液体乳中三聚氰胺的快速检测 胶体金免疫层析法(KJ201907)

液体乳中三聚氰胺的快速检测拉曼光谱法（征求意见稿）1范围本方法规定了液体乳制品中三聚氰胺快速测定方法。

本方法适用于生鲜乳、灭菌乳、巴氏杀菌乳、调制乳和发酵乳等液态乳制品中三聚氰胺含量的快速测定。

2原理样品经沉淀、溶剂提取，加表面增强试剂对信号增强，进行拉曼光谱扫描。

以704±10cm-1处的拉曼特征峰作为三聚氰胺定量基准峰，以925±10cm-1或类似基质中稳定存在的拉曼峰为内标峰，根据三聚氰胺峰与内标峰的相对强度对三聚氰胺的浓度绘制标准曲线，内置仪器内进行判别。

3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1 试剂3.1.1三氯乙酸。

3.1.2三氯乙酸溶液（5%）：准确称取三氯乙酸（3.1.1）50 g于1 L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀后备用。

3.1.3表面增强试剂：纳米金溶胶或银溶胶，或相当者。

注：表面增强试剂的参考配制方法：纳米金溶胶：取100mL0.01%氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）水溶液加热至沸，剧烈搅拌下准确加入1.0mL 1%柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液，金黄色的氯金酸水溶液在2min内变为红色，继续煮沸15min，冷却后用蒸馏水补加到100mL。

增强试剂配制用水为GB/T 6682规定的一级水。

纳米银溶胶：取200mL1.0mM硝酸银（AgNO3）水溶液加热沸腾，剧烈搅拌下逐滴准确滴加5.0mL1%柠檬酸三钠（Na3C6H5O7）水溶液，持续煮沸1h，溶液变为灰绿色，冷却后用蒸馏水补加到200mL。

增强试剂配制用水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1.4促凝剂：金溶胶的促凝剂：称取5.85g氯化钠，溶于100mL水中，摇匀，备用，或配制成其他相当的无机盐溶液。

银溶胶的促凝剂：称取5.85g氯化钠和2g氢氧化钠，溶于100mL水中，摇匀，备用，或配制成其他相当的无机盐溶液。

28 食品安全导刊 2010年11月刊ANAlySIS & TEST 自2008年三聚氰胺事件爆发以来，乳品安全一直备受关注。

为了加大对乳品行业的监管力度，使中国乳品行业迅速恢复元气，相关职能部门出台了多项措施：在质量控制方面，要求对奶源做到严格把关，有效提高乳品质量安全系数。

因此，在奶站收奶环节，企业对原料奶的检测把关显得尤为重要，同时为保证牛奶不发生腐败变质的现象，必须在最短的时间内对其进行检测并立即入罐冷藏，这些都对乳品的检测技术提出了挑战。

常规的三聚氰胺残留量检测方法主要有液相色谱/质谱法（LC-MS）、高效液相色谱（H PLC）、液相色谱串联质谱（LC-M S-M S）等，这些方法因为存在仪器设备昂贵、检测过程繁琐、检测时间太长和对检验人员的技能要求高等局限，所以不适合现场监控和大量样品的筛查，在鲜奶收购环节使用不现实。

鉴于此，如何选择一种快速、低成本的检测方法，构建从奶□ 张德红 扶胜 杜祥乐 北京望尔生物技术有限公司站、企业到政府监管的安全检测网络已成为当前迫切需要解决的问题。

目前，快速筛查技术主要有两大类：生物分析技术和化学分析技术。

生物分析技术又包含免疫学方法，该方法具有检出限低、准确性好、灵敏度高、重现性好等特点，是现在和未来快速筛查技术发展的主流技术，非常适合对原料乳的快速检测。

依托此项技术，北京望尔生物技术有限公司（以下简称北京望尔）开发出三聚氰胺酶联免疫试剂盒和胶体金试纸卡等检测产品，为广大乳品企业及相关机构提供了有效的三聚氰胺快速检测方案。

三聚氰胺酶联免疫试剂盒检测方案检测原理三聚氰胺试剂盒采用间接竞争E L I SA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中残留的三聚氰胺将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三聚氰胺抗体，在加入酶标二抗后，用T M B底物显色，样本吸光值与残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中三聚氰胺的含量。

附件7液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201907）i范围本方法规定了液体乳中三聚氰胺的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳和发酵乳中三聚氰胺的快速测定。

2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。

样品中的三聚氰胺与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。

通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中三聚氰胺进行定性判定。

3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

3.1试剂3.1.1 甲醇。

3.1.2 三羟甲基氨基甲烷（Tris ）。

3.1.3 1mol/L盐酸：移取83 mL浓盐酸，加入900mL水中，定容至1 L。

3.1.4甲醇水溶液：准确量取50 mL甲醇和50 mL水，混匀后备用。

3.1.5 稀释液：准确称取6.05 g Tris （3.1.2）和8.5 g 1mol/L盐酸（3.1.3），加水定容至1 L ,混匀后备用。

3.2参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度＞99%3.3标准溶液的配制三聚氰胺标准储备液（1000卩g/mL :精密称取适量三聚氰胺标准品（ 3.2），置于10 mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1000卩g/mL的三聚氰胺标—1——准储备液；或可直接购三聚氰胺标准储备液。

4C避光保存备用，有效期3个月。

3.4 三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒3.4.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。

3.4.2 试纸条或检测卡。

4 仪器和设备4.1 移液器：200 L、1000 k 和5 mL。

4.2 涡旋混合器。

4.3 电子天平：感量为0.01 g。

4.4 环境条件：温度15C ~35C，湿度＜80%5 分析步骤5.1 试样制备取适量有代表性样品充分混匀。

胶体金免疫层析法快速检测乳制品中三聚氰胺程国栋;吴小慧;张宇;李晓丹;吴方舟;王丹;金珠【期刊名称】《中国乳品工业》【年(卷),期】2015(043)009【摘要】建立了快速检测乳制品中三聚氰胺的胶体金免疫层析试纸条分析方法.通过实验研究了方法的灵敏度、重复性和特异性.结果表明,用免疫胶体金法测定乳制品中三聚氰胺的检出限为50～200 μg/kg,方法重现性好.选用了8种干扰物对胶体金免疫层析试剂条进行了特异性实验,发现尿素对胶体金免疫层析试纸条检测液态奶时存在干扰,其他物质没有干扰.使用胶体金免疫层析法和高效液相色谱法同时检测加标样品,结果一致.方法适用于乳制品中三聚氰胺的快速检测.【总页数】4页(P40-43)【作者】程国栋;吴小慧;张宇;李晓丹;吴方舟;王丹;金珠【作者单位】蒙牛乳业(马鞍山)有限公司,安徽马鞍山243000;蒙牛乳业(马鞍山)有限公司,安徽马鞍山243000;蒙牛乳业(马鞍山)有限公司,安徽马鞍山243000;蒙牛乳业(马鞍山)有限公司,安徽马鞍山243000;蒙牛乳业(马鞍山)有限公司,安徽马鞍山243000;内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司,呼和浩特010000;蒙牛乳业(马鞍山)有限公司,安徽马鞍山243000【正文语种】中文【中图分类】TS252.7【相关文献】1.原料乳和乳制品中三聚氰胺快速检测方法的探讨 [J], 丁云连;雷磊2.乳与乳制品中三聚氰胺快速检测方法 [J], 王玉英;柴艳兵;张耀广;赵媛媛;张玉娟;闫立红3.乳与乳制品中三聚氰胺的快速检测-高效液相色谱法 [J], 王新喜4.胶体金免疫层析法快速检测牛奶、奶粉、饲料中的三聚氰胺 [J], 李淑群;曹碧云;常化仿;邓安平5.胶体金免疫层析法快速检测乳制品中重金属离子铅 [J], 赵小旭;柳家鹏;柴艳兵;张耀广;杨敏;滕燕;李曼;郭健因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

胶体金免疫层析技术在检测乳制品中三聚氰胺的应用潘声旺1，和垚1，何茂萍1，陈春坛1，2，周钰潇1，何靓雯1，李亚阑1，2*（1.成都大学建筑与土木工程学院，成都610106；2.四川文理学院化学化工学院，四川达州635000）摘要:【目的】基于竞争抑制免疫层析原理，建立一种快速检测乳制品中三聚氰胺的方法。

【方法】在胶体金免疫层析（GICA ）技术的基础上，以胶体金为标记物，建立乳制品中三聚氰胺（MA ）快速检测方法、研发GICA 检测试纸；验证该方法的灵敏度、重复性和特异性。

【结果】所研发的GICA 试纸测定乳制品中MA 的检出限为40~160μg/kg ，重现性好；选用11种干扰物对GICA 试剂进行特异性实验，仅发现尿素、缩二脲对GICA 试纸检测液态奶时存在干扰，其他9种无干扰；使用GICA 、HPLC 、GC-MS 同时检测阴性或添加MA 质量分数2.00mg/kg 的阳性乳样品，检测结果一致。

【结论】GICA 试纸适用于乳制品中MA 的快速检测。

关键词:胶体金；免疫层析；三聚氰胺；乳制品中图分类号:TS207.7文献标志码:Ａ文章编号:1000-2650（2020）03-0346-07A Rapid Colloidal Gold-Based Immunochromatographic Strip Assay for Monitoring Melamine in Dairy ProductsPAN Shengwang 1，HE Yao 1，HE Maoping 1，CHEN Chuntan 1，2，ZHOU Yuxiao 1，HE Jingwen 1，LI Yalan 1，2*（1.School of Architecture and Civil Engineering ，Chengdu University ，Chengdu 610106，China ；2.School of Chemistry and Chemical Engineering ，SichuanUniversityof Arts and Science ，Dazhou635000，Sichuan ，China ）Abstract:【Objective 】This study was aimed to establish a method for the rapid detection of melamine (MA)in dairy products based on the principle of competitive immunochromatography.【Method 】On thebasis of colloidal gold Immunochromatographic assay (GICA)technology ，a rapid detection method forMA in dairy products was established and GICA test paper was developed with colloidal gold as the marker ，and its sensitivity ，repeatability and specificity were verified.【Result 】Determination of melamine in dairy products by colloidal gold immuneochromatographic assay the detection limits for 40~160μg/kg ，and reproducibility is ing 11kinds of interferences of colloidal gold immuneochromatographic reagent strip for the specific experiment ，discovered the presence of biuret and urea interference on col -loidal gold immuneochromatographic reagent strip for detection of liquid milk ，other substances without any interference.Simultaneous determination of the negative milk samples or the positive milk sam -ples with MA content of 2.00mg/kg by GICA and high performance liquid chromatography(HPLC)，and gas chromatography-mass spectrometer (GC-MS)the results obtained by these three methods were in good agreement.【Conclusion 】This method is suitable for rapid detection of melamine in dairy products.Keywords:colloidal gold ；immunochromatography ；melamine ；dairy products第38卷第3期2020年6月收稿日期:2019-10-27基金项目:成都市科技局技术创新研发计划（2018-YF05-00486-SN ）；四川省教育厅科研项目（18ZA0116）。

液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201907）附件7液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201907)范围本方法规定了液体乳中三聚氰胺的胶体金免疫层析快速检测方法。

本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳和发酵乳中三聚氰胺的快速测定。

原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。

样品中的三聚氰胺与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。

通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中三聚氰胺进行定性判定。

试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

3.1试剂3.1.1甲醇。

3.1.2三羟甲基氨基甲烷（Tris）。

3.1.31mol/L盐酸：移取83mL浓盐酸，加入900mL水中，定容至1L。

3.1.4甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀后备用。

3.1.5稀释液：准确称取6.05gTris（3.1.2）和8.5g1mol/L盐酸（3.1.3），加水定容至1L，混匀后备用。

3.2参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。

表1三聚氰胺参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量三聚氰胺Melamine108-78-1C3H6N6126.12注：或等同可溯源物质。

3.3标准溶液的配制三聚氰胺标准储备液（1000μg/mL）：精密称取适量三聚氰胺标准品（3.2），置于10mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1000μg/mL的三聚氰胺标准储备液；或可直接购三聚氰胺标准储备液。

4℃避光保存备用，有效期3个月。

3.4三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。

3.4.2试纸条或检测卡。

仪器和设备4.1移液器：200µL、1000µL和5mL。

三聚氰胺快速检测卡(胶体金法)说明书【产品名称】产品名称：三聚氰胺快速检测卡(胶体金法)英文名称：Melamine Rapid Test(Colloidal Gold)【产品简介】三聚氰胺是为提高乳及乳制品中表观蛋白质（全氮）含量而添加的一种化工原料，人体尤其是婴幼儿摄入一定量会增加肾脏负担，可能有致癌风险，国家已经禁止其作为食品添加物质使用。

本产品为快速检测液态奶和奶粉中三聚氰胺残留量的检测卡，检测过程只需20分钟左右，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。

【包装规格】5次/盒。

【产品组成】三聚氰胺快速检测卡（5条）；200μL刻度吸管（5支）；奶粉取样勺（1支）；提取瓶（内含三聚氰胺提取液4mL，5瓶）。

【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。

【检测限量】本产品检测方法对液态奶中三聚氰胺检出限为2.5mg/L，对婴幼儿配方奶粉（以粉末计）中三聚氰胺检出限为1.0mg/kg。

根据卫生部等5部（总局）《关于三聚氰胺在食品中的限量值的公告(2011年第10号)》规定，液态奶中三聚氰胺检出限为2.5mg/L；婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺检出限为1.0mg/kg。

【使用方法】1、液态奶检测：用吸管吸取200μL液态奶（至吸管刻度线），加入到提取瓶中，盖紧瓶盖后振荡混匀；奶粉检测：用奶粉取样勺量取1平勺奶粉（约0.4g），加入提取瓶中，盖紧瓶盖后振荡混匀。

2、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用吸管从提取瓶中吸取样品，垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。

3、室温环境计时10分钟，根据示意图判定结果。

【结果判定】阴性（-）：C线和T线都显色，表示样品中三聚氰胺浓度低于检出限。

阳性（+）：C线显色，T线不显色，表示样品中三聚氰胺浓度等于或高于检出限。

无效：C线未出现，表明操作过程不正确或检测卡已失效。

在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。

【注意事项】1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡恢复至室温。

液态奶中的三聚氰胺检测方法液态奶是我们日常生活中常见的一种奶制品，但是近年来随着食品安全问题的关注度提高，人们对于液态奶中可能存在的有害物质也越来越关注。

三聚氰胺就是一种可能存在于液态奶中的有害物质之一。

三聚氰胺是一种无色、无味的结晶性化合物，具有较高的氮含量。

如果长期摄入含有三聚氰胺的奶制品，可能会对人体造成损害，因此检测液态奶中的三聚氰胺成为一项十分重要的工作。

那么，如何检测液态奶中的三聚氰胺呢？下面我们将介绍一种常用的检测方法。

一、高效液相色谱法高效液相色谱法是目前常用的一种用于液态奶中三聚氰胺检测的方法。

该方法的原理是利用高效液相色谱仪对液态奶样品进行分离和检测，从而得出三聚氰胺的含量。

具体操作步骤如下：1. 样品处理：首先需要将液态奶样品进行前处理，一般常用的方法是将液态奶样品进行萃取和浓缩，将目标物质提取出来。

然后将提取物进行适当稀释，以便进行后续的分析。

2. 色谱条件设置：接下来需要设置色谱条件，包括流动相、柱温、检测波长等参数。

这些参数的设置会影响到后续的色谱分离效果和检测结果的准确性。

3. 样品分析：将经过前处理的样品注入高效液相色谱仪中，进行分析。

色谱仪会根据样品中的物质特性进行分离，最终得出样品中三聚氰胺的含量。

4. 数据处理：最后需要对所得到的数据进行处理和分析，得出最终的三聚氰胺含量结果。

高效液相色谱法是一种比较可靠、准确的检测方法，但是也存在一些局限性，比如需要专业的设备和操作技能，同时也需要一定的检测周期和成本。

针对液态奶生产企业和有关监管部门，需要建立检测标准和技术规范，保证三聚氰胺检测结果的可靠性和可比性。

二、质谱法质谱法是一种基于样品分子量和结构的分析方法，也可以用于液态奶中三聚氰胺的检测。

其原理是通过质谱仪对样品分子进行分析，从而得到目标物质的含量和结构信息。

液态奶中的三聚氰胺检测是一项重要的工作，关系到人们的饮食安全和健康。

通过采用高效液相色谱法、质谱法等现代化的检测方法，可以有效地对液态奶中的三聚氰胺进行快速、准确的检测，从而保障液态奶制品的质量和安全。