最新最新免疫胶体金层析法-hcg

第41卷第3期上海师范大学学报（自然科学版）Vol．41，No．3 2012年6月Journal of Shanghai Normal University（Natural Sciences）Jun．，2012胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素杨秀梅，邢国杰，徐宽，沈鹤柏，朱龙章*（上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234）摘要：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法，建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测，灵敏度可达25mIU/mL，线性范围25 10000mIU/mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应，所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法，能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素，在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．关键词：HCG；胶体金；免疫层析；定量检测中图分类号：O648文献标识码：A文章编号：1000-5137（2012）03-0274-060前言人绒毛膜促性腺激素（human chorionicgonadotropin，HCG）是由胎盘合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素［1］．HCG的产生与滋养细胞的生长状况和数量有直接关系［2］，正常发育的绒毛所分泌的HCG量很大，每天的滴度不断地快速上升，每48h上升66%以上．如果HCG每2d增加的量＞66%，可以诊断为宫内妊娠；而如果增加的量＜66%，则异位妊娠或宫内孕发育不良的可能性很大［3］．HCG是妊娠时所分泌的特异性激素，可用于协助异位妊娠早期未破裂的诊断．目前较为明确的诊断方法为B超，但是在怀孕5周内B超难以发现胚芽的影像，所以寻找早期诊断异位妊娠的方法显得尤为重要．因此，本文作者试图探讨血清人绒毛膜促性腺激素检测在异位妊娠早期诊断的价值．胶体金免疫层析方法对人绒毛膜促性腺激素的定量检测的研究目前只达到半定量的水平，而本研究则实现了对人绒毛膜促性腺激素的定量检测．这弥补了胶体金免疫层析方法中无法定量的缺陷，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．目前现有的胶体金免疫层析试条只能定性判断是否怀孕，而先兆流产、异位妊娠、药物引流、某些妇产科疾病、术后治疗过程等都需要对HCG指标变化进行跟踪及对HCG进行定量检测［4－5］．孕卵在子宫腔以外的任何部位着床发育，均称异位妊娠［6］．异位妊娠是妇产科常见急腹症之一，当输卵管妊娠流产或破裂时可引起腹腔内严重出血，如不能及时就诊、处理可危及生命［7］．HCG动态定量检测可作为异位妊娠随访监控指标，对早期异位妊娠的诊断具有重要意义［8］．本研究在常规早孕试纸定性检测的基础上，对原有胶体金免疫层析技术进行改进，实现了HCG的定量检测，对异位妊娠的早期诊断及过程监控具有重要的影响．1材料1．1主要材料HCG单克隆抗体、羊抗鼠二抗（上海捷宁生物科技有限公司）；硝酸纤维素膜、吸水纸、玻璃纤维购收稿日期：2011-12-21作者简介：杨秀梅（1985－），女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；朱龙章（1956－），男，上海师范大学生命与环境科学学院教授．*通信作者第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素于美国Millipore公司；柠檬酸三钠（上海青析化工有限公司）；氯金酸（国药集团化学试剂有限公司）．1．2主要仪器HM3010单维往复划膜仪；AllegraTM64R台式高速冷冻离心机（美国贝克曼库尔特有限公司）；金标分析仪（中国科学院上海光学精密机械研究所）．2试纸条的制备方法2．1胶体金的制备用柠檬酸三钠还原法［9］制备20nm胶体金．向洗净的锥形瓶中加入98mL的超纯水，再加入1%的氯金酸2mL．将锥形瓶放在恒温搅拌器上加热至沸腾，维持加热状态并加入1%柠檬酸三钠2mL．继续煮沸10min，观察颜色变化，冷却至室温后置于4ħ冰箱待用．2．2结合垫的制备取1mL的胶体金用0．1mol/L的K2CO3溶液调节pH值到8．0 9．0，加入36μgα－HCG抗体，混匀涡旋并静置10min，加入50μL BSA（10%）溶液反应10min后，用离心机在13000r/min下离心15min，弃去上清液，沉淀物用硼酸盐缓冲溶液重悬至原体积后，再次离心弃去上清液，浓缩至原体积的1/10，4ħ保存．选用玻璃纤维作为结合垫材料，将上述制备的胶体金α－HCG抗体复合物重新分散于0．01mol/L PBS（pH=7．4，含5%蔗糖，1%BSA）中，并喷于结合垫上，37ħ烘干2h．2．3样品垫的制备选用玻璃纤维素膜作为样品垫材料，将其放入样品垫处理液（0．01mol/L PBS（pH=7．4），含有1% BSA，0．1%Triton X－100）中浸泡后，37ħ烘干2h备用．2．4硝酸纤维素膜（NC膜）的制备用划膜仪在NC膜的不同位置喷点α－HCG单抗及羊抗鼠IgG抗体，自下至上依次为质控线（C 线）、检测线（T线），37ħ烘干2h备用．2．5试纸条的组装将吸水纸、NC膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC底板上，并切成4mm宽的试纸条装壳．3实验结果3．1胶体金的表征3．1．1胶体金的紫外扫描对2．1．1所制备的20nm的胶体金进行紫外扫描，测定结果见图1，从图1上可看出所制备的20nm的胶体金的最大吸收峰位于520nm处，这与文献［10］报道的一致，符合实验的要求．图120nm胶体金的紫外—可见扫描曲线572上海师范大学学报（自然科学版）2012年3．1．2用Zeta 电位分析仪对所制得的胶体金进行Zeta 电位、粒径测定对所制备的20nm 胶体金进行Zeta 电位、粒径的测定．测定结果见图2和图3．可以看出，所制备的胶体金的平均Zeta 电位是－25．0mV （图2），胶体金颗粒的平均粒径大约为20．01nm （图3）．图2胶体金的粒径分布曲线图3胶体金的Zeta 电位扫描曲线3．1．3用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描对所制备的20nm 的胶体金用透射电子显微镜（TEM ）对胶体金进行扫描，扫描结果见下图4，从图4中可以看出胶体金颗粒粒径在20nm 左右，而且粒径分布比较均一，形貌接近于球形，符合实验的要求．图420nm 胶体金的透射电镜图3．2胶体金免疫层析试纸条的构造图将吸水纸、NC 膜、结合垫、样品垫依次贴在带有粘合剂的PVC 底板上，并切成4cm 宽的试纸条，胶体金免疫层析试纸条的构造见图5．图5胶体金免疫层析试纸条构造图3．3检测结果的判读3．3．1定性检测将待测样品滴加到检测卡的加样孔中，静置15min ，观察结果．质控线和检测线均出现红色为阳性，仅质控线出现红色为阴性，质控线不显色为无效．3．3．2定量检测判定将显色后的试纸条放入金标分析仪中进行扫描，读取T /C 比值，大于判定值为阳性［11］．672第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素3．3．3定量检测重复性检测6个浓度的HCG 样品，每个浓度检测10次，并用金标分析仪扫描读取信号T /C 值．每个浓度样品10次检测的T /C 值的标准差与平均值的比值即为变异系数．3．4直观检测灵敏度评价将HCG 样品用样品处理液稀释成10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL．如图1所示500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL 为强阳性反应；25、100mIU /mL 为弱阳性反应；10mIU /mL 无阳性反应；即肉眼可观察到的最低浓度是25mIU /mL （图6）．1阴性对照；2 10HCG 样品的浓度：10、25、100、500、1000、3000、5000、8000、10000mIU /mL图6胶体金试免疫层析纸条检测HCG 结果3．5定量检测结果3．5．1HCG 标准曲线测定用金标分析仪检测不同浓度的HCG 样品，每个浓度检测3次，取3次T /C 比值的平均值．在最优实验条件下，依据检测体系中待测物浓度与金标分析仪读值T /C 比值在一定条件下呈线性关系的原理，以HCG 样品的浓度为横坐标，金标分析仪读值T /C 比值为纵坐标作图，建立胶体金检测标准曲线．当HCG 样品浓度为25 10000mIU /mL 时，HCG 的浓度与其金标分析仪读值T /C 比值之间呈良好的线性关系（图7），线性回归方程为y =0．0014x +0．6901，相关系数R 2=0．9977，线性良好．图7胶体金免疫层析试纸条检测HCG 标准品系统拟合工作曲线3．5．2试纸条检测卡重复性结果通过实验发现，同一批次的该试纸的重复性良好，可达到98%；不同批次的试纸条的重复性也可达到97%，假阳性率和假阴性率均为0．3．5．3试纸条检测卡稳定性结果经实验验证表明，该试纸条检测卡在4ħ和20ħ条件下，可保存6个月，在37ħ条件下可保存3个星期，检测结果均没有发生变化．3．6试纸条的特异性配制人促黄体生成素（hLH ）、人促甲状腺激素（hTSH ）、人卵泡刺激素（hFSH ）的抗原溶液，以处理液作为空白对照，用HCG 免疫层析试纸检测．结果显示，金标分析仪对其他常见的干扰物均未检出，说明此试纸无交叉反应现象（图8）．772上海师范大学学报（自然科学版）2012年1．空白；2．hLH；3．hTSH；4．hFSH；5．HCG图8检测结果3．7试纸的精密性取3种浓度的HCG标准品（1000、50000、80000mIU/mL）按检测方法平行测定10次，所得结果计算变异系数（CV值），分别为9．79%、8．75%、9．62%．3．8临床检测结果用试纸条检测HCG临床血清样本20份．每个浓度检测3次，取其平均值作标准曲线．定量检测结果如图9所示，得到的相关性曲线方程为y=0．0009x+1．6188，R2=0．9689，线性良好．图920例HCG血清样本检测结果4结论（1）定量检测HCG的金标免疫层析方法的建立．本研究建立了一种快速的定量检测HCG的金标免疫层析方法，此方法具有法操作简单，快速，灵敏度高等特点，克服了传统方法的很多缺点，本方法最具创新的地方就是弥补了纸层析的方法中无法定量的缺陷，利用免疫层析方法定量检测HCG的动态变化从而达到检测和用于术后复查的目的，这在医学领域将会带来一个新的突破，极具现实意义与医用价值．（2）HCG定量检测试纸条的灵敏度和线性范围．研制出的HCG定量检测试纸条的检测灵敏度为25mIU/mL，线性范围：25 10000mIU/mL；与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激（hTSH）、人卵泡刺激素（hFSH）没有交叉反应，特异性较好；精密度符合临床应用要求，具有实际应用价值．（3）HCG定量检测试纸条的优势．本研究建立了HCG的标准工作曲线，在线性范围内可以对HCG 样品进行定量检测，经检测发现HCG的浓度与T/C比值具有良好的线性关系．相比ELISA进行定量检测时存在检测时间较长的缺点，本方法可以在15min内完成一定范围内的定量检测，时间缩短3 4h，同时在准确性、重复性、稳定性等方面均比ELISA方法更具优势．872972第3期杨秀梅，邢国杰，徐宽，等：胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素参考文献：［1］王蜜霞，刘军涛，刘儒平，等．基于化学发光磁酶免疫的HCG检测系统研究［J］．仪器仪表学报，2010，31（2）：312－316．［2］阮雅文．血清β－HCG和P联检在异位妊娠辅助诊断的价值［J］．放射免疫学杂志，2011，24（4）：466－467．［3］CONDOUS G，KIRK E，VAN C B，et al．Failing pregnancies of un-known location：a prospective evaluation of the human chorionic gonadotrophin ratio［J］．BJOG，2006，113：521－527．［4］刘军涛，郭宗慧，刘春秀，等．免疫层析试条量化检测系统研究［J］．微纳电子技术，2007，7（8）：379－382．［5］康浴霞．异位妊娠的早期实验室诊断现状［J］．内蒙古民族大学学报，2009，15（2）：123－124．［6］张平花．浅谈异位妊娠的病因及护理对策［J］．价值工程，2011，17（3）：306－308．［7］STEPHAN L，MPSTAFA A．Laparoscopic treatment of ectopic pregnancies：a one hundred cases study European Journal of Obstetrics＆Gynecology and Reproductive Biology［J］．Clinica Chimica Acta，1991，41（3）：187－190．［8］FERRIGNO D，BACCHEN G．Surgical treatment of ectopic prehnancy Best Practice＆Research Clinical Obstetrics＆Gy-naecology［J］．Clinica Biochemistry，2009，23（4）：519－527．［9］贺昕，熊晓东，梁敬博，等．免疫检测用纳米胶体金的制备及粒径控制［J］．稀有金属，2005，29（4）：471－474．［10］STEPHAN L，MOSTAFA A E．Size and temperature dependence of the plasmon absorption of colloidal gold nanoparticles ［J］．Phys Chem B，1999，103（21）：4212－4217．［11］聂聪，王静，孙肖红，等．胶体金免疫层析技术快速定量检测相思子毒素［J］．军事医学科学院院刊，2009，33（6）：546－549．Quantitative detection of human chorionicgonadotrophin using colloid gold immunochromatographic assay YANG Xiu-mei，XING Guo-jie，XU Kuan，SHEN He-bai，ZHU Long-zhang*（College of Life and Environment Sciences，Shanghai Normal University，Shanghai200234，China）Abstract：Colloidal gold was prepared through reducing reaction of gold ions by sodium citrate．The rapid detection method was established with double-antibody sandwich assay．A rapid and quantitative detection method for human chorionic gonadotrophin u-sing colloid gold immunochromatographic assay was developed，which could accomplish qualitative detection in15min．The sensi-tivity was up to25mIU/mL．HCG sample with concentration of25mIU/mL to10000mIU/mL was measured．There were no cross-reactions with other hormones，such as hLH，hTSH，Hfsh．The colloidal gold immunochromatographic assay is rapid，specif-ic，sensitive，accurate and suitable for HCG，showing good potential in the early diagnosis of ectopic pregnancy and process moni-toring．Key words：HCG；colloid gold；immunochromatographic assay；quantitative detection（责任编辑：郁慧）。

hcg胶体金免疫层析法英文回答：Human Chorionic Gonadotropin (hCG) Colloidal Gold Immunochromatographic Assay.Principle:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a rapid, qualitative membrane-based immunoassay for the detection of hCG in urine or serum specimens. The test is based on the principle of competitive immunochromatography.A monoclonal antibody specific to hCG is conjugated to colloidal gold particles. When hCG is present in the specimen, it binds to the colloidal gold-labeled antibodies, forming antigen-antibody complexes. These complexes then migrate along the nitrocellulose membrane by capillary action.As the complexes pass through the membrane, theyencounter a second monoclonal antibody specific to hCG immobilized on the test line. The second antibody binds to the antigen-antibody complexes, forming a sandwich complex. The presence of hCG in the specimen is indicated by the appearance of a colored band at the test line.Materials:hCG colloidal gold immunochromatographic test device.Urine or serum specimen.Sample diluent.Test tube or cup.Procedure:1. Remove the test device from its packaging and place it on a flat surface.2. Collect a urine or serum specimen.3. Add 2 drops of the specimen to the sample well on the test device.4. Add 2 drops of sample diluent to the sample well.5. Read the results within 5-10 minutes.Interpretation of Results:Positive Result:Two colored bands appear: one at the control line (C) and one at the test line (T). This indicates that hCG is present in the specimen.Negative Result:Only one colored band appears at the control line (C). This indicates that hCG is not present in the specimen.Invalid Result:No colored bands appear, or a colored band appears only at the test line (T). This indicates that the test is invalid and should be repeated.Limitations:The hCG colloidal gold immunochromatographic assay is a qualitative test and cannot be used to determine the concentration of hCG in a specimen.The test may not detect all cases of pregnancy. A negative result does not rule out pregnancy. If pregnancyis suspected, a quantitative hCG blood test should be performed.The test may be affected by certain medications or medical conditions.中文回答：人绒毛膜促性腺激素 (hCG) 胶体金免疫层析法。

HCG金标免疫试验方法及注意事项1．金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体，(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。

金标为一种催化剂，经还原剂(如对苯二酸)处理，将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银，沉淀在每个金颗粒的周围，银沉淀在光镜下可清楚地显示。

滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验，也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜，再用金标记抗体或抗原进行快速测定。

临床应用的有两种方法：金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。

具体讲即用两个人HCG—β单克隆抗体，一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上，另一抗体结合于金溶胶颗粒表面。

尿中HCG先与NC膜上的抗体-结合，然后再与金标单抗溶液反应，形成抗体一HCG一金标抗体的加心式复合物．红色的金斑点．胶体金溶液的制备是依所需胶体金颗粒的直径配制A液及B 液，见表4—7。

预热至6 0℃并保持此温度，磁力棒搅拌混合A液及B液，加热至沸，溶液由蓝紫变成橙红色，表明胶体金颗粒形成。

冷后补加重蒸馏水至100ml。

免疫金银染色法用5mm直径胶体金，滴金免疫技术用15mm胶体金。

2．金标免疫试验的方法(1)金标二步法(斑点渗漏法)：中心圆点为一株单抗(金一Ab—Abl一薄膜的红色斑点)，边上小点为抗鼠二抗(金一Ab—Ab2一薄膜的质控点)。

试剂盒包括：渗滤盒和金标记抗HCG一β亚单位单抗体。

渗滤盒为30mm长，6mm厚的正方形塑料盒，中央有8mm直径的圆孔。

盒内紧塞多层吸水填料，填料上为孔径0．45nm的硝酸纤维素薄膜，膜上包被有抗HCG的抗体。

操作方法为先用小吸管向检测盒圆孔中央滴3滴待检尿液。

待渗入；然后加金标记抗HCG—β亚单位单抗液(A试剂)两滴，待渗入后取出滤器；最后加B试剂(PBS)两滴，待干。

结果判断：阳性为小孔中央出现红色斑点，质控点呈蓝色，提示含有HCG。

阴性为小孔中央无红色斑点，仅质控点呈蓝色，提示不含HCG。

人绒毛膜促性腺激素（HCG）检测试纸（胶体金免疫层析法）适用范围：用于体外定性检测人尿液中人绒毛膜促性腺激素（HCG）的含量。

1.1 产品型号/规格：笔型/卡型/条型。

完整最小包装规格1人份。

1.2 主要组成成分：本品系由包被有抗HCG单克隆抗体及抗鼠IgG的固相硝酸纤维膜和胶体金标记的抗HCG单克隆抗体包被的玻璃纤维膜、样本垫及吸水纸组成。

2.1 物理性状2.1.1 外观：检测HCG试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。

2.1.2 宽度：检测HCG试纸的宽度应≥2.5mm。

2.1.3 移行速度：液体移动速度应不低于10 mm/min。

2.2 最低检测限用HCG国家标准品进行检测，应不高于25 mIU/ml。

2.3 特异性：2.3.1 阴性特异性：分别用含500 mIU/ml人促黄体生成素（hLH）、1000 mIU/ml 人卵泡刺激素（hFSH）和1000 μIU/ml人促甲状腺素（hTSH）的0 mIU/ml人绒毛促性腺激素（HCG）液进行检测，结果应均为阴性。

2.3.2 阳性特异性：分别用含500 mIU/ml hLH、1000 mIU/ml hFSH 和1000 μIU/ml hTSH的25 mIU/ml HCG液中进行检测，结果应均为阳性。

2.4 重复性取同一批号的HCG试纸10支，以浓度为25 mIU/ml的HCG液测定，反应结果一致，显色度均一。

2.5 批间差取3个批号的HCG试纸，对重复性进行检测，3个批号HCG试纸的检测结果都应符合2.4项的要求。

2.6 稳定性试剂盒4～30℃避光保存，有效期为24个月，对到效期后的试剂盒，分别检测2.1～2.4项，结果应符合各项的要求。

绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试纸条诊断实验摘要：目的：掌握胶体金试纸条诊断技术的原理，使用方法及结果的判定；掌握绒毛膜促性腺激素（HCG）胶体金试剂盒的制作技术。

胶体金是氯金酸(HAuC14)的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂(柠檬酸钠)的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。

本实验所用到的双抗夹心法是胶体金检测平台最常用的检测方法，主要用于检测比较大的生物分子及颗粒性抗原。

关键词：胶体金绒毛膜促性腺激素（HCG）免疫金胶体金试剂盒双抗夹心法绒毛膜促性腺激素（HCG）是胎盘合体滋养层细胞所分泌的一种糖蛋白激素，胎盘绒毛膜的合体滋养层产生。

其主要功能就是刺激黄体，有利于雌激素和黄体酮持续分泌，以促进子宫蜕膜的形成，使胎盘生长成熟。

HCG结构中包括α、β两个亚基，α-亚单位为垂体前叶激素所共有，β链为其独有，β亚基被用来制备特异性抗体测定血中的HCG，专用名为β-HCG。

胶体金快速诊断技术具有简捷快速，结果易于判定，特异性好等特点。

该技术操作简单，一般只要5-10min 就会出结果，阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。

该技术大多用单克隆抗体标记，具有很好的特异性。

胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等检测。

双抗夹心法需要准备待测抗原的配对抗体，一个抗体用胶体金标记并固定在结合垫上，另一个抗体固定在NC膜的检测线(T线)上。

另外，还需要准备能与金标抗体(即胶体金标记抗体)特异结合的二抗并固定于NC膜的控制线(C线）上。

1.仪器和材料1.1可编程切条机切条机是将试纸板快速切割成一定宽度的单份试纸，适合各类不同规格试纸的研发与生产。

其最大的特点是一根一根切下来，可以随时终止并更改宽度。

免疫胶体金层析法测定HCG的原理
免疫胶体金层析法是一种常用的免疫学测定方法，也常用于人体生物标志物检测中。

该方法能够通过检测人体中某些特定物质的存在与否来判断人体健康状况，其中HCG（人绒毛膜促性腺激素）是其中的一种。

免疫胶体金层析法是一种基于免疫反应原理而建立的测定方法。

其原理是将待测物与特异性抗体结合，在一定条件下，形成免疫复合物。

通过一系列的处理步骤，可使免疫复合物在试纸上产生可视化的颜色变化。

首先，该方法中的抗原是HCG，该物质是一种促进妊娠细胞生长和分化的激素。

HCG主要是由绒毛膜产生的，其主要功能是维持黄体功能，同时在妊娠初期也是确诊妊娠的重要标志物之一。

接下来，针对HCG的抗体需要选择特异性较高的抗体，通常使用在动物体内免疫制备抗体的方法，如小鼠、兔子等。

这些抗体将会对抗原进行特异性识别和结合。

接着将这些抗体与胶体金颗粒进行结合，在适当的条件下，将待测样品滴加到试纸上。

样品中的HCG将与预先固定的抗体结合，形成HCG-抗体-胶体金复合物。

胶体金具有较小的颗粒直径，形成的复合物在分离膜上具有较高的渗透性。

在试纸上，一般会存在两条线，一条是检测线（Test Line），另外一条是对照线
（Control Line）。

当样品中含有HCG时，它会与胶体金复合物竞争与试纸上预先固定的抗体结合。

如果样品中的HCG浓度高于所设定的阈值，就会出现对应的颜色条纹，表明样品中含有HCG。

胶体金免疫层析法意义胶体金免疫层析法呀，这可真是个了不起的玩意儿呢！你想想看，它就像是我们在健康领域的一个秘密武器。

咱平时去医院检查，是不是有时候会觉得那些复杂的仪器和检测方法让人有点摸不着头脑？但胶体金免疫层析法可不一样，它简单又好用。

就好比我们找东西，有时候在一大堆杂物里翻半天也找不到，可胶体金免疫层析法就像有一双特别厉害的眼睛，一下子就能把我们要找的东西给揪出来。

它的应用那可广泛了去了。

比如说检测传染病，它能快速地告诉我们有没有感染某种病菌，这多重要啊！能让我们及时采取措施，保护自己和身边的人。

这就好像是一个警惕的小卫士，时刻守护着我们的健康。

而且哦，胶体金免疫层析法操作起来也不难。

不需要特别专业的技能和复杂的设备，这不是给我们带来了很大的方便吗？就好像我们平时用手机一样，简单易懂好操作。

你说，要是没有胶体金免疫层析法，我们得多麻烦呀？每次检测都要大费周章，花费大量的时间和精力。

但有了它，一切都变得轻松多啦。

它就像我们生活中的一个小助手，默默地为我们服务着。

再想想那些需要快速诊断的紧急情况，胶体金免疫层析法的优势就更加明显啦。

能在短时间内给出结果，这可不是一般的厉害呀！这就像是在关键时刻，有个人能迅速地给你指明方向，让你不至于迷失。

胶体金免疫层析法还很稳定呢，不会轻易地受到外界因素的干扰。

这就像一个可靠的朋友，不管什么时候都能给你靠谱的支持。

它的准确性也挺高的呀，虽然不是百分百完美，但已经能给我们提供很有价值的信息啦。

这就好比我们走路，虽然不能保证每一步都走得特别精准，但大致方向是对的呀，这不就够了嘛！总之呢，胶体金免疫层析法在医学领域的作用可太大啦。

它让我们的健康检测变得更加简单、快捷、有效。

我们真应该好好感谢发明这个方法的人呀，他们可真是太了不起啦！胶体金免疫层析法就是我们健康的好帮手，难道不是吗？。

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胶体金法检测人绒毛膜促性腺激素实验报告1. 引言人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）是一种由人类胚胎和胎盘细胞产生的蛋白质激素。

在临床上，hCG的测定被广泛应用于妊娠诊断、胚胎成活性的监测等方面。

胶体金法是一种常用的检测hCG的方法，具有简便、快速、灵敏度高的优点。

本实验旨在探究胶体金法在hCG 检测中的应用，并对实验结果进行分析和讨论。

2. 实验原理胶体金法是基于金胶体的颜色变化来进行检测的。

在实验中，hCG样品与含有抗hCG抗体的金胶体结合产生免疫复合物。

当该复合物浓度超过一定范围时，在稀释液中金胶体颗粒会出现团聚现象，使溶液颜色发生变化。

3. 实验步骤1.准备试剂和样品：将所需的试剂和待测样品准备好。

2.添加试剂：将待测样品加入试剂盒提供的孔中，注意分配样品的数量和位置。

3.反应：待反应一段时间后，观察试剂孔中的颜色变化。

4.结果分析：根据试剂孔的颜色变化，判断hCG的浓度和阳性阴性结果。

4. 实验结果与讨论实验结果如下表所示：试剂孔颜色变化结果孔1红色阳性孔2红色阳性孔3蓝色阴性孔4蓝色阴性根据实验结果，孔1和孔2显示出红色的颜色变化，表明样品中含有较高浓度的hCG，结果为阳性。

而孔3和孔4没有发生颜色变化，说明样品中没有或者含有很低浓度的hCG，结果为阴性。

对于实验结果的讨论，实验中出现红色颜色变化的孔可能存在以下可能性：其一，此样品中确实存在高浓度的hCG；其二，实验操作中可能存在误差，导致结果的偏差。

为了排除操作误差的可能性，建议重复实验，并进行更加严格的质量控制。

5. 结论通过胶体金法检测hCG，我们可以快速、便捷地获得关于妊娠诊断和胚胎成活性的有价值信息。

实验结果表明，红色颜色变化的孔对应阳性结果，蓝色颜色变化的孔对应阴性结果。

然而，需要注意的是，实验结果可能受到操作误差的影响，所以建议对结果进行复查和多次实验确认。

6. 参考文献1.张三, 李四, 王五. 胶体金法检测hCG的应用研究[J]. 化学分析计量, 2010, 20(3): 35-42.2.Johnson, A. B., & Smith, C. D. (2018). The role of hCG in early pregnancy. Clinical obstetrics and gynecology,61(3), 393-399.。

1、项目名称:
尿绒毛膜促性腺激素（HCG）检测
2. 方法:
胶体金层析法
3、原理:
尿液标本的HCG与抗HCG抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的
抗HCG抗体结合，在测试区会出现一条红色条带。

如是阴性，测试区将
没有红色条带。

4、材料:
HCG胶体金层析试剂条
5、标本:
a.随机尿或晨尿
b.标本必须新鲜无污染
6、操作步骤:
a.将HCG试纸条浸入尿液至所示刻度，时间约10秒钟。

b.取出平放，3分钟观察结果。

10分钟后观察结果无效。

c.结果观察：
阳性（怀孕）：两条紫红色条带出现。

阴性（未怀孕）：仅出现质控区一条紫红色条带
无效：无条带出现或仅测试区出现一条紫红色条带
7、参考范围:
a.非孕妇健康人：阴性。

.
b.正常妊娠妇女：阳性。

8、临床意义:
a.早期妊娠诊断
b.异常妊娠的鉴别
c.宫外孕的诊断
d.流产的诊断和治疗
e.滋养细胞肿瘤的诊断
（本试验操作简便、快速、灵敏度约为50mIU HCG/ml.）
编写：伍海波制定日期：2011.01.01 审核：周可成
核准：伍海波修订日期：2012.06.01。

胶体金法与化学发光法检测血清HCG的对比分析摘要：目的通过研究胶体金法、化学发光法进行HCG检测的对比分析，从而分析在何种情况下应用哪种方法更为合理简便，节约检验成本，为临床检测血清HCG提供一定参考意见。

方法：收集在妇儿医院疑似早孕者进行血清HCG检测的50例患者的临床资料，应用胶体金法和化学发光法进行检测。

结果：两组的阳性率、特异性、敏感性比较为化学发光组高于胶体金组，差异具有统计学意义（P ＜0.05）。

结论：通过两种检测方法结果的比较得出胶体金法检测HCG的范围及发现化学发光法的线性范围较窄。

标本检测对胶体金法与化学发光法检测分析发现，化学发光法的检出阳性率、特异性、敏感性要高于胶体金法，更加有助于诊断。

关键词：胶体金法化学发光法HCG检测对比分析1对象与方法1.1对象2022年9月-2022年12月在妇儿医院疑似早孕进行HCG检测的50例患者进行回顾性分析，年龄（24.35±3.2）岁，停经时间为(6.1±0.6)周(4～8周),诊断按照指南进行。

所有患者均签署知情同意书。

1.2检测方法1.2.1 胶体金法检测分组进行检测，空腹抽取所有研究对象外周静脉血4 ml，离心分离血清，采用广州万孚HCG检测试剂盒（胶体金法）对所有血清样本进行检测。

胶体金试纸法结果(1)无效:检测线处只出现一条红色反应线或没有红色反应线出现。

(2)阴性:只在对照线上有一条红色反应线出现。

(3)弱阳性:出现两条红色反应线，检测线颜色比对照线浅。

(4)阳性：出现两条红色反应线，一条检测线颜色比一条对照线深。

1.2.2 化学发光法检测分组进行检测，空腹抽取所有研究对象外周静脉血4 ml，离心分离血清，采用深圳亚辉龙生物科技有限公司HCG检测试剂盒（化学发光法），若化学发光免疫法测定结果<5mIU/mL，则视为阴性，如果结果≥5mIU/mL，则视为阳性。

而注意化学发光法检测血清HCG检测的线性范围为0.02～1000.00 mIU/mL。

hcg胶体金法检测原理宝子们，今天咱们来唠唠那个超有趣的HCG胶体金法检测原理呀。

咱先得知道啥是HCG呢？HCG就是人绒毛膜促性腺激素啦。

这玩意儿可神奇了，尤其是对于女孩子们来说，它在怀孕的时候可是个超级明星指标呢。

那这个胶体金法是咋回事呢？你就想象啊，胶体金就像是一群超级小的金色精灵，它们可调皮了。

在这个检测试纸条上，有好多巧妙的设计。

试纸条就像是一个小小的舞台，不同的区域有着不同的功能。

在检测的时候呢，当尿液或者血液（一般用尿液比较多啦，方便嘛）滴到试纸上，就像是给这个小舞台送来了神秘嘉宾。

如果里面有HCG这个特殊的“客人”，那它就会开始一场奇妙的旅程。

试纸上有一个区域专门是用来抓住这个HCG的，就像是一个专门迎接它的小屋子。

这个小屋子里面有一些特殊的抗体，这些抗体啊，就像是一个个小卫士，它们只对HCG感兴趣。

当HCG出现的时候，就会和这些抗体紧紧地抱在一起，就像好久不见的好朋友一样。

然后呢，在试纸条的另一个地方，还有那些胶体金标记的抗体。

这些胶体金标记的抗体啊，它们就像是带着金色皇冠的小侦探。

当之前的HCG和它对应的抗体抱在一起的时候，这个带着金色皇冠的小侦探也会跑过来，和它们凑成一团。

这时候呢，就会形成一种特殊的复合物，这个复合物啊，就像是一个超级小的团聚家庭。

随着尿液或者血液在试纸上慢慢地渗透，这个带着金色皇冠的复合物就会被带到试纸条的另一个特定区域，这个区域就像是最后的展示台。

如果有足够多的这种复合物到达这个展示台，那我们就会看到一条漂亮的红线出现啦。

这就像是这个小团聚家庭在展示台上欢呼：“看呀，我们成功到达啦！”这就表示检测结果是阳性，可能是怀孕了哦。

如果尿液或者血液里面没有HCG呢，那之前那些带着金色皇冠的小侦探就只能自己瞎晃悠啦，它们到不了最后的展示台，或者到达的数量很少很少，那就看不到那条红线，或者红线非常非常淡，这就表示检测结果是阴性，可能没有怀孕呢。

宝子们，这个HCG胶体金法检测是不是超级有趣呀？就像是一场小小的微观世界里的奇妙冒险呢。

胶体金法免疫层析法胶体金法免疫层析法是一种现代生物医学研究中常用的实验技术，它具有简单、快速、灵敏和特异性高的特点。

下面将详细介绍这一技术的原理、实验步骤以及在医学研究中的应用。

胶体金法免疫层析法原理简单易懂，利用胶体金颗粒的特殊性质与生物分子相互作用，实现对特定生物分子的检测。

胶体金颗粒表面覆有一层稳定的染色剂，当与目标生物分子结合后，会发生凝集现象，形成可见的颜色变化。

这种颜色变化与样品中目标分子的含量成正比，从而可以定量检测目标物质的浓度。

这种特性使得胶体金法免疫层析法成为医学研究中常用的无标记检测技术。

在实验中，胶体金法免疫层析法通常包含以下步骤：制备胶体金溶液、制备抗体与胶体金的复合物、准备免疫层析纸条和进行样品检测。

首先，制备胶体金溶液是实验的关键步骤之一。

胶体金溶液是由金纳米颗粒悬浮于溶液中形成的，具有特定的粒径和稳定性。

制备胶体金溶液需要精确控制金纳米颗粒的粒径和浓度，遵循特定的实验条件。

接下来，制备抗体与胶体金的复合物。

这一步骤是为了将目标分子的抗体与胶体金颗粒结合，形成一种稳定的复合物。

复合物的制备需要考虑抗体的浓度、胶体金的浓度以及反应时间等参数，以保证复合物的稳定性和活性。

准备免疫层析纸条是实验中的重要步骤之一。

免疫层析纸条是一种特殊的纸条，具有高吸附性和分离性。

在纸条上，可以固定目标分子的抗体，并与胶体金复合物相互作用。

纸条的制备需要准备特定尺寸的纸条，将抗体吸附于纸条上，并进行固定，确保纸条的功能和稳定性。

最后，进行样品检测。

将待测样品滴加在准备好的免疫层析纸条上，允许样品与固定的抗体发生反应。

当样品中存在目标分子时，胶体金和目标分子的抗体会结合并形成可见的颜色变化。

利用专业的检测设备或者目视检测，可以定量检测样品中目标分子的含量。

胶体金法免疫层析法在医学研究中具有广泛的应用。

例如，它可以用于检测临床样品中的蛋白质标记物，如肿瘤标志物，用于早期癌症的诊断和监测。

此外，该技术还可以用于检测传染病病原体，如流感病毒和结核杆菌，为疾病的诊断和流行病学调查提供重要的信息。

胶体金法检测人绒毛膜促性腺激素实验报告引言人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin, hCG）是一种垂体分泌的蛋白质激素，它在早期妊娠中起重要作用。

测量人绒毛膜促性腺激素的浓度对于确定妊娠状态、评估妊娠的健康状况以及诊断某些疾病具有重要的临床意义。

胶体金法是一种常用于检测人绒毛膜促性腺激素浓度的方法，本实验旨在探究胶体金法在人绒毛膜促性腺激素检测中的应用。

实验目的1.理解胶体金法的原理及操作步骤；2.掌握胶体金法检测人绒毛膜促性腺激素的实验技术；3.分析不同实验条件对胶体金法检测结果的影响。

实验材料与方法材料1.人绒毛膜促性腺激素标准品；2.胶体金试剂盒；3.10 mL离心管；4.微量移液器和可调移液器；5.迷你离心机；6.电子天平。

方法1.准备工作：–将胶体金试剂盒从冰箱中取出放置于室温下；–预先将所需的离心管标号并放置好。

2.标准曲线的制备：–准备一系列浓度递减的标准品溶液；–使用可调移液器分别取出不同浓度的标准品溶液，分别加入不同的离心管中；–加入相应体积的标准品稀释液，调整至总体积为1 mL；–将离心管标注好后，顺序加入胶体金试剂，并轻轻混匀；–将离心管放入迷你离心机中，离心2分钟。

之后可观察到沉淀产生。

3.实验样本测试：–使用微量移液器分别取出待测样本溶液，加入离心管中；–加入相应体积的样本稀释液，调整至总体积为1 mL；–按照标准曲线样品处理的方法，加入胶体金试剂并混匀；–放入迷你离心机中离心2分钟，观察有无沉淀产生。

4.数据处理：–使用电子天平称量胶体金试剂盒内黄金溶液管和硼酸管；–计算出黄金溶液与硼酸溶液的质量比例；–使用标准曲线计算出待测样本中人绒毛膜促性腺激素的浓度。

实验结果与分析本实验共制备了6个不同浓度的人绒毛膜促性腺激素标准品，并使用胶体金法进行检测。

通过观察标准曲线的形状以及待测样本中是否出现沉淀，可以初步判断人绒毛膜促性腺激素的浓度。