麦长管蚜AFLP银染分析体系的建立与优化

中国小麦条锈病菌源基地综合治理技术体系
的构建与应用
近年来，中国小麦条锈病严重危害了小麦产业的可持续发展。

为
了减小小麦条锈病的危害，中国小麦条锈病菌源基地综合治理技术体
系得以建立并应用。

该技术体系主要包括四个方面的内容，即菌源病株的基础研究、
定量检测技术的研发、菌源基地的动态监测以及综合防治技术的研究。

在菌源病株的基础研究方面，研究人员通过分子标记和功能基因组学
等方法，研究了小麦条锈病菌的群体遗传变异和发生规律，对其发生
与流行机理有了更为深入的认识。

在定量检测技术方面，利用PCR技
术和抗体等手段，实现了对小麦条锈病病原菌的快速、准确检测。

在
菌源基地的动态监测方面，建立了一套涵盖不同地区菌源基地的监测
体系，并通过多种途径进行调查，实现了对菌源基地的全面、精确监测。

在综合防治技术方面，通过纸带病害防治、生物防治、化学防治
和栽培技术措施等多种手段，将小麦条锈病的危害降至最低程度。

通过该技术体系的建立与应用，中国小麦条锈病的菌源基地综合
治理已经取得了显著的成效。

该技术体系的成功应用，在预防与控制
小麦条锈病、促进小麦产业发展等方面具有重大意义。

小麦条锈菌mflp分子标记体系的建立与优化小麦条锈菌是小麦上常见的病原菌之一，对小麦的生长和产量有很大的影响。

为了有效地控制小麦条锈菌的病害，研究其遗传多样性和分子特征是非常必要的。

分子标记技术是一种研究遗传多样性和分子特征的有效方法，因此建立和优化小麦条锈菌的分子标记体系非常重要。

1.样品准备。

选取50个不同来源的小麦条锈菌菌株，进行分子标记研究。

根据不同的来源进行分组，每组随机选取10个菌株。

2.DNA提取。

从每个菌株的培养物中提取基因组DNA，采用基因组DNA提取试剂盒进行操作。

将提取的DNA按照比例混合，制备为模板DNA。

3. mflp引物的设计。

根据小麦条锈菌基因组序列，设计并合成适合的mflp引物。

每个引物长度为20bp-25bp，GC含量在40%～60%之间，Tm值在55℃左右，引物之间的距离在300bp-500bp之间。

4.PCR反应。

采用脱氧核苷酸三磷酸（dNTPs）、Taq聚合酶、引物和模板DNA，进行PCR反应。

反应体系为20μL，PCR反应条件为：预变性（94℃，3min）；循环反应（94℃，30s，58℃，40s，72℃，30s），共循环35次；终止延伸（72℃，10min）。

5.PAGE分离。

将PCR产物进行PAGE分离，把凝胶中与DNA条带相同大小的部分切下来，将其溶解于无水甲醇中，离心沉淀、洗涤、干燥，最后溶解于硫酸钠水溶液中。

6.其他操作。

将得到的PCR产物进行扩增和PCR产物纯化。

使用基因测序仪进行DNA序列的测定和分析。

通过以上步骤，可以建立和优化小麦条锈菌mflp分子标记体系，为后续的遗传多样性研究和分子特征分析提供有力支持。

陕西农业科学2021,67(05)：32-34,39ShaanxeJouenaaoeAgeecuaiueaaSceences陕西杨凌麦长管！发生预测模型构建与验证解锋1,王世锋2,苏海燕3，廖淑霞4，胡想顺5(1.杨凌职业技术学院，陕西杨凌712100；2.陕西省西安市临潼区穆寨街办农业综合服务中心，陕西西安710600；3.陕西省西安市临潼区园艺工作站，陕西西安710600；4.杨陵区委考核督查办，陕西杨凌712100；5.西北农林科技大学植保学院，陕西杨凌712100)摘要：为了预测麦长管财田间发生发展程度，及时制定综合防治策略，根据历年来杨凌区麦长管酚的种群发生程度和气象数据，利用多元相关性性分析和多元线性回归法构建了杨凌地区3月下旬到5月下旬各旬麦长管财的发生程度的预测模型。

从16个气象因子中发现旬均温度、旬均相对湿度和旬均气压与当旬麦长管斬的发生相关系数排在最前3位。

用三个气象因素构建的各旬线性回归模型经实践验证表明对当旬麦长管酚发生程度预测的准确率为100%(3月下旬)、100%(4月上旬)、100%(4月中旬)、90%(4月下旬)、75%(5月上旬)、85%(5月中旬)、100%(5月下旬)，总体准确率90%。

由此得出结论本文构建的预测模型可用于指导实践中麦长管斬的综合防治。

关键词：小麦；麦长管酚;预测预报；多元线性回归；主成分分析法中图分类号：S433文献标识码：A文章编号：0488-5368(2021)05-0032-03Construction of Occurrence and Preeicting Model of Sitobion Aveeaee Yangling of Shaanxi ProvinccXIU Feng1,WANG Shifeng2,SU Haiyan3,LIUO Shuxia4,HU Xiangshun5(1.Yangling Vocational&Technical College,Yangling,Shaanxi712100,China；2.Muzhai Street ejficc,Lintong District,Can,Shaanxi710600,China；3.Lintofg Disiect Horticultural Station, Xi"an,Shaanxi710600,China；4.Yangling Dstricc enspectiof Kficc,Yangling,Shaanxi712100,China；5.State Key Laboratorr for Crop Stres s Biology,Key Laboratorr f Nogaweg Loes s Plateau Crop PesS Management of Minislrr f AgOcueuo,College of Plant Preceon,Nogawest A&F Universite,Yangling,Shaanxi712100,China)Abstracr:In ordee te predict the occurrence and development of S.avenac and te formulate IUM contror sieaigy,apedeciengmod+aoeoccu e+nc+d+ge+on wh+aieeom aai Maech ioaai Mayen Yangaengdesieeciwas esiabaeshed byusengmuaiepaeco e aaieon anaaysesand muaiepaeaeneaeeegee s eon meihod based on ihepopuaaieon occurrence degree and meteoroloeicel data of S.avenac in Yangling for years.It was found tUat the correlation coefficients of the occurrence of S.aveeae with ten-day averaae temperature,ten-day averaae relative humidi­ty and in-day average al pmssum were tUe top tUme from160X6(X010x101factors.The regression modeaconsiucied byiheih eemeieooaogecaaeacioseoFeach ien-daypeeod waseeFeeeed byp aciece.The e­suits showed that tUe predicting accuracy far occurrence degree of S.avnae was100%(late March),100%(+aeayApeea),100%(med Apeea),90%(aai Apeea),75%(+aeayMay),85%(med May)and100%(aai May),and ih+o e+ea a accu eacy was90%.Uiwas conc aud+d ihaiih+pedeciengmod+a+siabaesh+d en ihespap+e can b+us+d iogued+ih+compeh+nsee+conieoaoewh+aiaphed en peaciec+.Key wok U s:Wheat；S.aveeae；Predicting；Multipd linear regression；Panciyal component analysis收稿日期：2020-09-05修回日期：2020-10-15基金项目：国家重点研发计划(2016YFD0300705)；农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室开放基金(KFJJ20180107)**第一作者简介:解锋(1975-)，男，陕西西安人,硕士,副教授，从事农业气象及气象灾害防御的研究与教学工作通信作者:胡想丿I质*解 锋,等:陕西杨凌麦长管吗发生预测模型构建与验证33我国是小麦种植大国，麦长管吗Sitobion ave-nae 是小麦穗期最主要的害虫种类,防治主要依靠 化学农药[1]*但化学防治不可避免地会杀死天敌，增加麦长管吗的抗药性,还会污染环境,破坏田间生态系统的稳定*及时对麦长管吗的发生与发展做出准确的预测，可以及时指导、制定麦田小麦吗虫防治的综合治理措施*气象因素如温度、湿度、干旱和降雨等气象因子 是影响麦长管吗发生的重要因素，2"*气象因素如何影响吗虫的种群发展，与各地的气象因素密切相关*笔者根据杨凌（武功）1980 - 1987,2004 - 2008、2010 - 2016的百株吗量和气象因子,利用多元线性相关分析和回归法构建了麦长管吗发生百株吗量值 与气象因子间的多元回归模型,这对麦长管吗发生 的预测及预报，及时精准防控麦长管吗意义重大*1材料与方法1.1数据来源麦长管吗种群动态数据来源于西北农林科技大学昆虫生态学研究团队于1980 - 1987年, 2004 - 2008年以及2010 - 2016年的统计数据*数据收集的地点是陕西杨凌西北农林科技大学实验田，时间为每年3月15日到5月30日*每5 d 采集一次数据,换算为百株吗量，进一步根据百株 吗量转换为发生级别（表1）。

烟草AFLP分析体系的建立与优化
杨友才;周清明;尹晗琪
【期刊名称】《中国烟草学报》
【年(卷),期】2005(011)003
【摘要】以10份烟草种质资源为试材,对AFLP分析过程中包括DNA的提取质量和浓度、MseI/EcoRI以及T4 DNA连接酶的浓度、反应时间和反应温度、以及其反应体系的组成等影响因素进行了研究.建立了一种适于烟草AFLP银染技术的优化体系.该体系中各优化因素为:模板DNA的用量为400ng,酶切体系中MseI和EcoRI各加入4U,T4 DNA连接酶加入2.8U,采用酶切与连接在同一体系中一步完成,其酶切连接温度为37℃,反应时间为7h.并对预扩增、选择性扩增和银染的效果进行了检测,以引物E-ACT/M-CAC构建了烟草种质资源的AFLP指纹图谱,该图谱扩增带多,多态性强,且质量好.
【总页数】6页(P23-28)
【作者】杨友才;周清明;尹晗琪
【作者单位】湖南农业大学烟草工程技术研究中心;湖南农业大学;中山大学生命科学院
【正文语种】中文
【中图分类】TS413
【相关文献】
1.菜心cDNA-AFLP分析体系的优化与建立 [J], 肖旭峰;王恒;黄敏;雷建军
2.烟草AFLP银染分析体系的建立 [J], 杜传印;王玉军;李斯深;李常保;刘洪祥;田纪春
3.野生茄子cDNA-AFLP分析体系的优化和建立 [J], 王忠;杨清;汪仁;郑玉红
4.刺槐AFLP分析体系的建立与优化 [J], 籍新波;张连成;韩宏伟;张军;王进茂
5.十字花科蔬菜黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv. campestris)AFLP分析体系的建立及优化 [J], 翟文慧;贾春枫;周莹;黄金宝;刘凡;严红
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小麦锈菌AFLP分子标记技术体系的建立唐静;蒲志刚;张敏;阎文昭【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2005(020)006【摘要】以小麦条锈菌、杆锈菌、叶锈菌的夏孢子为材料,通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了锈菌的AFLP分子标记体系如下:40μL酶切体系中采用了EcoRI,TrulI各5U,37℃3 h,65℃3h双酶切4μL100ng/μL的DNA;然后加入10μL连接混合液22℃连接3 h,16℃10h;连接产物5μL,10μmol/LEcoRI,10μmol/LTrulI预扩引物各1.5μL,PCR反应液25μL,ddH2O17μL进行预扩;预扩产物稀释20倍后取5μL,50 ng/μL EcoRI,TrulI选扩引物各1μL,PCR反应液10μL,ddH2O3μL体系进行选择性扩增.为研究小麦锈病和其他真菌性病害的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具.【总页数】5页(P753-757)【作者】唐静;蒲志刚;张敏;阎文昭【作者单位】四川农业大学农学院,四川,雅安,625014;四川农业科学院生物技术核技术研究所,四川,成都,610066;四川农业科学院生物技术核技术研究所,四川,成都,610066;四川农业大学农学院,四川,雅安,625014;四川农业科学院生物技术核技术研究所,四川,成都,610066【正文语种】中文【中图分类】S435.121.43【相关文献】1.悬铃木AFLP分子标记技术体系的建立 [J], 刘震;牛晓锋;秦素玲;王艳梅;杜宗现;王伟2.小麦条锈菌AFLP体系的优化 [J], 张妍;康晓慧3.割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化 [J], 刘许辉;段维兴;刘新龙;杨海霞;高轶静;罗霆;宋焕忠;张革民;4.割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化 [J], 刘许辉;段维兴;刘新龙;杨海霞;高轶静;罗霆;宋焕忠;张革民5.红豆杉AFLP分子标记技术体系的建立及应用 [J], 史正文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蚜虫共生细菌多重PCR检测体系的建立蚜虫是农业害虫之一，对农作物造成了严重的危害。

为了有效地控制蚜虫的数量，近年来研究人员们关注于蚜虫共生细菌。

蚜虫共生细菌是一类与蚜虫共生的微生物，能够在蚜虫体内产生一些有益的代谢产物，并且对蚜虫的生长发育起到一定的调控作用。

研究蚜虫共生细菌对于有效控制蚜虫数量具有重要意义。

本文旨在建立一种多重PCR检测体系，用于检测蚜虫共生细菌的存在，为研究蚜虫共生细菌提供技术支持。

第一步：提取DNA我们需要从蚜虫体内提取共生细菌的DNA。

在实验室条件下，将蚜虫体表面用75%的乙醇进行消毒处理，然后用去离子水洗涤多次。

接着将蚜虫样本放入EP管中，加入适量的提取液，并通过振荡器进行充分振荡。

随后，根据提取试剂盒的说明书进行DNA提取操作。

第二步：PCR体系的建立在PCR反应体系中，我们需要添加蚜虫共生细菌的特异引物以及其他必要的试剂。

根据不同的蚜虫共生细菌种类选择相应的引物，然后按照引物试剂盒的说明书配置引物的工作液。

接着，加入模板DNA、引物、脱离酶、dNTPs等其他试剂至PCR反应管中，最后添加适量的Taq酶。

第三步：PCR反应条件的设置PCR反应条件对于PCR检测的灵敏度和特异性起着重要的作用。

首先确定PCR反应的温度和时间条件，包括变性、退火和延伸。

确定PCR反应的循环次数。

根据实际情况对PCR反应条件进行优化，以获得最佳的PCR检测结果。

第四步：PCR产物的分析我们需要对PCR反应产物进行分析，以确定蚜虫共生细菌的存在。

通常可以使用琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR或者其他相关技术进行PCR产物的分析。

通过比较实验样品和对照样品的PCR产物，可以确定蚜虫共生细菌的存在与否。

通过以上实验步骤，我们可以建立一套多重PCR检测体系，用于检测蚜虫共生细菌的存在。

这种检测体系具有灵敏度高、特异性好的特点，可以为研究蚜虫共生细菌提供技术支持。

这种多重PCR检测体系也可以应用于其他微生物的检测，具有一定的推广应用价值。

小麦抗病性研究的AFLP分析体系的建立
赵红梅;岳昌明;朱婕;王振英
【期刊名称】《天津师范大学学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2007(27)4
【摘要】利用小麦抗白粉病材料,通过对AFLP反应体系中几个主要条件的优化,建立了适合于小麦抗病性研究的AFLP反应最佳体系.实验结果表明,40μL酶切连接反应体系中,用于酶切的基因组DNA为500 ng,20μL预扩增反应体系中Mg2+终浓度为1.5 mmol/L,引物量为30 ng时,其预扩增结果最好,这为下步选扩实验提供了实验条件;同时对扩增产物的银染检测方法进行了探索,获得了最佳的银染方案,所获图谱条带清晰,无背景干扰,便于分析.
【总页数】4页(P7-10)
【作者】赵红梅;岳昌明;朱婕;王振英
【作者单位】天津师范大学,化学与生命科学学院,天津,300387;天津师范大学,化学与生命科学学院,天津,300387;天津师范大学,化学与生命科学学院,天津,300387;天津师范大学,化学与生命科学学院,天津,300387
【正文语种】中文
【中图分类】Q943.2
【相关文献】
1.小麦锈菌AFLP分子标记技术体系的建立 [J], 唐静;蒲志刚;张敏;阎文昭
2.小麦基因组AFLP反应体系的建立 [J], 贾璇;杨文香;刘大群
3.小麦基因组AFLP技术体系建立的研究 [J], 蔡健;陆娟;兰伟
4.小麦cDNA-AFLP技术体系建立的研究 [J], 雒淑珍;赵继荣;魏玉杰;张肖凌
5.小麦AFLP片段序列多态性分析和AFLP-SCAR标记的研究 [J], 王立新;常利芳;黄岚;王晓维;赵昌平
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小麦基因组AFLP反应体系的建立贾璇;杨文香;刘大群【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2003(026)002【摘要】利用小麦抗叶锈近等基因系研究了小麦基因组AFLP反应体系,建立了适于小麦基因组的AFLP反应体系:40 μL酶切体系中采用7.5 U PstⅠ和5 UMseⅠ37℃ 3 h,65℃3 h双酶切0.1～0.2 μg DNA,然后加入10 μL接头、T4连接酶混合液,16℃连接过夜;吸取未稀释的酶切连接液4 μL,加入75 ng预扩增引物,10 mmol/L dNTP,1.5 U Taq酶,1×buffer,加PCR水至40 μL进行预扩,将预扩产物稀释20倍,吸取5 μL,加入40 ng选择性引物,1.25 U Taq酶,7.5 mmol/L dNTP,2%去离子甲酰胺,1×buffer,加PCR水至25 μL进行选择性扩增.本研究为小麦抗叶锈基因的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供有力的工具.【总页数】5页(P55-59)【作者】贾璇;杨文香;刘大群【作者单位】河北农业大学,植物保护学院,河北,保定,071001;河北农业大学,植物保护学院,河北,保定,071001;河北农业大学,植物保护学院,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S512【相关文献】1.玫瑰基因组AFLP反应体系的建立和优化 [J], 李玉舒;张启翔2.唇(鱼骨)基因组AFLP反应体系的建立及优化 [J], 佟广香;匡友谊;尹家胜;徐伟3.大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立 [J], 孟淑春;张海英;郑晓鹰;刘玉梅;王永健4.小麦基因组AFLP技术体系建立的研究 [J], 蔡健;陆娟;兰伟5.小叶锦鸡儿基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立 [J], 陈旭辉;高玉葆;朱敏杰;赵婷婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

AFLP标记技术的发展和完善
李韬
【期刊名称】《生物工程学报》
【年(卷),期】2006(22)5
【摘要】AFLP标记技术自诞生以来,由于集成高效性、高通量、无需知道序列信息等诸多优点而在分子生物学研究中得以广泛应用.近年来,研究人员对该技术进行了不断的优化和完善,并由之衍生出多种相关技术,不仅能区分纯合子和杂合子,还能够将感兴趣AFLP条带进行位点特异性标记的高效转化,从而有利于进行大规模单位点检测和基因克隆,检测技术更趋高效.重点评述近年来"常规"AFLP技术向更高通量、更加高效和信息完全AFLP技术的转化和发展,了解这些变革对高效利用AFLP 技术实现研究目标具有重要的意义.
【总页数】5页(P861-865)
【作者】李韬
【作者单位】教育部植物功能基因组学重点实验室,江苏省作物遗传生理重点实验室,扬州大学,扬州,225009
【正文语种】中文
【中图分类】Q78
【相关文献】
1.AFLP标记技术及其在花生上的应用研究 [J], 郭静佩;王晓林;周鹏;周延清
2.利用AFLP标记技术评价甘蓝型油菜的遗传多样性和亲缘关系 [J], 李丽;黄先
群;WanapuChokchai;雷尊国;黄团;李其义;彭义;黄贵民;董颍苹
3.割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化 [J], 刘许辉;段维兴;刘新龙;杨海霞;高轶静;罗霆;宋焕忠;张革民;
4.割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化 [J], 刘许辉;段维兴;刘新龙;杨海霞;高轶静;罗霆;宋焕忠;张革民
5.红豆杉AFLP分子标记技术体系的建立及应用 [J], 史正文
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麦长管蚜对新烟碱类杀虫剂抗药性研究的开题报告一、背景和研究意义麦长管蚜是影响小麦生长的主要害虫之一，在园艺、农业等领域中造成重大的经济损失。

目前，新烟碱类杀虫剂被广泛地应用于麦长管蚜的防治工作中。

然而，近年来随着长期大规模使用新烟碱类杀虫剂，麦长管蚜出现抗药性的情况频繁发生。

这对麦长管蚜的防治工作带来了巨大的挑战。

因此，开展新烟碱类杀虫剂抗药性麦长管蚜的研究具有重要的意义和应用价值。

本研究旨在深入探究麦长管蚜的抗药性机制、抗性基因表达情况以及抗性形成的影响因素等，为有效防治麦长管蚜提供理论依据。

二、研究内容和方法本研究将采用分子生物学、细胞生物学等技术手段，对以下研究内容进行探究：1.麦长管蚜的抗药性机制分析：通过建立麦长管蚜的抗性品系，对比敏感品系对新烟碱类杀虫剂的敏感性与抗性；检测合成酶的活性及表达水平；分析新烟碱类杀虫剂诱导的代谢酶及运输蛋白等激活情况。

2.抗性相关基因表达分析：利用Real-time PCR技术，检测麦长管蚜的抗性相关基因，包括合成酶基因、代谢酶基因、运输蛋白基因等。

3.抗性形成影响因素分析：通过饲养环境、药剂浓度等条件的调整，考察麦长管蚜对新烟碱类杀虫剂的敏感性变化并进行动态监测；分析抗性形成的影响因素。

三、预期结果和意义通过对麦长管蚜抗药性的深入研究，本研究预期得到以下结果：1.揭示麦长管蚜新烟碱类杀虫剂抗性的机制和基因表达的特点。

2.分析新烟碱类杀虫剂诱导的代谢酶及运输蛋白等激活情况，为进一步探究抗性机制提供数据支撑。

3.从饲养环境、药剂浓度等角度分析抗性形成的影响因素，为制定针对性的防治策略提供依据。

本研究的结果对于进一步提高麦长管蚜的防治水平，降低其对小麦生产的危害具有重要意义和应用价值。

高粱AFLP连锁图谱的构建及抗蚜基因的定位的开题报告
一、课题背景
高粱（Sorghum bicolor (L.) Moench）是一种重要的粮食作物，也是工业原料、饲料和药材等的重要来源。

然而，高粱生长期较长，易受病害和虫害的影响，产量和质量也容易受到限制。

其中，高粱蚜是高粱的主要害虫之一，危害甚大。

目前，抗蚜高粱品种的培育已成为高粱育种的一个热点问题。

为了深入研究高粱抗蚜机制及其遗传基础，需要开展高粱基因组研究和遗传图谱构建。

二、研究内容
本课题旨在构建高粱的AFLP连锁图谱，并通过分子标记辅助筛选和定位高粱抗蚜基因。

具体研究内容如下：
1. 高粱材料筛选和DNA提取。

选择高粱蚜的抗感材料，根据已有研究结果选择不同的基因型和亲本进行交配。

从选好的材料中提取基因组DNA。

2. AFLP分子标记筛选。

使用PCR扩增AFLP分子标记，并进行分离和分析，根据表型分离结果选择与抗蚜相关的分子标记。

3. AFLP连锁图谱构建。

通过分离好的AFLP标记，运用遗传连锁分析方法构建高粱AFLP连锁图谱，确定AFLP标记在高粱基因组中的位置。

4. 抗蚜基因的定位。

将已经筛选出的与抗蚜相关的AFLP标记与高粱AFLP连锁图谱进行比对，最终确定抗蚜基因的位置。

三、研究意义
通过构建高粱的AFLP连锁图谱和分子标记辅助筛选和定位高粱抗蚜基因，不仅可以为高粱抗蚜品种的培育提供重要的分子标记和遗传图谱基础，还可以深入研究高粱抗蚜机制及其遗传基础，为高粱的遗传改良和育种提供理论支持。

同时，也可以为其他粮食作物的遗传改良提供参考。