血涂片制作参考26页PPT

2）pH值的影响：血细胞多种成分属 于蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所 带电荷随着溶液的pH而定。因此，血细 胞染色对氢离子浓度十分敏感。
染色时常用缓冲液（pH6.4～6.8）来调节
染色时的pH值，以达到满意的染色效果（表111）。
（2）试剂
1）Wright染液： Wright染液是由伊
红和亚甲蓝溶解于甲醇而成。甲醇的作用：
床常用的方法，主要用于观察血细胞形态
及仪器法检测结果异常的复查。
（2）厚血膜涂片法：取新鲜血液1滴于载
玻片的中央，用推片的一角将血滴由内向外旋
转涂布，制成厚薄均匀、直径约1.5cm的圆形 血膜，待自然干燥后，滴加数滴蒸馏水，使红 细胞溶解，脱去血红蛋白，倾去水，血涂片干 燥后即可染色并用显微镜检查。 本方法特别适合检查疟原虫、微丝蚴等。
（2）试剂：染液放置越久，其染色
效果越好。
（3）染色：Giemsa染色法的步骤与方 法见表1-11-2。
3．Wright-Giemsa染色法 Wright-
Giemsa染色法结合了Wright染色法和Giemsa
染色法的优点。在Wright染液配方的基础上，
每1.0g Wright染料添加0.3g Giemsa染料。染
色步骤与Wright染色法相同。
【方法学评价】血涂片染色的方法学评
价见表1-12。
【质量保证】染色过深、过浅与血
涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、 染液浓度、pH密切相关。Wright染色的
质量保证见表1-13。血涂片染色不佳的
原因及纠正措施见表1-14。
谢谢！
2．自动涂片法 目前有许多型号的自
动血液分析仪，配备有血涂片仪和染色仪，
可以按照检验人员的指令执行自动送片、 取血、推片、标记和染色等任务。

请报告箭头所指细胞内结构的名称
血涂片图谱
豪若小体（Howell-Jolly）
请报告箭头所指细胞的名称 靶形血红涂细片图胞谱
请报告箭头所指细胞的名称 异型血淋涂巴片细图谱胞
请报告箭头所指细胞的名 称
大血小板血涂、片巨图血谱 小板
请报告箭头所指现象的名称 血小板大小不均
血涂片图谱
请报告箭头所指细胞的名称 嗜多色血性涂片红图细谱 胞
请报告箭头所指细胞的名称 血球涂片形图红谱细胞
请报告箭头所指细胞的名称 赛塞利细胞血（涂淋片图巴谱肉瘤细胞）
请报告箭头所指细胞的名称 颗粒缺血涂失片的图谱中性粒细胞
请报告箭头所指细胞的名称 椭圆形血红涂片细图胞谱
请报告箭头所指细胞的名称 淋血巴涂细片图胞谱
请报告箭头所指细胞的名称 蓝细胞（血涂涂片抹图细谱胞）
请报告箭头所指细胞的名称 大血小板血、涂片巨图血谱小板
请报告箭头所指细胞的名称 缗钱血状涂片红图细谱胞
请报告箭头所指细胞的名称
血涂片图谱
口形红细胞
请报告箭头所指细胞的名称 原幼血涂淋片巴图细谱 胞
请报告箭头所指细胞的名称 血原涂单片图核谱细胞
请报告箭头所指细胞的名称 血泪涂滴片图样谱红细胞
请报告箭头所指细胞内结构的名称 血卡涂片波图氏谱环
请报告箭头所指细胞的名称 大血血小涂板片图、谱巨血小板
请报告箭头所指物的名称 血涂染片料图谱沉渣
请报告箭头所指细胞的名称 血成涂熟片图嗜谱酸性粒细胞
请报告箭头所指细胞的名称 血成涂片熟图红谱细胞
请报告箭头所指细胞的名称 异血型涂淋片巴图谱细胞
请报告箭头所指细胞的名称 异型血涂淋片巴图细谱 胞
请报告箭头所指细胞的名称 大细胞高色血涂素片性图谱红细胞或巨红细胞

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4
取血量及涂片法（涂片操作）
薄血膜 取洁净的载玻片2张， 1张平置在桌上，以左手拇 指，食指夹持载玻片两端
（手指切勿接触玻片表面），
用另一张边缘平滑（最好为
磨口边缘）的载玻片做推片，
用推片一端边缘的中点从取 血部分取约1微升的血量 （相当于1/4火柴头大小）， 使血滴与平置的载玻片接触， 并形成25~30度夹角，待 血液向两侧扩展约2厘米长 度时，均匀而迅速地轻轻向 左推出（约2.5厘米长）。
一、血膜制作 二、染色
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1
血片制作染色
血膜的制作 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂
呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘称 厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。
发热病人血片
标本片
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2
血膜的制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
.
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血片的染色 （一）染液的种类及染色原理
染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称 很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液 变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液 两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、 J.S.B氏染液等，后者包括利氏 (Leishman)、瑞氏和吉氏染液等。这些染 液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰 氧化所成的天青，所以称多色性染剂。
伊红在水溶液内遇到美兰或天青，即可互相化合而产生沈 淀从而失去染色力，因此，吉氏母液绝对不能进水。
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15
血片的染色
（二）吉氏染液母液配置方法
取吉氏粉0.5克置于研钵中，
加少量甘油充分研磨，再加再磨，
至25毫升加完为止，倒入60或 100毫升带有玻塞的有色玻瓶

红细胞大小异常 红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞
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红细胞大小异常
1．小红细胞( microcyte )：直径<6μm。血 片中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血 红蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、 珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增 多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心 淡染区消失。
对胞浆和中性颗粒染色较差，对胞核和寄 生虫着色较好。
三、瑞氏-吉姆萨复合染色法
取二者之长，染色效果好。
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瑞氏染色法
染料：酸性染料伊红和碱性染料美兰（亚甲蓝） 的复合染料。亚甲蓝氧化为次级染料天青。
溶剂：甲醇。溶解 + 固定。 磷酸盐缓冲液（PBS）：pH6.4～6.8
13
染色原理
1 .血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，与酸性伊红 结合染成粉红色，称为嗜酸性物质。
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大红细胞 巨红细胞
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红细胞大小异常
4．红细胞大小不均(anisocytosis)：指 红细胞之间直径相差一倍以上。见于严重 的增生性贫血的血涂片中。巨幼细胞性贫 血尤为明显，与骨髓造血紊乱有关。
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红细胞大小不均
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红细胞大小异常
小红细胞( microcyte ) 大红细胞( macrocyte) 巨红细胞(megalocyte) 红细胞大小不均 (anisocytosis)
2 .嗜碱性颗粒和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性美兰 结合，染成紫色或蓝色，称为嗜碱性物质。
3.中性颗粒呈等电点状态与伊红美兰均可结合，染 成紫红色，称为中性物质。
14
pH对细胞染色的影响
在酸性环境中染色偏红；在碱 性环境中染色偏蓝。因此要求用磷酸 盐缓冲液，使染色环境维持在6.4～ 6.8之间，以达到满意的染色他血液系统疾病时红 细胞除有数量变化外，往往伴有形态改 变，表现在红细胞大小、形状、染色性 质和内涵物的异常。因此，红细胞形态 检查对贫血的诊断和鉴别诊断有重要的 临床价值。

血涂片、红细胞形态
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正常红细胞 形态
血涂片、红细胞形态
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异常红细胞形态
红细胞大小异常 红细胞形状异常 血红蛋白充盈度与着色异常 红细胞内出现异常结构 红细胞排列异常 有核红细胞
血涂片、红细胞形态
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红细胞大小异常
1．小红细胞( microcyte )：直径<6μm。血片 中出现大量的染色过浅的小红细胞，提示血红 蛋白生成障碍，常见于缺铁性贫血（IDA）、 珠蛋白生成障碍性贫血。遗传性球形红细胞增 多症（HS），血红蛋白充盈良好，生理性中心 淡染区消失。
对于严重贫血患者，应如何推制血片？
血涂片、红细胞形态
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推制适当的血膜
角度大, 速度快, 太厚, 太短
推片不光滑，呈毛刷状
用力不均，呈搓板状
血量过多，无尾 血涂片、红细胞形态 玻片油腻，有空泡
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1.灰白层涂片法 抗凝血离心，取灰白层涂片。 用于白细胞减少者的白细胞分类和红斑 狼疮细胞(LEC)检查。
血涂片、红细胞形态
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1.新玻片上有游离碱质，须清洗后使用。
2.用过的载玻片须用肥皂水或乙醇除去 染料和油污。 3.使用时切勿用手触及玻片表面。
血涂片、红细胞形态
4
＊ 手工推片法
薄血涂片法 灰白层涂片法
厚血涂片法
＊ 自动血液涂片法
血涂片、红细胞形态
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手工薄血推片法
推片
手持玻片推制血膜
用推片从血滴前方接触血滴
吸附血液成一线
推完血片，迅速干燥 血涂片、红细胞形态
推片角度
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厚薄适宜，头体尾分明， 细胞分布均匀，边缘整齐， 两边和两端留有一定空隙。
血涂片、红细胞形态

❖ 绘制各种不同类型的血细胞,并说明它们 的主要作用；
❖ 任选20个红细胞，测量其直径，并计算 出平均值。
精选课件
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2.将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜 观察,调节焦距看清镜台测微尺的刻度；
3.移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜 台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某 刻度线对齐.然后从左向右查看两尺刻度线另一重 合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格 数.按下式计算目镜测微尺每格等于多少微米。
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目镜测微尺的标定
n×a X=
M
X:目镜测微尺每格的实际长度 a:镜台测微尺每格的实际长度 n:镜台测微尺的刻度数。 M:目镜测微尺的刻度数。
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4.移去镜台测微尺，换血涂片，目镜测微 尺测量细胞所占小格数X目镜测微尺每小 格代表的实际长度=被测细胞的实际长度。
精选课件
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实验报告
血涂片的制备和细胞大小的测量
精选课件
1
目的要求
1.掌握血涂片的制备方法； 2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态； 3.掌握显微测微尺的使用方法。
精选课件
2
实验原理
❖ 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血 液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
嗜中性粒细胞
精选课件
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嗜酸性粒细胞
精选课件
17
嗜碱性粒细胞
精选课件
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显微测微尺的使用
❖ 显微测微尺是用来测量在显微镜下所观察到的 物体的长度、面积的工具，包括镜台测微尺、 目镜测微尺两部分。

中性分叶粒细胞
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请报告箭头所指细胞的名称
多发性骨髓瘤细胞
99
请报告箭头所所指物的名称
都勒小体（Dohle boby)
100
请报告箭头所指细胞的名称
异型淋巴细胞
101
请报告箭头所指细胞的名称
缗钱状结构的红细胞
102
请报告箭头所指细胞的名称
嗜多色性红细胞
103
请报告箭头所指细胞的名称
大血小板、巨血小板
大血小板、巨血小板
84
请报告箭头所指细胞的名称
中幼红细胞
85
请报告箭头所指细胞的名称
颗粒缺失的嗜酸性粒细胞
86
请报告箭头所指细胞的名称
原幼淋巴细胞
87
请报告箭头所指细胞的名称
原单核细胞
88
请报告箭头所指细胞的名称
泪滴样红细胞
89
请报告箭头所指细胞内结构的名称
卡波氏环
90
请报告箭头所指细胞的名称
63
请报告箭头所指细胞的名称
泪滴样红细胞
64
请报告箭头所指细胞的名称
赛塞利细胞（sezary cell)
65
请报告箭头所指细胞的名称
颗粒减少的血小板
66
请报告箭头所指细胞的名称
中性晚幼粒细胞
67
请报告箭头所指结构的名称
棒状（Auer)小体
68
请报告箭头所指细胞的名称
成熟嗜碱性粒细胞
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请报告箭头所指细胞的名称
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请报告箭头所指细胞的名称
异型淋巴细胞
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请报告箭头所指细胞的名称
大细胞高色素性红细胞或巨红细胞
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请报告箭头所指细胞的名称

• 嗜中性粒细胞 是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数5070%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗粒细小， 分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般分3—5叶，叶 间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞年龄有关，如核为 杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。
• 嗜酸性粒细胞 比中性粒细胞略大，数量少，约占7%以下。核 常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆形的颗 粒，色鲜红或桔红。
《普通生物学》——
实验六 血涂片的制作和 血细胞的观察
实验目的
• 掌握血涂片的制作，观察红血球的形态及 在不同环境下的反应。
材料和用品
• 材料
–人血或鱼血
• 主要用品
–显微镜 酒精 棉花 5﹪ NaCl 0.9% NaCl 盖玻片 蒸馏水 载玻片
– 注射针筒 针头
别在3个玻片上滴上一滴5％NaCl、0.9％NaCl和蒸馏 水。
• 以酒精棉球消毒捐血者的指尖，等酒精自然蒸发后，用 采血针在消毒指尖刺一个小口（勿太用力，以免造成大 伤口）。将用过的采血针丢弃在指定的烧杯内。
• 将指尖血液各滴一滴至3个玻片上，并盖上盖玻片。捐 血者用棉花压住伤口直到血流停止，同时其他组员马上 进行下一步骤。
• 嗜碱性粒细胞 数量很少，约占1%以下。在一般血涂片上不易 找到，体积比上述2种白细胞稍小。胞质中分散着许多大小不一 的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定,圆形或分叶，也染成紫色，但 染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清。
• 淋巴细胞 数量较多，约占20%-40%，可见中、小型，淋巴细 胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,几乎占据 整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线 状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红细胞大，胞质较小 淋巴细胞的稍多，着色较浅。核圆形或卵圆形，位于细胞中部， 也染成深蓝紫色。