种子生活力测定原理及方法

实验 17 种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。

它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。

测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。

但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。

而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。

Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。

死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。

种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。

因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。

（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。

溶液避光保存，若变红色，即不能再用。

（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。

三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。

2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。

然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。

观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。

将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。

实验三十九种子生活力的快速测定种子发芽率是鉴定种子品质的重要标志，在确定播种量以及种子生理研究方面具有重要的作用，常需加以测定。

但一般测定发芽率的方法所需时间长，尤其是对处在深休眠状态的种子，根本无法应用，所以有必要根据活种子的生理特性建立起一套快速鉴定种子生活力的方法，以克服常规方法的缺点。

本实验介绍剥胚法，染色法和荧光法三类方法，可根据具体情况选用。

Ⅰ、剥胚法一、目的掌握用剥胚法测定种子生活力的原理和方法。

二．原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。

种子深休眠的原因很多，有些是因为果皮或种皮的束缚（如不透水、不透气）造成的；也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂，这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。

当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后，胚就很快萌发。

三、材料与设备1. 材料：苹果、柑桔的成熟种子或玉米乳熟期籽粒。

2. 设备：培养皿；滤纸；刀片；镊子。

3. 试剂：0.1﹪升汞。

四、实验步骤1. 种子处理取刚从成熟果实中剥出的新鲜柑桔种子300粒，已晒干的柑桔种子100粒，乳熟期新鲜玉米种子200粒，经晒干的乳熟期玉米种子或贮存三年以上的玉米陈种子各100粒，用0.1％升汞消毒后再用水充分洗净，进行以下处理：1.1柑桔新鲜种子，不加处理，作为对照；1.2 柑桔新鲜种子，用镊子小心剥去种皮，留下完整的胚；1.3柑桔新鲜种子，用刀片把种子横切为二，留下带胚根的一半，注意切除部分应不少于种子全长的一半。

1.4晒干的柑桔种子*，处理同1.2；*柑桔种子经晒干后即失去发芽能力。

1.5新鲜乳熟期玉米粒，不加处理作为对照（新鲜乳熟玉米种子粒因胚乳中存在着萌发抑制剂，不能萌发）。

1.6新鲜乳熟期玉米子粒，用镊子小心地将胚剥出。

1.7 晒干的乳熟期玉米子粒，不加处理。

1.8 贮存三年以上的玉米陈子粒，不加处理。

2. 观察测定以上处理完毕，随即将种子或胚整齐地摆在铺有适当大小滤纸的培养皿里，用蒸馏水湿润滤纸，加盖后置30℃左右的温箱中培养，并注意随时补充水分（但不可加水过多，否则易因缺氧而霉烂），从第二天起每天统计发芽种子数，记入下表，连续观察二星期。

实验3 种子生活力的测定目的要求用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。

特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。

通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。

一、 氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。

当TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。

当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。

TTC 还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。

【试剂】TTC 溶液的配制：取1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。

药液p Ｈ应在6.5～7.5，以pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。

【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。

2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。

3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC 溶液，以浸没种子为度。

4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。

表32-1 染色法测定种子生活力记载表+Cl+CN N NN +2HCN N NNHHCl【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。

(精品)种子生活力测定的原理种子生活力测定是种子品质检测的重要方法之一。

其原理是利用种子的代谢活动作为生活力的指标，通过测定种子的呼吸率、发芽率、抽胚率等参数来评价种子的生活力。

下面将详细介绍种子生活力测定的原理。

一、种子呼吸率的测定原理呼吸作为种子的代谢过程之一，可反映种子的生物化学活性。

种子呼吸率是指在单位时间内种子的氧气消耗量或二氧化碳产生量，即呼吸强度。

呼吸率的大小直接关系到种子的能量来源和消耗。

种子在用氧进行呼吸作用时，主要的代谢物质是葡萄糖和氨基酸，产生 ATP 等能量分子和二氧化碳、水等代谢产物。

利用呼吸量，可以评价种子存活度和质量。

测定种子呼吸率的方法有很多种，如使用光谱法、显微镜熔点计、低温燃烧法、气体检测法等。

其中，气体检测法是应用最广泛的一种方法。

方法是将种子装在呼吸率仪中，通过不断加入氧气和排出二氧化碳实现测定。

常用的仪器有 WSTE-1、WTmod1-1 等。

种子发芽率是种子生活力测定中最基本的参数之一。

它是指单位时间内种子的发芽数，反映种子生长发育的潜力和种子质量的优劣。

种子发芽过程主要涉及种子萌发、根和胚芽的形成和生长等，需要有充足的水分、适温、氧气和光照等条件。

种子发芽率受多种因素影响，如种子保存条件、处理方式、种子来源、品种特性等。

测定种子发芽率，常用的方法有常规温室法、纸巾培养法、挂网法等。

其中，常规温室法是最常用的一种方法。

其原理是将一定数量的种子放置在经过灭菌处理的仿土或营养物质充足的培养土壤中，在一定的温度和湿度条件下观察种子发芽情况，测定发芽率。

一般情况下，种子发芽率可以在 7-14 天内达到稳定。

种子抽胚率是指在不同水分和温度条件下，种子实现一定程度的萌发至抽胚的百分比。

它是种子品质的重要指标之一，同样受到多种因素影响，如种类、存储条件、处理方式等。

抽胚率的测定，常用的方法是室内拟真鉴别法和高温处理法。

室内拟真鉴别法是将种子放置在一定温度和湿度条件下，观察其抽胚情况；高温处理法是将种子暴露在高温环境中，观察其能否抽胚。

第五章种子生活力与活力测定本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法§2、种子活力测定原理及方法第一节种子生活力测定的原理与方法在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。

一、种子生活力概念：种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力；种子生活力和发芽具有不同的含义：一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。

而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。

所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。

二、种子生活力测定的意义1、测定休眠种子的生活力新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。

必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。

（怎样利用？）播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。

种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。

2、快速预测种子的发芽力:休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需的时间较长。

如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。

而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d计算发芽率）。

这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。

种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。

本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。

三、四唑测定法（GB）(一)四唑测定法概述1、发展简史四唑测定法于1942年由德国kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。

TTC测定（Tetrazolium Chloride测定法）是一种用于测定种子生活力的方法。

它通过将TTC溶液加入种子样品，测定种子内的脱氧酶活性，从而评估种子的生活力。

TTC测定的原理是：种子中含有脱氧酶，当种子受到刺激时，脱氧酶会将TTC转化为红色染料，用红色染料的含量来反映种子的生活力。

TTC测定的方法如下：
1.准备TTC溶液：将TTC粉末加入溶剂，按照所需浓度调整溶液。

2.准备种子样品：选择合适的种子数量，放入容器中。

3.加入TTC溶液：将TTC溶液加入种子样品中，搅拌均匀。

4.观察染色情况：在适当的时间内观察种子的染色情况，测定红色染料的含量。

TTC测定的效果是：通过TTC测定，可以准确评估种子的生活力，为种子的选择和保存提供依据。

此外，TTC测定还可以用于比较不同品种、不同保存条件下种子的生活力差异。

河南农业2016年第1期（上）LIANG ZHONG LIANG FA良种良法一、种子生活力的概念种子生活力是指种子发芽的潜在发芽能力或种胚所具有的生命力。

在种子植物中，许多植物种子具有休眠特性，如新收获的水稻、小麦、大麦、菠菜、芹菜等种子，一般发芽率很低，只有10%~50%。

但实际上，绝大多数不发芽的种子可能是具有生活力的，只是因为处在休眠状态而暂时不能全部发芽而已。

因此，在一个种子样品中全部有生命力的种子，应包括已能发芽的种子和暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子两个部分。

二、种子生活力的测定方法种子生活力的测定方法很多，归纳起来可分为休眠种子预措法、软X-射线法、生物化学速测法、生活力速测仪等。

种子检验工作中最常用的是生化测定。

生化测定是指应用生物化学的方法测定种子的生活力，具有简单、方便、快速等特点。

最常用的有四唑染色法、靓红染色法和红墨水法，但正式列入国际种子检验规程和我国农作物种子检验规程的种子生活力测定方法是四唑染色法。

三、四唑染色法的主要仪器设备电热恒温箱、变温发芽箱、冰箱、体视显微镜、台镜、手持放大镜和小型放大镜、四唑测定工作台、种子真空数种仪。

四、配制溶液用四唑配制成0.1%~1.0%（m/v ）溶液，1.0%溶液用于不切开胚的种子染色，0.1~0.5%溶液用于已经切开胚的种子染色，配成的溶液须贮存在黑暗处或棕色瓶里。

如果用蒸馏水配制溶液的pH 值不在6.5~7.5范围内，则采用磷酸缓冲液来配制。

五、四唑测定程序种子生活力测定的试样应从净度分析后并经充分混合的净种子中随机数取100粒种子，2~4个重复或少于100粒的若干副重复。

如果是测定发芽末期休眠种子的生活力，则可单用试验末期的休眠种子。

试验样品来源必须是净种子。

净种子可以从净度分析后的净种子中随机数取，也可以从送验样品中直接随机数取。

一般随机数取100粒种子，2~4个重复或少于100粒的若干副重复。

如果是测定发芽末期休眠种子的生活力，则可单用试验末期的休眠种子。

华南农业大学实验报告专业班次11农学1班组别201130010110 题目种子生活力的快速测定（TTC法）姓名梁志雄日期2012-11-21一、实验原理有活力种胚中的脱氢酶可以将TTC还原成不溶性的红色TTF，如果种胚死亡或种胚生活力衰退，则不能染色或染色较浅，因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生活力二、实验材料与实验器材水稻种子、恒温箱、小白瓷碗、镊子、小烧杯三、实验步骤1、实验之前将种子放在微波炉里稍微加热，将水稻种子用温水（30~35℃）浸泡2~6h，使种子充分吸涨2、随机抽取30粒水稻种子，小心剥去种皮，千万不要伤害种胚，然后把处理好的种子置于小白瓷碗中，加入0.5%TTC溶液，以刚好浸没种子为度，与恒温箱中（30~35℃）中保温0.5-1h。

3、染色结束后要立即进行鉴定，因放置太久会褪色。

倒出TTC溶液，再用清水将种子清洗1~2次，观察种胚染色的情况。

凡种胚全部或大部分被染成红色即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。

四、数据记录记录本实验测得染色种子25粒，无色种子5粒，其中染色的25粒种子中有19粒种子染色是比较深的，说明其生长活性物质多，生命力强。

根据以下公式种子活力（％）＝有活力的种子数/种子总数×100%可以知道种子活力=25/30*100%=83.3%六、实验总结有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸过程中的代谢物质跟TTC反应生成红色TTF，且代谢物质越多，颜色越深，代谢强度越大。

从本实验结果来看，种子生命力总体上时比较强的，且其中的19粒染色较深的那些则更高。

另外TTC法还可以运用于花粉活力的测定。

种子生活力的快速测定实验报告以下是种子生活力的快速测定实验报告：一、实验目的：1、了解种子的萌发过程；2、掌握种子活力的快速测定方法。

二、实验原理：种子的萌发是指种子在适宜的环境下，经过一定的时间后，胚根和胚芽开始向外生长并形成幼苗。

种子活力是指种子在一定时间内能够完成萌发的能力。

通过测定种子的吸水力、萌发率等指标来评估种子的活力。

常用的种子活力测定方法包括浸泡法、吸水力测定法、电导率测定法等。

三、实验材料：1、不同品种的玉米种子；2、清水；3、容器；4、计时器；5、电子天平；6、试管；7、吸水纸巾；8、显微镜。

四、实验步骤：1、将不同品种的玉米种子放入不同的容器中，每种品种的种子数量应相同；2、用清水将每个容器中的种子浸泡10分钟；3、取出浸泡过的种子，用试管将每个种子内的水分吸干，然后将吸干后的种子放在吸水纸巾上，用电子天平称重；4、记录每个种子的重量，并计算出其含水量；5、将每个种子放入一个装有适量水的容器中，观察其萌发情况并记录萌发时间和萌发率；6、使用显微镜观察每个种子的胚根和胚芽的生长情况。

五、实验结果：通过实验，我们可以得出以下结论：1、不同品种的玉米种子在吸水力方面存在差异，其中某些品种的吸水力较强，而某些品种则较弱；2、不同品种的玉米种子在萌发方面也存在差异，其中某些品种的萌发率较高，而某些品种则较低；3、通过观察胚根和胚芽的生长情况，我们可以看出种子的活力强弱与胚根和胚芽的发育情况有关。

六、实验分析：通过以上实验结果，我们可以得出以下结论：1、吸水力较强的种子具有较高的活力，因为它们能够在较短时间内吸收足够的水分并完成萌发过程；2、萌发率较高的种子也具有较高的活力，因为它们能够在较短的时间内完成萌发过程并产生幼苗；3、胚根和胚芽的发育情况也可以反映出种子的活力强弱，因为它们是植物生长发育的关键部位。

种子生活力的测定方法种子生活力的测定有以下几种方法：（一）氯化三苯基四氮唑法( TTC)1．将种子用温水（约30℃）浸泡2--6小时，使种子充分吸胀。

2．随机取种子100粒，红花、蓖麻等具有外壳的需要去掉外壳，豆类种子要去皮。

然后沿种胚中央准确切开，取一半备用。

3．将准备好的种子浸于2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)溶液中，于恒温箱( 30～35℃)中保温30分钟。

4．染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。

倒出TTC溶液，再用清水将种子冲洗1--2次，观察种胚被染色的情况，凡种胚全部或部分被染成红色的即为具有生命力的种子，种胚不被染色的为死种子。

如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子。

（二）溴麝香草酚蓝法（BTB法）1．浸种：同上述 TTC 法。

2．BTB 琼脂凝胶的制备：取 0.1% BTB 溶液 100 mL 置于烧杯中，将 1 g 琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。

待琼脂完全溶解后，趁热倒在 4 个干洁的培养皿中，使成一均匀的薄层，冷却后备用。

3．显色：取吸胀的种子 200 粒，整齐地埋于准备好的琼脂凝胶培养皿中，种子胚朝下平放，间隔距离至少 l cm 。

然后将培养皿置于 30 ～ 35 ℃下培养1 ～2 小时，在蓝色背景下观察，如种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。

4．计算活种子百分率。

用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观察。

（三）靛红染色法步骤同TTC染色法。

注意事项1．染料的浓度要适当，染色时间不能太长（如用红墨水染色，只需要5～10分钟即可），否则不容易区别染色与否。

2．靛红染色法测定种子生活力，适用于豆类、麻类、瓜类、十字花科、果树、乔灌木种子的生活力测定。

（四）碘化钾反应法1．将种子在水中浸18小时。

2．取出种子放在垫有湿滤纸的培养皿内，将培养皿置30℃恒温箱中，不同植物种子放置时间不同，如松种子放48小时，落叶松放72小时。

第五章种子生活力与活力测定本章讲2节§1、种子生活力测定原理及方法§2、种子活力测定原理及方法第一节种子生活力测定的原理与方法在种子贸易中，时常需要在短时间内掌握种子批的生活力状况，如果种子处于休眠状态难以通过发芽测定得到结果，种子生活力测定可以满足这一要求。

一、种子生活力概念：种子生活力(seed viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力；种子生活力和发芽具有不同的含义：一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。

而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。

所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。

二、种子生活力测定的意义1、测定休眠种子的生活力新收获的或在低温贮藏处于休眠状态的种子，正常发芽条件下，其发芽力很低，这种情况下，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。

必须进行生活力测定，了解种子的发芽潜力，合理利用种子。

（怎样利用？）播种之前对发芽率低而生活力高的种子，应进行适当处理后播种。

种子检验时，发芽试验末期有新鲜不发芽的种子或硬实种子，就应接着进行生活力测定；或破除休眠后做发芽试验。

2、快速预测种子的发芽力:休眠种子可借助于各种预处理打破休眠，进行发芽试验，但时间较长；而种子贸易中，因时间紧迫，不可能采用标准发芽试验来测定发芽力，因为发芽试验所需的时间较长。

如小麦8d，水稻14d，菠菜21d。

而多数林木种子则需要更长的时间（如月季15～25℃发芽，70d计算发芽率）。

这时，可用生物化学法测定种子生活力作为参考；而林木种子可用生活力来代替发芽力。

种子生活力测定方法有四唑染色法、靛蓝染色法、红墨水染色法、软X射线造影法等。

本节将重点介绍四唑染色法，并简要介绍其他方法。

三、四唑测定法（GB）(一)四唑测定法概述1、发展简史四唑测定法于1942年由德国kon(莱康)教授发明，二战期间传人美国。