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1）30%(w/v)Acrylamide 1L，(丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺=29:1)：配制方法：称量丙烯酰胺290g、甲叉双丙烯酰胺10g溶于600ml去离子水中，充分搅拌溶解，定容至1L，用0.45um滤膜滤去杂质，于棕色瓶中4°C保存。
2）5×TBE（1L）：配制方法：称量54gTris碱，3.72gNa2EDTA2H2O，27.5g硼酸溶于800ml去离子水中，充分搅拌溶解，定容至1L，高压灭菌后室温保存。
3）10%(W/V)过硫酸铵（10 ml）：配制方法：称取1g过硫酸铵，溶于10ml去离子水中搅拌溶解，储存于4℃。
5）10%乙醇(200ml)：配制方法：20ml无水乙醇加水溶解，最后定容至200ml。
6）1%的HNO3溶液（200ml）：配制方法：2ml硝酸加入到198ml双蒸水中，边加边搅拌。
7）染色液：0.2%的AgNO3溶液(200ml)：配制方法:快称0.4克AgNO3倒入200ml双蒸水中，黑暗中搅拌溶解后，快速倒入一棕色瓶中。
8）显色液：2%的Na2CO3及0.4%的甲醛溶液(200ml)：配制方法：称取4g Na2CO3精确量取0.8ml甲醛溶于少量双蒸水中，定容至200ml。
9）终显液：4%冰乙酸(200ml)：配制方法：量取8ml冰醋酸溶于双蒸水中，定容至200ml。
注：1）---3）为制胶配方5）---9）为银染试剂配方实验步骤：PCR产物的检测（12% 的PAGE电泳检测）：洗净玻璃板、胶条及梳子，晾干，然后用夹子夹好制成灌胶板。
↓用枪吸取 2.36ml三蒸水加入10ml离心管中，再加1.2ml 5×TBE缓冲液，2.4ml 30% Acr，4ul TEMED，最后加42ul APS(过硫酸铵)，用移液抢吹打混合混匀，然后缓慢倒入灌胶板中，插上梳子，慢慢放平，让其凝固。
↓待凝胶凝固后，拔掉梳子及玻璃板底部胶条，放入电泳槽，加1×TBE电泳缓冲液并接通电源，60伏，预电泳30min。
基本的银染步骤：（90min）材料：超纯水（>18 megohm/cm全程）、塑料染色托盘、摇床、塑料搅拌棒、10mL 一次性管、干净的玻璃杯、量筒、30%乙醇、100%乙醇、固定液（40%乙醇、10%乙酸）注意事项：1.在拿胶前确定用去离子水清洗橡胶手套。
2.用干净的容器，并标明银染专用。
3.当摇动时，确保容器大小可使胶在里面自由移动，染色时溶液能完全沫过胶面。
4.在拿胶或换溶液时，避免徒手摸胶或用金属物品接触，及避免对胶施加压力。
5.用有铁氟龙图层的棒和干净的玻璃容器准备试剂。
6.避免试剂交叉污染。
7.用新鲜配置的溶液。
样品含有高浓度的DTT：如果你的样品含有高浓度的DTT （>50mM）,银染时可能导致条带拖尾和黄色背景。
为避免拖尾按照下面的方法还原和烷基化样品：1. 用新鲜配制的DTT还原你的样品到终浓度为17mM，并在70℃加热10min.2. 用新鲜配制的碘乙酰胺烷基化你的样品到终浓度为35mM，并在70℃加热10min.3. 加不含DTT的SDS样品buffer到还原和烷基化后的样品中。
进行电泳，并按手册进行银染。
在开始之前：用试剂盒中的试剂准备如下溶液用于银染：程序：下面的程序用于8*8厘米预制胶，1.0mm厚。
如果要染两块小胶或1.0mm厚的大胶（18*18），保证孵育时间，将所有溶液的体积加倍。
注意：如果你的胶的尺寸和上面提到的不一样，你可能必须通过调整孵育时间和溶液体积来选择银染策略。
所有的孵育应该在一个旋转摇床上进行，以1圈/秒的速度在室温下进行。
确保每个胶有100ml的溶液。
1. 电泳后，将胶取出至合适尺寸的银染托盘内，用超纯水简单的清洗一下。
2. 用100ml固定液在摇床上缓慢旋转，固定胶20min。
如果你用的是Tricine 胶，那么就固定1小时。
注意：如果没有足够的时间完成银染程序，胶可以在固定液中存放一夜。
长时间的固定在某些情况下可能会改善灵敏度和背景。
PAGE凝胶快速银染试剂盒使用说明货号:G7210规格:1L保存:室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月。
试剂盒内容：G7210染色液A200ml染色液B1ml染色液C100ml显色液D100ml试剂E2g注：1L规格指可配制的银染液的体积，实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。
产品说明:蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把蛋白电泳带染成黑褐色。
它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。
其灵敏度比考马斯亮蓝高，PAGE凝胶快速银染试剂盒整个过程操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的蛋白条带。
操作步骤:一、染色液配制(无水乙醇自备)需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。
配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。
如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。
1.固定液：取40ml无水乙醇，10ml染色液A加去离子水至100ml，混匀；2.敏化液：取30ml无水乙醇，10ml染色液C加去离子水至100ml，混匀；3.银染液：称取0.12g试剂E，用50ml去离子水溶解，加入10ul染色液B混匀，加去离子水至100ml现用现配。
4.显色液：10ml显色液D和30ul染色液B加入去离子水至100ml，混匀，现用现配。
5.终止液：取5ml染色液A加去离子水稀释至100ml，现用现配。
二、染色：1.PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用固定液固定30min。
2.将PAGE胶转移至敏化液中，使染液没过PAGE胶，室温作用30min。
可置于摇床上缓慢摇晃3.弃去敏化液，用去离子水漂洗三次，每次10min。
4.将PAGE胶转移至银染液中，使染液没过PAGE胶，室温摇晃40min。
5.将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃，该显色一般在10min 左右。
蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项货号：G0180规格：20T有效期：6个月有效。
产品内容：试剂(A):Silver Stain Sensitizer(500×)2×1ml RT试剂(B):Silver Stain(100×)10ml RT避光试剂(C):Silver Stain Developer(5×)2×100ml RT避光试剂(D):Silver Stain Stop Buffer(10×)100ml RT产品说明：蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。
其优点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测；3、目的条带清晰；4、不含甲醇。
Protein Fast Silver Stain Kit与Protein Silver Stain Kit 相比，前者操作速度更快，当检测灵敏度可能低于后者，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。
本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：1、水平摇床或侧摆摇床2、去离子水(超纯)3、乙醇、冰乙酸操作步骤(仅供参考)：1、准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。
整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60～70rpm。
提前配制固定液，即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制。
提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。
2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。
3、固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤1次。
快速银染试剂盒产品简介：快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染的试剂盒。
本试剂盒也可以用于2D凝胶的银染，并且染色后和后续的质谱检测兼容。
本试剂盒只需一小时左右即可观察到蛋白条带，90分钟内可以完成2块凝胶的银染。
对于BSA蛋白，检测灵敏度可以达到0.3ng蛋白。
无需使用有毒的甲醇。
本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。
保存条件：室温保存，一年有效。
银溶液(100X)和银染显色加速液(2000X)需避光保存。
注意事项：由于银染非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。
操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。
需自备乙醇、乙酸及MilliQ级纯水或双蒸水。
下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。
对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。
本说明书所指的室温为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。
银染基本显色液(5X)在低温环境下可能会出现少量沉淀，可在30-50℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。
至少后续稀释至1X后须确保完全溶解。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.固定：电泳结束后，取凝胶放入约100ml固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70rpm。
固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制：依次加入50ml乙醇、10ml乙酸和40ml MilliQ级纯水或双蒸水，混匀后即成100ml固定液。
2.30%乙醇洗涤：弃固定液，加入100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
30%乙醇的配制：70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇，混匀后即成100ml 30%乙醇。
快速银染试剂盒Protein Stains Q产品编号：BSP029S-N包装规格：50 Assays产品简介银染是灵敏度较高的一种染色法，是对各种凝胶中的蛋白质进行染色时最常用的方法。
它通过被还原银离子在蛋白质上形成黑色来指示蛋白区带的。
银染的灵敏度比考马斯亮蓝染色高100倍，可以检测低于2 ng的蛋白质。
本试剂盒在保证检测灵敏度的同时，还具有操作方便快速的优点，可在1小时内完成1块凝胶的银染。
运输和保存条件在常温下运输，收到后，将所有试剂放置在2-8°C的环境中保存，保质期一年。
产品组成成份BSP029-NBSP029S-N-1溶液A 300 ulBSP029S-N-2溶液B 20 x 10 mlBSP029S-N-3干粉0.2 gBSP029S-N-4溶液D 5 x 40 mlBSP029S-N-5溶液E 10 ml注意:使用前将干粉用10ml的双蒸水溶解成20倍浓缩的溶液C,再按照需要的体积,稀释为1倍浓度.使用方法1. 取出电泳后的聚丙烯酰胺凝胶，用蒸馏水冲洗凝胶,根据以下程序所需要的试剂量,取一定体积的溶液B2. 和D，用双蒸水稀释成1倍的溶液后再使用.3. 加入20 ml蒸馏水，置于摇床上，震荡5 min。
4. 倾出蒸馏水，加入40%的甲醇20 ml和10 ul溶液A，置于摇床上，震荡10 min。
5. 倾出溶液A，加入20 ml蒸馏水，置于摇床上，震荡5 min，重复1次。
6. 倾出蒸馏水，加入20 ml溶液B，置于摇床上，震荡5 min。
7. 倾出溶液B，加入20 ml蒸馏水，置于摇床上，震荡20s，重复1次。
8. 倾出蒸馏水，加入20 ml溶液C，置于摇床上，震荡10 min。
9. 倾出溶液C，加入20 ml蒸馏水，置于摇床上，震荡1 min.10. 倾出蒸馏水，加入20 ml溶液D和10 ul溶液A，缓慢摇动，直至蛋白质条带具有足够的显色强度（约30 s-1 min）。
天净沙系列CAT#:220509-10常温运输和保存脂多糖PAGE 胶银染试剂盒LPS PAGE Silver Staining Kit使用手册V1.0江苏天净沙基因诊断技术有限公司网址：；电话：400-6605850；电邮：*****************产品及特点脂多糖银染的原理是银离子(Ag+）可与脂多糖形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把脂多糖电泳带染成黑褐色。
本产品就是根据此原理开发，它具有下列特点：1.即开即用，用户不需要单独准备各个成分，优化操作条件。
2.可用于聚丙烯酰胺凝胶电泳得到的脂多糖。
3.灵敏度高，能检测到几十ng的脂多糖条带。
4.比常规的银染方法快捷，只有染色和显影两步，只需要20分钟。
5.本产品足够配制1000mL的工作液，足够10次银染。
6.本产品只能用于科研。
规格及成分本产品采用小扁盒（无垫）包装成份编号规格包装材料溶液A成分一（干粉）220509a12克10mL棕色塑料瓶溶液A成分二，10×220509a2100mL125mL本色瓶溶液A成分三，10×220509a3100mL125mL本色瓶溶液B成分一，10×220509b1100mL125mL本色瓶溶液B成分二220509b25mL5mL本色瓶使用手册220509sc1份无运输及保存常温运输和保存，保存期限为一年。
自备试剂去离子水。
使用方法一、配制溶液A（即染色液）100mL注意：溶液A需要新鲜配制，不能存放。
所需溶液A（染色液）的体积跟PAGE胶的面积大小相关，一般的10cm×10cm的mini-PAGE胶需要20-30mL。
下面的用量是针对配制100mL溶液A。
如果配制的溶液A的体积不是100mL，则需按比例改变各成分用量。
1.在一干净烧杯中加入下列成分，充分搅拌混匀即可。
成分用量自备去离子水80mL溶液A成分一0.2g溶液A成分二10mL溶液A组分三10mL二：配制溶液B100mL需要配制的溶液B（显色液）的体积完全跟PAGE胶的大小相关，一般的10cm×10cm的mini-PAGE胶需要20-30mL溶液B。
蛋白质染色（银染法）标准操作规程1、目的及适用范围检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质，实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
2、主要仪器摇床、避光盒3、试剂及配制方法乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛，去离子水固定液：100mL乙醇（40%乙醇），25mL冰醋酸（10%冰醋酸）加水到250mL；致敏液：75mL 乙醇（30%乙醇）17g 乙酸钠，28.2g 三水乙酸钠（34g乙酸钠），0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250mL；银染液：0.625g AgNO3，100 uL37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；显色液：6.25 g Na2CO3，50 μL 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；终止液：3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250mL保存液：1% 冰醋酸4、操作步骤4.1固定：50mL固定液中固定30min或者更长时间4.2致敏：50mL致敏液中致敏30min4.3水洗：3 x 10min4.4银染：50mL银染液中染20min （保持避光）4.5水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)4.6显色：50mL显色液中显色，时间视显色程度而定4.7终止：50mL终止液中终止10min4.8保存：1% 冰醋酸，4 ℃5、注意事项5.1 固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
5.2 甲醛在使用前加入。
5.3 最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
5.4 显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。
5.5 银染液和显色液需要预冷。
5.6 所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染。
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)产品编号产品名称包装P0017A 考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法) 1盒产品简介：本考马斯亮蓝染色试剂盒(Coomassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。
使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。
观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。
本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。
包装清单：产品编号产品名称包装P0017A-1 考马斯亮蓝染色液100mlP0017A-2 考马斯亮蓝染色脱色液500ml—说明书1份保存条件：室温保存，至少一年有效。
注意事项：可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。
本染色液和脱色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.常规染色脱色方法：a.电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。
b.置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。
注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。
凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。
凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。
通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。
快速银染银染步骤及相关药品配制银染步骤及相关药品配制一．银染基本步骤1．洗板和擦板电泳槽板先用无水乙醇擦一遍，5分钟后用配制的剥离硅烷（repel）溶液涂抹均匀。
放置15－30分钟玻板（用过的玻板先用NaOH溶液浸泡，直至废胶脱落）先用抹布蘸少许洗洁精在自来水下洗净，再用无水乙醇擦一遍，5分钟后用新鲜配制的亲和硅烷（binding）溶液涂抹均匀。
放置15－30分钟2．装板玻板在下，电泳槽板在上，中间放两根压条(涂抹repel和binding的面相互靠近)，对齐后，用三对夹子将波板与电泳槽板夹紧。
3．灌胶用针筒吸取6％的聚丙烯酰胺凝胶溶液，缓慢均匀的从灌胶口将胶灌入，灌好后取下靠近灌胶口的夹子，倒插入梳子，注意不要起汽泡，插好后，再夹上夹子。
凝胶需要1－2个小时。
4．预电泳取下夹子，拔出倒插的梳子，在自来水下将灌胶口冲洗干净，放入电泳槽，卡紧，灌入缓冲液，上下槽各300ml左右，注意用夹子夹紧上槽排放缓冲液的胶管。
80W衡功率电泳半小时。
5．点样用吸管吹干净灌胶口的废胶，将梳子顺插入灌胶口，开始点样，注意不要串样，梳齿不要将胶面弄坏。
6．电泳80W衡功率电泳1小时左右。
7．银染将玻板放入配制好的银染液中，银染半小时左右10．显影从银染液中拿出玻板快速水洗3－5秒，然后放入新鲜配制的显影液中，室温显影，直至条带清晰11．用自来水轻轻冲洗板子正反面几次，洗净残余的NaOH。
二．药品配制1．6%聚丙烯酰胺凝胶（PA）：Urea: 420.42gAcr: 60g 丙烯酰胺Bis: 3.16g10×TBE: 50ml加超纯水定容至 1L8% 聚丙烯酰胺PA：尿素 420.42gAcr： 80gBis: 4.212g10*TBE: 100ml加超纯水定容至 1L2. 10×TBETris-base: 216g硼酸：110gEDTA-Na2：14.88g3. binding（亲和硅烷）无水乙醇：2mlBinding原液：8ul冰醋酸：8ul4．Repel （剥离硅烷）三氯甲烷：100mlRepel：2ml5．Loading buffer：甲酰氨：49ml10mM EDTA（PH=8.0）：1ml溴酚蓝：0.125g二甲苯青：0.125g7．银染液蒸馏水：1500ml无水乙醇：150ml硝酸银溶液（1g/ml）：1500ul 8．显影液蒸馏水：1500ml氢氧化钠：30g甲醛：6ml硫代硫酸钠（10mg/ml）：300ul。
质谱银染的试剂
质谱银染是一种在质谱分析中用于增强蛋白质或肽段的检测灵敏度的方法。
通常使用的质谱银染试剂是银离子的溶液，它会与蛋白质或肽段中的氨基酸残基反应，形成银颗粒，从而增强质谱信号。
以下是一种常用的质谱银染试剂的制备步骤：
1.制备酸性银溶液：
o将银硝酸（AgNO₃）溶解在蒸馏水中，得到
酸性的银溶液。
2.加入酸：
o向银溶液中加入一些酸，通常是甲酸
（HCOOH）或乙酸（CH₃COOH），以调整溶
液的酸性。
酸性条件有助于促使银离子与蛋
白质发生反应。
3.加入还原剂：
o添加一种还原剂，如脱氢乙酸（HCHO）或亚
硫酸氢钠（NaHSO₃），以还原银离子为银颗
粒。
4.反应蛋白质或肽：
o将待检样品中的蛋白质或肽与银离子反应，
形成银沉淀。
5.洗涤：
o将反应后的样品进行洗涤，去除未反应的试
剂和其他杂质。
6.干燥：
o将样品干燥，以得到质谱银染后的样品。
使用质谱银染的优势在于其增强了质谱信号，使得低丰度的蛋白质或肽段更容易被检测到。
然而，该方法可能对某些质谱仪器的灵敏度产生影响，因此在使用时需要谨慎优化条件。
PAGE凝胶快速银染试剂盒使用说明货号:G7210规格:1L保存:室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月。
硝酸银2g染色液A100ml显色液B100ml显色液C100ml终止液D100ml注：1L规格指可配制的硝酸银染色液的体积，实际使用次数根据PAGE 胶大小不同而不同。
产品简介:核酸银染的原理是银离子可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染成黑褐色。
它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。
其灵敏度比EB高200倍，该产品整个过程只需要20分钟，操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的DNA条带。
操作步骤:一、染色液配制需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。
配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。
如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。
1，硝酸银染液：称取0.2g硝酸银，加入到90ml去离子水中彻底溶解，加入10ml溶液A混匀，现用现配。
2，显色液：分别取溶液B和溶液C各10ml加入80ml去离子水中混匀，现用现配。
3，终止液：取终止液D10ml加去离子水稀释至100ml，现用现配。
二、染色：1，PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用去离子水漂洗两遍，每次2min。
2，将PAGE胶转移至硝酸银染液中，使染液没过PAGE胶，室温染色10min。
可置于摇床上缓慢摇晃，使其染色均匀。
3，弃去染色液，用去离子水快速漂洗三次，每次半分钟。
4，将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃显色至条带清晰可见。
5，可选，将PAGE胶转移至终止液中，终止显色1min。
6，银染后PAGE胶可拍照保存或用于后续试验。
注意事项：1.银染主要出现在PAGE胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2.对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。
石蜡切片神经纤维波蒂安（Bodian）银染试剂盒产品说明书（中文版）主要用途石蜡切片神经纤维波蒂安（Bodian）银染试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和银还原技术，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中神经纤维、神经末梢、神经原纤维形态学的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心改良波蒂安（Bodian）方法、成功实验证明的。
主要适用于石蜡包埋的脑组织或外周神经组织切片的相关纤维组织检测。
广泛用于脑神经病理生理解剖学（例如轴突退行性病变、非髓鞘化神经纤维疾病等）的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。
技术背景神经纤维对于银离子敏感。
通过嗜银（argyrophilic）染色，即使用蛋白银（silver proteinate）浸润组织切片，由铜离子移去结缔组织中的银，实现神经纤维和结缔组织的差异化，在还原剂的存在下，使神经纤维上的离子银还原为可见金属银沉积，呈现黑色。
产品内容脱蜡液（Reagent A）300毫升补水液A（Reagent B）100毫升补水液B（Reagent C）100毫升补水液C（Reagent D）100毫升补水液D（Reagent E）300毫升染色液（Reagent F）50毫升置换液（Reagent G）1毫升还原液（Reagent H）10毫升强化液（Reagent I）10毫升显色液（Reagent J）10毫升平衡液（Reagent K）10毫升产品说明书1份保存方式保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月用户自备小型玻璃染色缸：用于石蜡切片的脱蜡和染色操作培养箱：用于切片染色孵育中性树脂：用于切片封片光学显微镜：用于切片染色后观察分析实验步骤一、脱蜡处理1．取出10片待测的10微米厚的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）2．按下表依次放进小染色缸里孵育3．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）二、样本染色处理1．准备一个6孔板或小型玻璃染色缸2．加入5毫升染色液（Reagent F）（注意：可以进行10张切片处理）3．加入100微升置换液（Reagent G），混匀4．放入整个切片，室温下孵育48小时，或直至切片呈现黑色，避免光照5．取出切片，小心移去切片上的染色液（Reagent F）6．室温下，小心将切片置入50毫升补水液D（Reagent E）中孵育15秒7．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）8．小心加上200微升还原液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面9．室温下孵育10分钟10．小心移去切片上的还原液（Reagent H）11．室温下，小心将切片置入50毫升补水液D（Reagent E）中孵育30秒12．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）三、样本显色处理1．小心加上200微升强化液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面2．室温下孵育5分钟3．即刻移去切片上的强化液（Reagent I）4．室温下，小心将切片置入50毫升补水液D（Reagent E）中孵育30秒5．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）6．小心加上200微升显色液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面7．室温下孵育3分钟至5分钟，或直至背景出现灰色为止（注意：避免过度显色；显微镜下观察后继续下列操作）8．即刻移去切片上的显色液（Reagent J）9．室温下，小心将切片置入50毫升补水液D（Reagent E）中孵育30秒10．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）11．即刻加上200微升平衡液（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面12．室温下孵育5分钟13．小心移去切片上的平衡液（Reagent K）14．室温下，小心将切片置入50毫升补水液D（Reagent E）中孵育2分钟15．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）16．（选择步骤）复染处理（注意：建议使用核固红复染试剂盒- HLS40011）17．（选择步骤）透明处理18．放上盖玻片或封片（中性树脂）19．即刻在一般光学显微镜下观察：神经纤维呈现黑色结缔组织呈现灰色与黑色之间细胞核呈现粉红色（如果复染）背景呈现灰色或紫色注意事项1．本产品为50次操作2．操作时，须戴手套3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全4．建议使用玻璃染色缸5．石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎6．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干7．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面8．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察9．样品染色后保存，避免光照10．本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定显色清晰。
快速银染试剂盒产品简介：快速银染试剂盒(Fast Silver Stain Kit)是一种快速简单、可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染的试剂盒。
本试剂盒也可以用于2D凝胶的银染，并且染色后和后续的质谱检测兼容。
本试剂盒只需一小时左右即可观察到蛋白条带，90分钟内可以完成2块凝胶的银染。
对于BSA蛋白，检测灵敏度可以达到0.3ng蛋白。
无需使用有毒的甲醇。
本试剂盒可足够用于25块常规的8×10cm凝胶的银染。
保存条件：室温保存，一年有效。
银溶液(100X)和银染显色加速液(2000X)需避光保存。
注意事项：由于银染非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。
操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。
需自备乙醇、乙酸及MilliQ级纯水或双蒸水。
下述使用说明中各种溶液的使用量适用于大小为8×10cm厚度为0.75-1mm的凝胶。
对于更大的凝胶，各种溶液的使用量需按凝胶面积的比例放大，对于更厚的凝胶，作用时间需按照厚度的比例适当延长。
本说明书所指的室温为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。
银染基本显色液(10X)在低温环境下可能会出现沉淀，可在30-37℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1.固定：电泳结束后，取凝胶放入约100ml固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为60-70rpm。
固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制：依次加入50ml乙醇、10ml乙酸和40ml MilliQ级纯水或双蒸水，混匀后即成100ml固定液。
2.30%乙醇洗涤：弃固定液，加入100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
30%乙醇的配制：70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇，混匀后即成100ml 30%乙醇。
3.水洗涤：弃30%乙醇，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
4.增敏：弃水，加入100ml银染增敏液(1X)，在摇床上室温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm。
银染增敏液(1X)的配制：99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银染增敏液(100X)，混匀后即为银染增敏液(1X)。
银染增敏液(1X)配制后需在2小时内使用。
5.水洗涤(共2次)：弃原有溶液，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。
弃水，再加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。
6.银染：弃水，加入100ml银溶液(1X)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
银溶液(1X)的配制：99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银溶液(100X)，混匀后即为银溶液(1X)。
银溶液(1X)配制后需在2小时内使用。
7.水洗涤：弃原有溶液，加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1-1.5分钟，摇动速度为60-70rpm。
注意：水洗涤的时间不能超过1.5分钟。
8.显色：弃水，加入100ml银染显色液，在摇床上室温摇动3-10分钟，直至出现比较理想的预期蛋白条带，摇动速度为60-70rpm。
银染显色液的配制：90ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入10ml银染基本显色液(10X),再加入0.05ml银染显色加速液(2000X)，混匀后即为银染显色液。
银染显色液配制后需在20分钟内使用。
9.终止：弃银染显色液，加入100ml银染终止液(1X)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
终止时有气体产生属正常现象，产生的气体为二氧化碳。
银染终止液(1X)的配制：95ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入5ml银染终止液(20X),混匀后即为银染终止液(1X)。
银染终止液(1X)配制后宜当天使用。
10.水洗涤：弃银染终止液，加入100ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动2-5分钟，摇动速度为60-70rpm。
11.保存：可在MilliQ级纯水或双蒸水中保存。
或采用适当的方式制备成干胶。
常见问题：1.背景太深：a.显色时间过长。
通常显色反应会在10分钟内结束，显色反应时间过长会导致背景很深。
b.洗涤不充分。
洗涤时间过短，或洗涤液加入的量不足，或者容器过于狭小导致摇动时溶液不易充分混合，或摇动速度过慢，导致混匀不充分。
请按照说明书的建议确保各种溶液的用量和作用时间，摇床的推荐速度为60-70rpm。
c.凝胶中原有的缓冲液等未在固定步骤中去除干净。
一方面需确保固定的时间和固定液的用量，另一方面对于不是最常用的Bis-Tris缓冲的凝胶需要更长的固定时间以充分去除凝胶中的原有缓冲成分，以降低背景。
d.水的纯度太低。
需使用大于16 MΩ·cm的高纯度水。
2.蛋白条带非常浅：a.蛋白的半胱氨酸(Cysteine)残基的含量特别低或几乎没有。
半胱氨酸残基的存在对于银染非常重要，半胱氨酸残基的含量过低会导致检测灵敏度下降。
b.银染后水洗涤时间过长。
在银溶液染色时需严格控制水洗涤的时间，水洗涤的时间不能超过1.5分钟，否则会导致过多的银离子被洗去，导致检测灵敏度下降。
c.上样量不足。
本试剂盒检测BSA的灵敏度可以达到0.3ng，对于不同的蛋白检测灵敏度可能不同。
对于一些蛋白可能需要大于1ng的蛋白量才能被检测到。
d.固定步骤后的洗涤不够充分。
导致少量乙酸残留，影响后续检测。
确保30%乙醇洗涤和水洗涤的用量和时间，可以适当延长洗涤时间。
3.凝胶上出现小点或或其它非蛋白的痕迹：a.凝胶没有充分被溶液浸没。
请注意选择大小合适的容器，并加入足量的各种溶液，同时需保持适当的混匀速度确保凝胶可以被溶液浸没。
b.用于银染的容器没有充分洗涤干净。
容器需先用洗涤剂充分洗涤，随后用自来水充分冲洗，最后用高纯度水再洗涤数次。
该容器最好能专用于银染，并注意避免各种可能的蛋白污染。
为确保充分洗涤干净，对于耐硝酸的容器，例如玻璃容器，可以在上述洗涤剂及自来水洗涤后用50%硝酸洗涤，随后用高纯度水充分洗涤。
c.指纹或其它压痕。
请注意戴手套操作，切勿直接接触皮肤。
操作时请注意尽量勿挤压、折叠或摩擦凝胶。
d.有金属物质接触凝胶。
金属物质例如金属镊子等接触凝胶会出现非特异性痕迹。
4.在60-70 kD处出现一片模糊的蛋白染色背景：皮肤上脱落的角蛋白(keratin)污染了蛋白样品。
一方面需注意戴手套操作，另一方面需注意盛放蛋白样品的容器盖子尽量不要敞开，甚至在取放蛋白样品时在超净台内进行以避免可能的角蛋白污染。
5.在凝胶的顶端处出现黄色背景：a.样品中DTT浓度很高。
采用其它适当的还原试剂，或者在许可范围内适当减少DTT的用量。
b.采用Tris-Glycine-SDS电泳体系。
Tris-Glycine-SDS电泳体系中的Glycine会导致背景凝胶的顶端出现轻微的黄色背景。
换用Tris-Tricine-SDS电泳体系则可显著消除此黄色背景。
6. 银在染色器皿中出现沉淀：染色器皿中可能含有残余的洗涤剂或上次银染时的残余试剂。
需确保把染色器皿洗涤干净。
使用本产品的文献：1. Xiang D, Zhang J, Chen Y, Guo Y, Schalow A, Zhang Z, Hu X, Yu H, Zhao M, Zhu S, Lu H, Wu M, Yu Y, Moldenhauer A, Han W.Expressions and purification of a mature form of recombinant human Chemerin in Escherichia coli.Protein Expr Purif. 2010 Feb;69(2):153-8.2. Zhao M, Wu M, Guo L, Jiang J, Huang W, Lin X, Zhang Z, Xiang D, Lu H, Zhu S, Yu Y, Moldenhauer A, Han W.Expression, purification, and characterization of a novel soluble form of human Delta-like-1.Appl Biochem Biotechnol. 2010 Mar;160(5):1415-27. Epub 2009 Mar 31.3. Cheng B, Liu X, Gong H, Huang L, Chen H, Zhang X, Li C, Yang M, Ma B, Jiao L, Zheng L, Huang K.Coffee components inhibit amyloid formation of human islet amyloid polypeptide in vitro: possiblelink between coffee consumption and diabetes mellitus.J Agric Food Chem. 2011 Dec 28;59(24):13147-55.4. Li Y, Gong H, Sun Y, Yan J, Cheng B, Zhang X, Huang J, Yu M, Guo Y, Zheng L, Huang K.Dissecting the role of disulfide bonds on the amyloid formation of insulin.Biochem Biophys Res Commun. 2012 Jun 29;423(2):373-8.5. Du G, Ye L, Zhang G, Dong Q, Liu K, Tian JHuman IL18-IL2 fusion protein as a potential antitumor reagent by enhancing NK cell cytotoxicityand IFN-γ production.J Cancer Res Clin Oncol. 2012 Jun 15.6. Pan PW, Zhang Q, Bai F, Hou J, Bai GProfiling and Comparative Analysis of Glycoproteins in Hs578BST and Hs578T and Investigation ofProlyl 4-Hydroxylase Alpha Polypeptide II Expression and Influence in Breast Cancer Cells.Biochemistry (Mosc). 2012 May;77(5):539-45.。
