实验三 种子生活力测定

三种常用检测种子生活力方法比较(1)随着种子在种植中所占的重要地位，各种检测种子生活力的方法也应运而生。

常用的检测种子生活力的方法有三种，分别是发芽率法、荧光法和电导率法。

本文将对这三种方法进行详细介绍，并进行比较。

一、发芽率法发芽率法是最常用的检测种子生活力的方法之一。

其主要原理是把一定数量的种子在一定的条件下进行发芽，然后通过计算发芽率来推断种子的生活力。

条件包括温度、湿度、光照和通风等，不同的作物和品种有不同的最适条件。

发芽率法检测种子主要有以下几个优点：一是操作简单；二是可大批量检测；三是检测结果真实可靠。

但是同时也存在着一些缺点，如检测时间长、结果受环境因素的影响等。

二、荧光法荧光法是一种新兴的检测种子生活力的方法。

荧光法主要利用了种子的细胞色素氧化酶体系在氧化还原体系下发生反应而使荧光物质荧光素产生荧光。

通过测定产生的荧光的强度来判断种子的生活力。

三、电导率法电导率法是一种利用种子中质量和导电能力的变化来测定种子生活力的方法。

其主要原理是将一定数量的种子放入导电液中，通过测定电导率的变化来判断种子的生活力。

导电液可以是盐水、糖水、电导液等。

三种方法比较从上述的介绍可以看出，每种方法都有其优点和缺点，没有一种方法是完美的。

所以在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的方法。

一般来说，发芽率法适用于大批量检测，荧光法适用于单个种子检测，电导率法适用于不同品种间的比较。

除此之外，也可以选择不同的方法相互协作，如发芽率法和荧光法或者电导率法和发芽率法组合使用。

欢迎阅读种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。

【试剂】TTC溶液的配制：取1gTTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。

药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1染色法测定种子生活力记载表方法种子名称供试粒数有生活力种子粒数无生活力种子粒数有生活力种子占供式粒数的%【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

2.染色温度一般以25～35℃为宜。

3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。

4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。

种子生活力快速测定------红墨水染色法一、教学目标：知识与能力熟悉红墨水染色法测定种子生活力的原理和方法及其计算过程与方法通过实验，培养学生动手操作的能力情感态度与价值观通过观察和实验等教学活动，培养学生科学的思维方法，实事求是的科学态度以及协作精神。

二、教学重点和难点显色过程既是重点又是难点三、教学准备（一）教师准备1.仪器设备、材料和试剂（1）仪器：培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切种子用)1块；烧杯1个；搪瓷盘1个；（2）试剂：取市售红墨水稀释20倍（1份红墨水加19份自来水）做为染色剂。

（3）材料：玉米或小麦2.实验操作准备浸种实验组将待测种子在30～35℃温水中浸泡(大麦、小麦、籼谷6～8h , 玉米5h左右,梗谷2h), 以增强种胚的呼吸强度,使显色迅速。

对照组取充分吸胀后取出一部分种子，在沸水中煮沸3～5min，3．学生分好组（二）、学生准备学生课前认真的自学，自己查找相关资料，了解与弄清所需实验用具或用品的用途和用法，做好预习案及实验前的一切准备。

四、教学方法、教学手段：1、教学方法：实验探究。

2、教学手段：本节课以学生亲自动手实践为主，教师演示与辅导为辅的教学手段。

五、教学设计：（一）创设情景，导入新课：教师讲述：种子生活力就是种子发芽的潜在能力，通过对种子生活力的测定可以快速预测种子的发芽能力，为我们的播种选种提供理论依据，本节课我们就是学习怎样动手快速测定种子生活力。

（二）讲授新课1.将在预习过程中遇到的疑惑，带到课堂师生共同解决，师生共同回顾种子生活力的相关知识。

2.红墨水染色法测种子生活力（1）教师示范操作（同时讲解操作要点）步骤：①. 显色取吸胀的种子和死种子各50粒,用刀片沿种胚中央纵切为两半, 其中一半放入培养皿中，加适量红墨水溶液（以浸没种子为度），染色10-20min后倒去红墨水溶液,用水反复冲洗多次,至冲洗液无色为止。

②.观察对比观察冲洗后两组种子胚部着色情况。

种子活力的测定【实验目的】学习掌握TTC法和红墨水染色法快速测定种子活力的原理和方法【实验原理】TTC法：活种子的胚在呼吸作用过程中能进行氧化还原反应，而死种子则无此反应。

当TTC渗入活种子胚细胞内作为氢受体而被脱氢辅酶(NADH2或NADPH2)上的氢还原时，无色的TTC转变为红色的三苯基甲腙（TTF）；如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力。

红墨水染色法：活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。

种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总数×100%TTC法：活种子百分率（%）=（染成红色的种子粒数/实验种子的总粒数)×100%红墨水法：活种子百分率（%）=(不着色或着色很浅的种子粒数占实验种子/实验种子的总粒数) ×100%【实验材料、试剂】玉米、小麦种子0.3%(w/v)TTC5%红墨水（红墨水5ml+95ml自来水)【实验步骤】TTC法1. 将玉米、小麦种子用温水(30~35℃)浸泡3~6h，使种子充分吸胀。

2. 随机取种子30粒，沿种胚中央准确切开，其中一半置于培养皿中，加入0.3%TTC，以覆盖种子为宜，置于30 ℃观察培养箱中培养30min ；另30半粒玉米置于沸水中2min以杀死胚，同样加入0.5%TTC置于30 ℃培养箱中染色处理作为对照观察。

3. 倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗2次，观察种胚被染色的情况。

4.观察：种胚为红色为活种子，而不能染色或染色较浅的为死种子。

5%红墨水显色1.同样将吸胀的玉米、小麦种子30粒用单面刀沿种子胚的中心线纵切为两半；2.其中一半置于培养皿中，加入5%红墨水，以覆盖种子为宜，置于30 ℃培养箱中培养10min.染色后倒去红墨水并用水冲洗多次至冲洗液无色为止。

另30半粒玉米置于沸水中2min以杀死胚，同样加入5%红墨水置于30℃培养箱中染色处理作为对照观察；3.观察：凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。

实验3 种子生活力的测定目的要求用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。

特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。

通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

一、 氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC 还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。

【试剂】TTC 溶液的配制：取1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。

药液p Ｈ应在6.5～7.5，以pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC 溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1 染色法测定种子生活力记载表+Cl+CN N NN +2HCN N NNHHCl【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

华南农业大学实验报告专业班次11农学1班组别201130010110 题目种子生活力的快速测定（TTC法）姓名梁志雄日期2012-11-21一、实验原理有活力种胚中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色TTF，如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力二、实验材料与实验器材水稻种子、恒温箱、小白瓷碗、镊子、小烧杯三、实验步骤1、实验之前将种子放在微波炉里稍微加热，将水稻种子用温水（30~35℃）浸泡2~6h，使种子充分吸涨2、随机抽取30粒水稻种子，小心剥去种皮，千万不要伤害种胚，然后把处理好的种子置于小白瓷碗中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为度，与恒温箱中（30~35℃）中保温0.5-1h。

3、染色结束后要立即进行鉴定，因放置太久会褪色。

倒出TTC溶液，再用清水将种子清洗1~2次，观察种胚染色的情况。

凡种胚全部或大部分被染成红色即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。

四、数据记录记录本实验测得染色种子25粒，无色种子5粒，其中染色的25粒种子中有19粒种子染色是比较深的，说明其生长活性物质多，生命力强。

根据以下公式种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总数×100%可以知道种子活力=25/30*100%=83.3%六、实验总结有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸过程中的代谢物质跟TTC反应生成红色TTF，且代谢物质越多，颜色越深，代谢强度越大。

从本实验结果来看，种子生命力总体上时比较强的，且其中的19粒染色较深的那些则更高。

另外TTC法还可以运用于花粉活力的测定。

植物生理学小论文三种常用检测种子生活力方法的比较班级：09级生物技术2班学号：系别：化学与生命科学系:雪婷日期：2012年5月15日浅谈三种常用检测种子生活力的方法雪婷（师学院化学与生命科学系675000）［摘要］种子活力是种子最重要的生理及生产指标之一，近年来，无论在育种选种方面还是植物生理实验方面都得到广泛关注。

本文基于对种子活力的概念、影响种子活力的因素和种子活力快速测定的最新研究进展为基准，对TTC法、BTB法及红墨水染色法三种常见种子活力快速检测方法进行了简要综述。

结论：四氮呢染色法是蔓荆子种子生活力测定的最佳方法，生活力与发芽率呈显著的正相关。

关键词：种子活力；TTC法；BTB法；红墨水染色法；研究进展The discussion on three kinds of methods todetect seed vigorSUN-xueting（Chuxiong normal university, chuxiong, yunnan675000f China）Abstracts： The seed vigor is the most important physiological and seed production indexes・ In recent years♦ No matter in selecting seeds breeding or in plant physiology experiments・ The seedvigor is widely mentioned This paper based on the concept of the seed vigor influence factors of the seed vigor and the seed vigor rapid determ in at ion of the latest research progress Compari tion of three kinds of methods to determine seed vigor・Keywords： seed vigor ； Triphenyl Tetrazol ium Chloride method； Bromo— thymol blue method；red ink method；research progress种子生活力是检测种子质量最重要的指标之一，它对于种子的发育，萌发，成熟以及成长为植株的潜在能力具有十分紧密的联系。

实验三十九种子生活力的快速测定种子发芽率是鉴定种子品质的重要标志，在确定播种量以及种子生理研究方面具有重要的作用，常需加以测定。

但一般测定发芽率的方法所需时间长，尤其是对处在深休眠状态的种子，根本无法应用，所以有必要根据活种子的生理特性建立起一套快速鉴定种子生活力的方法，以克服常规方法的缺点。

本实验介绍剥胚法，染色法和荧光法三类方法，可根据具体情况选用。

Ⅰ、剥胚法一、目的掌握用剥胚法测定种子生活力的原理和方法。

二．原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。

种子深休眠的原因很多，有些是因为果皮或种皮的束缚（如不透水、不透气）造成的；也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂，这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。

当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后，胚就很快萌发。

三、材料与设备1. 材料：苹果、柑桔的成熟种子或玉米乳熟期籽粒。

2. 设备：培养皿；滤纸；刀片；镊子。

3. 试剂：0.1﹪升汞。

四、实验步骤1. 种子处理取刚从成熟果实中剥出的新鲜柑桔种子300粒，已晒干的柑桔种子100粒，乳熟期新鲜玉米种子200粒，经晒干的乳熟期玉米种子或贮存三年以上的玉米陈种子各100粒，用0.1％升汞消毒后再用水充分洗净，进行以下处理：1.1柑桔新鲜种子，不加处理，作为对照；1.2 柑桔新鲜种子，用镊子小心剥去种皮，留下完整的胚；1.3柑桔新鲜种子，用刀片把种子横切为二，留下带胚根的一半，注意切除部分应不少于种子全长的一半。

1.4晒干的柑桔种子*，处理同1.2；*柑桔种子经晒干后即失去发芽能力。

1.5新鲜乳熟期玉米粒，不加处理作为对照（新鲜乳熟玉米种子粒因胚乳中存在着萌发抑制剂，不能萌发）。

1.6新鲜乳熟期玉米子粒，用镊子小心地将胚剥出。

1.7 晒干的乳熟期玉米子粒，不加处理。

1.8 贮存三年以上的玉米陈子粒，不加处理。

2. 观察测定以上处理完毕，随即将种子或胚整齐地摆在铺有适当大小滤纸的培养皿里，用蒸馏水湿润滤纸，加盖后置30℃左右的温箱中培养，并注意随时补充水分（但不可加水过多，否则易因缺氧而霉烂），从第二天起每天统计发芽种子数，记入下表，连续观察二星期。