三种测定银杏叶提取物中总黄酮的方法比较

文章编号:10044736(2000)03000302紫外分光光度法测定银杏制剂黄酮含量吕　红(武汉化工学院制药系,湖北武汉430073)摘　要:以芦丁为标准品,标准品和供试品经硫酸水解后,在紫外分光光度仪267nm 处测定银杏制剂中的黄酮含量,该法简便易行,快速,重现性好.关键词:紫外分光光度法;含量测定;银杏黄酮中图分类号:R 914.1 文献标识码:A收稿日期:20000229作者简介:吕　红(1955),女,武汉市人,工程师,主要从事药物制剂和药物分析实验教学工作.0　引　言银杏叶总黄酮采用芦丁为标准品,以硝酸铝—亚硝酸钠为显色剂,生成铝螯合物,在分光光度计510nm 处进行测定.该方法为一些药典所采用,但不专属,通常测定结果含量偏高,误差较大,重现性差[1,2].HPLC 法测定银杏总黄酮虽然误差较络合分光光度法小,但操作复杂,且山奈素,异鼠李素标准品极难得到[1,3].为了简便快速,准确的测定银杏制剂中的黄酮含量,根据黄酮在紫外有吸收峰的原理,将银杏叶提取物硫酸水解后的甲醇液在紫外分光光度计200～400nm 处进行扫描,该供试液在267±1nm 处有最大吸收峰,而槲皮素甲醇液在此处正好有一吸收肩峰,因此本实验选用芦丁作标准品,用紫外分光光度法测定银杏制剂中的黄酮含量.1　实验部分1.1　仪器与试药756B 紫外分光光度仪(上海第三仪器厂);芦丁(卫生部药品生物制品检验所);银杏叶提取物干浸膏、银杏叶缓释片、缺银杏叶空白对照缓释片(自制)、Ginkgo Biloba 胶囊(Healthy lofe Co);硫酸、甲醇(AR 级).1.2　标准液的制备准确称取120℃烘干至恒重芦丁标准品约0.02g 置入50m L 圆底烧瓶中,加入0.025mol H 2SO 410m L 、甲醇20m L,沸水浴上回流1h,放冷过滤,用甲醇冲洗烧瓶及滤器,将滤液和洗液合并于50m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.8μm 微孔滤膜过滤,吸取滤液10m L 置于100m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀即得.1.3　供试液的制备取银杏叶提取物干浸膏10g ,银杏叶缓释片和缺银杏叶空白对照缓释片各20片分别研细,取Ginkg o B iloba 胶囊20粒混匀,以上各供试品于120℃干燥至恒重,准确称取各供试品约0.2g ,按照芦丁标准液的制备方法制备各供试液.1.4　空白参比试液的制备准确吸取0.025mol H 2SO 410m L 于50m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,吸取10m L 置于100m L 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀即得.1.5　测定波长的选定将以上配制的标准液,供试液及空白参比溶液于紫外分光光度仪200～400nm 之间进行吸收图谱自动扫描,如图1所示.银杏叶提取物,银杏叶缓释片和Ginkgo B iloba 供试液在267±1nm 处有最大吸收峰,该吸收峰不受供试液放置时间图1　标准液与供试液紫外吸收光谱图1—芦丁标准品;2—Ginkgo Biloba;3—银杏叶提取物干浸膏;4—银杏叶缓释片第22卷第3期 武　汉　化　工　学　院　学　报 V ol.22　N o.32000年9月 J .　W uhan Inst.　Chem.　Tech. Sep.　2000的影响,吸收峰位置稳定.芦丁标准液在其最大吸收峰255nm的下降部位267±1nm处有一肩峰,不受试液放置时间的影响,吸收峰位置稳定.将标准液和各供试液在267nm分别测定吸光度后,再按标准加入法将各供试液与标准液分别制成混合液,在同一波长处测定,A总=A1+A2符合郎白比尔定律,因此选267nm作为测定波长.银杏叶空白对照缓释片供试液和空白参比溶液在240～400nm处无吸收峰.1.6　芦丁标准液工作曲线的制定分别准确吸取1.2中制备的芦丁标准液1、2、3、4、5m L于10m L容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,依次在紫外分光光度仪267nm处,以空白参比溶液调零依次测定,仪器输出浓度方程为Co rc=K.DATA+BK=0.370　B=0.00　R2=0.999 1.7　供试液的测定准确吸取1.3中制备的银杏叶干浸膏,银杏叶缓释片,Ginkg Biloba供试液各1m L于10m L容量瓶中,加甲醇于刻度,摇匀.在紫外分光光度仪267nm处,以空白参比溶液调零,测定其吸光度,由仪器按1.6给出的浓度方程,输出各供试液的浓度.测定结果见表1.表1　样品总黄酮含量供　试　液平均含量/%(N=5)RSD/%银杏叶提取物干膏14.440.091银杏叶缓释片 6.840.645Ginkgo B ilo ba 2.000.74 1.8　回收实验将1.3中制备的银杏叶干浸膏,银杏叶缓释片,Ginkg B iloba供试液分别制备5份,其银杏黄酮的含量是根据17供试液测定方法测得,按标准添加法分别加入1.2中的芦丁标准液1m L,制成供试品与标准品的混合液,按17供试液测定方法依次测定,结果见表2:表2　回收率实验结果供　试　液平均回收率/%(N=5)RSD/%银杏叶提取物干膏100.21.34银杏叶缓释片100.71.52Ginkg o Biloba100.21.372　结果与讨论2.1　溶剂与测定结果的关系本实验中所用甲醇如有异物,需蒸馏后再使用.否则影响测定结果.2.2　试液的制备与测定结果的关系标准液和供试液如只用滤纸过滤,滤液中有细小滤纸纤维,影响回收实验测定结果,因此有微孔滤膜过滤.2.3含量测定结果分析由Healthy Lofe Co.生产的Ginkgo Biloba胶囊剂,产品说明书上标明每粒胶囊含24%银杏总黄酮提取物60mg,胶囊中除有银杏提取物外还含有其它辅料,根据笔者称样计算,胶囊剂中银杏总黄酮的含量约为2.2%,本实验测得胶囊剂中银杏黄酮为2.0%.因该制剂并未标明胶囊中银杏黄酮的准确含量,实验中将其作为供试品进行银杏黄酮的含量测定,是将该制剂作为参考,其目的是为了验证本实验中采用的含量测定方法是否可行.结果表明本实验中银杏黄酮测定方法是可行的.胶囊剂中的辅料是根据显微鉴别推测,并根据推测结果所得辅料按1.3供试液制备方法制备,按1.5方法用紫外分光光度仪进行图谱自动扫描,在240～400nm处无吸收峰.本实验所测银杏叶干膏含银杏黄酮质量比为14.44%,如要达到24%的含量,还需将提取物精制.参考文献:[1]　扬义方.银杏叶及其制剂的定性定量分析[J].国外医药(植物药分册),1995(4):147～152.[2]　钱天秀.银杏研究状况[J].国外医药(植物药分册),1997(4):157～161.[3]　刘素艳,等.银杏总黄酮含量的HP LC测定[J].中国医药工业杂志,1999(11):513～514. (下转第7页)4武汉化工学院学报第22卷方便教师及时检查学生的实验数据,随着电脑越来越普及,Microsoft Office 又是几乎每台电脑中必备的软件,我们相信,利用Excel 处理实验数据的方法会得到进一步的推广和应用.参考文献:[1]　邝生鲁.物理化学实验[M ].武汉:武汉工业大学出版社,1996.144～145.[2]　东北师范大学.物理化学实验[M ].北京:人民教育出版社,1982.155～158.[3]　华东理工大学.物理化学实验与技术[M ].上海:华东化工学院出版社,1990.69～72.Data handling of measurements of surfacetension of solution by Microsoft ExcelZHAO Chun fang(Depar tment o f Pharmaceutical Technology ,W uhan Institute of Chemical Techno log y ,W uhan,430074,China )Abstract:A method by Microsoft Ex cel to handle the data ex periment in physical chemistry measure-ments of surface tension of solutions based on the biggest bubbles w as introduced.And the method is con-venient ,fast and reliant.Key words :Microsoft Ex cel ;measurements of surface tension;ex perimental data in physical chemistry本文编辑:张汉平 (上接第4页)The determination of flavonoids contentfor ginkgo biloba with ultraviolet spectrophotometryLU Hong(Department of Pha rmaceutical T echnolog y ,Wuhan Institute of Ch emical Technolo gy ,W uhan 430073,China )Abstract :Taking w ith rutin as standard sample,the flavonoids content in the ginkgo biloba w ere deter-mined by means of ultraviolet spectropho tometry at 267nm.The method is easy,quick,and the repeata-bility is v ery g ood .Key words :ultraviolet spectrophotometry;co ntent m eassuring;ginkgo biloba flav onoids本文编辑:张汉平 7第3期赵春芳:用EX CEL 处理液体表面张力测定实验数据。

FZD0117
银杏叶提取物中银杏黄酮（Total Flavonglycoside）含量测定方法一、色谱条件
色谱柱：Inertsil ODS-3 4.6×150mm 5μm
流动相：甲醇:水:磷酸(50:50:0.3，V/V)
检测波长：360nm
流速：1mL/min
柱温：室温
进样量：10μL
二、溶液制备
1. 对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品约3mg于25mL容量瓶中，加入甲醇溶解定容。

2. 样品溶液制备精密称取银杏叶提取物样品约35mg于100mL 圆底烧瓶中，加入甲醇-25%盐酸(4：1)的混合溶液25ml，振摇使样品溶解后，置沸水浴回流30min，迅速冷却至室温，转移到50mL容量瓶中，用甲醇冲洗圆底烧瓶并定容，摇匀即得供试样品溶液。

三、样品测定
在上述色谱条件下，待仪器稳定、基线平稳后进样测定，槲皮素（Quercetin）保留时间约为13min，山奈酚（Kaempferol）约为21min 异鼠李素（Isorhamnetin）约为23min。

银杏黄酮含量按下式计算：
（2.5Q+2.59K+2.44I）Ws×2
银杏黄酮含量（%）= ×S
As×Wi
式中Q、K、I分别为样品中槲皮素、山奈酚、异鼠李素的峰面积As、Ws分别为槲皮素对照品的峰面积和称样量（mg）
S为槲皮素对照品的纯度(%)
Wi为样品称取量（mg）。

银杏叶中有效成分黄酮的提取研究及黄酮的检验和分析姬晨辉（内蒙古农业大学理学院内蒙古呼和浩特010018）摘要：银杏是我国的特有植物，又称公孙树。

银杏叶为最古老的中生代孑遗植物银杏的干燥叶。

银杏有裸子植物活化石之称。

据《本草纲目》记载，银杏果具有敛肺平喘、止遗尿、白带的作用。

在医药上有很高的利用价值。

银杏叶的提取方法有有机溶剂萃取法、水提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超临界萃取法、超声波提取法、酶法等。

本文采取乙醇提取总黄酮的方法，用分光光度法测定总黄酮的含量。

关键词：银杏叶总黄酮乙醇含量测定Abstract: Ginkgo biloba is our country's endemic plants, also known as maidenhair tree. Ginkgo biloba is the oldest Mesozoic relict plant Ginkgo biloba dried leaves. Ginkgo has gymnosperms living fossil. According to the "Compendium of Materia Medica" records, ginkgo fruit with convergence lung asthma, only enuresis, vaginal discharge effect. In medicine has a high value in use. Ginkgo biloba extract organic solvent extraction method, water extraction, dilute alkali or alkaline aqueous alcohol extraction, supercritical extraction, ultrasonic extraction, enzymatic and so on. This paper adopts ethanol extract flavonoids method, using spectrophotometric determination of total flavonoids.Key word s: Ginkgo biloba Flavonoids Ethanol Determination1 材料与方法1.1 试验材料银杏叶采集于自然生长的银杏树叶、75%酒精、石油醚、旋转蒸发器、丙酮、4～5碳烷基醇、醋酸酯1.2 试验方法1.2.1 银杏叶总黄酮提取率计算方法银杏叶总黄酮提取率（%）=提取液中心黄酮的重/提取所用银杏叶中总黄酮含量*100%。

银杏叶中黄酮提取及含量测定一、实验目的提取银杏叶中的总黄酮并测定其含量。

二、实验原理银杏系银杏科银杏属落叶乔木，银杏叶中含有多种生理活性成分，其中黄酮类化合物是重要的生理活性物质，具有保肝护肝、预防治疗心血管疾病、抗氧化、抗衰老等作用。

因此，将银杏叶作为高营养、保健功能价值的资源加以开发利用，这对于提高银杏叶综合利用率有重要意义。

银杏叶黄酮类化合物的提取方法目前研究的有水浸取法，成本低但浸取率低；有机溶剂浸取法中，乙醇浸取的效率高且无毒，是目前采用较多的方法；韩玉谦等采用超临界流体萃取法，在70%乙醇溶液中加热回流法和CO2 超临界流体萃取法提取银杏叶中的活性成分，银杏黄酮回收率为84 . 4 % ，是常规萃取法回收率的2倍多；乙醇超声波浸取法, 黄酮提取率可达到8 6 . 7 %。

银杏黄酮含量的测定常用分光光度法和高效液相色谱法。

分光光度法自20世纪9 0年代以来一直是用来测定银杏黄酮的一种重要方法, 由于其成本低、便于操作等特点, 是一种快捷有效的方法[1]。

本实验采用乙醇作溶剂进行索氏提取，建立了用Al(NO3)3显色法对芦丁标准品和银杏叶提取液进行光谱扫描测定银杏叶总黄酮含量的方法[2]。

三、实验仪器和试剂材料：银杏叶粉末50g试剂：标准芦丁样品，无水乙醇（600ml），50mlAl(NO3)3（0.1mol/L），乙醚，5%NaNO2溶液，10%AL(NO3)3，4%NaOH溶液。

仪器：紫外分光光度计、电子分析天平、水浴锅、烘箱、烧杯、容量瓶（100ml1个、50ml1个、10ml6个）、索氏提取器、减压蒸馏装置、锥形瓶、沸石等。

四、实验步骤1.1提取银杏叶中总黄酮（1）将银杏叶洗净, 在103℃下烘干至恒重,用研钵捣碎制得银杏叶粉（2）准确称取10.0g，置于索氏提取器中，按下列条件加热回流提取：乙醇浓度80％，料液比1：20(g／ml)，回流温度85℃，回流时间2 h，平行进行1~3次实验。

药学论文-高效液相色谱法测定复方银杏叶片中银杏总黄酮的含量【摘要】目的建立复方银杏叶片中银杏总黄酮含量测定方法。

方法采用高效液相色谱法，用Symmetry C18色谱柱( 250 mm×4.6 mm,5 μm )，以甲醇0.4%磷酸溶液（52∶48）为流动相，流速为1.0 ml·min-1，检测波长360 nm ，柱温35℃。

结果该法线性关系良好，平均加样回收率为98.35 % ,RSD为1.17 % ( n = 5 )。

结论该法操作简便，分离效果好，结果准确，专属性强，可作为复方银杏叶片的质量控制方法。

【关键词】复方银杏叶片；黄酮；槲皮素；山柰素；异鼠李素；高效液相色谱法Abstract：ObjectiveTo establish the determination method of flavonoids in compound Ginkgo biloba Leaves Tablets .MethodsThe analysis was performed on aSymmetry C18 column（4.6 mm ×250 mm,5 μm） with methanol 0.4% phosphoric acid( 52:48 ) as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml ·min-1, and at a column temperature of 35℃. The detection wavelength was 360nm.ResultsThe linearity of this method was good.The average recovery of added samples was 98.35 % with RSD 1.17 %. (n=5 ) .ConclusionThe method is convient with a good separating degree for the determination of flavonoids and can be used to evaluate the quality of compound Ginkgo biloba Leaves Tablets.Key words：Compound Ginkgo biloba LeavesTablets； Flavonoid； Quercetin ； Kaempferol； Isorhamnetin； HPLC复方银杏叶片是由银杏叶提取物和广西野葛根提取物等制成的复方制剂，具有活血化淤，降低血脂，清除自由基和抗衰老等功效和作用［1］。

HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）法是一种常用的分析方法，常用于药物、食品、环境等领域的分析。

本文将使用HPLC法来测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量。

1. 实验仪器和试剂准备- 仪器：高效液相色谱仪（包括采样器、色谱柱、检测器、色谱软件等）- 试剂：甲醇、乙醇、乙腈、纯净水、银杏叶软胶囊样品2. 样品制备将银杏叶软胶囊样品取重量（大约0.5克），加入适量的甲醇或乙醇中，以达到合适的浓度。

然后使用超声波清洗仪进行超声提取，提取时间约15分钟。

提取液离心，取上清液。

如果需要，可以通过滤膜过滤以去除颗粒杂质。

3. 色谱条件设置- 色谱柱：C18反相色谱柱（5μm，4.6mm×250mm）- 流动相：甲醇-水（80:20）- 流速：1.0 mL/min- 检测波长：280 nm- 注射体积：20 μL- 初始梯度：0-10分钟，甲醇-水（80:20）- 梯度条件：10-25分钟，甲醇-水（60:40）25-35分钟，甲醇-水（50:50）35-40分钟，甲醇-水（30:70）40-45分钟，甲醇-水（20:80）45-55分钟，甲醇-水（10:90）4. 标准曲线绘制选取适量的外标总黄酮标准品，加入适量的甲醇或乙醇中，得到一系列的浓度。

分别进行HPLC分析，测量各浓度的峰面积，并绘制出标准曲线。

5. 样品测试用之前制备好的样品提取液进行HPLC分析。

将待测样品注入色谱柱，使用上述的色谱条件进行分析。

分析时重复进行3次实验，并计算出平均值。

6. 数据计算利用标准曲线上的峰面积和浓度，计算出待测样品中总黄酮的含量。

7. 结果和讨论通过HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量，得到了样品的峰面积。

通过比对标准曲线，可以计算出样品中总黄酮的含量。

通过以上步骤，我们可以使用HPLC法测定银杏叶软胶囊中总黄酮的含量。

银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定银杏叶是一种常见的中草药，被广泛用于治疗心血管疾病、脑血管疾病等疾病。

银杏叶中含有丰富的总黄酮醇苷，是其主要药效成分之一。

因此，测定银杏叶片中总黄酮醇苷的含量对于研究其药效作用具有重要意义。

本文旨在介绍一种测定银杏叶片中总黄酮醇苷含量的方法。

一、实验材料和仪器1.实验材料银杏叶片粉末、无水乙醇、二氯甲烷、硫酸、硝酸、硼酸、钠氢碳酸、碳酸钠、硫酸铜、硝酸铅、氢氧化钠、酚酞指示剂、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇等。

2.仪器紫外分光光度计、高速离心机、旋光仪、恒温水浴器、电子天平、磁力搅拌器等。

二、实验步骤1.提取样品中的总黄酮醇苷取适量的银杏叶片粉末，用无水乙醇进行浸提，提取液在恒温水浴器中加热回收至干燥。

将干燥后的提取物用二氯甲烷和无水乙醇混合溶解，制备成10mg/mL的样品溶液。

2.测定样品中总黄酮醇苷的含量将样品溶液加入紫外分光光度计中，以350nm为波长进行测定。

同时取一定量的样品溶液，用硫酸进行水解反应，加入硝酸、硼酸、钠氢碳酸等试剂，然后用碳酸钠进行中和，加入硫酸铜、硝酸铅等试剂，用氢氧化钠进行沉淀，最后用酚酞指示剂进行滴定。

3.计算总黄酮醇苷的含量根据测定结果，计算样品中总黄酮醇苷的含量。

具体计算公式如下：总黄酮醇苷含量（mg/g）=（C×V×D）/m其中，C为滴定所用的氢氧化钠的浓度，V为样品溶液的体积，D 为稀释倍数，m为样品的质量。

三、实验结果与分析本实验所得到的银杏叶片中总黄酮醇苷的含量为XXmg/g。

该结果表明，银杏叶片中含有较高的总黄酮醇苷含量，这也是其药效作用的主要来源之一。

同时，该实验方法具有可靠性高、操作简便等优点，适用于银杏叶片中总黄酮醇苷的含量测定。

四、结论本文介绍了一种测定银杏叶片中总黄酮醇苷含量的方法，该方法具有可靠性高、操作简便等优点。

实验结果表明，银杏叶片中含有较高的总黄酮醇苷含量，这也是其药效作用的主要来源之一。