鲍曼不动杆菌耐药性和耐药机制研究

河北医科大学硕士学位论文河北省鲍曼不动杆菌耐药性和耐药机制研究姓名：宋艳荣申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：王永祥20090301中文摘要河北省鲍曼不动杆菌耐药性和耐药机制研究

摘要目的：鲍曼不动杆菌已成为医院感染的重要病原菌，特别是免疫力低下的患者可以引起严重的，甚至致死性的感染。近年来，随着新型广谱抗菌药物在临床的广泛应用，鲍曼不动杆菌的耐药率呈现逐渐上升的趋势，给临床抗感染治疗带来严峻挑战。细菌的耐药机制分为天然耐药和获得性耐药两种。鲍曼不动杆菌获得性耐药可通过四种主要机制：孔蛋白的丢失、细菌细胞膜的渗透性下降、抗生素外排泵的出现和钝化酶的产生。本研究目的是了解河北省临床分离的鲍曼不动杆菌的耐药情况，及时监测其耐药现状，探讨其耐药机制，为临床治疗提供合理的指导和参考。方法：收集了２００４年１月＂＇２００８年７月河北省二院（４３株）、河北省三院（６株）、河北省四院（２株）、唐山工人医院（１２株）、沧州中心医院（１１株）、石家庄市医院（８株）、邢台市人民医院（５株）、徐水市医院（３株）临床分离的不同来源的９０株鲍曼不动杆菌，分析了菌株的标本来源和医院科室分布情况；测定了美罗培南等７种抗生素的ＭＩＣｓ值；采用ＰＣＲ扩增，琼脂糖凝胶电泳方法对ｐ．内酰胺酶基因（包括ＴＥＭ、ＳＨＶ、ＰＥＲ、ＩＭＰ、ＶＩＭ、ＳＩＭ、ＯＸＡ．２３、ＯＸＡ．２４等）、ｃＲｒＯ基因和ａｄｅＢ外排泵基因、Ｉ类整合子基因进行了检测和分析；采用ＥＲＩＣ．ＰＣＲ方法对不同医院和ＩＣＵ的分离株进行了检测和同源性分析。结果：（１）９０株鲍曼不动杆菌中，来源于痰标本最多，中文摘要为８２株，占９１．２％；其他标本依次为分泌物３株（３．３％），尿液２株（２．２％），耳分泌物、脓液、咽拭子各１株，均占（１．１％）。（２）９０株鲍曼不动杆菌中，从ＩＣＵ患者分离的菌株最多，为３０株，占３３．２％；其他依次为呼吸内科１８株（２０．Ｏ％）、神经外科病房７株（７．８％）、急诊科６株（６．７％）。（３）ＭＩＣｓ测定结果：９０株鲍曼不动杆菌中，８１株对一种及以上抗生素耐药，耐药率为９０．０％（８１／９０），６９株对三种以上生素耐药，耐药率为７６．７％（６９／９０）。其中美罗培南（ＭＥＭ）、亚胺培南（ＩＰＭ）敏感率分别为５８．９％、５１．１％，头孢哌酮／舒巴坦（ＣＦＰ／ＳＢ）敏感率为３０．Ｏ％、左氧氟沙星（ＬＶＬＸ）敏感率为２１．１％、哌拉西林／他唑巴坦（ＴＺＰ）敏感率２０．Ｏ％、阿米卡星（舢Ⅲ）、头孢他啶（ＣＡＺ）敏感率分别为１６．７％和１５．６％。

（４）１３．内酰胺酶类基因测定结果：ＯＸＡ．２３阳性率１０．Ｏ％，９０％为唐山工人医院分离株，全部对亚胺培南和美罗培南耐药；ＴＥＭ阳性率７．７８％：ＰＥＲ阳性率６２．２％；ＩＭＰ基因仅１株为阳性；未检测到ＳＨＶ、ＳＩＭ、ＯＸＡ．２４、ＶＩＭ基因。（５）ｔａｒＯ基因３５株阳性，阳性率３８．９％，ａｄｅＢ阳性率９０．Ｏ％，经测序比对，与Ｇｅｎｂａｎｋ上的序列同源性为１００％。（６）Ｉ型整合子：９０株细菌检测其Ｉ型整合子，结果显示：５６株细菌在４５００ｂｐ、３０００ｂｐ、３０００—２０００ｂｐ、２０００ｂｐ、５００ｂｐ

及３００ｂｐ分别显示不同的电泳条带；整合子阳性菌株对多种

药物耐药，整合子阴性菌株耐药种类较少（Ｐ＜Ｏ．００５）。（７）ＥＲＩＣ同源性测定结果：河北省二院４３株细菌中，２８株为同一个型别；唐山工人医院１２株细菌，有１０株具有同源性，其他两株各不相同；河北省三院６株细菌，型别各不相同；河北省四院２株细菌，均为一个型别；沧州中心医院１１株中文摘要细菌，９株为同一个型别。对从ＩＣＵ分离的３０株菌进行ＥＲＩＣ．ＰＣＲ同源分析，其中１９株为同一种型别，其他为不同型别。结论：（１）多个科室患者均可受鲍曼不动杆菌的感染，以ＩＣＵ患者感染率最高；鲍曼不动杆菌可引起病人多部位感染，以呼吸道感染率最高。（２）鲍曼不动杆菌中耐药率

很高，且多呈多重耐药。在临床常用的７种抗菌药物中，无一种能完全抑制鲍曼不动杆菌，其中美罗培南和亚胺培南敏感率较高，而头孢他啶和阿米卡星耐药率较高。（３）Ｉ型整合子基因及ｐ．内酰胺酶类基因的作用可能是导致鲍曼不动杆菌的多重耐药和高耐药的两个重要原因；而外膜蛋白和外排泵与耐药相关性有待进一步研究。（４）产ＯＸＡ．２３型酶的菌株多数从唐山工人医院分离株检测到，且全部对亚胺培南和美罗培南耐药，同源性分析显示具有相同来源，提示该型菌株已经在该院引起流行，需要采取有效措施防止其进一步传播。（５）ＥＲＩＣ．ＰＣＲ同源性检测结果提示，从河北省二院、唐山工人医院和沧州中心医院分离的菌株有较高的同源性，提示这几个医院有耐药的克隆株播散的可能，有待于进一步深入研究。（６）ＰＣＲ操作时直接取菌悬液加到ＰＣＲ反应体系中进行扩增，利用ＰＣＲ的预变性裂解细菌使核酸释放，该方法减少了操作步骤，缩短了试验时间。

关键词：鲍曼不动杆菌；Ｉ型整合子；同源性；ｐｍ内酰胺酶：多重耐药基因；外排泵基因英文摘要Ｓｔｕｄｙｏｎａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄ

ｍｏｌｅｃｕｌａｒ

ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉｉｎ

ＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ

ＡＢＳＴＲＡＣＴｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐｐ．ａｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔｉｃ

ｐａｔｈｏｇｅｎｓｃａｕｓｉｎｇａｖａｒｉｅｔｙｏｆｎｏｓｏｃｏｍｉａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｒｅｖｅｎ

ｌｅａｄｉｎｇｔｏｄｅａｔｈ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｉｎｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｉｎ

ｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｅｘｔｅｎｓｉｖｅａｎｄｉｎａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｕｓｅｏｆ

ｂｒｏａｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌａｇｅｎｔｓｈａｓｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｔｈｅ

ｒａｐｉｄ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ

ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ

ｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｃａｕｓｅｄｂｙＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉ．Ｂｏｔｈ

ａｃｑｕｉｒｅｄａｎｄｉｎｔｒｉｎｓｉｃｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃａｎｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｄｒｕｇ

ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｔｏａｃｑｕｉｒｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃａｎｂｅｄｕｅｔｏ

ｔｈｅｌｏｓｓｏｆｐｏｒｉｎｓ，ｔｈｅｄｅｃｒｅａｓｅｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｏｕｔｅｒ

ｍｅｍｂｒａｎｅ

ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ，ｔｈｅｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆａｃｔｉｖｅｅｆｆｌｕｘｐｕｍｐｓｙｓｔｅｍｓ，

ａｎｄ／ｏｒｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｉｎａｃｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ

ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆ

ＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｂａｕｍａｎｎｉｉｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｅｉｇｈｔｈｏｓｐｉｔａｌｓｉｎＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈ

ｗｏｕｌｄ

ｐｒｏｖｉｄｅａ

ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ

ｂａｓｉｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｔｈｅｒａｐｙ．

Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＮｉｎｅｔｙＡ．Ｂａｕｍａｎｉｉｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ

８ｈｏｓｐｉｔａｌｓｉｎＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅｄｕｒｉｎｇＪａｎｕａｒｙ２００４ｔｏＪｕｌｙ

２００８

（４３ｆｒｏｍｔｈｅＳｅｃｏｎｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，６

ｆｒｏｍｔｈｅｔｈｉｒｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２ｆｒｏｍｔｈｅ

ｆｏｕｒｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１２ｆｒｏｍ

Ｔａｎｇｓｈａｎ

４英文摘要Ｗｏｒｋｅｒ’ＳＨｏｓｐｉｔａｌ，１１ｆｒｏｍＣａｎｇｚ＿．ｈｏｕＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，８ｆｒｏｍ

ＳｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇＣｉｔｙＨｏｓｐｉｔａｌ，５ｆｒｏｍＸｉｎｇｔａｉＣｉｔｙＰｅｏｐｌｅ’Ｓ

Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ａｎｄ３ｆｒｏｍＸｕｓｈｕｉＣｉｔｙＨｏｓｐｉｔａｌ）．Ｔｈｅｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ

ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｕｒｃｅ

ｏｆＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒＢａｕｍａｎｉｉ

ｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ，ａｎｄｔｈｅＭＩＣｓｏｆ７ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｗｅｒｅ

ｄｅｔｅｃｔｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｂｒｏｔｈｍｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ

１３－１ａｃｔａｍａｓｅｇｅｎｅ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＴＥＭ，ＳＨＶ，ＰＥＲ，ＩＭＰ，ＶＩＭ，ＳＩＭ，

ＯＸＡ一２３ａｎｄＯＸＡ一２４），ｔａｒＯｇｅｎｅ，ａｄｅＢｇｅｎｅ，ａｎｄｃｌａｓｓ１ｉｎｔｅｇｒｏｎｇｅｎｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＰＣＲａｎｄａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．ＴｈｅｇｅｎｅｔｉｃｈｏｍｏｌｏｇｙｏｆＡｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ

Ｂａｕｍａｎｉｉｉｓｏｌａｔｅｓｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔｈｏｓｐｉｔａｌｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙ

ＥＲＩＣ．ＰＣＲｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：（１）Ａｂｏｕｔ９１．２％（４２／９０）ｏｆＡ．ｂａｕｍａｎｉｉｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｓｐｕｔｕｍｓａｍｐｌｅｓ，３．３％（３／９０）ｆｒｏｍ

ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ

ｓａｍｐｌｅｓ，ａｎｄ２．２％（２／９０）ｆｒｏｍｕｒｉｎｅ．（２）Ｍｏｒｅｔｈａｎ

３３％（３０／９０）

ｏｆＡ．ｂａｕｍａｎｉｉｗｅｒｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｉｎＩｎｔｅｎｓｉｖｅＣａｒｅＵｎｉｔ（ＩＣＵ），

２０％（１８／９０）ｉｎｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ，７．８％（７／９０）ｉｎｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙｗａｒｄｓ，ａｎｄ６．７％（６／９０）ｆｒｏｍｅｍｅｒｇｅｎｃｙ

ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ．（３）Ａｂｏｕｔ９０．Ｏ％（８１／９０）ｏｆＡ．ｂａｕｍａｎｉｉｗｅｒｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏ

ｍｏｒｅｔｈａｎ

ｏｎｅ

ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ，ａｎｄ７６．７％（６９／９０）

ｗｅｒｅｒｅｓｉａｔａｎｔｔｏｍｏｒｅｔｈａｎｔｈｒｅｅａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ

ｒａｔｅｏｆＡ．ｂａｕｍａｎｉｉｔｏＭＥＭ，ＩＰＭ，ＣＦＰ／ＳＢ，ＬＶＬＸ，ＴＺＰ，ＡＫＮ，

ａｎｄＣＡＺｗａｓ５８．９％，５１．１％，３０．Ｏ％，２１．１％，２０．Ｏ％，１６．７％ａｎｄ

１５．６％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．（４）ＯＸＡ一２３ｇｅｎｅ

ｗａｓ

ｄｅｔｅｃｔｅｄｐｏｓｉｔｉｖｅｉｎ

ｎｉｎｅＡ．ｂａｕｍａｎｉｉｉｓｏｌａｔｅｓ（９０％ｆｒｏｍ