临床健康猪群猪链球菌2型带菌率流行情况调查

中国动物检疫２０１０年第２７卷第１２期　蛾　一６３一　临床健康猪群猪链球菌　２型带菌率流行情况调查　郑彦梓　，陈进喜　，翟成兵，，覃明强　，黄梅，，黄稳妃　，王中华　，覃芳芸　，熊毅ｚ，彭定兵，　（１．广西钦州市动物疫病预防控制中心，广西钦州　５　３５０００；２．广西动物疫病预防控制中心，广西南宁５　３０００１）　

摘要：为了解钦州Ｉ市临床健康猪群中猪链球菌２型的流行情况，采用ＰＣＲ方法对采集的病料进行检测分析。　３７４份样品的ＰＣＲ检测结果显示，链球菌、猪链球菌、猪链球菌２型的带菌率分别为８１．８％、４８．９％、２．９　Ｄ／０’表明钦州市　健康猪中猪链球菌带菌率高，但猪链球菌２型带菌率较低。　关键词：临床健康猪；猪链球菌２型；流行病学调查；扁桃体　中图分类号：￥８５１．３１　３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５—９４４Ｘ（２０１０）１２—００６３—０２　

Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｈｅａｌｔｈｙ　Ｓｗｉｎｅ　Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　Ｓｅｒｏｔｙｐｅ　２　ｉｎ　Ｑｉｎ￣ｈｏｕ　ｏｆ　Ｇ１Ｊａｌ１　ｉ　Ｚｈｅｎｇ　Ｙａｎｚｉ　，Ｃｈｅｎ　Ｊｉｎｘｉ　，Ｚｈａｉ　Ｃｈｅｎｇｂｉｎｇ　，Ｑｉｎ　Ｍｉｎｇｑｉａｎｇ　，Ｈｕａｎｇ　Ｍｅｉ　，　Ｈｕａｎｇ　Ｗｅｎｆｅｉ　，Ｗａｎｇ　Ｚｈｏｎｇｈｕａ　，Ｑｉｎ　Ｆａｎｇｙｕｎ　，Ｘｉｏｎｇ　Ｙｉ　，Ｐｅｎｇ　Ｄｉｎｇｂｉｎｇ’　（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｏｉｎｚｈｏｕ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ａｎｄ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｑｉｎｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３５０００，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ａｎｉｍａｌ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎ仃ｏｌ　ａｎｄ　Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３０００ｌ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｍｉｃ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｓｅｒｏｔｙｐｅ　２　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｓｗｉｎｅ　ｉｎ　Ｑｉｎｚｈｏｕ，３７４　ｔｏｎｓｉｌｓ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｓｗｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ＰＣＲ．Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏ．　ＣＯＣＣＵＳ　ｓｕｉｓ，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｓｅｒｏｔｙｐｅ　２　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　８１．８％，４８．９％，２．９％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｓｗｉｎｅ　ｉｎ　ａ　ｃａｒｒｉｅｒ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｓｅｒｏｔｙｐｅ　２　ｗａｓ　ｌｏｗ　ｉｎ　Ｑｉｎｚｈｏｕ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｓｗｉｎｅ￣Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｓｅｒｏｔｙｐｅ　２：ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ；ｔｏｎｓｉｌｓ　

猪链球菌２型（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　Ｓｕｉｓ　Ｓｅｒｏｔｙｐｅ　２，ＳＳ２）是一种重要的　人兽共患传染病，可引起猪脑膜炎、　关节炎、心内膜炎、肺炎和突然死亡，　并可感染特定人群并致死，被我国列　为二类动物疫病。曾在欧洲、美洲和　亚洲多个国家出现暴发流行ｆ　－２］，不仅　给世界养猪业造成巨大损失，而且危　及公共卫生安全。近年来国内屡见猪　链球菌２型暴发的报道　。为了了解　钦州市临床健康猪群中猪链球菌２　型的流行情况，我们采集屠宰场临床　健康猪的扁桃体进行链球菌的分离　和检测，为我市猪链球菌的诊断和防　控工作提供数据支持。　１材料与方法　１．１　样品采集　健康猪扁桃体的采集：从钦州市　各县区屠宰场采集屠宰猪的扁桃体。　１．２样品细菌培养　无菌操作挑取样品于绵羊血平　板上画线接种，３７℃培养１８～２０　ｈ，挑　取单个呈浅灰色或半透明针尖大小　溶血菌落经涂片镜检为链球菌后接　种于葡萄糖肉浸液肉汤液体培养基　内增菌培养，３７℃培养１８－２０　ｈ收取　通讯作者：彭定兵　菌液备用。　１．３细菌ＤＮＡ提取　取细菌液体培养物１．２　ｍＬ，１２　０００　ｒｐｍ离心１　ｍｉｎ，弃上清，加入３００　Ｕ　Ｌ的生理盐水、１００　Ｕ　Ｌ的ＥＤＴＡ　混匀，４０　Ｕ　Ｌ　１０％ＳＤＳ和８　Ｕ　Ｌ（１０　ｍｇ／ｍＬ）的蛋白酶Ｋ，混匀后５２℃水　浴２ｈ，每隔２０ｍｉｎ摇匀一次。酚氯仿　抽提２次，加入２～２．５倍的无水乙醇　及１／１０体积的３　ｍｏｌ／Ｌ醋酸钠，混　匀，一２０℃静置过夜。１２　０００　ｒｐｍ离心　１５　ｍｉｎ。倒掉上清，用１　ｍＬ　７５％的酒　精洗涤两次，３７℃烘干，加入３０　ｕ　Ｌ　ｄｄＨ，Ｏ，立即使用或一７０℃储存备　用。　１．４多重ＰＣＲ　参考文献５建立的猪链球菌２　型三重ＰＣＲ方法，按照其体系和程　序进行ＤＮＡ扩增，对检测样品中分　离到的可疑细菌进行ＰＣＲ检测。　２结果　２．１　三重ＰＣＲ　对３７４份健康猪扁桃体分离菌　进行三重ＰＣＲ检测，反应体系总体　积２５　ｕ　Ｌ，内含样品细菌ＤＮＡ模板　２．０　ｕ　Ｌ，加１０×Ｒｅａｃｔｉｏｎ　Ｂｕｆｆｅｒ　２．５　ＩＪ　Ｌ，ｄＮＴＰ（２．５　ｍｍｏｌ／ｐ　Ｌ）２．０　Ｕ　Ｌ，　ＴａｑＤＮＡ酶（５　Ｕ／Ｕ　Ｌ）０．２５　Ｕ　Ｌ，Ｍｇ—　Ｃ１２（２５　ｍｎｌｏｌ几）１　ｕ　Ｌ，２５　ｐｍｏｌ／ＩＪ　Ｌ　的引物ｓｔｓｌ／ｓｔｓ２各０．７　ＩＪ　Ｌ、ｇｄｈｌ／ｇｄｈ２　各０．４　Ｌ、ｃｐｓ２ＪＹｃｐｓ２Ｊ２各０．４Ｕ　Ｌ，　加ｄｄＨ２０至２５ｐ　Ｌ，置ＰＣＲ仪中，９５　℃５　ｍｉｎ；９４　ｏＣ变性４５　Ｓ，５６℃退火　４５　Ｓ，７２℃延伸６０　Ｓ，３３个循环；７２℃　延伸１０　ｍｉｎ。取ＰＣＲ产物６　ｕ　Ｌ在　１０　ｇｍ琼脂糖凝胶上电泳，置凝胶成　像系统中观察结果。部分样品的检测　结果电泳图见图１。　

囊蕾羞　

２．２　ＰＣＲ检测结果　通过对３７４份健康猪扁桃体分　离菌进行三重ＰＣＲ，检测的结果见表　ｌ，从表中可见，链球菌的比例最高为　钦州市区（为８７．７％）；猪链球菌检出　率最高的为浦北（为５３．２％）；而市区　的猪只没有检出猪链球菌２型，灵山　．　６４．—　卿嘲　中国动物检疫２０１０年第２７卷第１２期　主持人：袁丽萍ｙ。ｐ６５２＠ｈ。　ｍ　．。。ｍ　一起实验鸡发生鸡白痢沙门氏菌感染　

王海燕，徐向明　（江苏畜牧兽医职业技术学院流行病学研究中心，江苏泰州Ｉ　２２５３００）　摘要：从某实验鸡场购回ｌ周龄ＳＰＦ雏鸡２００羽准备进行试验，饲养ｌ周后爆发疾病，疑似鸡白痢，取病鸡肝　脏经过前增菌，鉴别培养，细菌菌落形态观察，染色镜检、生化试验、血清学鉴定及１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列测定，分离鉴　定到了１株鸡白痢沙门氏菌，菌体型为Ｏ１，９，１２，动力学试验显示该菌株不具有运动能力　结果提示，加强实验鸡场　的沙门氏茵净化和接雏后的饲养管理对于保障实验动物的安全和动物实验的质量十分重要。　关键词：实验动物；鸡白痢沙门氏菌；感染；药物敏感性试验　中图分类号：￥８５８．３５　文献标识码：Ｃ　文章编号：１００５—９４４Ｘ（２０１０）１２—００６４～０２　

鸡自痢是由鸡白痢沙门氏菌引抗菌药物进行预防和治疗…。实验用１．１．２培养基及微量生化发酵管　起的鸡和其他禽类的一种畸形全身动物的鸡场一般是采用净化种群的麦康凯琼脂培养基，沙门氏菌志贺氏　性疾病。鸡白痢沙门氏菌是一种无鞭方法，饲养和管理不善会导致鸡白痢菌筛选培养基（ＳＳ）营养琼脂培养基，　毛的沙门氏菌［１１。其与另一种无鞭毛的发生，但实验用鸡发生白痢是非常胆硫乳琼脂（ＤＨＬ）培养基，亚硒酸钠　的沙门氏菌一鸡伤寒沙门氏菌引起少见的。本研究从购回并饲养１周的胱氨酸增菌液（ｓｃ）等培养基购自青　的疾病合称为鸡白痢一鸡伤寒ｆ２］。该患病ＳＰＦ鸡群中分离出了一株鸡白　岛海博生物技术有限公司；ＬＢ平板　病在世界范围内广泛存在，尤其是养痢沙门氏菌，并进行了系统鉴定，现　自行配置；微量发酵管购自杭州天和　鸡场和火鸡养殖场，能导致鸡的生产报告如Ｆ。　微生物试剂有限公司。　性能下降，种蛋的孵化率降低，由于１　材料与方法　１．１．３沙门氏菌属诊断血清沙门　可发生垂直传播对养鸡业造成巨大１．１　材料　氏茵Ａ—Ｆ群０多价诊断血清购于　的经济损失ｆｌｌ　３－ｓｌ。目前控制该病的主１．１．１　病料病料取病死ＳＰＦ鸡肝　国生物技术集团公司兰州生物制　要措施是净化种群；其它鸡群则采用脏。　品研究所（批号：２００７０１０１）。　－＋－＋一＋一＋－＋－＋－十－＋一＋一十一＋－＋　＋…＋一＋　＋一＋－＋一＋一＋一＋－＋＊＋一＋＊＋－＋－＋・－４－－＋－－４－－＋－＋－＋－＋－十一＋－十－＋一＋－＋一＋－＋－—　－—　－—＋－—　－—　＊—　－・　－—＿卜－—＋ｒ－—　・　和浦北的检出率分别为５．９％和　国外不同国家和地区在正常猪体中　链球菌的初步研究［Ｊ１．中国畜禽传染　

３．９％。猪链球菌２型平均枪出率为检出率也不一样，高的达７５％，而低病，ｌ９９３（５）：１．３．　２．９％。　的只有３％　，带菌检出率多数在『４１孙银华，杨昌，严勋，等．猪兰氏Ｑ　

表Ｉ　３７４份健康猪扁桃体分离菌的ＰｃＲ检　测结果　

３讨论　覃芳芸等［７１所建立的三重ＰＣＲ　检测方法，引物设计针对菌体的１６Ｓ　ｒＲＮＡ具有群间特异性，猪链球菌既　高度保守又特异性强的谷氨酸脱氢　酶ＧＤＨ具有种的特异性，利用ＧＤＨ　基因设计的特异性引物可以区分猪　链球菌与链球菌属其它亚种；猪链球　菌病２型荚膜多糖ｃｐｓ基因开放阅　读框架中的ｃｐｓ２Ｊ同源性非常高，与　其它型同源性低，可以用来区分猪链　球菌２型。该三重ＰＣＲ检测方法适　用于猪链球菌２型的流行病学调查　和快速诊断。　据报道，欧洲等国家的猪链球菌　病病原体中，２型流行最广（２４．７％）。　５０％以上　。但一般认为，猪群是否会　发生猪链球菌病与其带菌率的高低　并无直接的关系。国内正常猪群猪链　球菌２型的带菌率也不一致，高的可　达１ｏ０％，江苏的为０％～７７％，平均为　４０．９％（３６／８８）［ｇＪ。本调查在健康猪样　品中的猪链球菌带菌率为４８．９％，而　猪链球菌２型带菌率为２．９％，这表明　钦州临床健康猪群链球菌带菌率高，　但猪链球菌２型带菌率低。到目前为　止，猪链球菌２型在我市并没有暴发　流行的报道，但病原的分离以及流行　病学调查结果显示我市猪群中存在　猪链球菌２型感染，因此，建议临床　上要重视猪链球菌２型的防控，以防　在我市形成暴发和流行。　参考文献：　［１］Ｊｅｎｓｅｎ　Ｊ，　ＶａｎＤｅｒｓｅｎ　Ｃ　Ａ．　Ｍｅｎｉｎｇｏ—ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ　ｂｉｊ　ｖａｆｌｃｅｎｓ　ｄｏｏｒ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｅｅｎ　［Ｊ］．Ｔｉｊｄｓｃｈｒｉｆｔ　Ｖｏｏｒ　Ｄｉｅｒｇｅｎｅｅｓｋｕｎｄ，１９５１，７６：８１５—８３２．　［２］Ｆｉｅｌｄ　Ｈ　Ｉ，Ｂｕｎｔｅｎ　Ｄ，Ｄｏｎｅ　Ｊ　Ｔ．　Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｐｉｇｌｅｔ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　Ｉ　Ｓｔｒｅｐｔｏ　ｃｏｃｃａｌ　ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｓ　ａｎｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｖｅｔ　ｅｒｉｎａｒｙ　Ｒｅｃｏｒｄ，１９５４，６６：４５４—４５５．　［３】黄毓茂，黄引贤，余志东，等．２型　群链球菌病的诊断与防制［Ｊ］．中国预　防兽医学报，１９９９，２１（６）：４６２．４６５．　［５］覃芳芸，熊毅，盛宇明，等．猪链球　菌２型多重ＰＣＲ检测方法的建立及　应用［Ｊ］．畜牧与兽医，２００７，３９（９）：４．６．　［６】Ａｒｅｎｄｓ　Ｊ　Ｐ，Ｈａｒｔｗｉｎｇ　Ｎ，Ｒｕｄｏｌｐｈｙ　Ｍ，ｅｔ　ａ　１．Ｃａｒｒｉｅｒ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｃａｐｓｕｌａｒ　ｔｙｐｅ　２　ｉｎ　ｐａｌａｔｉｎｅ　ｔｏｎｓｉｌｅ　ｏｆ　ｓｌａｕｇｈｔｅｒｅｄ　ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，　１　９８４，２０（５）：９４５．９４７．　『７１　Ｗｉｓｓｅｌｉｎｋ　Ｈ　Ｊ，Ｊｏｏｓｔｅｎ　Ｊ　Ｊ，Ｓｍｉｔｈ　Ｈ　Ｅ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ＰＣＲ　ａｓｓａｙｓ　ｆｏｒ　ｓｉｍｕｌｔａ－　ｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｉｘ　ｍａｊｏｒ　ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｔｗｏ　ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ．．ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｐｈｅｎｏ－，　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｉｎ　ｔｏｎｓｉｌｌａｒ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ　ｆｒｏｍ　ｐｉｇｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃ１ｉｎ　Ｍｉ－　ｃｒｏｂ，２００２，４０（８）：２９２２．２９２９．　ｆ８１　Ｓｔａａｔｓ　Ｊ　Ｊ，Ｆｅｄｅｒ　Ｉ，Ｏｋｗｕｍａｂｕａ　Ｏ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ：ｐａｓｔ　ａｎｄ　ｐｒｅｓｅｎｔ『Ｊ１．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍ．　ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ，１９９７，２１：３８１．　『９１　Ｈｅ　Ｋ　Ｗ，Ｎｉ　Ｙ　Ｘ，Ｗａｎｇ　Ｊ　Ｃ，ｅｔ　ａ　１．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｓｕｉｓ　ｔｙｐｅ　２［Ｊ］．Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ｚｏｏｎｏｓｅｓ，２００２，ｌ８（５）：　４５．４７．