实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别
活细胞数目比例有什么影响？
4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。
5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?
一、实验目的与要求
1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；
2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；
3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；
4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
二、实验原理
1. 酵母菌
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。
大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液
图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）
三、实验设备及材料
1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。
2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。
3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。
四、实验步骤与内容
1．美蓝浸片的观察
（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
五、实验结果
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征、出芽情况及死活细胞数量变化。
图1：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×10）图2：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×40）
图3：酵母菌0.1%美蓝浸片观察30min（10×40）图4：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）
图5：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）图6：酵母菌0.05%美蓝浸片观察30min（10×40）注意：显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。
物镜倍数（低倍镜10倍，高倍镜40倍，油镜100倍）
六、思考题
1. 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？
试分析其原因。
美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。
原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时
间较长都会对细胞结构造成破坏。
2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？
要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器
实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别练习题
一、名词解释
1. 假菌丝：酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，
容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。
等九部分组成。
8. 简单染色的操作程序是
9．酵母菌通过0.1%美兰染色1~2分钟后，活细胞呈色，死细胞呈色；
10. 在其它条件相同的情况下，物镜放大倍数越大，焦距，其工作距
离，所需光量。
11. 用日光灯作光源时，通常用反光镜，用自然光作光源时，通常用反
光镜。
12. 显微镜的倍数越大，焦深越，调焦应该越。
三、选择题
1. 对光学显微镜观察效果影响最大的是：（）
A 目镜
B 物镜
C 聚光器D总放大倍数
2. 目镜头上的"K"字母表示：（C ）
A.广视野目镜
B.惠更斯目镜
C.补偿目镜；
3. 目镜头上的"P"字母表示：（A ）
A.平场目镜
B.广视野目镜
C.平场补偿目镜
A.正低相差物镜
B.正高相差物镜
C.负高相差物镜。
5. 物镜头上的"UVL"字母表示：（C ）
A.无荧光物镜
B.照相物镜
C.相差物镜。
6. 镜头上标有"对C"字母的镜头是：（A ）
A.相差调整望远镜
B.摄影目镜
C.相差目镜
11．镜头上标有“NK"字母的镜头是（A ）
A.照相目镜
B.荧光目镜
C.相差目镜
12．目镜头上的“PK”字母表示（C ）
A.平场目镜
B.补偿目镜
C.平场补偿目镜
13．物镜头上的"Splan"字母表示（A ）
A.超平场物镜
B.平场物镜
C.消色差物镜
14．物镜头上的"SplanApo"表示（A ）
A.超平场复消色差物镜
B.超平场半消色差物镜
C.超平场物镜
15.物镜头上的"Planapo"表示（C）
A.超平场物镜
B.平场物镜
C.平场复消色差物镜
16．物镜头上的"Plan"字母表示（A ）
A.平场物镜
B.消色差物镜
C.超平场物镜
17．目镜头上的"W"字母表示（C ）
A.广视野高眼点补偿目镜
B.高眼点目镜
C.广视野目镜
18．目镜头上的"SWK"字母表示（A ）
A.超广视野目镜
B.高眼点补偿目镜
C.平场补偿目镜
A.超广视野目镜
B.广视野高眼点目镜
C.平场补偿目镜
20.物镜头上的"错.L"字母表示（B ）
A.消色差物镜
B.半消色差物镜
C.复消色差物镜
7. 用油镜镜检时应将聚光器升至最高。（）
8. 使用高倍镜时，可将聚光器升至最高。（）
9. 显微镜的放大倍数愈高，其视野面积愈大。（）
10. 光学显微镜的分辨率与介质折射率有关，由于香柏油的介质折射率（约1.5）
高于空气（1.0）。因此使用油镜的观察效果好于高倍镜，目前科学家正在寻找折射率比香柏油更高的介质以改进光学显微镜的观察效果。（）五．问答题
1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响? 试分析其原因。
美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。
原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏。
2. 显微镜下观察酵母菌的个体形态特征与细菌个体形态特征有何不同?
要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器
3. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?
故可以此来区分活菌和死菌。
方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。
计算公式：
实验四放线菌的形态观察和酵母菌的形态观察及死活细 胞鉴别 一、实验目的： 1.了解放线菌和酵母菌的形态特征。 2.学习区分细胞的死活状态。 二、实验原理： 1.放线菌的形态特征： 放线菌属于细菌的一种，具有很大的细胞大小差异，通常为革兰氏阳性菌。放线菌的形态特征包括菌落形态、细胞形态、颜色、菌丝特征等。放线菌的菌落形态多呈现出有规则的褶皱或丝状结构。 2.酵母菌的形态特征： 酵母菌属于真菌的一种，单细胞有丝分裂生殖的真菌。酵母菌的形态特征包括细胞形态、菌落形态、颜色等。酵母菌的细胞呈球形或卵圆形，常以单细胞或成链形式存在。 3.死活细胞鉴别： 通过酵母菌培养基中的亚甲基蓝染色来判断细胞的存活状态，活细胞吸收染料颜色比较浅，死细胞吸收染料颜色比较深。 三、实验材料与方法： 1.材料： -放线菌菌种：已提前分离培养好的放线菌
-放线菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等 -培养皿、显微镜、镰刀、牛津杯、显微镜载玻片 -无菌移液器、无菌吸管、火焰灭菌器 -酵母菌培养基：含有葡萄糖、酵母提取物、氨基酸、无机盐等 -亚甲基蓝染液：浓度为1% 2.方法： a.取一小块放线菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的放线菌菌落。 b.用无菌吸管将放线菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。 c.让菌液干燥后，用显微镜在高倍镜下观察放线菌的细胞形态和菌落特征。 d.取一小块酵母菌菌落，用镰刀切下悬浮于牛津杯中的酵母菌菌落。 e.用无菌吸管将酵母菌菌液吸入无菌移液器中，将移液器染上菌液的一侧略吹气，使菌液沾附在显微镜载玻片上。 f.将带有酵母菌菌液的显微镜载玻片倾斜，滴入一滴亚甲基蓝染液，静置5分钟。 g.用显微镜在高倍镜下观察染色后的酵母菌细胞，根据染色程度判断细胞的存活状态。 四、实验结果与分析：
实验四 真菌营养体观察与酵母菌死活细胞鉴别 一、实验目的 1.掌握对真菌个体形态结构的观察方法；初步认识真菌的形态特征，巩固课堂知识，增强感性认识。 2.掌握对酵母菌的形态结构及出芽生殖方式的观察方法，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；认识酵母菌的基本形态特征。 二、实验原理 1.真菌个体形态结构的观察 霉菌是由复杂的菌丝体组成。它分为基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌的繁殖菌丝及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 2.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 ⑴形态观察： 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。因此用高倍镜观察即可。酵母细胞一般呈卵圆形。其繁殖方式比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖（仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖），有些酵母可形成假菌丝；有性繁殖通过接合形成子囊及子囊孢子。 ⑵死活细胞鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。 三、实验步骤 1.霉菌个体形态结构的观察 ⑴霉菌直接制片观察法：在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的霉菌菌丝；再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝分散开。盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 2.酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别：在载玻片中央滴加1滴0.1%美蓝染色液→无菌挑取一环酵母菌与美蓝染色液均匀→盖上盖玻片（制成水封片）→放置3分钟→高倍镜（×40）下观察酵母形态和出芽情况→30分钟后再观察 四、实验结果 1.绘图说明所观察的根霉菌、曲属菌、青霉属的形态特征图。 2.绘图说明所观察的酵母菌的形态特征图。 五、讨论分析 1.你主要根据哪些形态特征来区分毛霉菌和根霉菌在形态特征上的异同？ 毛霉菌:营养体为无隔多核菌丝体,在营养菌丝上长出分枝或不分枝的孢囊 梗,顶端膨大形成孢子囊,有囊轴、囊领、无囊托,无匍匐枝、无假根,有性生殖 产生接合孢子,接合孢子外无附属丝。根霉菌：营养体为无隔多核的菌丝体,由 营养菌丝产生匍匐菌丝,以跳跃式蔓延生长,在匍匐丝交接处长出假根,上方长 出孢囊梗,顶端膨大成孢子囊,有囊轴,孢囊孢子,囊托,无囊领。 2.试比较曲霉属菌和青霉属菌无性结构的不同 曲霉属：在营养菌丝的足细胞上长出无隔的分生孢子梗,顶端膨大形成顶囊,在顶囊的表面上长出单层或双层小梗,在小梗顶端分化出串珠状的分生孢子。青霉菌：分生孢子梗从菌丝细胞长出,有隔有分枝,小梗有单轮或双轮生,双轮生中又分为对称和不对称。分生孢子梗的分枝和轮生组成了复杂的扫帚状分枝结构。在扫状枝上,最后一级分枝为产生串生链状分生孢子的小梗,呈瓶梗状,着生小梗的细胞叫梗茎,支持梗基的细胞叫副枝。分生孢子常为球形,椭圆形呈蓝绿色。 3.你主要根据哪些形态特征来区分酵母菌的形态特征？
酵母菌形态观察 酵母菌形态观察 微生物实验报告 酵母菌的形态观察 一、目的要求： 1、掌握普通光学显微镜的使用方法和注意事项 2、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别 3、学习鉴别死活酵母细胞的实验方法 二、器材和器皿： 2、生理盐水、美蓝染色液、 3、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种针、擦镜纸 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 四、操作步骤： （一）显微镜的主要构造： 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。 （二）显微镜的使用方法 1．低倍镜的使用方法 （1）取镜和放置：
显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将 显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。 （2）调节光源 （3）低倍镜观察 先将标本玻片置于载物台上，并将标本部位处于物镜的正下方，以左手按逆时针方向 转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注在上升镜台时，切勿 在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。 然后，两眼同时睁开，左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内 出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察 标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。 观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高倍物镜（或油镜）转回到 低倍物镜，取出标本，按放片的方法换上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜（或油镜）下换片，以防损坏镜头。 （五）美蓝浸片观察步骤 在载玻片上滴一小滴0.1%美蓝液，无菌操作用接种环取酵母少许，与美蓝液混合均匀，染色2-3min。 2.加盖玻片： 先将盖玻片一端与菌液接触，然后慢慢放下使其盖在菌液上。 先低倍镜，后高倍镜，观察酵母细胞的形态、构造和出芽情况，并注意区分死细胞 （蓝色）与活细胞（不着色）。 4.30min后再镜检。 五、实验现象 1.都是单个细胞 2.都是透明的 3.基本是活的 5. 用美兰染色后蓝色是死细胞，透明的是活细胞 1.美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。 答：吕氏碱性美蓝染液无毒性，在浓度不大的情况下，对酵母菌死细胞的数量影响几 乎没有。在浓度高的情况下，会导致酵脱水死亡。作用时间短对死细胞数量影响不大，时
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、目的要求： 1、观察酵母菌的形态特征及出芽生殖。 2、掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。 3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，具有典型的细胞核，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。 美蓝是一种无毒性染料，氧化型为蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。 三、实验器材 1、酿酒酵母或卡尔酵母（Saccharomyces calsbergensis）； 2、0.05％、0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液； 3、显微镜，载玻片，盖玻片等。 四、操作步骤 1、美蓝浸片观察 1）在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。 2）用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 3）将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 4）染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 5）用0.05％吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。 2、水-碘浸片观察 在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘浓，然后再在其上加三滴水，取酿酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与溶液混匀，盖上盖玻片后镜检。
微生实验报告 姓名：王晶晖 专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032 实验四酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别，微生物细胞大小的测定 一、实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 . 3．了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、实验原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的
酵母菌的形态观察 实验目的：掌握常见真菌的不同结构特征； 熟悉普通光学显微镜低倍镜与高倍镜的使用方法； 实验材料：菌种：啤酒酵母 试剂：乳酸石炭酸 实验内容： 1.酵母菌的形态观察 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。 基本原理：本实验是通过水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 基本步骤：酵母培养物→制片→镜检 注意事项： （1）取菌量不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 （2）用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。 注意事项：观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，更换高倍镜观察 2.显微镜油镜的使用与保养 低倍镜的使用方法： （1）取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部 位调到通光孔的正中。 （2）调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上 观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标 本片的损坏。然后，两眼在目镜上观察，左手顺时针方向缓慢转动 粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。
（3）如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适， 可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节，如果在调节焦 距时，镜台下降已超过工作距离(>5.40mm)而未见到物象，说明此次 操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目地上升镜台。 高倍镜的使用方法 （1）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。 （2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明 低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。 （3）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.5－1 圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)如果视野的亮度不合适， 可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须顺时 针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。 显微镜使用的注意事项： （1）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。 （2）轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。（3）保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。 （4）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。 放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻 片或碰坏物镜。不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要 任意拆卸各种零件，以防损坏。使用完毕后，必须复原才能放回镜 箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下 降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈， 推片器回位，盖上外罩，放回实验台柜内。
实验七酵母菌、霉菌的形态观察 一、基础知识 酵母是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍．大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子．本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。 霉菌可产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3-10 m)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。观察霉菌的形态有多种方法，常用的有下列二种： 直接制片观察法：是将培养物置于乳酸石炭酸棉蓝染色液中，制成霉菌制片镜检。用此染液制成的霉菌制片的特点是：细胞不变形；具有防腐作用，不易干燥，能保持较长时间；能防止孢子飞散；染液的蓝色能增强反差。必要时，还可用树胶封固，制成永久标本长期保存。 载玻片培养观察法：用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长，培养一定时间后，将载玻片上的盖玻片直接在显微镜下观察即可。 二、实验目的 1．学习并掌握观察酵母菌和霉菌形态的基本方法及酵母菌、霉菌的形态特征。 2．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 3．掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 三、实验材料 酿酒酵母（Saccharomyles cerevisiae）培养的2d的麦芽汁（或豆芽汁）斜面培养物，曲霉（Aspergillus.sp）青霉、根霉（Rhizopus.sp）和毛霉（Mucor.sp）培养2-5d的马铃薯琼脂平板培养物。 四、实验器材试剂 1．器材：平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒以及载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜、无菌吸管、U形玻棒、解剖刀。 2．试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液，革兰氏染色用碘液，5%孔雀绿水溶液，
实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 活细胞数目比例有什么影响？ 4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。 5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它? 一、实验目的与要求 1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法； 2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理 1. 酵母菌 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。 大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液 图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40） 三、实验设备及材料 1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。 2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。 3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。 四、实验步骤与内容 1．美蓝浸片的观察 （1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。 注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
死活细胞的鉴定和显微镜直接计数 学院：生命科学专业：生物科学年级：2010级姓名：王亚军指导老师：张琪白璐陈勇 摘要：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。其细胞的大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片可在显微镜下观察到啤酒酵母的形态和出芽生殖方式。用美蓝对啤酒酵母的活细胞进行染色，可对啤酒酵母的死细胞和活细胞进行鉴别。 测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法等。显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载片上，在显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 关键词：啤酒酵母菌美蓝染料血细胞计数板 引言：酵母菌的繁殖方式包括无性繁殖和有性繁殖。无性繁殖方式包括芽殖和裂殖。芽殖是酵母菌最普遍的繁殖方式。其过程是：成熟的母细胞在其形成芽体的部位长出芽细胞，芽细胞脱离母体，成为新的个体细胞。如果不脱离母细胞，又长出新芽，子细胞就和母细胞连接在一起，形成藕节状或竹节状的细胞串，称为假菌丝或真菌丝。少数酵母以裂殖方式进行繁殖，当母细胞长到一定大小时，细胞核开始分
裂，之后，在细胞中间产生一隔膜，将细胞一分为二。还有些酵母菌可形成一些无性孢子如节孢子、掷孢子、厚垣孢子等。有性繁殖则是通过形成子囊和子囊孢子。 常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母菌、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。其中用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。 实验内容： 一、实验原理： 美兰是一种无毒性染液，有两种形态还原型：无色氧化型：蓝色。活细胞因新陈代谢而有强还原力，使美兰从氧化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽构成3个平台.中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种：一种是25×16：计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是16×25：一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。技术时，通常数五个中方个的总菌数，然后求得每个中方格的平
【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于蒸馏水中，混合均匀。 2)干燥固定。将载玻片在酒精灯上方来回移动，注意不要让载玻片距离火焰过近，以免烫死酵母菌细胞，可用手背反复试温度。 3)染色。孔雀绿染色 1-2min；水洗后用95%的乙醇溶液脱色30s；水洗后用番红染液复染1min；水洗后干燥。
实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 一、实验目的与要求 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 二、基本原理 1.单个的酵母菌合同是常见细菌的几倍甚至几十倍。为单细胞，呈圆形，卵形或椭圆形， 内有细胞核，液泡和颗粒体物质。有的种类能产生子囊孢子或掷孢子、冬孢子、担孢子等。有的种类一定条件下形成假菌丝或真菌丝。大多数采取出芽方式进行无性繁殖，也可通过结合产生子囊孢子进行有性生殖。 2.酵母菌在液体培养基中生长时，能利用其中的可发酵型糖，并产生气体，有些产生 挥发性的酯香味，菌体可沉于管的底部或悬浮在培养液中，或漂浮在培养液省形成菌膜或菌醭（分析一下为什么）。当其生长在固体培养基上时，菌落形态与细菌相似，但较大较厚，呈乳白色或红色，表面湿润、粘稠，易被挑起。随时间延长，菌落颜色往往变暗，有些菌落边缘呈皱褶状。 3. 由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸法 或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。美兰对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型呈无色。由于细胞的新陈代谢，，活细胞内有较强还原能力，使美兰由氧化型转变为无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞内还原力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。 三、实验材料 1.酵母液体培养物和斜面培养物。 2.吕氏碱性美兰染液，革兰氏染色用碘液。 3.仪器和其他用品 四、方法步骤 1.制片 先在载玻片中央滴加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，再滴加少量水稀释。无菌操作取试管中培养的酵母菌少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。 2.镜检 将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜，再用高倍镜，观察酵母菌的形态和出
【生物课件】实验四酵母菌形态及菌落特征的观察实验目的 通过观察酵母菌的形态和菌落特征，了解酵母菌的生长形态、菌落特征及其对应的属种。 实验器材 显微镜、玻璃片、盖玻片、移液管、培养基、酵母菌培养液、灭菌针 实验步骤 1.制备酵母菌培养液：取1g葡萄糖、0.5g酵母粉、0.1g硫酸镁在100mL蒸馏水中溶解，用自制的无菌培养瓶煮沸30分钟，灭菌后保存备用。 2.取一支酵母菌液体菌种，在无菌条件下采取少量菌液接种到培养基上，再将其存放在恒温培养箱中，温度为25℃，在培养过程中要注意对无菌操作方法的规范性。 3.观察菌落特征：观察24小时、48小时、72小时3个时期的菌落形态，比较菌落的大小、形状、颜色等特征，并记录下来。 4.观察酵母菌形态：用无菌的显微镜玻片将酵母菌液体培养液中的酵母菌移涂到玻璃片上，再用盖玻片把酵母菌压扁。然后观察酵母菌的形态，比较细胞的大小、形状和细胞壁的厚度等特征，并记录下来。 实验结果 1.菌落特征观察：在培养液表面，经过24小时，酵母菌的菌落直径为2mm-3mm，呈白色，球状，边缘清晰；经过48小时，酵母菌的菌落直径为4.5mm-5mm，呈白色，球状，边缘模糊；经过72小时，酵母菌的菌落直径为8mm-10mm，呈乳白色，规则圆形，边缘模糊。 2.酵母菌形态观察：酵母菌细胞呈椭圆形或卵圆形，直径约2μm，细胞壁厚度约为0.1μm。在显微镜下，酵母菌细胞明显可见且呈现圆形，且细胞壁能被观察到。 讨论分析 本实验通过对酵母菌菌落特征、形态的观察，初步确定酵母菌种类。在进行观察时，需要注意培养温度、培养基的组成以及无菌操作等因素的影响，这些因素都可能对菌落和细胞形态产生一定的影响。在实验过程中，还可以尝试采用不同的培养基，探究培养基成分对酵母菌的生长和菌落形态的影响，这样可以更加深入地了解酵母菌的生理特性和形态特征。
酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别, 微生物测量技术,显微镜直接计数法 一、实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法. 3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、实验原理 染色：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 测量：微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 计数：每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。 在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数 因1ml=1cm3=1000mm3， 三、实验仪器 1 菌种: 培养48h的酵母菌． ２染色液和试剂：0.05%、0.1%吕氏碱性美蓝． 3 器材：显微镜、血球计数板、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、吸水纸、计数器、移液器、擦镜纸。 四、实验方法 １目微尺的校正： 把Olympus目镜的下部罗圈旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的实际长度。 用同法分别校正在低倍镜下和高倍镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
实验一普通光学显微镜的使用和保养及酵母菌形态、死活鉴定 一、目的要求 1、掌握显微镜的基本使用技术和保养方法 2、掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了解酵母菌的形态结构。 3、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。 二、实验器材 1、菌种：酵母菌标准片，酵母菌菌悬液。 2、染色液或试剂：革兰氏染色用碘液，0.1％吕氏碱性美兰染色液 3、仪器和其他：显微镜、载玻片，盖玻片、镊子 三、方法与步骤 1、低倍镜观察 先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。 2、高倍镜观察 显微镜的设计一般是共焦点的。低倍镜对准焦点后，转换到高倍镜基本上也对准焦点，只要稍微转动微调即可。 3、油浸镜观察 油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离）很短，一般在0.2mm以内，因此使用油浸物镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使物镜受损。 使用油镜按下列步骤操作： （1）先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2cm，并将高倍镜转出。（2）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 （3）从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。 （4）从接目镜内观察，放大视场光阑及聚光镜上的虹彩光圈，使光线充分照明。用粗调节旋钮将载物台徐徐下降，当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。 （5）观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许二甲苯，擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注意向
微生物学实验 实验项目名称和学时分配 说明：在上述12个实验中根据实验材料情况压缩合并成9个实验。 实验内容、要求和所用设备 1、实验内容 实验一显微镜的使用和真菌形态的观察 一、[目的要求] 熟悉普通光学显微镜各部分的结构和性能。 观察真菌的基本形态。 二、[实验原理] 1.光学显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成。 2.油镜通常标有“OI”或“HI”字样，有时也有用刻一圈红线或黑线为标记的。用不同 放大倍 数的目镜可使被检物体放大1000-2000倍。 三、[实验步骤] 1.调节光源
2.低倍镜观察 3.高倍镜观察 四、[实验报告] 1.实验结果 绘出所观察到的真菌形态，并注明物镜放大倍数和总放大倍数。 2.思考题 根据你的实验体会，谈谈如何根据所观察微生物的大小选择不同的物镜进行有效观察。 实验二革兰氏染色法 一、[目的要求] 了解革兰氏染色的原理；掌握革兰氏染色的方法。 二、[实验原理] 根据革兰氏染色反应的结果，可将所有细菌分为两类：呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示； 三、[实验步骤]（插片法） 1.涂片 2.固定 3.染色 4.干燥 5.镜检 四、[实验报告] 1.实验结果 报告所观察到的两种细菌革兰氏染色的结果并绘图。 2.思考题 1.革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？ 2. 革兰氏染色成败的关键在哪一步？为什么？应如何掌握？ 实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 一、[目的要求] 1. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。 2. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、[实验原理]
《微生物学实验》 一、实验课名称：微生物学实验 Experiment of Microbiology 二、实验课性质：独立设课 三、适用专业：生物科学；生物技术；生物工程；水产养殖；科学教育 四、采用教材及参考书 1．沈萍，X秀容，李广武主编．微生物学实验（第三版）．：高等教育，1999 2．黄秀梨主编．微生物学实验指导．：高等教育、施普林格，1999 五、学时学分：课程总学时：36；课程总学分：1；实验总学时：36
七、实验教学的目的和要求 在学完本课程之后，学生能够：通过做一些基础实验，使学生逐渐掌握培养、分离、纯化、观察和检测微生物的系列基本技能，同时让学生学会制作培养基和消毒灭菌的一般方法。训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；学习微生物学的基本知识；加深理解微生物学的基本理论。同时，通过实验培养学生观察、分析、解决问题的能力；实事求是、严肃认真的科学态度；独立思考、勇于创新的开拓精神及认真负责、团结协作、勤俭节约、爱护公物的优良作风。 八、实验项目的内容和要求 实验一：显微镜的使用及细菌简单染色法 内容：（1）学习油镜的使用方法；（2）学习细菌简单染色操作技术。 要求：学习并掌握油镜的原理和使用方法及细菌的制片方法和简单染色法。 实验二：革兰氏染色法 内容：进行革兰氏染色法操作。 要求：了解革兰氏染色的原理并掌握革兰氏染色法步骤。 实验三：细菌芽孢染色法 内容：细菌的芽孢染色。 要求：掌握细菌的芽孢染色方法。
实验四：荚膜染色法和活细菌运动性的观察 内容：（1）用湿墨水法观察细菌的荚膜；（2）用悬滴法观察细菌的运动。 要求：学习并掌握荚膜染色法和学习用悬滴法观察细菌的运动性。 实验五：酵母形态观察及死活细胞鉴别 内容：（1）观察酵母个体形态及出芽方式；（2）用美蓝染色液区别死活细胞。 要求：了解自然存在的酵母菌及其形态结构与出芽方式，通过染色区别死活细胞。 实验六：放线菌、霉菌的形态观察 内容：（1）用插片法观察放线菌的形态特征；（2）用挑取法或插片法观察霉菌的形态特征。 要求：学习放线菌、霉菌的观察方法，辨认放线菌、霉菌的营养菌丝，气生菌丝、孢子丝（或孢子囊）孢子的形态。 实验七：微生物大小的测定和显微直接计数法 内容：（1）微生物大小的测定；（2）血球计数板计数。 要求：（1）学习并了解用测微尺测定微生物大小的方法，增强微生物细菌大小的感性认识；（2）明确血球计数板计数的原理，掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。 实验八：玻璃器皿的洗涤、包扎及干热灭菌 内容：（1）玻璃器皿洗涤的方法和包扎；（2）玻璃器皿的干热灭菌。
微生物实验思考题参考答案与知识要点 一．酵母菌形态观察与死活细胞鉴别 1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因. 美蓝是一种无毒性的染料,它的氧化型呈蓝色,还原型无色.用美蓝对酵母的活细胞进行染色时,由于细胞的新陈代谢作用,细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型.因此,具有还原能力的酵母活细胞是无色的,而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色,借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别. 美蓝浓度高了,代谢不太活跃的活细胞也会被染色,从而使观察到的死细胞较多,活细胞较少；反之,则代谢微弱的细胞也能还原美蓝,不被染色,从而使观察到的死细胞较少,活细胞较多. 二. 细菌的简单染色和革兰氏染色 1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？ 革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色〔是脱色时间〕.如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌.脱色时间的长短还受涂片的厚薄,脱色是玻片晃动的快慢与乙醇用量的多少等因素的影响,难以严格规定〔脱色是应当控制速度,脱色时间一般为20—30s〕. 2. 固定的目的之一是杀死菌体,这与自然死亡的菌体有何不同？ 自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变.固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的. 3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？ 能.在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌〔G＋〕,被酒精脱色为革兰氏阴性菌.最后一步用番红染液复染,是为了让结果更清楚. 4. 涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题？ a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上； b 增加其对染料的亲和力. 固定时应注意：手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次〔手指触摸玻片反面,不烫手为宜〕,固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩. 三. 霉菌、放线菌的形态观察 1. 镜检时,如何区分基内菌丝与气生菌丝？ 一般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔
微生物实验报告 酵母菌的培养及观察实验 刘欣怡201100140057 生物科学基地班 组别：周一下午三组 同组者：曹平平，周楠， 刘艺，刘希伟 实验完成时间：2012年11月19号 一、实验目的 1、了解酵母菌的形态及出芽方式 2、学习区分酵母菌的死细胞和活细胞 3、掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 4、巩固显微镜操作技术和无菌操作技术 二、实验器材 1．菌种： 酿酒酵母7d麦氏培琼脂（产孢培养基）斜面培养物，酿酒酵母2d YPD（酵母合成培养基）液体培养物。 2. 培养基： 酵母合成培养基，麦氏琼脂斜面 3、试剂： 0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水、香柏油、去离子水等。 4. 仪器
试管，锥形瓶，酒精灯，显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶，接种环，滴管，滤纸，镊子、培养皿等。 三、实验原理 1、培养基： 酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。 2、酵母菌： 酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。 3、酵母菌的形态、大小、结构： 酵母菌是单细胞真菌，并非系统演化分类的单元； 酵母菌细胞的形态通常为圆形、卵圆形或椭圆形。也有特殊形态，如柠檬形、三角形、藕节状、腊肠形，假菌丝等； 比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米×5-20微米； 酵母菌无鞭毛，不能游动； 酵母菌具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。