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棉种质量安全之真实性和纯度SSR分子检测研究进展作者：王飞来源：《种子科技》 2018年第12期摘要：目前我国棉花品种多、乱、杂现象较为严重，对棉农收益和棉花品质造成不利影响。
田间种植鉴定已不能完全满足棉种质量管控的需求。
SSR检测技术可以从分子水平给予每个棉花品种唯一的“身份证明”，成为棉种鉴定较先进的技术和发展趋势。
简要介绍了SSR分子检测在棉花品种鉴定中的研究进展，同时探讨了SSR分子检测技术还存在的一些问题，希望对以后的研究有所参考。
关键词：棉种；SSR分子检测；品种鉴定；研究进展长久以来，棉种的纯度与真实性鉴定停留在一些传统方法上，如田间种植鉴定法，其需要投入大量的物力、人力，且时效性差，易受人为和环境的影响，制约了对棉种的质量管控。
随着分子生物学技术的发展，利用SSR分子检测技术进行品种真伪与纯度鉴定已成为发展趋势，国际植物新品种权保护联盟在分子测试指南中，将构建DNA指纹数据库的标记方法确定为SSR[1]。
1SSR分子标记原理SSR（简单重复序列，SimpleSequenceRepeat）是由几个核苷酸组成的短序列首尾连接重复多次构成，在作物DNA中串联重复排列[2]。
每个SSR侧翼序列通常是同一作物品种中相对保守的单拷贝序列，由该序列可设计出一对互补寡聚核苷酸引物，再经过SSR-PCR扩增，其产物通过电泳检测可显示出不同品种间重复次数的差异。
2研究进展2.1检测体系的优化SSR分子技术鉴定棉种的真实性和纯度的一般步骤分为棉种DNA提取、PCR扩增、PAGE凝胶电泳及银染。
在棉种DNA提取方法上，宋国立等[3]提出了改良的CTAB法，该法能够较好地去除DNA中的棉酚、单宁等物质。
高文伟等[4]采用改良的SDS-CTAB法，不需要多次酚-氯仿抽提，得到了高质量的棉花DNA，是一种高效简洁的DNA提取法。
然而以上方法都是以棉花组织或叶片为试验材料，不能满足鉴定要求的时效性。
匡猛等[5]开发了一种直接以棉籽为材料，只需两次酚-氯仿-异戊醇抽提获得棉种DNA的方法，其显著提高了检测的时效性。
ＳＳＲ标记在棉花遗传育种中的应用摘要SSR是建立在PCR基础上的分子标记，具有多态性高、重复性好、共显性、操作简单等优点，已在棉花研究中被广泛应用。
综述了SSR标记的原理与特点，以及其在棉花遗传图谱构建、功能基因及QTLs定位分析、标记辅助育种、种质鉴定及遗传多样性分析等方面的应用；展望了SSR分子标记技术广阔的应用前景。
关键词SSR；棉花；遗传育种SSR（Simple Sequence Repeats）标记即微卫星标记，是由1~6个核苷酸为单位串联重复而成，长度一般在200bp以下，两端为较保守的单拷贝序列。
通过重复次数不同及重复程度不完全相同而呈现多态性，呈孟德尔式遗传，共显性。
SSR标记广泛存在于基因组的不同位置，根据两侧相对保守的单拷贝序列设计引物，进行PCR扩增，经电泳、显色，便能测出不同个体在某个SSR位点上的多态性，在此基础上进行相应的分析。
棉花基因组中存在丰富的SSR标记，而且分布均匀，检测出的多态性频率较高，已广泛应用于遗传图谱构建、遗传多样性分析、种质鉴定、分子标记辅助选择等方面的研究。
1SSR的基本原理及特点微卫星DNA由两部分组成，即核心序列和两翼的序列，核心序列即前面所称“重复”的短序列，两侧一般是相对保守的单拷贝序列。
在PCR基础上的SSR 分析是根据微卫星DNA两翼区域的序列设计位点专一的引物，以总基因组为模板进行PCR扩增，扩增产物经变性聚丙烯酰胺凝胶分离，用放射自显影、银染或荧光进行检测。
这种序列广泛分布于真核生物基因组，其重复次数的不同就产生了等位基因之间的多态性。
由于SSR两端多为相对保守的单拷贝序列，通过设计引物便可以PCR扩增，进行多态性检测。
与其他分子标记相比，SSR有以下优点：①共显性遗传，不易被自然选择和人工选择所淘汰，符合孟德尔遗传定律[1，2]；②多态性高，可通过PCR扩增呈现出来，试验程序简单，重复性高；③SSR序列的两侧序列较保守，在等位基因中多相同，便于重复利用已知引物；④易于检测、重复性好、可进行自动化分析，1个位点一般可在24h内完成，且可同时进行多位点的检测；⑤对DNA质量和数量的要求不高，仅需微量组织便能有效的分析鉴定。
SSR分子标记在棉花研究中的应用张玉翠;杨伟华;匡猛;许红霞;王延琴;周大云;冯新爱;苏畅【摘要】[目的]分析SSR分子标记在棉花研究中的应用,展望基于SSR的多色荧光标记检测技术的前景.[方法]通过概述SSR标记的原理、特点及其在棉花研究中的应用,展望了SSR的应用前景.[结果]SSR信息量丰富、揭示多态性高、重复性好、结果可靠,是一种快捷简便的分子标记,在棉花研究中已取得广泛应用.随着科技发展,基于SSR的多色荧光标记检测技术也将得到普遍应用.[结论]更好地了解了SSR标记的特点及其在棉花研究中的应用,为棉花育种等相关研究提供了理论依据和技术指导.%[Objective] The aim was to analyze the application of SSR marker in cotton research, look forward the prospect of multi-color fluorescence labeling detecting techniques based on SSR. [Methods] Through summarizing the principles and characteristics of SSR marker and its application in cotton research, the application prospects of SSR were prospected. [Result] SSR marker has many advantages such as information rich, high polymorphism, reliability and good repeatability, thus, it is a simple and efficient molecular marker, and used widely in cotton research. With the development of technology, multi-color fluorescence labeling detecting techniques based on SSR was used widely. [Conclusion] The characteristics of SSR marker and the application of it in cotton research were better understood, which provided theoretical basis and technical guidance for cotton breeding, etc.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】3页(P1321-1323)【关键词】棉花;SSR;荧光检测【作者】张玉翠;杨伟华;匡猛;许红霞;王延琴;周大云;冯新爱;苏畅【作者单位】中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000;中国农业科学院棉花研究所,河南安阳455000【正文语种】中文【中图分类】S562高产、优质棉花新品种的选育对棉花产业发展至关重要，准确、快速地对棉花品种真实性和纯度进行鉴定在净化棉种市场、保障棉花生产、维护育种研究者和棉农的利益中有重要意义。
PAGE凝胶快速银染试剂盒使用说明货号:G7210规格:1L保存:室温(15℃-25℃)干燥保存，复检期12个月。
硝酸银2g染色液A100ml显色液B100ml显色液C100ml终止液D100ml注：1L规格指可配制的硝酸银染色液的体积，实际使用次数根据PAGE 胶大小不同而不同。
产品简介:核酸银染的原理是银离子可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒，可把核酸电泳带染成黑褐色。
它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。
其灵敏度比EB高200倍，该产品整个过程只需要20分钟，操作简单，灵敏度高，能检测到10ng以下的DNA条带。
操作步骤:一、染色液配制需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定，一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。
配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。
如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例改变各成分用量。
1，硝酸银染液：称取0.2g硝酸银，加入到90ml去离子水中彻底溶解，加入10ml溶液A混匀，现用现配。
2，显色液：分别取溶液B和溶液C各10ml加入80ml去离子水中混匀，现用现配。
3，终止液：取终止液D10ml加去离子水稀释至100ml，现用现配。
二、染色：1，PAGE电泳结束后，将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用去离子水漂洗两遍，每次2min。
2，将PAGE胶转移至硝酸银染液中，使染液没过PAGE胶，室温染色10min。
可置于摇床上缓慢摇晃，使其染色均匀。
3，弃去染色液，用去离子水快速漂洗三次，每次半分钟。
4，将PAGE胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE胶，室温摇晃显色至条带清晰可见。
5，可选，将PAGE胶转移至终止液中，终止显色1min。
6，银染后PAGE胶可拍照保存或用于后续试验。
注意事项：1.银染主要出现在PAGE胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2.对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。
微卫星标记的简述微卫星标记（microsatellite），又称为短串联重复序列(simple tandem repeats, STRs)或简单重复序列（simple sequence repeats），是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由2～6个核苷酸的串联重复片段构成，由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星标记的应用非常广泛。
微卫星位点通常通过PCR扩增，扩增产物通过电泳分析并根据大小分离等位基因进行检测。
PCR扩增后的等位微卫星可以用多种方法检测，如荧光标记、银染。
微卫星存在于大多数生物的基因组中，被广泛的应用于遗传杂交育种和绘制染色体遗传图谱等领域。
高度多态的微卫星还可以用来在人群进行个体识别。
实验步骤1. 客户收集标本(血液或组织等标本)并提取DNA。
2. 设计引物序列并扩增，琼脂糖电泳检测结果。
3. 合成荧光标记引物。
4. 进行PCR扩增，产物通过测序仪器电泳检测, 获得扩增片段大小。
5. 分析测序仪器读出的数据，给结果图谱。
微卫星DNA 也称简单串联重复序列( Simple Sequence Repeats，简称SSRs)或简单串联重复序列多态性(Short Tandem Repeat Polymorphism,简称STRP)。
微卫星DNA 是真核生物基因组重复序列中的主要组成部分，主要由串联重复单元组成，每单元长度在1－10bp 之间，1 个SSR 的总长度可达几十到几百个bp。
每个微卫星DNA 都由核心序列和侧翼序列组成，其核心序列呈串联重复排列。
侧翼DNA 序列位于核心序列的两端，为保守的特异单拷贝序列，能使微卫星特异地定位于染色体常染色质区的特定部位。
Weber 将微卫星分为3 类：单纯(pure) SSR、复合(compound) SSR，和间隔(interrupted) SSR。
所谓单纯SSR 是指由单一的重复单元所组成的序列，如(AT) n；复合SSR 则是由2 个或多个重复单元组成的序列，如(GT)n(AT)m；间隔SSR 在重复序列中有其它核苷酸夹杂其中，如(GT)nGG(GT)m。
收稿日期:2000-06-24,3论文联系人基金项目:国家自然科学基金(39830240,3980089),国家转基因植物研究专项(J 992A 2023)资助项目作者简介:张 军(1968-),男,在职博士研究生,工作单位为山东省农业科学院.棉花微卫星标记的PA GE 银染快速检测张 军,武耀廷,郭旺珍,张天真3(农业部农作物种质资源与育种重点开放实验室,南京农业大学农学系,南京210095)摘要:利用一种简便、快速的PA GE 银染方法检测了异源四倍体棉花栽培种陆地棉与海岛棉之间的微卫星多态性,并检测到了微卫星在陆地棉品种间的多态及微卫星标记位点在陆地棉品种间的复等位性。
关键词:棉花;微卫星;PA GE ;银染中图分类号:S 562.035.3 文献标识码:A文章编号:100227807(2000)0520267203Fa st Screen i ng of M icrosa tell ite M arkers i n Cotton w ith PAGE sil -ver Sta i n i ng ZHAN G Jun ,W U Yao 2ting ,GUO W ang 2zhen ,ZHAN G T ian 2zhen (A g rono m y D ep a rt m en t ,N anj ing A g ricu ltu ra l U n iversity ;K ey L abora tory of C rop Ger m p las m and B reed ing ,M in istry of A g ricu ltu re ,N anj ing 210095,Ch ina )Abstract :Po lym o rph is m of m icro satellite m ark 2ers betw een cu ltivars of allo tetrap lo id co tton species (Gossyp ium h irsu tum L .)and the seais 2land co tton (G .baba rd ense L .)w as screened u s 2ing a rap id and si m p le m ethod of PA GE silver stain ing .T he po lym o rp h ic and m u ltiallelic char 2acter of m icro satellite m arkers am ong up land co tton cu ltivars w ere iden tified as w ell .Key words :co tton ;m ico satellite ;PA GE ;silverstain ing微卫星(m icro satellite )或短串联重复(STR )又称简单序列重复(SSR )。
收稿日期:2000-06-24,3论文联系人基金项目:国家自然科学基金(39830240,3980089),国家转基因植物研究专项(J 992A 2023)资助项目作者简介:张 军(1968-),男,在职博士研究生,工作单位为山东省农业科学院.棉花微卫星标记的PA GE 银染快速检测张 军,武耀廷,郭旺珍,张天真3(农业部农作物种质资源与育种重点开放实验室,南京农业大学农学系,南京210095)摘要:利用一种简便、快速的PA GE 银染方法检测了异源四倍体棉花栽培种陆地棉与海岛棉之间的微卫星多态性,并检测到了微卫星在陆地棉品种间的多态及微卫星标记位点在陆地棉品种间的复等位性。
关键词:棉花;微卫星;PA GE ;银染中图分类号:S 562.035.3 文献标识码:A文章编号:100227807(2000)0520267203Fa st Screen i ng of M icrosa tell ite M arkers i n Cotton w ith PAGE sil -ver Sta i n i ng ZHAN G Jun ,W U Yao 2ting ,GUO W ang 2zhen ,ZHAN G T ian 2zhen (A g rono m y D ep a rt m en t ,N anj ing A g ricu ltu ra l U n iversity ;K ey L abora tory of C rop Ger m p las m and B reed ing ,M in istry of A g ricu ltu re ,N anj ing 210095,Ch ina )Abstract :Po lym o rph is m of m icro satellite m ark 2ers betw een cu ltivars of allo tetrap lo id co tton species (Gossyp ium h irsu tum L .)and the seais 2land co tton (G .baba rd ense L .)w as screened u s 2ing a rap id and si m p le m ethod of PA GE silver stain ing .T he po lym o rp h ic and m u ltiallelic char 2acter of m icro satellite m arkers am ong up land co tton cu ltivars w ere iden tified as w ell .Key words :co tton ;m ico satellite ;PA GE ;silverstain ing微卫星(m icro satellite )或短串联重复(STR )又称简单序列重复(SSR )。
是指一类遍布于生物基因组中的由几个核苷酸对(称为核心序列,一般为1～6bp S )为重复单位组成的简单串联重复。
其重复次数在同一物种不同的遗传型间是高度可变的,但这段重复的两端却是相对保守的单拷贝序列,据此设计引物,即可通过PCR 技术分析核心序列重复次数的变异,在不同的遗传型间检测到多态,称为简单序列长度多态性(SSL P )。
微卫星首先是在人类遗传研究中发现的[1],以后发现在植物中也普遍存在。
现在,微卫星作为一种分子标记技术已经用于植物遗传、育种研究。
Yu 等[2]利用研究开发出的棉花微卫星的引物,进行棉花遗传图谱构建及Q TL 分析。
但是,微卫星的长度很小,一般为100～300bp S ,有时甚至小于100bp S ,其多态性有时仅表现为几个bp S 的差异。
因此一般的琼脂糖凝胶电泳很难检测微卫星的多态性。
早期的研究是在PCR 反应体系中加入一种用放射性同位素标记的脱氧核苷酸底物,利用变性或非变性的PA GE 经放射自显影检测多态性[3,4],这给研究中利用微卫星标记带来很大的麻烦。
利用高分辨率的琼脂糖凝胶电泳可以检测到大多数微卫星的多态[4],但这种琼脂糖凝胶的制备费时、费力。
Panaud 等[5]尝试利用PA GE 银染技术检测微卫星的多态性。
银染的灵敏度非常高,但一般的银染方法操作比较繁琐,不容易控制染色背景,使得结果不稳定。
我们利用一种快速简便的银染方法,通过非变性的PA GE 有效地检测了陆地棉与海岛棉种间及陆地棉种内品种间微卫星的多态性。
1 材料和方法1.1 植物材料陆地棉遗传标准系TM —1、海岛棉高产抗病品系海7124及其杂交F 1。
陆地棉6个栽培品种。
1.2 棉花基因组DNA 的分离纯化参考郭旺珍等[6]的方法。
1.3 微卫星的PCR 扩增PCR 反应体系(67mM T ris 2HC l (pH 8.8),16mM (N H 4)2SO 4,0.002%明胶,0.2mM dN T P S ,762 棉花学报 A cta Go ssyp ii Sinica 2000,12(5):267～2692.5mMM gC l2,正向引物与反向引物(M ap Pairs TM 产品)各0.6ΛM,0.25ΛT aq DNA聚合酶(上海Sangon公司产品),模板DNA20ng)10Λl,反应程序为:95℃变性2m in;94℃变性40s、57℃退火45s、72℃延伸60s,共30个循环;72℃延伸7m in。
1.4 扩增产物的PA GE 银染分析扩增产物经非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶浓度8%～10%,凝胶大小180×120×2mm,电泳缓冲液为1XTB E,恒压500V,电泳1h。
电泳结束后,凝胶用蒸馏水稍冲洗后,按照以下程序进行银染(参考吴冠芸等[7]介绍的方法,稍做修改):固定(10%乙醇、0.5%冰乙酸)6m in,两次;渗透(0.2%硝酸银水溶液)10～12m in;蒸馏水漂洗3m in,两次;0.002%(w v)硫代硫酸钠的水溶液漂洗2m in;显色(1.5%氢氧化钠、0.4%甲醛)适度;0.75%。
2 结果与分析2.1 银染的灵敏度利用Sangon的50bp分子量m arker,设置浓度梯度,进行灵敏度实验。
上样量1.0ng则50bp、100bp、150bp、200bp、250bp和300bp片段的量分别为0.027、0.040、0.020、0.053、0.033和0.040ng。
从图1可以看出,这些DNA条带清晰可见,在上样量为0.25ng时也能检测到0.01ng的300bp条带。
而一般的琼脂糖凝胶EB染色仅能检测到1ngDNA。
2.2 微卫星在陆地棉与海岛棉之间的多态性利用50对引物,对TM—1与海7124进行检测,有48对检测到了多态。
图2显示SSR1604在TM-1与海7124之间检测到了两个多态性位点,从其F1的带型可以看出微卫星标记呈现典型的共显性。
2.3 微卫星在陆地棉品种间的多态性与复等位性从图3中可以清楚地看出SSR1604可以检测到品种3,6与品种2,4,5之间有多态性差异,而品种1的谱带明显地与两类都不同。
这说明微卫星标记位点在陆地棉具有复等位的特点。
另外,在图3中箭头所指的品种1与品种2的多态性差异很小,仅为几个bp,这样微小的差异通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可以有效地检测到,而用琼脂糖凝胶电泳则难以检测。
3 讨论微卫星作为分子标记具有非常大的优越性,表现在(1)是共显性标记,可以在连锁分析中提供比显性标记(如RA PD)更为丰富的信息;(2)基于PCR技术,有利于标记分析的自动化;(3)微卫星的重复次数具有很高的变异性,因此多态性非常丰富,而且标记位点具有复等位性,这使得即使在种内的栽培品种间也非常容易获得多态性标记位点;(4)微卫星广泛分布于真核生物基因组的编码区与非编码区[1],有利于构建饱和的分子连锁图谱;(5)一旦开发出引物序列,即可在不同的实验室之间共享[8]。
我们利用的引物是根据陆地棉TM-1与海岛棉P i m a3—79之间有差异的微卫星设计的,其在异源四倍体栽培棉种之间的可以检测到丰富的多态性。
虽然在我们的实验中有个别引物没有检测到多态,这很可能与我们所选的海岛棉亲本海7124与P i m a3—79之间的遗传差异有关。
我们在陆地棉的栽培品种之间也检测到了微卫星的多态性差异和标记位点的复等位性。
我们已经筛选到了与棉花高强纤维Q TL连锁的微卫星标记(张天真等,2000,待发表),并正在将微卫星标记用于棉花遗传作图和其它Q TL 分析。
直到最近,检测微卫星主要是两类方法:一是利用高分辨率的琼脂糖凝胶电泳EB染色分析[9],这不可避免地降低了检测的灵敏度和分辨率;二是利用放射性同位素标记PCR反应底物, PA GE 放射性自显影检测,这种方法不仅有受辐射危害的危险,而且操作费时、费力,影响了检测效率,非常不利于遗传作图中大量标记的快速检测。
但其灵敏度和分辨率均较好,因此很多实验室还是倾向于使用该方法[2,10,11]。
而利用溴化乙锭(EB)检测聚丙烯酰胺凝胶中的核酸时,由于凝胶对EB被紫外线激发出的荧光的淬灭,使检测的灵敏度降低。
Panaud等[5,12]介绍的检测微卫星的银染方法,是一种通用于蛋白质和核酸温和的银染程序,它对蛋白质具有很高的染色灵敏度。
因此,染色过程中较难控制染色背景,加之程序稍显繁琐,不利于微卫星标记的大量检测分析。
我们利用非变性的高浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶银染过程中,利用强碱溶液构成的显色液,又在硝酸银溶液渗透之前利用硫代硫酸钠溶液漂洗,有效地控制了染色背景,提高了分辨能力,而整个染色程序不足一个小时时间,使得微卫星的多态性分析简便迅速,并且避免了放射性同位素危害的可能性。
利用这种PA GE 银染检测技862 棉 花 学 报 12卷术,可以快速有效地对大量微卫星标记进行分析,特别有利于利用微卫星标记构建棉花的遗传图谱和对大群体进行标记检测。
这对于微卫星标记在棉花遗传、育种研究中的应用具有重要的意义(见图版)。
参考文献:[1]HAM ADA H,Petrino M G,Kakunaga T.A novelrepeated elem ent w ith z2DNA fo r m ing po tential is w idely found in diverse eucaryo tic genom es[J].P roc N atl A cad Sci U SA,1982,79:646526469.[2]YU J,Kohel R J.M app ing co tton genom e w ithmo lecular m arkers[C].P roc Beltw ide Co tton Conf, 1997,447.[3]ZHAO X,Kochert G.Characterizati on and geneticm app ing of a sho rt,h igh ly repeated,interspersed DNA sequence from rice(O ry z a sativa L)[J].M o l Gen Genet,1992,231:3532359.[4]WU K S,T ank sley S D.A bundance po lymo rph is mand genetic m app ing of m icro satellite in rice[J].M o l Gen Genet,1993,241:2252235.[5]PANAUD O,Chen X,Jack P I.F requency of m i2cro satellite sequences in rice(O ry z a sativa L)[J].T hero A pp l Genet,1995,87:7822788.[6]郭旺珍,张天真,潘家驹,等.棉花胞质雄性不育育性恢复基因的RA PD2PCR标记筛选[J].科学通报, 1997,24:264522647.[7]吴冠芸,潘华珍,主编;生物化学与分子生物学实验常用数据手册[M].科学出版社,1999,263.[8]M I LBOU RN E D,M eyer R C,Co llins A J,et al.Iso lati on,characterizati on and m app ing of si m p le se2 quence repeat loci in po tato[J].M o l Gen Genet, 1998,259:2332245.[9]HU T T EL B,Peter W,Kurt W,et al.Sequence2tagged m icro satellite site m arkers fo r ch ickpea(C icer arietinum L)[J].Genom e,1999,42:2102217. [10]PROVAN J,Pow ell W,W augh R.M icro satelliteanalysis of relati onsh i p s w ith in cultivated po tato(S olanum tuberosum)[J].T hero A pp l Genet,1996,92:107821084.[11]YU K F,Park S J,Poysa V.A bundance and varia2ti on of m icro satellite DNA sequences in beans (P haseolus and V ig na)[J].Genom e,1999,42:27234.[12]Panaud O,Chen X,M cCouch S R.D evelopm ent ofm icro satellite m arkers and characterizati on of si m p le sequence length po lymo rph is m(SSL P)in rice (O ry z a sativa L)[J].M o l Gen Genet,1996,252: 5972607.●・环球动态・棉花遭受日灼伤为害的问题 1999 2000年度,澳大利亚昆亚兰州北部棉区遭受了较严重的日灼伤问题,一些棉花的大部分叶子干枯脱落。
