大鼠促黄体生成素(LH)酶联免疫分析

大鼠胃促黄体生成素及其受体的免疫组化及原位杂交研究(1)【摘要】目的：探讨大鼠胃组织中是否表达促黄体生成素（LH）及其受体(LHR), 为进一步研究LH对胃的功能调节提供理论依据. 方法：采用免疫组织化学SABC和原位杂交的方法进行研究. 结果：在大鼠胃底腺的壁细胞和主细胞呈LH和LHR免疫反应阳性. 阳性物质分布于细胞质和细胞膜上，细胞核呈阴性反应. 上述细胞同样含有LH和LHR mRNA杂交信号，信号物质亦分布于细胞质内，细胞核呈阴性反应. 结论：大鼠胃壁细胞和胃主细胞既能产生LH，又能表达LHR，说明LH对胃壁细胞和胃主细胞功能作用可能是通过旁分泌或自分泌的作用来实现的. 【关键词】黄体生成素免疫组织化学原位杂交胃底腺0引言LH(luteinizing hormone, LH)及其受体(luteinizing hormone receptor, LHR)可以在下丘脑－垂体－性腺轴之外表达已经被公认. 我们先前的实验已经证明，大鼠颌下腺的浆液性腺泡上皮细胞能够表达LH及其受体［1-2］，但作为消化系统最重要器官之一的胃组织是否表达LH及其受体，目前尚未阐明，本实验采用免疫组织化学和原位杂交等技术对该问题进行了研究. 1材料和方法 1.1材料正常雄性SD大鼠，体质量（200±20）g，购自第四军医大学试验动物中心；LH mAb购自美国ZYMED公司；LHR多克隆抗体、SABC试剂盒与敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅰ型为武汉BOSTER公司产品；购自TaKaRa公司；地高辛标记随机引物标记试剂盒购自Roche; Hind Ⅲ，EcoRⅠ内切酶购自New England Biolabs公司；胶回收试剂盒购自Promega公司；DAB显色试剂盒购自北京中山试剂公司. 1.2方法 1.2.1LH及其受体的免疫组织化学SABC法SD大鼠术前晚禁食不禁水，经腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉，取出胃组织立即放入Bouins液中固定，用石蜡包埋后将组织蜡块切成4 mm的切片，并将切片贴附于APES处理过的载玻片上，烘干备用. 将切片进行二甲苯脱蜡，先后各10 min，无水乙醇5 min，加入30 g/L甲醇中20 min以去除内源性过氧化物酶，然后按SABC法进行LH及其受体的免疫组织化学染色，第一抗体：LH抗体（1∶500稀释）和LHR抗体（1∶300稀释），在4℃冰箱孵育过夜，第二抗体: LH和LHR分别为生物素标记的羊抗鼠或羊抗兔IgG(1∶200稀释)，室温孵育2 h. SABC复合物（1∶200稀释）室温孵育30 min. DAB显色10~15 min，蒸馏水终止反应，剃度乙醇脱水，透明二甲苯两次，各10 min，中性树胶封片. 用正常兔血清取代第一抗体进行孵育作阴性对照. 1.2.2LH及其受体的标记探针根据文献产生的克隆制备探针，分别从LH及其受体的上切下最初的DNA片段，长度分别为150，650 bp，并进行回收，采用随即引物标记法进行标记，具体方法按Roche公司的地高辛标记试剂盒进行：用灭菌去离子蒸馏水稀释1 μg DNA至总体积16 μL；把DNA瓶置于沸水中，水浴10 min. 然后，迅速冰浴3 min以上，使DNA热变性；加4 μL DIG Random Labeling Mix(高效)，混匀后再1000 g离心5 min，置37℃水浴反应过夜，时间越长，产量越高. 延长反应时间至20 h可明显增加地高辛标记DNA的产量，并加入0.2 mmol/L EDTA 2 μL以终止反应，置-20℃保存备用. 1.2.3LH及LHR mRNA原位杂交程序用上述方法麻醉动物后，取出胃组织立即放入用Bouins液（内含1g/L DEPC）中固定，整个制片过程均防RNA酶污染，切片厚度为4μm，将切片进行二甲苯脱蜡，先后各15 min,剃度乙醇水化，加入30 g/L甲醇中20 min以去除内源性过氧化物酶；胃蛋白酶活性37℃消化30 s，以增加探针的穿透力；4 g/L多聚甲醛终止反应5 min，以终止蛋白酶K的作用；每张切片滴加含2.0 mg/L地高辛标记探针的原位杂交液30 μl，置湿盒中42℃杂交20 h；分别用37℃预热的2×SSC，0.1×SSC洗涤5 min×3，10 min×2；滴加小鼠抗地高辛抗体37℃，2 h，0.5 mol/L TBS洗涤5 min×3；滴加生物素化羊抗小鼠IgG 37℃ 1 h，0.5 mol/L TBS洗涤5 min×3；滴加ABC 37℃ 30 min. 最后用 DAB显色液显色，室温10~15 min，镜下观察其显色情况，水洗终止反应. 梯度乙醇脱水，中性树胶封片. 阴性对照分别用不含探针的杂交缓冲液取代含探针的杂交液，及用正常羊血清取代羊抗地高辛抗体IgG进行孵育. 1。

小鼠黄体生成素(LH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围： 96T70pg/ml-2400pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中黄体生成素(LH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠黄体生成素(LH)水平。

用纯化的小鼠黄体生成素(LH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入黄体生成素(LH)，再与HRP标记的黄体生成素(LH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的黄体生成素(LH)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠黄体生成素(LH)浓度。

标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

小鼠促黄体激素(LH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T70pg/ml-2400pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中促黄体激素(LH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠促黄体激素(LH)水平。

用纯化的小鼠促黄体激素(LH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促黄体激素(LH)，再与HRP 标记的促黄体激素(LH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的促黄体激素(LH)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠促黄体激素(LH)浓度。

试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789终止液6ml×1瓶2 酶标试剂标准品（4800pg/ml）0.5ml×1瓶3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂A液6 显色剂B液标准品稀释液 1.5ml×1瓶1份10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2400pg/ml 1200pg/ml 600pg/ml 300pg/ml 150pg/ml 5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

大鼠促黄体激素(LH)elisa试剂盒使用说明书检测范围：48T1.5 ng/L - 40 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中促黄体激素(LH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠促黄体激素(LH)水平。

用纯化的大鼠促黄体激素(LH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促黄体激素(LH)，再与HRP标记的促黄体激素(LH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的促黄体激素(LH)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠促黄体激素(LH)浓度。

试剂盒组成1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同3。

8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，标识清晰，各组分齐全，液体无渗漏。

1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm；液体移行速度应不低于10mm/min。

1.3准确度
用参考品作为样本进行测定，其测定结果的相对偏差（B ias）不应超过±10%。

1.4最低检出限
应不大于1mIU/mL。

1.5线性
在1mIU/mL～100mIU/mL 的范围内，线性相关系数r≥0.9900。

1.6精密度
1.6.1批内精密度
用同一批号的试剂分别测定 2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。

2.6.2 批间精密度
用三个不同批号的试剂分别测定2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。

1.7特异性
1.7.1与促卵泡生成素（FSH）
浓度不低于200IU/L 的FSH，测定结果应不大于1mIU/mL。

1.7.2与促甲激素（TSH）
浓度不低于200mIU/L 的TSH，测定结果应不大于1mIU/mL。

1.7.3与人绒毛膜促性腺激素（HCG）
浓度不低于1000IU/L 的HCG，测定结果应不大于1mIU/mL。

人黄体生成素释放激素（LHRH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人LHRH，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中LHRH 含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

概述黄体生成素释放激素（LHRH）也称为促性腺激素释放激素GnRH，是下丘脑分泌的一种肽类物质，由腺垂体嗜碱细胞分泌的两种促性腺激素之一，是主要作用于黄体生成（女性）及睾丸间隙细胞的一种糖蛋白激素，作用于垂体产生LH。

LHRH是由9种不同氨基酸残基组成的10肽，序列为Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly。

其α-亚单位为89个氨基酸组成的肽链，与滤泡刺激素的相同；β-亚单位也是由115个氨基酸组成，但是氨基酸序列与滤泡生成素不同，分子量为26000；糖基结合在β-亚单位的第13和第30位氨基酸上，是其生物活性所必需。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗LHRH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗LHRH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的LHRH呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

促黄体生成素（LH）测定试剂盒(酶联免疫法)适用范围：用于体外定量测定人血清中黄体生成素（LH）的含量。

1产品型号/规格及其划分说明1.1产品型号试剂盒包装规格为48人份/盒、96人份/盒，具体组成见表1：表1 试剂盒主要组成成分2.1外观和物理检查试剂盒应组分齐全，内外包装均应完整，标签清晰，液体试剂无渗漏。

各组分装量不少于表1中要求。

2.2准确性试剂盒内校准品与相应浓度的国家标准品同时进行分析测定，用双对数（Log-Log）数学模型拟合，要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行；以LH国家标准品为对照品，试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比应在0.900～1.100之间。

2.3剂量-反应曲线的线性在2.0~100 IU/L范围内，用Log-log数学模型拟合，剂量-反应曲线相关系数（r）应不小于0.9900。

2.4 精密度2.4.1分析内精密度（CV%）应不大于15.0%。

2.4.2分析间精密度（CV%）应不大于20.0%。

2.4.3批间精密度（CV%）应不大于20.0%。

2.5 最低检出限应不高于1.0 IU/L2.6 质控品测定值每次检测结果均应在允许范围之内。

2.7 特异性检测浓度为500 mIU/L的促甲状腺素（TSH），在本试剂盒上的测定结果应不高于1.0 IU/L。

检测浓度为1000 IU/L的促卵泡生成素（FSH），在本试剂盒上的测定结果应不高于1.0 IU/L。

检测浓度为100000 IU/L的人绒毛膜促性腺激素（HCG），在本试剂盒上的测定结果应不高于1.0 IU/L。

2.8 稳定性2.8.1 效期末稳定性试剂盒在2~8℃放置12个月，测定结果应符合上述2.1、2.2、2.3、2.4.1、2.4.2、2.5、2.6要求。

2.8.2 热稳定性将试剂盒在37℃条件下放置7天，测定结果应符合上述2.1、2.2、2.3、2.4.1、2.4.2、2.5、2.6要求。

促黄体生成素（LH）测定试剂盒(磁微粒化学发光免疫分析法)适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中的促黄体生成素（LH）的含量。

1.1 包装规格：100测试/盒，200测试/盒1.2主要组成成分注：1.不同批号试剂盒中各组分不可以互换使用。

2. 校准品和质控品具有批特异性，具体浓度见瓶签。

2.1外观试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；磁微粒试剂摇匀后为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集；其他液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；包装标签应清晰、易识别。

2.2装量各组分装量应不低于标示体积。

2.3溯源性根据GB/T21415-2008及有关规定，提供试剂盒内校准品的来源提供了试剂盒内校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，溯源至中国食品药品检定研究院提供的国家标准品（编号：150531）。

2.4线性在[1.0，250.0]IU/L范围内，用双对数数学模型拟合，相关系数r应不低于0.9900。

2.5空白限应不高于0.5IU/L。

2.6准确性试剂盒内校准品与相应浓度的LH国家标准品（编号：150531）同时进行分析测定，用适当的数学模型拟合，要求两条剂量-反应曲线不显著偏离平行；以LH 国家标准品为对照品，试剂盒内校准品的实测值与标示值的效价比在0.900~1.100之间。

2.7精密度2.7.1分析内精密度质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于8.0%。

2.7.2批间精密度在三个批次产品之间，质控品测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。

2.8质控品的测定值均应在规定的质控范围内。

2.9特异性浓度不低于200IU/L的卵泡生成素（FSH）、浓度不低于200mIU/L的促甲状腺素（TSH）、浓度不低于1000IU/L的人绒毛膜促性腺激素（HCG），分别在本试剂盒上的测定结果均应不高于0.5IU/L。

2.10稳定性试剂盒在2~8℃保存，有效期为12个月，在有效期满前后两个月内，检测试剂盒的外观、装量、线性、空白限、准确性、分析内精密度、质控品的测定值，应符合2.1、2.2、2.4、2.5、2.6、2.7.1、2.8的规定。

酶联免疫分析检测（LH）人促黄体生成素概述人促黄体生成激素（hLH）是由垂体前叶分泌的糖蛋白激素，其分子量大约为30000，由两条多肽链（即a和b亚单位）组成。

LH的a亚单位由89个氨基酸残基组成，并与FSH和hGG 的a亚单位的结构相同，b亚单位在上述激素之间是不同的，从而赋予各激素各自的生物及免疫特性。

在女性体中，LH在卵泡期与FSH一起促进卵泡的成熟、雌性激素的合成和分泌：促进排卵和使排卵后的卵泡转变为黄体。

促进间质生长。

并促进黄体合成和孕激素与雌性激素的分泌。

男性LH促进睾丸间质细胞增生，并促进其合成和分泌睾酮。

由于LH和FSH的作用提互相协同的，故二者常同时测定。

LH增高见于Klindfelter综合症，Turner综合症，性腺切除后及促性腺激素产生肿瘤；减低见于西蒙氏病，席汉氏综合症，肥胖性生殖器退化综合症，垂体性侏儒，睾丸肿瘤，卵巢肿瘤，神经性厌食及使用雌激素后。

原理本公司生产的LH微孔法检测试剂盒采用双抗体夹心酶标免疫技术定性检测血清中hLH水平，这种方法应用高亲合性、高选择性、高敏感度度的单克隆及多单克隆hLH抗体配伍，快速检测出标本中hLH水平，此方法使标本、酶标抗体及固相抗体同步反应，当标本中含有hLH 时，特异性的形成固相抗体——抗原——酶标抗体复合物，并结合在微孔壁面，洗去多余的酶标抗体，再加入酶底物显色。

试剂组成1.微孔反应板：96孔，用抗人促黄体生成激素多克隆抗体包被孔反应板，2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。

2.酶结合物：一瓶，5ml，含抗单克隆与辣根过氧化物酶的结合物，含有0.02%柳硫汞及蛋白稳定剂,2-8℃保存,有效期内稳定.3.标准品:七瓶,每瓶1ml,含人促黄体生成激素浓度分别为0,5,10,25,50,100,200mIU/ml的血清标准品,含有0.02%柳硫汞及蛋白稳定剂,2-8℃保存,有效期内保持稳定.4.显色A;一瓶,7.0ml含过氧化氢和稳定剂，2-8℃保存,有效期内保持稳定.5.显色B：一瓶，7.0mL,含色素基质和稳定剂，2-8℃避光保存,有效期内保持稳定。

2018年8月研究原著摘要：目的检测SD 雄性大鼠不同月龄相关性激素水平变化及规律，探讨影响性激素的因素，为今后雄性激素相关实验提供正常参考值。

方法取20只1月龄雄性SD 大鼠（体重80~121g ），相同饲养条件下，每5只1笼饲养，所有大鼠均从1月龄（幼年）一直养到实验结束。

分别在1、4、24月龄检测20只雄性SD 大鼠的促卵泡刺激素（FSH ）、促黄体生成素（LH ）、睾酮（T ）水平，每只均测定2次，比较1、4、24月龄大鼠的性激素水平。

结果经检测，1月龄（幼年）、4月龄（成年）、24月龄（老年）SD 雄性大鼠的血清FSH 、T 水平比较，差异有统计学意义（P <0.05）；1月龄（幼年）、4月龄（成年）、24月龄（老年）SD 雄性大鼠的血清LH 水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）。

结论随着SD 大鼠月龄的增加，FSH 水平逐渐降低，LH 处于低水平且变化不明显，T 水平随着年龄的增长先由低逐渐升高，进入成年期后逐渐降低。

关键词：SD 雄性大鼠；促卵泡刺激素（FSH ）；促黄体生成素（LH ）；睾酮（T ）中图分类号：R 332文献标志码：A 文章编号：2096-1413(2018)23-0004-02Associated sex hormone levels in different age of SD male ratsZHANG Guo-fei,WU Yue,DENG Wei,CHEN An-long,DING Xing-wang,SHI Jing(Urology Surgery Department,the Sixth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi 830002,China)ABSTRACT:Objective To detect the changes and regularity of sex hormones in SD male rats at different ages,and to explore the factors affecting sex hormones,and provides normal reference values for male hormone related experiments in the future.Methods Twenty male SD rats of 1month old were selected(body weight 80-121g),every 5rats were kept in one cage under the same feeding conditions,and all rats were raised from 1month old (young age)to the end of the experiment.The follicle stimulating hormone (FSH),luteinizing hormone (LH)and testosterone (T)levels of 20SD rats were detected at 1,4and 24months,each data was measured 2times,and the levels of sex hormones of rats at 1,4and 24months were compared.Results The levels of serum FSH and T in the SD male rats of 1month old (young),4months old (adult)and 24months old (old)were significantly different after detection (P <0.05).There were no significant differences in the levels of serum LH between the SD male rats of 1month old (young),4months old (adult)and 24months old (old)(P >0.05).Conclusion With the increase of the age of SD rats,the level of FSH gradually decreased,LH was at a low level and the change was not obvious,and the level of T increased gradually from low to high and gradually decreased after entering adulthood.KEYWORDS:SD male rats;follicle stimulating hormone (FSH);luteinizing hormone (LH);testosterone (T)DOI :10.19347/ki.2096-1413.201823002基金项目：新疆维吾尔自治区自然科学基金（No.2015211C183）。

促黄体生成素（LH）检测试纸（胶体金免疫层析法）产品技术要求lanshizi促黄体生成素（LH）检测试纸（胶体金免疫层析法）适用范围：体外半定量检测人尿液中的促黄体生成素（LH）含量。

1.1 包装规格板型：1人份/盒，2人份/盒，5人份/盒，7人份/盒，10人份/盒，20人份/盒，25人份/盒，30人份/盒，50人份/盒。

1.2 主要组成成分检测试剂盒由相应人份的检测试剂、一次性塑料吸管、一次性尿杯（选配）、记录卡（选配）和干燥剂组成，其中检测试剂主要由固相于硝酸纤维素膜的抗鼠IgG多克隆抗体（质控线C）、抗β-LH单克隆抗体（检测线T1、T2、T3、T4）和胶体金标记的抗α-LH单克隆抗体组成。

2.1 物理性状2.1.1 外观试纸应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。

2.1.2 膜条宽度试纸膜条宽度应≥2.5 mm。

2.1.3 液体移行速度液体移行速度应不低于10 mm/min。

2.2准确性分别检测浓度为1mIU/mL、5 mIU/mL的LH阴性样品液，25 mIU/mL和65mIU/mL 的LH阳性样品液，检测结果与相应浓度应一致。

2.3 特异性2.3.1 与促卵泡激素（FSH）的交叉反应检测浓度为200 mIU/mL 的FSH样品液，结果均应为阴性。

2.3.2 与促甲状腺激素（TSH）的交叉反应检测浓度为250 μIU/mL 的TSH样品液，结果均应为阴性。

2.4重复性取同一批号的试纸30人份，检测浓度为10 mIU/mL 、25 mIU/mL和50 mIU/mL 的LH样品液各10人份，反应结果应一致，且显色度应均一。

2.5 稳定性可选用以下方法之一进行验证：2.5.1 热稳定性试验对37℃条件下放置20天后的试纸进行检测，产品性能应符合2.1～2.4的要求。

2.5.2 效期稳定性对4℃～30℃条件下放置24个月后两个月内的试纸进行检测，产品性能应符合2.1～2.4的要求。

注1：热稳定性试验不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式；。

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）产品货号：E-EL-H6019产品规格：96T/48T/24T人促黄体生成激素(LH)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human LH(Luteinizing Hormone) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话************QQ客服800110755具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

用途该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其它相关生物液体中LH浓度。

灵敏度、检测范围、特异性和重复性●灵敏度：0.1mIU/mL。

●检测范围：0.16-10mIU/mL。

●特异性：可检测样本中的人LH,且与其它类似物无明显交叉反应。

●重复性：板内，板间变异系数均<10%。

检测原理本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。

用抗人LH抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的人LH会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。

后依次加入生物素化的抗人LH抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗人LH 抗体与结合在包被抗体上的人LH结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。

加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。

用酶标仪在450nm波长处测OD值，LH浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中LH的浓度。

试剂盒组成及保存未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周；如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒并按照下表中的条件分别保存各组分。

试剂体积以实际发货版说明书为准。

相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。

试验所需自备物品1.酶标仪(450nm波长滤光片)2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL3.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水4.吸水纸5.加样槽注意事项1.试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。

促黄体生成素定量检测试剂盒（酶联免疫法）说明书目录●产品名称●包装规格●预期用途●检验原理●主要组成成分●储存条件及有效期●适用仪器●样本要求●检验方法●参考值（参考范围）●检验结果的解释●检验方法的局限性●产品性能指标●注意事项●参考文献●生产企业●医疗器械生产企业许可证编号●医疗器械注册证书编号●产品标准编号●说明书批准及修改日期产品名称通用名：促黄体生成素定量检测试剂盒（酶联免疫法）英文名称：LH ELISA（serum）包装规格96人份/盒预期用途用于定量或定性检测待测样品中促黄体生成素(LH)的浓度。

促黄体生成素(LH)由垂体前叶产生，是一种分子量约30.000道尔顿的糖蛋白。

由α和β亚单位组成。

α链类似人促甲状腺激素(TSH)，卵泡刺激激素(FSH)和人绒膜促性腺激素(hCG)，由于它们的β亚单位组成不同，功能则不同。

男性间歇性分泌LH，男性体内LH还称为间质细胞刺激激素(ICSH)。

其主要功能是刺激间质细胞(Leydig cells)产生睾丸激素。

女性LH浓度则随着月经排卵周期变化而变化，变化取决于下丘脑垂体性腺轴上激素的顺序。

从月经第一天起缓慢爬升，由于直接刺激垂体，GnRF和FSH升高，雌二醇升高导致分泌LH，至第12或13天时加速分泌，LH达到最高后的12到18小时开始排卵，如未受孕LH迅速下降至月经，下一周期开始。

性腺机能减退患者血清中LH增高。

初期睾丸不全和Klinefelter综合症LH增高。

肾功不全，肝硬化，甲亢和严重饥饿时LH浓度也升高。

女性卵巢不成熟，初期卵巢不全，多囊卵巢疾病或更年期期间类固醇激素减少，LH分泌物不规律。

男性存在类似情况。

垂体前叶分泌减少，下丘脑GnRH分泌减少，垂体前叶功能不全，均可导致LH降低。

垂体和下丘脑功能紊乱，应同时做其它试验进行确诊。

诊断下丘脑，垂体或性腺发育不全，检查下丘脑－垂体－性腺轴功能，需结合其他实验，如LH-RH兴奋实验以及检测其他激素的水平进行确诊。

促黄体生成素测定标准操作规程1.检验原理：采用两步法免疫检测，运用化学发光微粒子免疫检测（CMIA）技术与灵活的检测模式的结合，测定人血清和血浆中的促黄体生成素（LH）。

第一步，将样本和促黄体生成素B亚基抗体包被的顺磁微粒子混合。

样本中促黄体生成素与促黄体生成素B 亚基抗体包被的微粒子结合。

冲洗后进入第二步，加入口Y嗟酯标记的促黄体生成素。

亚基抗体结合物，形成反应混合物。

再次冲洗后，将预激发液和激发液加入反应混合物中；测量产生的化学发光反应，以相对发光单位（RLUs）表示。

样本中的TSH含量和ARCHITECTi 光学系统检测到的RLUs值成正比。

2.试剂主要组成部分：2.1试剂盒微粒子：促黄体生成素B亚基（小鼠、单克隆）抗体包被的粒子，储存于含有蛋白（牛，小鼠）稳定剂的4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）缓冲液中。

最低浓度：0.04%固体物质。

防腐剂：ProClin300.结合物：口Y咤酯标记的促黄体生成素Q亚基抗体（小鼠、单克隆）结合物,储存于含有蛋白（牛，酪蛋白）稳定剂的2-（N-吗啡琳）乙磺酸（MES）缓冲液中。

最低浓度：170ng∕mL.防腐剂：ProClin300和ProClin9502.2需要但未提供的试剂预激发液：预激发液含有1.32%（W/V）过氧化氢激发液：激发液含有0.35N氢氧化钠浓缩清洗缓冲液：浓缩清洗缓冲液含有磷酸盐缓冲液。

防腐剂：抗菌剂。

3.样本要求：人血清（包括采集于血清分离管中的血清）或采集于肝素或EDTA钾抗凝管中的血浆。

血清和血浆样本中应不含纤维蛋白、红细胞或其他颗粒物质。

2-8C可保存7天；T（TC以下可保存6个月。

样本应避免反复冻融。

4.检验方法：仪器法（详见雅培i1000标准操作规程）检验结果的解释促黄体生成素项目通过四参数Logistic曲线拟合数据约简法（4PLC,Y加权）生成一条校准曲线7.检验方法的局限性7.1将检测结果用于诊断时，应与其他数据：如症状、其他甲状腺检查结果、临床表现等结合使用。

大鼠促卵泡素（FSH）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：1.56mU/ml-100mU/ml最低检测限：0.39mU/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的大鼠FSH，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中FSH 含量。

说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗FSH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗FSH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的FSH呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

大鼠促黄体生成素(LH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T80pg/ml-2400pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中促黄体生成素(LH)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠促黄体生成素(LH)水平。

用纯化的大鼠促黄体生成素(LH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促黄体生成素(LH)，再与HRP标记的促黄体生成素(LH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的促黄体生成素(LH)呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠促黄体生成素(LH)浓度。

1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（4800pg/ml）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2400pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液1200pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液600pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液300pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液150pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

LH（啮齿动物）ELISA试剂盒方案，附参考文献LH（啮齿动物）ELISA试剂盒是一种用于定量测定啮齿动物血清/血浆中促黄体生成素（LH）的免疫分析方法。

该试剂盒内包含了LH （啮齿类鼠源）ELISA所需的所有试剂和相关组份。

简单快捷的方案设计和优化的试剂配比，为科研工作者提供好的LH （啮齿类鼠源）ELISA 实验分析方案。

LH （啮齿类鼠源）ELISA试剂盒特点如下：1、试剂盒内含有分析所需的所有必需试剂，操作简单便捷；2、试剂盒内组分经实验优化，确保更高的检测灵敏度名称LH（啮齿动物）ELISA试剂盒参考文献：1.Effects of Pharmacologically Induced Leydig Cell Testosterone Production on Intratesticular Testosterone and Spermatogenesis.Chung JY, Brown S, Chen H, Liu J, Papadopoulos V, Zirkin B.Biol Reprod. 2019 Sep 2. pii: ioz174. doi: 10.1093/biolre/ioz174. [Epub ahead of print]2.The GMO90+ project: absence of evidence for biologically meaningful effects of genetically modified maize based-diets on Wistar rats after 6-months feeding comparative trial.Coumoul X, Servien R, Juricek L, Kaddouch-Amar Y, Lippi Y, Berthelot L, Naylies C, Morvan ML, Antignac JP, Christèle DL, Jegou B, Tremblay-Franco M, Canlet C, Debrauwer L, Le Gall C, Laurent J, Gouraud PA, Cravedi JP, Jeunesse E, Savy N, Dandere-Abdoulkarim K, Arnich N, Fourès F, Cotton J, Broudin S, Corman B, Moing A, Laporte B, Richard-Forget F, Barouki R, Rogowsky P, Salles B.Toxicol Sci. 2018 Dec 10. [Epub ahead of print]3.Vitexin alleviates streptozotocin-induced sexual dysfunction and fertility impairments in male mice via modulating the hypothalamus-pituitary-gonadal axis.Li ZM, Liu N, Jiang YP, Zheng J, Sun M, Li YX, Sun T, Wu J, Yu JQ.Chem Biol Interact. 2018 Oct 23;297:119-129. doi: 10.1016/j.cbi.2018.10.013.4.Neonatal overfeeding induces early decline of the ovarian reserve: Implications for the role of leptin.Sominsky L, Ziko I, Soch A, Smith JT, Spencer SJ.Mol Cell Endocrinol. 2016 May 3. [Epub ahead of print]。

ELISA测定血清LH、FSH的方法学评价吴端宗;林国诚【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2002(017)002【摘要】目的用酶联免疫法测定血中黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH),以对该方法的方法学性能作一评价.方法以临床血清标本作为检测标本,用酶联免疫法测定血中的LH和FSH,观察其灵敏度、线性试验及线性范围、精密度、回收率,并与放免法做比较.结果 LH、FSH的灵敏度分别为2.2 IU/L,1.3 IU/L.线性范围2.2～200 IU/L,1.3～100 IU/L.低、高两种浓度的LH和FSH的批内变异分别为8.61%,5.70%和9.46%,6.36%;批间变异分别为7.14%,6.01%和4.46%,4.69%.回收率LH为91.84%～107.66%,平均98.13%;FSH为92.77%～96.88%,平均94.54%.与RIA比较,其相关系数LH为0.975 9,P＜0.001;FSH为0.945 5,P＜0.001.结论该方法有较高的灵敏度,重复性好,结果准确可靠等特点,与RIA有良好的相关性,且无放射性污染,可以替代RIA用于临床检验.【总页数】2页(P15-16)【作者】吴端宗;林国诚【作者单位】福建泉州市儿童医院,福建泉州,362000;第四军医大学西京医院核医学科,陕西西安,710032【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.测定血清FSH与LH含量对诊断男性不育症的探讨 [J], 时锦桓2.高通量ELISA测定血清糖类抗原125的方法学评价 [J], 陈娟;张蓉;于水;曲松本3.女性闭经患者血清FSH、LH、PRL水平测定分析 [J], 张志君;刘惠4.卵巢早衰患者测定血清FSH、LH和E2水平的临床意义 [J], 李滢5.围绝经期女性血清FSH、LH、E_2、T水平测定分析 [J], 曲灵菊;魏双梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。