꎬ以促进对杆状病毒结构和功能的了解ꎬ为更好地开发和利用杆状病毒提供借鉴ꎮ１㊀杆状病毒基因组１.１㊀基因组特征自从１９９４年Ａｙｒｅｓ等[１１]报道苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅ￣ｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓꎬＡｃＭＮＰＶ)Ｃ６株的全基因组序列以来ꎬ随着分子生物学技术手段的飞速发展ꎬ已有７３种杆状病毒全基因组被测定ꎬ包括４５种α杆状病毒㊁２２种β杆状病毒㊁１种δ杆状病毒㊁３种γ杆状病毒和２种未分类病毒(表１)ꎮ通过对不同杆状病毒基因组比较发现ꎬ其基因组大小介于８０~１８０ｋｂꎬＧ＋Ｃ含量在２９％~５８％ꎬ全长大于５０个氨基酸的ＯＲＦ有８９~１８１个ꎮ这些ＯＲＦ几乎均匀地分布在基因组ＤＮＡ的２条链上ꎬ转录方向没有偏好性ꎬ基因之间的基因间序列非常短ꎬ甚至基因之间有重叠ꎮ非编码区占１０％左右ꎬ主要由基因启动子序列㊁基因上游或下游非编码区和同源重复区(Ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｒｅｇｉｏｎｓꎬｈｒｓ)组成ꎮ表１㊀ＧｅｎＢａｎｋ数据库中已注册的杆状病毒基因组信息病毒属病毒ＧｅｎＢａｎｋ登录号大小/ｂｐＯＲＦ数量/个Ｇ＋Ｃ含量/％年份ＡｌｐｈａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＡｄｈｏＮＰＶＮＣ＿００４６９０１１３２２０１２５３５.６２００３ＡｄｏｒＮＰＶＮＣ＿０１１４２３１１１７２４１２１３５.０２００８ＡｇｉｐＮＰＶＮＣ＿０１１３４５１５５１２２１６３４８.６２００８ＡｇｓｅＮＰＶ－ＡＮＣ＿００７９２１１４７５４４１５３４５.７２００６ＡｇｓｅＮＰＶ－ＢＮＣ＿０２５９６０１４８９８１１５０４５.６２０１４ＡｎｐｅＮＰＶＮＣ＿００８０３５１２６６２９１４７５３.４２００６ＡｇＭＮＰＶ－３７ＮＣ＿０３１７６１１３１８５５１５６４４.５２０１６ＡｇＭＮＰＶ－２ＤＮＣ＿００８５２０１３２２３９１５８４４.５２０１５ＡｐｃｉＮＰＶＮＣ＿０１８５０４１２３８７６１１７３３.４２０１２ＡｃＭＮＰＶＮＣ＿００１６２３１３３８９４１５４４０.７１９９４ＢｍＮＰＶＮＣ＿００１９６２１２８４１３１３６４０.４１９９６ＢｕｓｕＮＰＶＮＣ＿０２３４４２１２０４２０１２７３６.８２０１４ＣａｐｏＮＰＶＮＣ＿０３０２４０１２８０５８１３０３９.７２０１６ＣｈｆｕＤＥＦＭＮＰＶＮＣ＿００５１３７１３１１６０１４９４５.８２００３ＣｈｆｕＭＮＰＶＮＣ＿００４７７８１２９５９３１４６５０.１２００３ＣｈｍｕＮＰＶＮＣ＿０２３１７７１２４６８８１４８５０.０２０１４ＣｈｒｏＮＰＶＮＣ＿０２１９２４１２９０５２１４９４８.６２０１３ＣｈｃｈＮＰＶＮＣ＿００７１５１１４９６２２１５１３９.１２００５ＣｌｂｉＮＰＶＮＣ＿００８２９３１３５４５４１３９３７.７２００６ＣｏｖｅＭＮＰＶＮＣ＿０２６４３０１２５７６７１３８４２.９２０１５ＥｃｏｂＮＰＶＮＣ＿００８５８６１３１２０４１２６３７.６２００６ＥｐｐｏＮＰＶＮＣ＿００３０８３１１８５８４１３６４０.７２００１ＥｕｐｓＮＰＶＮＣ＿０１２６３９１４１２９１１３９４０.４２００９ＨｅａｒＮＰＶＮＣ＿００３０９４１３０７５９１３７３８.９２００１ＨｅｓｐＮＰＶＮＣ＿０２１９２３１４０６３３１３７３８.１２０１３ＨｙｃｕＮＰＶＮＣ＿００７７６７１３２９５９１４８４５.１２００６２㊀第９期梁振普等:昆虫杆状病毒基因组学研究进展续表１㊀ＧｅｎＢａｎｋ数据库中已注册的杆状病毒基因组信息病毒属病毒ＧｅｎＢａｎｋ登录号大小/ｂｐＯＲＦ数量/个Ｇ＋Ｃ含量/％年份ＬａｆｉＮＰＶＮＣ＿０２６９２２１５７９８９１３５４３.７２０１５ＬｅｓｅＮＰＶＮＣ＿００８３４８１６８０４１１４９４８.６２００６ＬｙｄｉＭＮＰＶＮＣ＿００１９７３１６１０４６１６３５７.５１９９８ＬｙｘｙＭＮＰＶＮＣ＿０１３９５３１５６３４４１５７５３.４２０１０ＭｂＭＮＰＶＮＣ＿０２３６８１１５２７１０１５９３９.９２０１４ＭａｃｏＮＰＶ－ＡＮＣ＿００３５２９１５５０６０１６９４１.７１９９７ＭａｃｏＮＰＶ－ＢＮＣ＿００４１１７１５８４８２１６８４０.０２００２ＭａｖｉＭＮＰＶＮＣ＿００８７２５１１１９５３１２６３８.６２００６ＯｒｌｅＮＰＶＮＣ＿０１０２７６１５６１７９１３５３９.９２００８ＯｒｐｓＭＮＰＶＮＣ＿００１８７５１３１９９５１５２５５.１１９９７ＰｅｓｐＮＰＶＮＣ＿０２４６２５１５１１１０１３８５３.３２０１４ＰｓｉｎＳＮＰＶＮＣ＿０２６２６８１３９１３２１４１３９.３２０１５ＳｐｅｘＭＮＰＶＮＣ＿００２１６９１３５６１１１３９４３.７１９９９ＳｐｆｒＭＮＰＶＮＣ＿００９０１１１３１３３０１４３４０.２２００７ＳｐｌｉＮＰＶＮＣ＿００３１０２１３９３４２１４１４２.７２００１ＳｐｌｉＮＰＶ－ⅡＮＣ＿０１１６１６１４８６３４１４７４５.０２００８ＳｕｊｕＮＰＶＮＣ＿０２８６３６１３５９５２１３１３８.７２０１５ＴｈｏｒＮＰＶＮＣ＿０１９９４５１３２９７８１４５３７.９２０１３ＴｒｎｉＳＮＰＶＮＣ＿００７３８３１３４３９４１４５３９.０２００５ＢｅｔａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＡｄｏｒＧＶＮＣ＿００５０３８９９６５７１１９３４.５２００３ＡｇｓｅＧＶＮＣ＿００５８３９１３１６８０１３２３７.２２００４ＣｈｏｃＧＶＮＣ＿００８１６８１０４７１０１１６３２.７２００６ＣｌａｎＧＶＮＣ＿０１５３９８１０１４８７１２３４４.４２０１１ＣａＬＧＶＮＣ＿０２２６４６１０１８１８１２２４６.７２０１３ＣｎｍｅＧＶＮＣ＿０２９３０４１１１２４６１１８３５.２２０１６ＣｒｌｅＧＶＮＣ＿００５０６８１１０９０７１２９３２.４２００３ＣｙｐｏＧＶＮＣ＿００２８１６１２３５００１４３４３.２２００１ＤｉｓａＧＶＮＣ＿０２８４９１９８３９２１２５２９.７２０１５ＥｐａｐＧＶＮＣ＿０１８８７５１１９０８２１３２４１.５２０１２ＥｒｅｌＧＶＮＣ＿０２５２５７１０２７５９１３０３８.７２０１４ＨｅａｒＧＶＮＣ＿０１０２４０１６９７９４１７９４０.８２００８ＭｏｓｐＧＶＮＣ＿０２９９９６１３４２７２１４４３８.３２０１６ＭｙｕｎＧＶＮＣ＿０３３７８０１４４５１０１５３４９.９２０１７ＰｈｏｐＧＶＮＣ＿００４０６２１１９２１７１３０３５.７２００２ＰｉｒａＧＶＮＣ＿０１３７９７１０８５９２１２０３３.２２０１０ＰｌｉｎＧＶＮＣ＿０３２２５５１１２５３６１２３４４.２２０１６ＰｌｘｙＧＶＮＣ＿００２５９３１００９９９１２０４０.７２０００ＰｓｕｎＧＶＮＣ＿０１３７７２１７６６７７１８３３９.８２０１０ＳｐｆｒＧＶＮＣ＿０２６５１１１４０９１３１４６４６.２２０１５ＳｐｌｉＧＶＮＣ＿００９５０３１２４１２１１３６３８.８２００７ＸｅｃｎＧＶＮＣ＿００２３３１１７８７３３１８１４０.７２０００ＤｅｌｔａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＣｕｎｉＮＰＶＮＣ＿００３０８４１０８２５２１０９５０.９２００１ＧａｍｍａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＮｅａｂＮＰＶＮＣ＿００８２５２８４２６４９３３３.５２００６ＮｅｌｅＮＰＶＮＣ＿００５９０６８１７５５９３３３.３２００４ＮｅｓｅＮＰＶＮＣ＿００５９０５８６４６２９０３３.７２００４ＵｎｃｌａｓｓｉｆｉｅｄＰｅｌｕＳＮＰＶＮＣ＿０２７９２３１３２８３１１４５３９.６２０１５ＢａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅＵｒｐｒＮＰＶＮＣ＿０２９９９７１０５６６７１２４３４.８２０１６㊀注:所有数据均来自ｈｔｔｐｓ://ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/ｇｅｎｏｍｅｓ/ＧｅｎｏｍｅｓＧｒｏｕｐ.ｃｇｉ?ｔａｘｉｄ＝１０４４２ꎮ１.２㊀核心基因尽管不同种杆状病毒基因组存在基因组成的多样性ꎬ但研究发现ꎬ有１套相对保守的基因存在于目前已测序的杆状病毒基因组中ꎮ２０１２年Ｇａｒａｖａｇｌｉａ等[１２]研究发现３７个杆状病毒核心基因ꎮ２０１７年Ｊａｖｅｄ等[１３]报道了第３８个核心基因ｐｉｆ７(ａｃ１１０)ꎮ目前ꎬ杆状病毒的核心基因数目为３８个ꎬ具体分类和名称见表２ꎮ按照核心基因的功能可以分为五大类:复制ꎬ转录ꎬ包装㊁装配和释放ꎬ口服感染ꎬ与宿主细胞相互作用ꎮ在核心基因编码产物中ꎬ大约１/２是参与衣壳和ＯＤＶ囊膜组成以及感染幼虫所必须３河南农业科学第４７卷的蛋白质ꎮ其他大部分参与ＤＮＡ的复制或加工ꎬ或者与晚期或极晚期转录有关ꎮ这些核心基因因其重要性在长期进化中得以保留ꎬ并成为杆状病毒的重要标志[１４]ꎮ随着研究的深入也许会发现更多的核心基因ꎬ因为病毒许多共有的基因在进化过程中发生了突变而没有被分析出来ꎮ表２㊀杆状病毒核心基因及分类基因功能㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀核心基因复制ｌｅｆ－２(Ａｃ６)㊁ｌｅｆ－１(Ａｃ１４)㊁ｄｎａ－ｐｏｌ(Ａｃ６５)㊁ｈｅｌｉ￣ｃａｓｅ(Ａｃ９５)转录ｐ４７(Ａｃ４０)㊁ｌｅｆ－８(Ａｃ５０)㊁ｌｅｆ－９(Ａｃ６２)㊁ｌｅｆ－４(Ａｃ９０)㊁ｌｅｆ－５(Ａｃ９９)口服感染ｐｉｆ－０/Ｐ７４(Ａｃ１３８)㊁ｐｉｆ－１(Ａｃ１１９)㊁ｐｉｆ－２(Ａｃ２２)㊁ｐｉｆ－３(Ａｃ１１５)㊁ｐｉｆ－４(Ａｃ９６)㊁ｐｉｆ－５(Ａｃ１４８)㊁ｐｉｆ－６(Ａｃ６８)㊁ｐｉｆ７(ａｃ１１０)包装㊁装配和释放Ａｃ５３㊁ｖｐ１０５４(Ａｃ５４)㊁Ａｃ６６㊁ｖｌｆ－１(Ａｃ７７)㊁Ａｃ７８㊁ｇｐ４１(Ａｃ８０)㊁ｖｐ９１/ｐ９５(Ａｃ８３)㊁ｖｐ３９(Ａｃ８９)㊁ｐ３３(Ａｃ９２)㊁Ａｃ９３㊁ｐ２５(Ａｃ９４)㊁３８ｋ(Ａｃ９８)㊁ｐ６.９(Ａｃ１００)㊁ｂｖ/ｏｄｖ－ｃ４２(Ａｃ１０１)㊁ｐ４５(Ａｃ１０３)㊁ｏｄｖ－ｅｃ４３(Ａｃ１０９)㊁ａｌｋ－ｅｘｏ(Ａｃ１３３)㊁ｐ４９(Ａｃ１４２)㊁ｏｄｖ－ｅ１８(Ａｃ１４３)与宿主相互作用Ａｃ８１㊁ｏｄｖ－ｅｖ２７(Ａｃ１４４)２㊀杆状病毒功能基因组学２.１㊀ＲＮＡ转录相关基因杆状病毒基因组的转录表达是按时序进行的ꎮ根据杆状病毒基因在病毒复制过程中的表达时间可分为极早期㊁早期㊁晚期和极晚期[１５]ꎮ早期基因的合成依赖宿主ＲＮＡ聚合酶Ⅱ识别和转录ꎬ而晚期基因则是病毒编码的ＲＮＡ聚合酶转录[１６]ꎮ转录活化因子ＩＥ－１与杆状病毒基因组中的ｈｒｓ相互作用形成二聚体ꎬ该二聚体可与宿主的转录系统相互作用从而促进早期基因的转录ꎮ杆状病毒晚期基因利用的ＲＮＡ聚合酶ꎬ由４个转录晚期和极晚期基因的亚基构成(ＬＥＦ－４㊁ＬＥＦ－８㊁ＬＥＦ－９和Ｐ４７)[１６]ꎮＬＥＦ－４是一种参与ＲＮＡ加帽的酶ꎮ在ＬＥＦ－８的Ｃ端发现很多物种ＲＮＡ聚合酶的保守基序ꎬ它编码ＲＮＡ聚合酶的催化位点[１７]ꎮＬＥＦ－９存在与ＲＮＡ聚合酶β亚基同源的基序ꎬ编码酶活化中心Ｍｇ２＋结合位点[１８]ꎮＰ４７是ＲＮＡ聚合酶中较小的亚基ꎬ与其他ＲＮＡ聚合酶没有同源性[１９]ꎮＬＥＦ－５和ＶＬＦ－１也和晚期基因的转录相关ꎮ研究发现ꎬＬＥＦ－５可与自身相互作用且Ｃ端含有一段与ＲＮＡ聚合酶Ⅱ延长因子ＴＦＩＩＳ类似的结构域ꎮ通过对ＬＥＦ－５进行纯化分析表明ꎬＬＥＦ－５的功能是起始转录ꎬ而非延伸因子[２０]ꎮＶＬＦ－１与多角体蛋白和Ｐ１０的转录相关ꎮＶＬＦ－１与多角体和Ｐ１０基因启动子下游的 爆发序列 结合引发它们的大量表达[２１]ꎮ其他与晚期基因表达有关的基因为ｌｅｆ－６㊁ｌｅｆ－１０㊁ｌｅｆ－１２和３９ｋꎮ此外ꎬ甲基转移酶(Ａｃ６９)㊁ＡＤＰ－核糖焦磷酸水解酶㊁ＬＥＦ－２和ＰＫ１也可能参与了晚期基因的表达ꎮ２.２㊀ＤＮＡ复制相关基因病毒ＤＮＡ复制相关基因在病毒生命周期中起着关键的作用ꎮ杆状病毒ＤＮＡ的复制是由顺式作用元件㊁反式作用因子及其宿主细胞提供的复制因子共同作用而完成的ꎮ顺式作用元件是指病毒ＤＮＡ复制起点ꎬ它包括同源重复序列和非同源重复序列２类ꎮ反式作用因子是病毒表达产物ꎬ该产物是病毒ＤＮＡ复制所必需的ꎮ瞬时复制试验证明ꎬｄｎａ－ｐｏｌ㊁ｈｅｌｉｃａｓｅ(ｐ１４３)㊁ｉｅ－１㊁ｌｅｆ－１㊁ｌｅｆ－２和ｌｅｆ－３是ＤＮＡ复制的必需基因ꎮＩＥ－１是一种多功能调节蛋白ꎬ它能够反式激活多个早期基因和晚期基因的启动子ꎬ且其酸性激活区是病毒ＤＮＡ复制所必需的[２２]ꎮＬＥＦ－１具有ＤＮＡ引物酶活性ꎬ可与ＬＥＦ－２相互作用[２３]ꎮＬＥＦ－２是一种ＤＮＡ引物酶协助因子ꎬ也是ＤＮＡ复制所必需的[２４]ꎮＬＥＦ－３是一种单链结合蛋白(ＳＳＢ)ꎬ也可运送病毒ＤＮＡ解旋酶进入宿主细胞核中[２５]ꎮＰ１４３是病毒编码的ＤＮＡ解旋酶ꎬ具有ＡＴＰ酶和解旋酶的活性ꎮｄｎａ－ｐｏｌ编码了病毒的ＤＮＡ聚合酶ꎬ具有３ᶄ ５ᶄ外切核酸酶活性ꎮＰ３５㊁ＩＥ－２㊁ＰＥ３８㊁ＬＥＦ－７㊁ＶＬＦ－１作为激活因子刺激病毒ＤＮＡ的复制ꎮＡＮ具有５ᶄ ３ᶄ核酸外切酶和核酸内切酶的活性ꎬ参与ＤＮＡ的重组[２６]ꎮ２.３㊀主要结构蛋白基因将杆状病毒ＤＮＡ转染至相应细胞可以正常产生有感染性的子代病毒ꎬ病毒的复制和增殖并不受影响ꎮ因此ꎬ推测病毒结构蛋白对早期基因转录和病毒ＤＮＡ复制并不是必需的[２７]ꎮ杆状病毒结构蛋白组成的复杂结构相当于一个将病毒基因组转入宿主细胞中的运载系统ꎬ是通过对宿主昆虫的长期适应进化演变而成的ꎮ有些结构蛋白还具有其他酶活性ꎬ能够促进和帮助病毒在细胞内的复制ꎮ杆状病毒产生的２种不同类型的病毒粒子ＢＶ和ＯＤＶꎬ具有相同的核衣壳结构但囊膜组分不同(图１)ꎮ表３详细列出了杆状病毒的主要结构蛋白基因ꎬ其主要编码包涵体蛋白㊁ＢＶ和ＯＤＶ的囊膜蛋白及核衣壳相关蛋白组分ꎬ其中后者大部分是ＢＶ和ＯＤＶ共有的ꎮ４㊀第９期梁振普等:昆虫杆状病毒基因组学研究进展图１㊀ＢＶ和ＯＤＶ的结构与主要蛋白质构成表３㊀杆状病毒的主要结构蛋白基因蛋白质分类基因名称敲除后的影响包涵体蛋白ｐｏｌｙｈｅｄｒｉｎ可稳定存在ｐｅ可稳定存在ｅｎｈａｎｃｉｎ可稳定存在Ｐ１０可稳定存在ａｌｋａｌｉｎｅｐｒｏｔｅａｓｅｓＢＶ囊膜蛋白ｇｐ６４无法稳定存在Ｆ－Ｐｒｏｔｅｉｎ可稳定存在ꎬ但杀死幼虫的时间延长Ｖ－ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ可稳定存在ꎬ但ＢＶ产量减少ｅ２６可稳定存在ＯＤＶ囊膜蛋白ｅ２６可稳定存在ｅ２５无法稳定存在ｅｃ４３无法稳定存在ｅ１８无法稳定存在ｅ６６可稳定存在ｖｐ９１可稳定存在ａｃ１４５可稳定存在ꎬ但经口感染能力降低ｐ７４可稳定存在ꎬ没有经口感染能力ｐｉｆ－１可稳定存在ꎬ没有经口感染能力ｐｉｆ－２可稳定存在ꎬ没有经口感染能力ｐｉｆ－３可稳定存在ꎬ没有经口感染能力ｐｉｆ－４可稳定存在ꎬ没有经口感染能力ｐｉｆ－５可稳定存在ꎬ没有经口感染能力ｐｉｆ－６可稳定存在ꎬ没有经口感染能力核衣壳相关蛋白ｐ６.９无法稳定存在ｖｐ３９无法稳定存在ｇｐ４１无法稳定存在３８ｋ无法稳定存在ｐ４９无法稳定存在ｅｃ２７无法稳定存在ａｃ６６受到严重影响ｐ３３无法稳定存在ｖｐ１０５４无法稳定存在ｖｌｆ－１无法稳定存在ｖｐ８０无法稳定存在ｐｐ７８/８３无法稳定存在ｐ２４可稳定存在３㊀杆状病毒的应用杆状病毒的分子生物学研究促进了对病毒组装及感染周期的认识ꎬ具有重要的理论意义ꎬ同时也具有重要的实践意义ꎮ目前ꎬ杆状病毒已广泛用作生物杀虫剂和外源蛋白表达载体ꎮ此外ꎬ杆状病毒作为基因治疗载体也越来越受到重视ꎮ３.１㊀杀虫剂昆虫杆状病毒杀虫剂的研究始于１９世纪ꎮ目前ꎬ已在２０多个国家登记㊁生产和应用了近４０种病毒杀虫剂[２８]ꎮ野生型杆状病毒杀虫剂具有对人畜和天敌无害㊁宿主特异性高㊁无化学残留㊁对环境安全㊁可自然传播等优点ꎮ然而ꎬ杆状病毒的杀虫速度慢㊁杀虫谱窄等缺点限制了其推广ꎮ为了克服杆状病毒的缺点ꎬ科学家开始尝试用各种分子生物学手段进行改造以获得重组杆状病毒ꎮ近年来ꎬ该方面的研究主要集中在以下几个方面:(１)缺失内源基因增加杀虫效果ꎮ如将ＡｃＭＮＰＶ中的ｅｇｔ基因缺失ꎬ重组病毒会减少昆虫的摄食ꎬ从而提高感染昆虫的死亡率[２９]ꎮ(２)插入外源基因提高杀虫速度㊁降低害虫对病毒的抗性ꎮ如插入昆虫专性神经毒素基因㊁昆虫保幼激素酯酶基因㊁增效蛋白基因㊁蛋白酶基因㊁利尿激素基因等构建的重组病毒ꎬ大大缩短了害虫的发病时间ꎮ(３)内源基因过量表达ꎮ如过量表达ｖｆｇｆ基因的重组ＡｃＭＮＰＶ明显加速了寄主死亡[３０]ꎮ(４)对宿主范围基因操作来拓宽杆状病毒宿主域ꎮ如将源自舞毒蛾核型多角体病毒(Ｌｙｍａｎｔ￣ｒｉａｄｉｓｐａｒｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓꎬＬｄＭＮＰＶ)的ｈｒｆ－１基因插入ＡｃＭＮＰＶ中ꎬ重组ＡｃＭＮＰＶ病毒可以在舞毒蛾细胞中复制[３１]ꎮ随着对重组病毒的深入研究ꎬ克服了杆状病毒的缺点ꎬ也为增强病毒的杀虫功能提供了可能ꎮ３.２㊀表达载体昆虫杆状病毒表达载体系统(Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘ￣ｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍꎬＢＥＶＳ)是基因工程四大表达系统之一ꎬ目前市场上商业化的杆状病毒载体有Ａｃ－Ｂａｃ￣ｍｉｄ(来源于苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒基因组)和Ｂｍ－Ｂａｃｍｉｄ(来源于家蚕核型多角体病毒基因组)[３２￣３３]ꎮ它们在实际应用过程中具有产物表达水平高ꎬ表达产物可进行翻译后加工ꎬ外源蛋白的免疫原性㊁抗原性和功能等生物活性与天然蛋白质相似ꎬ大规模生产基因工程产品成本低等优点ꎮ自１９８３年人们利用该表达系统首次成功表达人干扰素－β后ꎬ相继成功表达了人生长因子㊁人２ꎬ６－唾液酸转移酶㊁人粒－巨噬细胞集落刺激因子和人抗白蛋白免疫蛋白Ｇ１等蛋白[３４￣３７]ꎮ目前ꎬ美国ＦＤＡ(食品和药物管理局)已经授权上市９种ＢＥＶＳ来源的产品ꎬ其中Ｃｅｒｖａｒｉｘ®㊁Ｐｒｏｖｅｎｇｅ®㊁Ｇｌｙｂｅｒａ®和Ｆｌｕｂｌｏｋ®疫苗分别用于预防和治疗子宫颈癌㊁前列腺癌㊁脂蛋白酶缺乏遗传病和流感ꎻＰｏｒｃｉｌｉｓ®Ｐｅｓｔｉ㊁ＢＡＹＯＶＡＣ５河南农业科学第４７卷ＣＳＦＥ２®㊁Ｃｉｒｃｕｍｖｅｎｔ®ＰＣＶ㊁ＩｎｇｅｌｖａｃＣｉｒｃｏＦＬＥＸ®和Ｐｏｒｃｉｌｉｓ®ＰＶＣ主要用于预防猪疫病[３８]ꎮ昆虫杆状病毒表达载体系统可广泛应用于生物学㊁医学㊁农业等不同领域表达蛋白质ꎬ为人类服务ꎮ３.３㊀基因治疗基因治疗是一种通过基因转移载体将外源正常基因导入靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用ꎬ从而达到治疗疾病目的的生物医学技术ꎮ杆状病毒相比于其他病毒转移载体具以下优点:(１)基因容量大ꎬ可容纳１个或多个外源基因ꎮ(２)安全性高ꎮ由于杆状病毒的天然宿主昆虫是节肢动物ꎬ与人及其他哺乳动物的亲缘关系较远ꎬ即使它进入哺乳动物细胞ꎬ其基因组也不能在细胞中复制ꎮ(３)表达蛋白质效率高ꎮ杆状病毒表达载体可同时携带多个启动子ꎬ这些启动子能各自驱动下游基因的高水平表达ꎮ(４)翻译后修饰能力与哺乳动物细胞相似ꎮ因此ꎬ杆状病毒在基因治疗中具有广阔的应用前景ꎬ开辟了杆状病毒应用的新领域ꎮ目前杆状病毒可用于治疗多种疾病ꎬ包括癌症㊁感染性疾病㊁遗传性疾病㊁心血管疾病和自身免疫性疾病等ꎬ其中癌症治疗是该技术的主要研究和应用领域[３９]ꎮ４㊀小结随着生态环保概念深入人心ꎬ昆虫杆状病毒将具有更大的发展前景ꎬ不仅为农林生产提供新的生物农药ꎬ而且为研究宿主功能基因提供重要的基因工程载体[４０]ꎮ杆状病毒作为杀虫剂ꎬ杀虫速度慢和宿主域窄是其缺点ꎬ同时也是其优点ꎮ杀虫速度慢是因为病毒是一种简单生命ꎬ要在虫体内完成其复制周期ꎬ害虫难以对其产生抗性ꎻ正是因为宿主域窄ꎬ所以它们对非靶标生物是安全的ꎮ在应用基础研究上ꎬ可以针对具体情况构建重组型病毒或者添加杀虫增效剂[４１]ꎮ作为表达系统ꎬ其外源蛋白表达量低和蛋白质表达后修饰存在差异ꎬ也可以通过优化表达系统进行完善ꎮ越来越多杆状病毒基因组测序和功能基因研究的完成ꎬ为病毒杀虫剂的开发提供了理论支持ꎬ也为深入了解杆状病毒的侵染机制㊁分子进化和病毒与宿主的特异性互作关系提供重要的理论依据ꎮ参考文献:[１]㊀ｖａｎＯｅｒｓＭＭꎬＶｌａｋＪＭ.Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｉｃｓ[Ｊ].Ｃｕｒ￣ｒｅｎｔＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓꎬ２００７ꎬ８(１０):１０５１￣１０６８. [２]㊀ＡｃｋｅｒｍａｎｎＨＷꎬＳｍｉｒｎｏｆｆＷＡ.Ａｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｉｎｖｅｓｔｉ￣ｇａｔｉｏｎｏｆ２３ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｖｅｒｔｅｂｒａｔｅＰａ￣ｔｈｏｌｏｇｙꎬ１９８３ꎬ４１(３):２６９￣２８０.[３]㊀ＧｒａｎａｄｏｓꎬＲｏｂｅｒｔＲ.Ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｙｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ[Ｍ].ＢｏｃａＲａｔｏｎꎬＦｌａ(ＵＳＡ):ＣＲＣＰｒｅｓｓꎬ１９８６. [４]㊀ＨｅｒｎｉｏｕＥꎬＪｅｈｌｅＪ.Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｐｈｙｌｏｇｅｎｙａｎｄｅｖｏｌｕｔｉｏｎ[Ｊ].ＣｕｒｒｅｎｔＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｓꎬ２００７ꎬ８(１０):１０４３￣１０５０. [５]㊀ＨｏｒｔｏｎＨＭꎬＢｕｒａｎｄＪＰ.Ｓａｔｕｒａｂｌｅａｔｔａｃｈｍｅｎｔｓｉｔｅｓｆｏｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｎ￣ｄｅｒｉｖｅｄｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｏｎｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓａｎｄｅｖｉ￣ｄｅｎｃｅｆｏｒｅｎｔｒｙｖｉａｄｉｒｅｃｔｍｅｍｂｒａｎｅｆｕｓｉｏｎ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９３ꎬ６７(４):１８６０￣１８６８.[６]㊀ＫｅｄｄｉｅＢＡꎬＡｐｏｎｔｅＧＷꎬＶｏｌｋｍａｎＬＥ.Ｔｈｅｐａｔｈｗａｙｏｆｉｎ￣ｆｅｃｔｉｏｎｏｆＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓｉｎａｎｉｎｓｅｃｔｈｏｓｔ[Ｊ].Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ１９８９ꎬ２４３:１７２８￣１７３０. [７]㊀ＳｌａｃｋＪꎬＡｒｉｆＢＭ.Ｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓｏｃｃｌｕｓｉｏｎ￣ｄｅｒｉｖｅｄｖｉ￣ｒｕｓ:Ｖｉｒｉｏｎｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＶｉｒｕｓＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２００７ꎬ６９:９９￣１６５.[８]㊀ＨｅｒｎｉｏｕＥＡꎬＯｌｓｚｅｗｓｋｉＪＡꎬＣｏｒｙＪＳꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｇｅｎｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ[Ｊ].ＡｎｎｕａｌＲｅ￣ｖｉｅｗｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙꎬ２００３ꎬ４８(４８):２１１￣２３４. [９]㊀ＪｅｈｌｅＪＡꎬＢｌｉｓｓａｒｄＧＷꎬＢｏｎｎｉｎｇＢＣꎬｅｔａｌ.Ｏｎｔｈｅｃｌａｓ￣ｓｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ:Ａｐｒｏｐｏｓａｌｆｏｒｒｅｖｉｓｉｏｎ[Ｊ].ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ２００６ꎬ１５１(７):１２５７￣１２６６.[１０]㊀ＭｏｓｃａｒｄｉＦ.Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒ￣ｕｓｅｓｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌｏｆＬｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ[Ｊ].ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙꎬ１９９９ꎬ４４(１):２５７￣２８９.[１１]㊀ＡｙｒｅｓＭＤꎬＨｏｗａｒｄＳＣꎬＫｕｚｉｏＪꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｃｏｍｐｌｅｔｅＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅ￣ｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ[Ｊ].Ｖｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９４ꎬ２０２(２):５８６￣６０５. [１２]㊀ＧａｒａｖａｇｌｉａＭＪꎬＭｉｅｌｅＳＡＢꎬＩｓｅｒｔｅＪＡꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅａｃ５３ꎬａｃ７８ꎬａｃ１０１ꎬａｎｄａｃ１０３ｇｅｎｅｓａｒｅｎｅｗｌｙｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄｃｏｒｅｇｅｎｅｓｉｎｔｈｅｆａｍｉｌｙＢａｃｕｌｏｖｉｒｉｄａｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏ￣ｇｙꎬ２０１２ꎬ８６(２２):１２０６９￣１２０７９.[１３]㊀ＪａｖｅｄＭＡꎬＢｉｓｗａｓＳꎬＷｉｌｌｉｓＬＧꎬｅｔａｌ.Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉ￣ｆｏｒｎｉｃａｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓＡＣ８３ｉｓａｐｅｒｏｓｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙｆａｃｔｏｒ(ＰＩＦ)ｐｒｏｔｅｉｎｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｏｃｃｌｕｓｉｏｎ￣ｄｅｒｉｖｅｄｖｉｒｕｓ(ＯＤＶ)ａｎｄｂｕｄｄｅｄｖｉｒｕｓｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄａｓ￣ｓｅｍｂｌｙａｓｗｅｌｌａｓａｓｓｅｍｂｌｙｏｆｔｈｅＰＩＦｃｏｍｐｌｅｘｉｎＯＤＶｅｎｖｅｌｏｐｅｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ２０１７ꎬ９１(５):１５￣１６. [１４]㊀ＭｉｅｌｅＳＡＢꎬＧａｒａｖａｇｌｉａＭＪꎬＢｅｌａｉｃｈＭＮꎬｅｔａｌ.Ｂａｃｕｌｏ￣ｖｉｒｕｓ:Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｎｓｉｇｈｔｓｏｎｔｈｅｉｒｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｃｏｎｓｅｒ￣ｖａｔｉｏｎ[Ｊ].ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙＢｉｏｌｏｇｙꎬ２０１１ꎬ２０１１(１):３７９￣４２４.[１５]㊀ＢｌｉｓｓａｒｄＧＷꎬＲｏｈｒｍａｎｎＧＦ.Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ[Ｊ].ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙꎬ１９９０ꎬ３５(３５):１２７￣１５５.[１６]㊀ＧｕａｒｉｎｏＬＡꎬＸｕＢꎬＪｉｎＪꎬｅｔａｌ.Ａｖｉｒｕｓ￣ｅｎｃｏｄｅｄＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｐｕｒｉｆｉｅｄｆｒｏｍｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ￣ｉｎｆｅｃｔｅｄｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９８ꎬ７２(１０):７９８５￣７９９１.６㊀第９期梁振普等:昆虫杆状病毒基因组学研究进展[１７]㊀ＴｉｔｔｅｒｉｎｇｔｏｎＪＳꎬＮｕｎＴＫꎬＰａｓｓａｒｅｌｌｉＡＬ.Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄｉｓ￣ｓｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｌａｔｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆａｃｔｏｒ￣８ｇｅｎｅ:Ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｌａｔｅｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒａｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＧｅｎｅｒａｌＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ２００３ꎬ８４(Ｐｔ７):１８１７￣１８２６.[１８]㊀ＬｕＡꎬＭｉｌｌｅｒＬＫ.Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｌａｔｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆａｃｔｏｒｇｅｎｅｓｗｉｔｈｉｎｔｈｅ３３.８￣ｔｏ４３.４￣ｍａｐ￣ｕｎｉｔｒｅｇｉｏｎｏｆＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９４ꎬ６８(１０):６７１０￣６７１８. [１９]㊀ＣａｒｓｔｅｎｓＥＢꎬＬｕＡＬꎬＣｈａｎＨＬ.Ｓｅｑｕｅｎｃｅꎬｔｒａｎｓｃｒｉｐ￣ｔｉｏｎａｌｍａｐｐｉｎｇꎬａｎｄｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐ４７ꎬａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｌａｔｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉ￣ｒｏｌｏｇｙꎬ１９９３ꎬ６７(５):２５１３￣２５２０.[２０]㊀ＧｕａｒｉｎｏＬＡꎬＤｏｎｇＷꎬＪｉｎＪ.Ｉｎｖｉｔｒｏａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｂａｃｕ￣ｌｏｖｉｒｕｓｌａｔｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆａｃｔｏｒＬＥＦ￣５[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉ￣ｒｏｌｏｇｙꎬ２００２ꎬ７６(２４):１２６６３￣１２６７５.[２１]㊀ＹａｎｇＳꎬＭｉｌｌｅｒＬＫ.Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｖｅｒｙｌａｔｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｂｙｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｖｅｒｙｌａｔｅｆａｃｔｏｒ１[Ｊ].Ｊｏｕｒ￣ｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９９ꎬ７３(４):３４０４￣３４０９.[２２]㊀ＫｏｖａｃｓＧＲꎬＧｕａｒｉｎｏＬＡꎬＳｕｍｍｅｒｓＭＤ.Ｎｏｖｅｌｒｅｇｕｌａ￣ｔｏｒｙｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｈｅＩＥ１ａｎｄＩＥ０ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒｓｅｎｃｏ￣ｄｅｄｂｙｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｍｕｌｔｉｃａｐ￣ｓｉｄｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９１ꎬ６５(１０):５２８１￣５２８８.[２３]㊀ＭｉｋｈａｉｌｏｖＶＳꎬＲｏｈｒｍａｎｎＧＦ.ＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＬＥＦ￣１ｉｓａＤＮＡｐｒｉｍａｓｅ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ２００２ꎬ７６(５):２２８７￣２２９７.[２４]㊀ＥｖａｎｓＪＴꎬＬｅｉｓｙＤＪꎬＲｏｈｒｍａｎｎＧＦ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｆａｃ￣ｔｏｒｓＬＥＦ￣１ａｎｄＬＥＦ￣２[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９７ꎬ７１(４):３１１４￣３１１９.[２５]㊀ＷｕＹꎬＣａｒｓｔｅｎｓＥＢ.Ａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｓｉｎｇｌｅ￣ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎꎬＬＥＦ￣３ꎬｍｅｄｉａｔｅｓｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｕｔａｔｉｖｅｈｅｌｉｃａｓｅＰ１４３[Ｊ].Ｖｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９８ꎬ２４７(１):３２￣４０.[２６]㊀ＭｉｋｈａｉｌｏｖＶＳ.Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅ[Ｊ].ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙꎬ２００３ꎬ３７(２):２５０￣２５９. [２７]㊀ＭｉｌｌｅｒＬＫ.Ｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓ[Ｍ].ＮｅｗＹｏｒｋꎬＵＳＡ:Ｓｐｒｉｎｇｅｒꎬ１９９７.[２８]㊀凌同.昆虫杆状病毒表达系统的研究进展与应用[Ｊ].微生物学免疫学进展ꎬ２０１４ꎬ４２(２):７０￣７８. [２９]㊀ＷｉｌｓｏｎＫＲꎬＯᶄＲｅｉｌｌｙＤＲꎬＨａｉｌｓＲＳꎬｅｔａｌ.Ａｇｅ￣ｒｅｌａｔｅｄｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａｍｕｌｔｉｐｌｅｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙ￣ｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓｅｇｔｇｅｎｅｉｎｔｈｅｃａｂｂａｇｅｌｏｏｐｅｒ(Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａｎｉ)[Ｊ].ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌꎬ２０００ꎬ１９(１):５７￣６３.[３０]㊀ＤｅｔｖｉｓｉｔｓａｋｕｎＣꎬＣａｉｎＥＬꎬＰａｓｓａｒｅｌｌｉＡＬ.ＴｈｅＡｕｔｏｇｒａ￣ｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＭｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒａｃｃｅｌｅｒａｔｅｓｈｏｓｔｍｏｒｔａｌｉｔｙ[Ｊ].Ｖｉｒｏｌｏｇｙꎬ２００７ꎬ３６５(１):７０￣７８.[３１]㊀ＤｕＸꎬＴｈｉｅｍＳＭ.Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｏｓｔｒａｎｇｅｆａｃｔｏｒ１(ｈｒｆ￣１)ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＬｙｍａｎｔｒｉａｄｉｓｐａｒＭｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅ￣ｄｒｏｖｉｒｕｓａｎｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＭｎｕ￣ｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ￣ｉｎｆｅｃｔｅｄＩＰＬＢ￣Ｌｄ６５２Ｙｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｖｉ￣ｒｏｌｏｇｙꎬ１９９７ꎬ２２７(２):４２０￣４３０.[３２]㊀ＬｕｃｋｏｗＶＡꎬＬｅｅＳＣꎬＢａｒｒｙＧＦꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｇｅｎｅｒａ￣ｔｉｏｎｏｆｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｓｂｙｓｉｔｅ￣ｓｐｅ￣ｃｉｆｉｃｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｓｅｒｔｉｏｎｏｆｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｓｉｎｔｏａｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｇｅｎｏｍｅｐｒｏｐａｇａｔｅｄｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｉｒｏｌｏｇｙꎬ１９９３ꎬ６７(８):４５６６￣４５７９. [３３]㊀ＭｏｔｏｈａｓｈｉＴꎬＳｈｉｍｏｊｉｍａＴꎬＦｕｋａｇａｗａＴꎬｅｔａｌ.Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌａｒｇｅ￣ｓｃａｌｅｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｌａｒｖａｅａｎｄｐｕｐａｅｏｆｓｉｌｋｗｏｒｍｂｙＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓｂａｃｍｉｄｓｙｓｔｅｍ[Ｊ].Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ＆ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬ２００５ꎬ３２６(３):５６４￣５６９.[３４]㊀ＳｍｉｔｈＧＥꎬＳｕｍｍｅｒｓＭＤꎬＦｒａｓｅｒＭＪ.Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｕ￣ｍａｎｂｅｔａｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｉｎｉｎｓｅｃｔｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈａｂａｃｕ￣ｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ＆ＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌ￣ｏｇｙꎬ１９８３ꎬ３(１２):２１５６￣２１６５.[３５]㊀ＫａｄｏｎｏＯｋｕｄａＫꎬＹａｍａｍｏｔｏＭꎬＨｉｇａｓｈｉｎｏＹꎬｅｔａｌ.Ｂａｃ￣ｕｌｏｖｉｒｕｓ￣ｍｅｄｉａｔｅｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｕｍａｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒ￣ｍｏｎｅｉｎｌａｒｖａｅｏｆｔｈｅｓｉｌｋｗｏｒｍꎬＢｏｍｂｙｘｍｏｒｉ[Ｊ].Ｂｉｏ￣ｃｈｅｍｉｃａｌ＆ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓꎬ１９９５ꎬ１３(２):３８９￣３９６.[３６]㊀ＣｈｅｎＪꎬＷｕＸＦꎬＺｈａｎｇＹＺ.ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎꎬｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎＧＭ￣ＣＳＦｕｓｉｎｇｓｉｌｋｗｏｒｍｐｕ￣ｐａｅ(Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ)ａｓａｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏ￣ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ２００６ꎬ１２３(２):２３６￣２４７.[３７]㊀顾玲玲ꎬ吴萌ꎬ朱善元ꎬ等.Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒ＶＰ１基因在昆虫细胞中的表达及鉴定[Ｊ].河南农业科学ꎬ２０１８ꎬ４７(１):１１４￣１１７.[３８]㊀ＦｅｌｂｅｒｂａｕｍＲＳ.Ｔｈｅｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓｙｓ￣ｔｅｍ:Ａｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇｐｌａｔｆｏｒｍｆｏｒｖｉｒａｌｖａｃ￣ｃｉｎｅｓａｎｄｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙｖｅｃｔｏｒｓ[Ｊ].ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＪｏｕｒ￣ｎａｌꎬ２０１５ꎬ１０(５):７０２￣７１４.[３９]㊀王嫱ꎬ张琳ꎬ陈赛娟.基因治疗:现状与展望[Ｊ].中国基础科学ꎬ２０１７ꎬ１９(４):２１￣２７.[４０]㊀梁振普ꎬ李路军ꎬ张俊庆ꎬ等.昆虫杆状病毒组学研究进展[Ｊ].河南农业科学ꎬ２０１７ꎬ４６(８):１￣６. [４１]㊀许书美ꎬ付月君.杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ中Ａｃ１０９蛋白的抗虫功能分析[Ｊ].山西农业科学ꎬ２０１８ꎬ４６(２):１５５￣１５８ꎬ１７１.７。

基因工程制药综述昆虫杆状病毒表达系统的研究进展综述体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。

原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞, 它操作简便、周期短、收益大及表达产物稳定, 但是表达基因的相对分子质量 (Mr)有限, 不宜过大, 且不能对表达产物进行一些翻译后加工、修饰。

真核细胞系统包括 CHO 等哺乳动物细胞、酵母细胞和昆虫细胞等。

昆虫细胞表达系统(即杆状病毒表达系统)具有独特的生物学特性, 日益受到人们的重视。

1 杆状病毒的生物学特性杆状病毒只来源于无脊椎动物, 虽然已发现 600 多种杆状病毒, 但进行分子生物学研究的不到 20 种。

杆状病毒的基因组为单一闭合环状双链 DNA 分子, 大小为 80～ 160 kb, 其基因组可在昆虫细胞核复制和转录[1]。

DNA 复制后组装在杆状病毒的核衣内, 后者具有较大的柔韧性, 可容纳较大片段的外源 DNA 插入, 因此是表达大片段 DNA 的理想载体。

其中, 用作外源基因表达载体的杆状病毒, 目前仅限于核型多角体病毒( nuclear polyhedrosis virus, NPV)。

该病毒颗粒在细胞内可由多角体蛋白包裹形成长度约 1～ 5 μm 的包含体病毒 , 呈多角体形状[2]。

核型多角体病毒有两种形式[2] :一种为包含体病毒( occluded virus, OV) , 另一种则为细胞外芽生病毒( budded virus, BV)。

它们在病毒感染中扮演的角色不同, 包含体病毒是昆虫间水平感染的病毒形式, 昆虫往往是食入污染OV 的食物后引起感染。

包含体病毒外层裹了一层蛋白晶体, 即 Mr 为 29 000 的多角体蛋白, 它对病毒的水平感染起以下作用:①保护病毒颗粒在外界传播过程中免遭环境因素的破坏而失活。

②保证病毒颗粒在适当的位置释放, 引起感染。

昆虫中肠上皮局部的强碱性环境( pH=10. 5) , 可使病毒颗粒释放蛋白酶溶解多角体[3] 。