免疫胶体金技术
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(四)制备胶体金的注意事项
1. 玻璃器皿的清洁
玻璃器皿清洗→清洁液浸泡24h →流水冲→蒸馏 水反复洗涤→晾干
2. 试剂配制
应尽量使用分析试剂
各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制
3. 影响胶体金颗粒大小的因素
加入还原剂的速度
搅拌是否均匀
制备胶体金所用的烧瓶大小
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三. 胶体金探针的制备
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(二)胶体金的基本概念 胶体金,一般指金的水溶液,又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金
溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm 之间。
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二. 胶体金的制备
(一) 可用多种方法制备胶体金 1. 分散法:包括机械分散法、超声波法、电分
散法和胶溶法等
2. 凝聚法:包括物理凝聚法、化学凝聚法(氧 化法、水解法和还原法)
3. 其中应用最多的是化学还原法
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化学还原法
【基本原理】在氯化金水溶液中加入一定量的还 原剂,使金离子还原为金原子。在适当条件下, 还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒,形成 金溶胶。
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大,15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小,3~12nm
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(一)免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
【基本原理】
1. 直接法---将胶体金标记的一抗直接对标本进行染色, 然后在光镜或电镜下观察
方法简单, 但一种探针仅限于检测一种抗原, 较局限
2. 间接法---先将未标记的特异性一抗与标本中的抗原 结合, 然后加金标二抗或SPA与一抗结合, 在光镜或电 镜下对抗原的分布进行定位研究