种子生活力的测定红墨水法教学设计

（一）材料： 玉米种子 （二）设备： 小烧杯；刀片；镊子； （三）试剂： 0.02％～0.2％靛红溶液、5％红墨水
三、实验步骤同TTC法
四、思考
1、试比较这二种方法所测定的结果是否相同？ 为什么？
ห้องสมุดไป่ตู้
五、注意
所列方法都是以细胞对物质的透性为前提，只能 快速地了解种子具有的发芽潜力，为急需之用。
（一）材料： 小麦种子
（二）仪器设备：
小烧杯；刀片；镊子；温箱
（三）试剂：
0.12％～0.5％TTC溶液
三、实验步骤
1. 2. 3. 4.
将种子用温水（约30℃）浸泡2～6h 随机取种子100粒，然后沿种胚中央准确切 开，取其一半备用。 将准备好的种子浸于TTC试剂中，于恒温箱 （30～35℃）中保温30min。 反应结束，观察种胚的情况，凡种胚全部 或大部分被染成红色的即为具有生命力的 种子。种胚不被染色的为死种子，如果种 胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被 染色，而胚根或胚芽的尖端不染色都属于 不能正常发芽的种子。
实验十 植物种子生命力 的快速测定
Ⅰ.TTC法 一、原理

TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）氧化态
是无色的，可被氢还原成不溶性红色三苯甲
月替（TTF）。

用TTC溶液浸泡种子，如果种胚具有生命力，
其脱氢酶就可以将TTC还原成为三苯甲月替而 呈红色;如果种胚死亡便不能染色.
二、材料、仪器设备及试剂
Ⅱ.染料染色法 一、原理

有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性， 有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进 入细胞内，胚部不染色。 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧 失了选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使 胚部染色。

种子室内检验技术教学单元教师手册
教学项目三种子室内检验技术学生手册（学习方案）
任务6：种子生活力测定资讯单
任务4：种子生活力测定实训任务单
室内检测技术任务六：种子生活力四唑测定原始记载表
生活力的生化（四唑）测定原始记载表
检验员：日期：校核人：日期：审核人：日期：
11
教学项目三种子室内检验技术任务6 种子生活力测定考核方案种子生活力检验考核评价表
12
室内检测技术任务六：种子生活力四唑测定总考核评价
种子生活力四唑考核评价单
13。

子的百分数。但是，采用发芽实验测定种子的
生活力所需时间较长，有时在生产上或种子贸
易过程中，需要较快地知道种子的生活力，采
用萌发实验就无法满足这些要求。另外，处在
休眠状态下的种子虽然不能萌发，但仍然具有
生活力，显然，采用萌发实验是无法测定休眠
种子的生活力的。而采用以下的化学方法，可
2021以/4/24较快地测定种子的生活力。
种子冲洗l~2次，观察种胚被 染色的情况。凡种胚全部或 大部分被染成红色的即为具 有生活力的种子，种胚不被 染色的为死种子。如果种胚
（30℃~35℃）中保温
中非关键性部位（如子叶的
0.5~1h。另取100粒吸涨种 一部分）被染色，而胚根或
子，于沸水中煮5min后，
胚芽的尖端不染色，都属于
再加入0.5%TTC溶液染色。 不能正常发芽的种子。根据
贮藏。若已变为红色，则不 能继续使用。
2021/4/24
4
实验步骤
▪
浸种：将待测种子用温水 （30℃~35℃）浸泡2－6 h，
▪
使种子充分吸胀。
统计：染色结束后要立即进
行鉴定，因放置太久会褪色。 倒出TTC溶液，再用清水将
▪ 显色：随机取吸涨种子100 粒，小心剥去种皮或外壳， 务必不要伤害种胚。然后将 处理好的种子置于小白瓷碗 中，加入0.5% TTC溶液， 以浸没种子为度，于恒温箱
2
实验原理
▪ 有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸代谢途 径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的2，3， 5 - 三苯基氯化四唑（2，3，5 - triphenyl tetrazolium chloride 简称为TTC）还原为红色、不溶 性的甲月替，而且种子的生活力越强，代谢活动越

大小麦种子生活力和发芽率快速测试方法夏收期间，有些地区会遭受了梅雨、暴雨和特大暴雨袭击，这给夏熟大小麦选留种带来极大困难。

因此及时做好麦种速测，做到心中有数，尤为重要。

麦种发芽需经过一段休眠期，特别是大麦种子，休眠期长达三个月左右。

这主要是种子内脱落酸含量较高，只有当脱落酸含量降低时，麦种才能解除休眠。

一、红墨水快速测定法：
1、常用红墨水稀释1:500倍液，将需测定的大麦种子用刀片纵切，取带有种胚的一半漫于红墨水液中，浸泡半小时左右，用清水冲洗后逐粒检查，凡是有生活力的种胚处无红色反应，仍呈白色，其它部分都染成红色，而无生活力的种子无论胚或胚乳部分都被染红，依据种胚的着色与否判断麦种有无生活力。

2、在采用红墨水测定的过程中，将麦种预先用清水浸泡12小时，再纵切染色，可提高测定效果，浸泡染色时间仅需10分钟。

同时由于经过了预先浸泡，经红墨水染色测定后，该半粒种子可继续留下保湿培养，观察其发芽情况，3-4天后就可得出发芽率结果；而且这一方法测定发芽率还不易受霉菌污染。

二、赤霉素快速测定法：
用赤霉素打破种子休眠期，直接速测其发芽率。

将市售小包装赤霉素配成20ppm 的溶液(即20毫克赤霉素加水1000 毫升)，将备好的大小麦种子浸人药液内，并置于冰箱，在5°C条件下浸泡24小时后，取出按常规发芽方法，每个培养皿放麦种10粒并保湿，在25°C室温下经1-2天后胚根、胚芽萌动，3-4天内就能迅速确定麦种的发芽率。

实验3 种子生活力的测定目的要求用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。

特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。

通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

一、 氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC 还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。

【试剂】TTC 溶液的配制：取1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。

药液p Ｈ应在6.5～7.5，以pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC 溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1 染色法测定种子生活力记载表+Cl+CN N NN +2HCN N NNHHCl【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

植物种子活力的检定
一实验原理
TTC法是利用有活力的种子呼吸时所产生的NADH2和NAPH2与渗入胚细胞内的TTC反应,将无色TTC还原成红色的TTF,从而使种胚着色,以鉴别种子活力的方法.凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力,而死的种子胚细胞原生质膜丧失这种能力,于是染料便能进入死细胞而染色.用红墨水等染料染色时,如果是死种子,胚乳和种胚均被染成红色,而活种子仅有胚乳被染成红色,种胚依然为白色.植物种子的活力是指种子萌发出芽的潜能,它决定种子的品质和实用价值大小
二实验目的
掌握以上两种方法测定种子活力的原理和基本操作过程
三实验器材和试剂
恒温箱电炉
0.5％TTC溶液,5％红墨水
四 操作步骤
TTC法和红墨水法
1)浸种
2)切种
3)药水浸泡
4)计数。

种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。

【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。

药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1 染色法测定种子生活力记载表【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

2.染色温度一般以25～35℃为宜。

3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。

4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。

实验四种子生活力测定一、目的要求通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

二、材料与器具1．材料刺槐种子。

2．器具及药品种子检验板、烧杯、解剖刀、小镊子、手持放大镜、量筒、培养皿、解剖针、玻璃棒、胶匙、四唑等。

三、方法步骤1．靛兰染色法靛兰为兰色粉末，分子式为C16H8N2O2（SO3）2Na2，它能透过种子的死细胞组织染上蓝色，但不能透过活细胞组织，因此活细胞不染色。

所以染成蓝色的种胚是无生活力的种子；未染色的是有生活力的种子。

根据染色部位和比例大小即可判断种子的生活力。

（1）抽取测定样品所需样品从净度测定选出的纯净种子中提取，用四分法随机取出四组种子，每组100粒，此外还要抽取约100粒种子作为后备，以便代替取胚时弄坏的种子。

（2）浸种浸种时间因树种而异。

松属、雪松属的种子在室温下浸3～5天。

刺槐种子可加入沸水不断搅拌至水凉或用锐利的解剖针或小刀等仔细地从胚根后面弄破种皮，然后用室温水浸种24h，浸种过程中更换1～2次水。

（3）取胚以松属树种为例。

浸种后，分组取胚，沿种子的棱切开种皮和胚乳。

取出种胚，种胚取出后放在盛有清水的玻璃皿里，以免种胚干燥萎缩而丧失生活力。

取胚时随时记下空粒、腐烂粒、感染了病害虫害的种粒以及其它显然没有生活力的种子粒数分组记入记录表。

如取胚时由于人为技术而破坏种胚，可以从后备组中任取一粒取胚补上。

（4）溶液的配制及染色用蒸馏水配成浓度为0.05～0.1的溶液。

随配随用，不宜存放过久。

在20℃～30℃条件下约需浸2～3h。

试剂的用量应该能够完全浸没种胚。

将玻璃器皿中清水到出余下种胚，立即注入靛兰溶液，淹没种胚，如有种胚浮在表面，应将其拨沉，（5）观察记载当到达染色所规定的时间之后倒出靛兰溶液。

用清水冲洗种胚，立即将种胚放在垫有潮湿的白纸的培养皿中观察。

根据染色的部位和程度，把胚分为有生活力的和无生活力的两类，记入表5-1。

取胚时受到机械损伤的部分也会染上颜色，但不要把它作为没有生活力的种胚。

ISTA Working Sheets on Tetrazolium Testing, Volume I, 1st Edition, 2003 Volume I - Agricultural, Vegetable and Horticultural Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
Volume II, 1st Edition, 2003 Volume II - Tree and Shrub Species By N. Leist and S. Krämer Illustrated by J. Pfäfflin
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（2）磷酸缓冲液常用来配制四唑染色液（Ph6.5-7.5） (1)ISTA法： 母液I：9.078g KH2PO4溶解于1000ml蒸馏水；
母液Ⅱ： 9.472gNa2HP04 或11.876g Na2HPO4· 2O溶解于 2H
或在两端横切，打开胚腔，并 切去小部分胚乳(配子体组织) 针叶树种子沿胚旁 边纵切
Gansu Agricultural Universiry
第一节 种子生活力测定原理及方法
（3）四唑染色
目的：通过染色反应，将胚和活的营养组织里的
健壮、衰弱和死亡部分的差异正确地显现出来。 染色程序： 将准备好的100×4种子放入适宜大小的培养皿或 烧杯中。 加入适宜浓度的四唑溶液，以淹没种子为度，移置 到一定温度的（黑暗或弱光）恒温箱内进行染色反应。

3、 计数种胚不着色或着色浅的种子数，算出其 发芽率。
活种子 死种子
纸上荧光法
原理： 凡有生活力的种子和已经死亡的种子，它
们的种皮对物质的透性是不同的，而许 多植物的种子中又都含有荧光物质。利 用对荧光物质的不同透性来区分种子的 死活，方法简单，特别是对十字花科植 物的种子，尤为适用。
仪器、材料与试剂：
方法与步骤：
1、 浸种：（同BTB法）
2、 染色：取已吸胀的种子200粒，沿胚和中线切 为两半，将一半置于培养皿中，加入5%红墨水 （以淹没种子为度），染色5-10分钟，（温度 高时时间可短些）。
染色后，倒去红墨水液，用水冲洗多次，至冲洗 液为无色止。检查种子死活。结果凡种胚不着 色或着色很浅的为活种子，凡种胚与胚乳着色 程度相同的为死种子。可用沸水杀死的种子为 对照观察。
1%BTB琼脂凝胶：取0.1%BTB溶液100ml 至于烧瓶中，另将1g琼脂剪碎后加入， 用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶 解后，趁热倒入数个干净的培养皿中， 使成为一均匀的薄层冷却后备用。
方法与步骤：
1、 浸种：为了增强种胚的呼吸强度，使 BTB反应迅速而鲜明,必须预先充分浸种。 取小麦种子50粒，在30—50oC条件下， 浸种3—5小时，
2、 播种：将充分吸胀的种子整齐排列于 培养皿的中央。种子的间距应大些，使 各种子的胚部相互离开（直径10厘米的 培养皿不宜超过50粒）。务必使种子的 胚部都向下，腹沟向上，当凝胶温度降 至40oC时，沿玻棒仔细倒入各种子之间， 成一均匀薄层（0.2-0.4cm为宜），使种 胚埋没与胶层之中。
3、 观察及计数：将培养皿放于30—50oC 条件下小麦1-2小时，就可对光观察，并 初次计数。（观察时要从透射光下看）。 在蓝色背景下，凡局限于种胚附近，出 现较深的黄晕色圈的是活种子，无黄晕 色圈的可能是死种子。结果计数。

实验六种子生活力的快速测定一、实验目的1.加深对种子作用的理解；2.掌握种子生活力的测定方法。

二、实验原理在播种、交换和调运种子之前，都要及时了解种子的发芽率，以确定是否作为播种材料或引种种源。

因此，快速而又准确地测定种子生活力，对于及时调种和播种后确保全苗、壮苗具有极其重要的意义。

种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。

有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产生的氢（H）有生活力的种子进行呼吸作用，呼吸代谢途径催化产种子生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深；死亡种子没有呼吸作用，不会将TTC还原成红色；种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染成较浅或局部被染色；三、实验材料及用品材料：绿豆种子实验器皿：恒温箱、小烧杯、镊子、刀片实验试剂：0.5%TTC溶液（避光保存）四、实验步骤1. 浸种：将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸作用。

2. 显色：a、种子处理：随即选取吸胀的种子 40 粒，小心剥去种皮，勿伤及种胚。

b、实验组处理：将处理好的20粒种子置于小烧杯中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保1h。

c、对照组处理：另取20粒种子，于沸水浴中煮5min后，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为宜，恒温（32℃）中保温1h。

3. 统计：染色结束，马上鉴定；倒出TTC溶液，用清水将种子冲洗1-2次，观察种胚乳染色情况。

有生活力种子：种胚全部或大部分被染成红色；无生活力种子：不被染色。

生活力的种子数计算种子生活力的比率= ————————X 100%实验组测定种子数五、实验现象与结果保温1h后种子染色情况：被染色的数目未被染色的数目未煮沸的种子14 6煮沸的种子 0 20表一种子染色情况记录表图1 未煮沸的种子染色情况图2 煮沸的种子染色情况生活力的种子数未煮沸的种子生活力的比率= ————————X 100% = 14/20 X 100% = 70%实验组测定种子数生活力的种子数煮沸的种子生活力的比率= ———————X 100% =0/20 X 100% = 0实验组测定种子数六、分析和讨论1.在实验中，去种皮时要小心防止伤及种胚，因为胚是种子中的活细胞，若损失可能使实验无法进行反应，造成实验的误差。

实验一，水稻种子活力的快速测定、发芽特性观察一、实验目的：1、学习和掌握水稻种子活力的快速测定方法。

2、观察不同温度和水分（氧气）条件下稻种的发芽情况。

3、了解水稻种子的发芽特性及其与外界环境条件的关系。

二、实验内容：（1）T.T.C法快速鉴定种子生活力原理：凡是有生命活力的种子胚，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种子胚则没有此反应。

当TTC（氯化三苯基四氮唑）深入种子胚的活细胞内时，被种胚中的脱氢辅酶还原成不溶性的红色稳定不扩散的TTF（三苯甲腙）。

（2）红墨水法快速测定种子生活力原理：凡是有活力的种子胚细胞的原生质膜具有半透性，选择性吸收物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。

而丧失活力的种子，其胚部细胞原生质膜会丧失选择吸收能力，于是染料便能自由进入死细胞内而染色，所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的活力。

（3）具备有发芽能力的水稻种子在一定水分、温度和氧气条件下，即能萌发生长。

种子吸收水分以后，在30－35℃条件下发芽较快，但根芽生长受氧气供应程度的影响较大。

氧气充足时，先长根，而水分充足氧气缺乏时，则芽鞘先伸长。

因此，掌握适宜的温度，水分（氧气）条件进行催芽，才能达到芽齐、芽壮，为培育壮秧打好基础。

三、实验仪器、设备:1.籼（A种，B种）、粳型水稻种子（C种，D种），恒温箱，冰箱，培养皿9cm（12套）及15cm(36套)，定性滤纸15cm（一盒），烧杯250ml (12个)，刀片，游标卡尺，温度计，放大镜，镊子等。

红墨水一瓶，红四氮唑（TTC）一瓶。

2.直尺、天平、游标卡尺、干燥箱、网筛（装秧洗土）、剪刀。

四、实验要求：每5人为1组，全班分为6组。

1.水稻种子活力的测定1.1 T.T.C法快速鉴定种子生活力①预先浸种：每组取待测粳、籼稻种子各20粒预浸，籼稻种子浸6-8小时，粳稻种子浸24小时。

之后取出部分浸泡过的粳稻种子和籼稻种子于80℃的高温环境下煮10-15分钟并将其编号籼（A种，B种）和粳型水稻种子（C种，D种）。

第五章种子生活力与活力测定本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法§2、种子活力测定原理及方法第一节种子生活力测定的原理与方法在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。

一、种子生活力概念：种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力；种子生活力和发芽具有不同的含义：一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。

而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。

所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。

二、种子生活力测定的意义1、测定休眠种子的生活力新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。

必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。

（怎样利用？）播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。

种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。

2、快速预测种子的发芽力:休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需的时间较长。

如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。

而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d计算发芽率）。

这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。

种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。

本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。

三、四唑测定法（GB）(一)四唑测定法概述1、发展简史四唑测定法于1942年由德国(莱康)教授发明，二战期间传人美国。

ISTA于1950年成立四唑测定技术委员会，1953年首次将四唑测定列入国际种子检验规程，主持编写《四唑测定手册》，经过多次ISTA 会议讨论修改，于1984年正式公布发行。

实验二蔬菜种子质量及活力测定一、实验目的了解种子品质测定及活力测定在生产上的意义，并掌握其测定及处理的方法。

二、实验器材1.材料：各种蔬菜种子、瓜类和豆类蔬菜吸水膨胀的新种子和陈种子（贮藏三年以上的种子）、红墨水或TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）。

2.用具：恒温箱、棕色试剂瓶、刀片、剪刀、电炉一个、烧杯、量筒、盆、培养皿、纱布、标签、毛巾。

三、方法步骤1.种子纯度测定（1）取样：将样品置于光滑平坦的平面上，均匀搅拌。

然后耙平，使之呈正方形，画对角线将样品分成四等份，除去上下对角线中的种子，将剩余种子混匀后再用划线法分离，如此重复直到获得需要供试之样品重量为止。

（2）测定：根据种子大小，称出种子2份，每份50（小粒种子）～500（大粒种子），仔细清除混杂物，然后称重计算，取2份种子，取其平均值作为被测种子的纯洁度。

2.种子绝对重量（千粒重）自纯净种子中不加选择地数出1000粒种子（大粒种子500粒），称重，重复一次，取2份种子，取其平均值作为被测种子的绝对重量。

3.种子发芽率及发芽势（1）发芽床准备：在培养皿中铺放2～3层滤纸，滤纸浸湿，水量以培养皿倾斜而水不滴出为度。

（2）种子的准备：从纯净种子中按取样的方法取得平均样品，而后随机连续数取种子2-4份，作为检验样品，每份种子50粒（大粒）～100粒（小粒）。

（3）播放种子：将种子均匀排放于发芽床中，培养皿贴上标签，注明蔬菜名称、重复次数、处理日期等。

然后将种子放在适宜的温度和光照条件下（见表11.3、11.4、11.5）在恒温箱或温室内进行发芽。

（4）种子管理：发芽期间，每天早晨或晚上检查温度并适当补充水分、氧气，发现霉烂种子随时拣出登记，有5%以上种子发霉时，应更换发芽床，种皮上生霉时可洗净后仍放在发芽床上。

在恒温箱底部放一定期换水的水槽，利于保持箱内的湿度。

（5）发芽情况统计：种子的胚根长大种子的一半时可以认为是发芽的种子。

凡有下列情况之一者，都作为不发芽的种子：没有幼根的种子或有根而无芽者；种子柔软、腐烂而不能发芽着；幼根和幼芽为畸形者；豆科有些不发芽也不腐烂的硬粒种子。

3、统计结果并计算萌芽率
以沸水烧死的种子作为对照 染色20min后,用水冲洗至洗液无色,检查 种子死活.凡胚不着色或着色很浅的为活 种子;凡胚与胚乳着色程度相同的为死种 子.
实验结果
统计结果为:50粒种子中有2粒为死种子 ∴萌芽率为 48/50×100%=96%
注意事项
必须将种子沿中轴均匀地切成两半,然 后分装到两个培养皿中,否则就达不到 对照的效果. 统计种子死活之前,必须用水冲洗至洗 液无色,以免影响实验结果.
实验器材与试剂
实验仪器:恒温箱,烧杯,培养皿,漏斗,镊子, 实验试剂:5%红墨水 实验材料:大麦,小麦,粳谷的种子
实验步骤
1、浸种
将待测种子在30-35℃温水中浸种(大 麦,小麦6-8小时),以增强种胚的呼吸强 度,使显色迅速.
2、染色
取已吸胀的种子50粒,沿胚的中轴线切 为两半,分置于两个培养皿中,其中一个 以沸水处理10min后,各加3%红墨水染色 20min
实验九 种子发芽率的快速测定
南京晓庄学院生命科学系
实验目的
熟悉种子活力快速ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ定的各种方法
种子活力测定的常用方法有：
氯化三苯基四氮唑法(TTC法) 溴麝香草酚蓝法(BBT法) 红墨水染色法 纸上荧光法
本实验采用红墨水染色法
实验原理
生活细胞的原生质膜具选择性吸收物质 的能力,而死的胚细胞则没有这个能力, 于是染料便能进入死细胞而染色,通过 这种方法可以确定种子的死活.

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱 TTC还原反应
种胚染色不明显
Ⅱ.溴麝香草酚蓝法（BTB法） 凡活细胞必进行呼吸作用，吸收O2、 放出CO2，CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3 解离成H＋和HCO3-，使种胚周围环境的酸 度增加，用溴麝香草酚蓝（BTB）可以测定 酸度的：
（1）活种子: 胚不着色或着色很浅;
（2）死种子: 种胚的着色度和胚乳相同。
3.记录及计算 统计上述3种方法胚部有生活力种子的数目，将 观察判断结果记入下表（P79 ，表1-25-1 ）内，并求 出发芽率。
表1-25-1 种子生活力的快速测定记录表
项目 种子名称 供试粒数/ 个 有生活力 的种子粒 数/个 无生活力 的种子粒 数/个 有生活力 种子占供 试粒数的 百分数/%
种子生活力的快速测定
种子生活力测定简介
种子发芽率是指在适宜的条件下、在规
定的时间内种子发芽的百分数。
它是衡量种子品质的主要依据，在确定
播种量及种子生理研究方面具有重要的作 用。
用直接发芽的方法测定种子发芽率所需时间
长，尤其是对于处于深度休眠状态的种子，几乎 难以应用。 而利用快速测定的方法，则能在较短的时间 内测得种胚的生活力，以了解种子是否具有发芽 的潜力。
方法与步骤
1.浸种 将玉米的新种子，用30～35℃温水浸 种24h，使其充分吸涨，以增强种胚的呼吸 速率。
2.显色（染色）与观察 Ⅰ.氯化三苯基四氮唑（TTC）法 显色 （1）随机取吸涨的种子20粒，用单面刀片沿种胚中 心线纵切为二半; （2）将其中的一半置于培养皿中，将另一半在沸水 中煮5min杀死种胚，作同样处理（作为对照）; （3）加入适量的0.5%TTC溶液（以覆盖种子为度）; （4）分别做标记; （5）在40℃的恒温箱中放置30min。