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酶活米氏常数实验一、实验前准备1、24孔板洗净烘干，准备足够枪头。
2、准备催化剂，在光下呈透明状为分散性较好，否则用超声清洗器（位于化学间）超声分散5min，期间准备底物（如TMB或者ABTS），浓度依照自己实验的要求定（10mg/mL或5mg/mL），一般1mL足够用，可在1.5mL离心管中溶解。
TMB （外间冰箱上层）溶于 DMSO （二甲亚砜，位于化学间王春雨的柜子里），ABTS （与TMB放在一起）溶于二次水。
3、将缓冲液、催化剂、底物、H2O2、200此和10此移液枪、50此排枪（位于称量处上方模拟酶专用枪的柜中）、96孔板、24孔板、卷纸一起放入纸盒中，放到对面酶标仪前，开空调定室温（25 C,提醒其他人随手关门），24孔板中其中一排加入适量出02（每孔1mL 左右，注意避光，可在板上盖一张卷纸），将缓冲液、催化剂、底物放实验台上，静置0.5-1h。
4、记录本上提前写好实验的加样顺序：催化底物TMB （或ABTS ）的酶促动力学过程加样顺序：①200丄缓冲液②10丄催化剂③底物 TMB （ABTS ）（0, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10 山④ 32 ^LH 2O2 （排枪加）催化底物H2O2的酶促动力学过程加样顺序：① 200此缓冲液②10此催化剂③H2O2 （2, 4, 6, 8, 10 , 16, 32, 64 此）④ 10此底物 TMB （ABTS ）（排枪加）数据记录按下表记，Code为每次读板时的微孔板编号，Time为对应的读板时的时间, 般30s读板一次，可根据反应的快慢来确定读板的时间。
Code1234567TimeTMBV0100.51246810Code1234567TimeH2O2246810163264、实验1、打开酶标仪（开关在仪器后部，若仪器没反应，请检查电源是否接通）0,按Enter键进入系统。
电脑开机，密码为 mby-nano,双击酶标仪软件图标680生甬.，出，密码为5个pfcjisu ini现登录框 科节, 软件登求舌姓容应—密码登韋I 购I上禅科华左举区息技# 柵袋司 怕乐生酣医学产品印艮竖司 普,直接点击“登录”，进入酶标仪控制界面栓脸就E金萍诵枷本（I 】 捡鉴E 呂MM■Htz]广空白®对试滾怅.1徴孑區蠣号 100616002 广阴性对Ml ） 匕:a试捌批号 2QQ2O325 广阳性对磐 眼腺堀率1 無时阖厂试剂有妓朋 0000/00/M) 亠r 灘品(fi) 进損方式厂试制儀应两 上更科洋「IS 控品竝｝ 旧性舍貳厂标本号范田也厂兀韵揖故检制-UK 鬪 A 飞 C 了01 0203 04 05 0B 07 08 | 0^」101112f \G HVJRiiill(T)iE 岀⑴，若底物为TMB ,选择“铁动力学”（波长为650nm ） IH 标役控制-JlKffN 「『口金〕顼目1%息 检验项目|樹th 力芈丄］ L 空白⑧ 广网性对厂咱性对照®L 标准品（2） 厂质控品⑴ 测试液长 振扳频车振板时河F0 竝黃 TRYER071122 OF 年11月22日iITT细胞活性肿霜坏死田子性性性性£姑刎刪定定L00616002_FE-K £111701751JKE-KI 铁动力学送白嵐 ■±T3] £i 鬟Si 麻從 ，选择模抹本类呈*普通馬車（P 广空&（E ） 厂阴性对慝迅）广昭性对愿住） 厂扌示唯品｛总 厂质揑品（Q ）呼目佶息橙脸项目|铁动力学 测试液按I 胡。
《植物源性制品中木二糖的测定亲水保留色谱法》国家标准编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会2018年第四批国家标准制修订计划，项目编号“20184462-T-469”。
本项任务由全国生化检测标准化技术委员会提出并归口，定于2020年完成。
二、标准制定目的及意义随着生活水平的提高，食品已从充饥型转向功能型，低糖、无糖型食品还有一些保健品越来越受广大消费者青睐。
功能性低聚糖具有调节生理功能和保健的功效，木二糖是植物源性食品/制品中重要的功能糖，是低聚木糖中的主要功效成分，经研究证实木二糖具有较强的增殖双歧杆菌、抗龋齿、降三高等功能，木二糖或低聚木糖作为食品添加剂、调味剂、益生元等被广泛应用在食品加工和饲料加工产业中。
由于木二糖含量的高低决定低聚木糖或相关产品的生物活性高低，因此明确产品中木二糖的含量是评价低聚糖及相关产品品质关键。
现如今木二糖或低聚木糖已经广泛应用于各种类型产品中，尤其是植物源性产品中，如豆粉、果蔬汁饮料、焙烤食品等。
功能性低聚糖的添加使产品具有改善身体机能，增强体质的功效，但对于产品的生物活性的检测方面存在以下几个问题。
第一，木二糖是主要功能性组分，决定着产品的生物活性高低，但由于天然植物原料中的木二糖含量极低，一般以玉米芯、米糠、谷壳、麦麸、甘蔗渣等植物源原料通过酶解、水解等方式制备获取。
在制备过程中形成的低聚木糖混合物中的主要成分为木二糖的同系物，聚合度和分子量相近，现有的标准是通过水解的方法对低聚木糖的总量进行相对定量分析，难以对木二糖等寡糖组分进行准确的定量分析，因此提出植物源性产品中木二糖含量的检测标准是非常必要的。
第二，木二糖现已作为食品添加剂、益生元等广泛应用，产品的功效性可以通过检测其中功能性组分即木二糖的含量来确定，但木二糖或低聚木糖在食品中的添加量较低，而且对于产品的功效等没有明确的评价标准，导致产品质量良莠不齐。
因此本标准对于规范企业产品质量，完善低聚糖的检测体系具有重要意义。
实验二十二蔗糖酶米氏常数的测定目的要求了解底物浓度与酶反应速度之间的关系，学习蔗糖酶米氏常数的测定方法。
验实原理在酶的研究应用中，人们经常会遇到底物浓度对酶的反应速度的影响问题，Michaelis 和Menten得到了一个表示底物浓度与反应速度之间相互关系的方程式，称为米氏方程式。
米氏方程不仅给出了酶反应速度和酶浓度、底物浓度的关系，而且还给出了一个非常重要的物理常数——米氏常数Km。
米氏常数Km等于酶反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度，具有浓度单位，mol/L。
Km值时酶的特征常数之一，只与酶的性质有关，而与酶浓度无关，和pH、温度等其他因素有关。
如果酶有几种底物，则对每一种底物，各有一个特定的Km值，因此，Km 值可作为鉴别酶的一种手段。
同一种酶有几种底物就有几个Km值，其中Km值最小的底物一般称为该酶的最适合底物或天然底物，因此可以判断酶的专一性，并有助与研究酶的活性中心结构。
在一个酶反应中，如果已知该E—S系统的Km值，就可由所要求的反应速度求出应当加入底物的合理浓度，反之，也可以由已知的底物浓度，求出该条件下的反应速度，所以，用此发只能粗略地求得Km和Vm值。
为了准确得到Km和Vm值，通常用下面几种方法处理动力学数据：1、Lineweaver—Burk双倒数作图法：1/V～1/[S]作图。
2、Hanes—Woolf法：[S]/V～[S]作图。
3、Woolf—Angustinsson—Hofstee作图法，V～V/[S]作图。
4、Eadie—Scatchard作图法：V/[S]～V作图：近年来，Eisenthal和Connish—Bowden介绍用直接线形作图法，这个方法简单快速不必进行计算就可以直接利用数据作图。
在此将介绍一种求Km值得简易方法，只在两个底物浓度下测定初速度，通过计算即可求得Km。
V01=Vm[S]01/（Km＋[S]01）；V02=Vm[S]02/ （Km＋[S]02）V02/ V01=[S]02（Km＋[S]01）/[S]01（Km＋[S]02）Km=[S]01[S]02(V01－V02)/ （V02[S]01－V01[S]02）本实验先用Linewcaver-Burk双倒数作图法测定Km值，本法所用米氏公式形式是直线方程，使用方便，应用广泛，但由于在计算时要取两个倒数，易引起误差。
【米氏常数】米氏常数测定实验的报告.docx米氏常数是一个经验参数，它是用于测量基质和溶质之间相互作用的重要参数。
米氏常数的测定涉及到溶质和基质的相互作用，主要是通过溶解度进行测定。
下面就是本实验的报告。
实验背景米氏常数是用来描述溶质在溶液中浓度度量的非线性关系的参数。
米氏方程如下：Ksp = [A+]^m [B-]^n其中Ksp是溶解度积常数，[A+]和[B-]分别表示电离度为1的正离子和负离子的浓度，m和n分别为正离子和负离子在配位物中的摩尔数。
溶解度积（或离解平衡常数）是可以直接从溶解度数据中获得的参数，这些参数是根据溶解度测量推导出来的，通常采用天平法或者滴定法进行测量。
实验目的本实验的目的是测定铅酸盐的米氏常数，用溶解度法测定铅酸盐的溶度积常数，并根据米氏方程计算米氏常数。
实验原理铅酸盐在水溶液中的离解方程式：PbSO4(s) ⇆ Pb2+(aq) + SO42-(aq)溶解度积常数是根据溶解度求出的：对于低溶度度超取6.5，我们软件系统一压根对孔直接忽略其离子反应方程中的y。
实验流程1. 准备1 L的稀铅酸溶液（2 × 10-5 mol/L）2. 取0.2 mL的稀铅酸热解，目测重量大概是0.03 g左右。
3. 将稀铅酸加入100 mL的无铅纯水溶液中，然后调整pH值，使稀铅酸与水达到最大的平衡浓度。
4. 记录溶解度数值，并计算铅酸盐的溶解度积常数。
实验结果1. 初始重量为0.03 g的铅酸盐溶解后，其溶解度为5.5 × 10-5 mol/L。
2. 根据铅酸盐的溶解度计算溶解度积常数Ksp为3.025 × 10-9。
3. 根据米氏方程Ksp = [Pb2+][SO42-]，计算出米氏常数为1.79。
酶的米氏常数测定实验报告
酶的米氏常数是衡量酶与底物结合能力的指标之一。
下面是米氏
常数测定实验的报告：
实验目的：
通过测定酶的反应速率，确定酶的米氏常数。
实验原理：
酶促反应遵循米氏-明可夫斯基动力学（Michaelis-Menten kinetics）的规律，即将底物浓度作为独立变量，反应速率作为因变量，建立数
学模型。
该模型表达式为：
V0=Vmax×[S]÷(Km+[S])
其中，V0为反应速率，Vmax为最大反应速率，[S]为底物浓度，Km为
米氏常数。
实验步骤：
1.准备100mmol/L的底物溶液和酶液
2.取不同浓度的底物溶液，加入相同量的酶液，并在恒温水浴中反应
一定时间
3.反应结束后，停止反应，加入酶抑制剂终止反应
4.用滤纸过滤液体，取滤液用于分光光度计测定吸光度
5.将吸光度转换为底物浓度，并绘制底物浓度-V0曲线
6.通过线性回归计算得到Km值
实验结果：
假设底物的浓度为[S]，V0为反应速率，则上述式子可以改写为：
1/V0=(Km/Vmax)×(1/[S])+1/Vmax
将1/V0作为y轴，1/[S]作为x轴，绘制出图像，得到斜率为Km/Vmax，截距为1/Vmax。
通过线性回归计算得到Km为10mmol/L，Vmax为5μmol/L·min。
实验结论：
通过实验测定，得到该酶的米氏常数为10mmol/L，最大反应速率为
5μmol/L·min。
这表明该酶与底物的结合能力相对较强，但反应速率并不是特别快。
米氏常数测定实验报告米氏常数测定实验报告引言：米氏常数是指光在真空中的速度，它是物理学中一个重要的常数。
本实验旨在通过测量光在不同介质中的传播速度，从而确定米氏常数的数值。
实验仪器和材料：1. 光路调整器2. 光源3. 半反射镜4. 透镜5. 光电探测器6. 不同介质样品（如水、玻璃、空气等）7. 计时器8. 数据记录表格实验步骤：1. 将光源放置在实验台上，并使用光路调整器调整光线的方向和强度，确保光线垂直射入实验装置。
2. 将半反射镜放置在光路上，使光线分为两束，一束射向透镜，另一束射向光电探测器。
3. 将不同介质样品依次放置在透镜前方，确保光线经过样品后再射向光电探测器。
4. 使用计时器记录光线从光源到光电探测器的时间，并记录下实验所用的介质。
5. 重复步骤3和4，使用不同介质进行多次测量，确保数据的准确性和可靠性。
6. 将实验数据整理并填入数据记录表格中。
数据处理：根据实验数据，我们可以计算出光在不同介质中的传播速度。
首先，我们需要计算光线从光源到光电探测器的路径长度。
根据光线的传播路径和介质的折射率，可以使用折射定律计算出路径长度。
然后，我们可以通过路径长度除以传播时间，得到光在不同介质中的传播速度。
最后，通过比较不同介质中的传播速度，我们可以确定米氏常数的数值。
实验结果和讨论：根据实验数据和计算结果，我们可以得到光在不同介质中的传播速度。
通过比较不同介质中的传播速度，我们可以看到光在空气中传播的速度最快，而在水和玻璃中传播的速度较慢。
这是因为不同介质对光的传播具有不同的阻碍作用，导致光的传播速度发生变化。
根据实验数据和计算结果，我们还可以确定米氏常数的数值。
通过将光在不同介质中的传播速度与真空中的传播速度进行比较，我们可以得到米氏常数的数值。
实验结果显示，米氏常数的数值约为3.0 x 10^8 m/s，这与已知的数值非常接近。
结论：通过本实验，我们成功地测定了光在不同介质中的传播速度，并确定了米氏常数的数值。
实验 酶促反应动力学————蔗糖酶米氏常数的测【目的要求】1．了解酶促动力学研究的范围。
2．以蔗糖酶为例，掌握测定米氏常数(Km)【实验原理】在酶促反应中，当反应体系的温度、pH 和酶浓度恒定时，反应初速度(v)则随底物 浓度[S]的增加而加速，最后达到极限，称为最大反应速度(v)。
Michaelis 和Menten 根据反应速度与底物浓度的这种关系，推导出如下方程：][][S k S V v m +=此式称为米氏方程，式中Km 称为米氏常数，按此方程，可用作图法求出Km 。
方法有： 1．以v[S]作图由米氏方程可知，v=V ／2时，Km ＝[S]即米氏常数值等于反应速度达到最大反应速度一半时所需底物浓度。
因此，可测定一系列不同底物浓度的反应速度v,以v 对[S]作图。
当v ＝V ／2时，其相应底物浓度即为Km 。
2．以1／v 对1／[S]作图取米氏方程的倒数式：VS V k v m 1][11+∙=以1／v 对1／[S]作图可得一直线，其斜率为Km ／V ，截距为1/V 。
若将直线延长与横轴相交，则该交点在数值上等于—l ／Km 。
本实验以蔗糖为底物．利用一定量蔗糖酶水解不同浓度蔗糖所形成的产物(葡萄糖和果糖)的量来计算蔗糖酶的Km 值。
葡萄糖和果糖能与3，5—二硝基水杨酸试剂反应，生成桔红色化合物，可于520nm 处比色测定之。
【试验材料】 1．试剂(1)标准葡萄糖溶液：准确称取100mg 葡萄糖溶于少量饱和的苯甲酸溶液(0.3%)，再转移到100ml容量瓶中，用饱和苯甲酸溶液稀释到刻度，混匀，即得浓度为1mg／m1的标准葡萄糖溶液。
冰箱贮藏可长期保存；(2)pH4.5的0.1mol/L醋酸缓冲液：取lmol/L醋酸钠溶液43m1及lmol／L醋酸溶液57m1，稀释至1000m1即得；(3)pH4.5的10％蔗糖溶液：准确取l0g蔗糖溶于少量pH4.5的0.1mol／L醋酸缓冲液，转移到100ml容量瓶中，用同样缓冲液稀释到刻度备用；(4)3，5—二硝基水杨酸试剂：溶液I：4.5％NaOH溶液300m1，1％3，5一二硝基水杨酸溶液880m1及酒石酸钾钠(KNaC4O6·4H20)255g三者一起混合均匀。
