第２７卷第４期 ２００８年ｌ２月 成都大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｖ＿０１．２７ ＮＯ．４ Ｄｅｃ．２００８
文章编号：１００４—５４２２（２００８）０４—０２７３—０４
一亚麻酸特异性脂肪酶产生茵的复合诱变研究
魏决 ，郭玉蓉 ，罗 雯 ，付忠旭
（１．成都大学生物产业学院，四川成都６１０１０６；２．陕西师范大学食品学院，陕西西安７１００６２）
摘要：将前期实验中经筛选、紫外诱变获得的ａ一亚麻酸特异性脂肪酶产生茵为诱变出发菌，通过紫外线、硫 酸乙二酯和氟化锂的物理一化学复合诱变处理，经平板筛选和摇瓶发酵及发酵液中脂肪酶活性的测定，分离出 具有产生更高活力ａ一亚麻酸特异性脂肪酶的菌株，测试结果显示，其酶活较单一紫外诱变菌种提高了３１％．
关键词：ａ一亚麻酸；特异性脂肪酶；诱变；脂肪酶活力
中图分类号．＂ＴＱ９２５ ．６ 文献标识码：Ａ
Ｏ 引 言
紫苏油中的不饱和酸含量为９１．６％，其中ａ一
亚麻酸的含量高达６１．８％．ａ一亚麻酸属∞一３系
列多烯脂肪酸（∞一３ＰＵＦＡ），人体摄人后经代谢生
成两种对人体健康产生重要作用的活性因子ＤＨＡ
和ＥＰＡ．大量的研究发现：ａ一亚麻酸具有降血压、
降血脂、抑制血栓、抗癌，提高大脑与神经系统功
能，改善过敏体质与视觉功能等重要的生理作 用ｕ引．ａ一亚麻酸在人体内不能合成，必须从体外
摄取．对于婴幼儿和青少年，ａ一亚麻酸能增强智
力、提高记忆力、保护视力、改善睡眠，如果缺乏将
会影响其智力的正常发育．本试验拟通过对所采
集样品中微生物的筛选及一系列诱变，得到能产
生对水解紫苏子油脂中大量ａ一亚麻酸具有专一
水解能力的特异性脂肪酶的微生物菌株，以期在
以紫苏油、亚麻油为原料的ａ一亚麻酸生产过程
中，摒弃化工方法，充分利用生物技术简化生产工
艺过程，提高产品纯度，增加产量．
工业微生物菌种得分离与筛选
来源:青岛海博
一、微生物工业对菌种得要求
(一)、微生物工业得生产水平由三个要素决定:生产菌种得性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备。其中生产菌种得性能就是最重要得因素。
(二)、微生物工业对菌种得要求就是:
(１)菌株高产,在较短得时间内发酵产生大量发酵产物得能力;
(２)在发酵过程中不产生或少产生与目标产品相近得副产品及其她产物;
(3)生长繁殖能力强,较强得生长速率,产孢子得菌种应该具有较强得产孢子能力;
(4)能够高效地将原理转化为产品;
(５)能利用广泛得原材料,并对发酵原料成分得波动敏感性小;
(６)对需要添加得前体物质有耐受能力,并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用;
(7)在发酵过程中产生得泡沫要少;
(8)具有抗噬菌体得能力;
(9)遗传稳定性,
二、工业用微生物菌种得来源及选育
(一)微生物菌种得来源
一般通过以下几个途径收集菌种、采集样品与分离筛选:
(1)就是根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买;
(２)从大自然中采集样品分离;
(3)从一些发酵制品中分离筛选目得菌株、
当前发酵工业所用菌种总趋势就是从野生菌转向变异菌,自然选用转向代谢育种,从诱发基因突变转向基因重组得定向育种。
(二)微生物工业菌种得分离
1、野生菌株得分离、筛选过程
(１)新菌种分离与筛选得步骤
菌种分离得流程如下:
标本采集 →标本材料得预处理→富集培养→菌种初筛→ 菌种复筛→性能鉴定→ 菌种保藏
①采样
采样季节:以温度适中,雨量不多得秋初为好。
采土方式:在选好适当地点后,用小铲子除去表土,取离地面5—1５cm处得土约10g,盛入清洁得牛皮纸袋或塑料袋中,扎好,标记,记录采样时间、地点、环境条件等,以备查考。为了使土样中微生物得数量与类型尽少变化,宜将样品逐步分批寄回,以便及时分离、
②标本预处理
④纯种分离:采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落、
中国农业科技导报
，2021, 23(3) ：82-90
Journal of Agricultural Science and Technology
谷关假单胞菌脂肪酶基因PgLipl的克隆和表达
张冰玉，苏小运
*
(中国农业科学院饲料研究所
，农业农村部饲料生物技术重点开放实验室
，北京100081)
摘要:低温脂肪酶在饲料、洗涤、有机合成等行业中具有重要的应用价值，然而目前已发现的低温脂肪酶数
量不多，对其基因多样性了解不够深入，因此有必要从自然环境中挖掘新的低温脂肪酶基因。为了获得低温
脂肪酶基因资源
，通过基因组序列比对分析
，从谷关假单胞菌(Pseudomonas guguanensis)中发现并克隆获得一
个脂肪酶基因P. guguanensis lipase 1 ( PgLipl)，并对该基因进行序列分析和蛋白质预测
，表达后检测PgLipl
的最适底物、最适pH、最适温度
，同时研究了表面活性剂、变性剂、EDTA、金属离子及有机溶剂对该酶活性的
影响。结果显示:该基因片段大小为840 bp，预测编码含279个氨基酸残基的蛋白质
，氨基酸序列与来源于门
多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的脂肪酶相似性92.6%。该酶的最适温度为10 t，在0 t相对酶活为
60.2%，是一个低温脂肪酶;其最适pH为&5,在pH 3.0~12.0时
，仍然具有62%以上的相对酶活。40 t处理
45 min后,PgLip1还能保持72.6%的残余酶活。该酶的最适反应底物为对硝基苯基丁酸酯(pNPB);在高浓度
异丙醇、异戊醇和乙酸乙酯中的酶活反而高于相应较低浓度中
，吐温-20、吐温-80和Triton X-100表面活性剂
能较大程度激活PgLip1(3.2~5.9倍)。研究丰富了对低温脂肪酶生物多样性的科学认识
，所获得的PgLip1
是一个受表面活性剂特异激活且对部分高浓度有机溶剂耐受的低温脂肪酶，具有较好的应用前景。
江苏农业科学２０１３年第４１卷第４期 ・－——３２５－－——
周 杰，刘雅琴，龚洪兵，等．低温碱性脂肪酶产生菌的分离筛选及酶学性质［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（４）：３２５—３２７
低温碱性脂肪酶产生菌的分离筛选及酶学性质
周 杰，刘雅琴，龚洪兵，白晓雨，江旭
（北方民族大学生物科学与工程学院，宁夏银川７５００２１）
摘要：从富含油脂的土壤、菜籽中分离筛选出低温碱性脂肪酶产生菌，从稀释样品涂布的筛选平板上得到１１株
脂肪酶产生菌。通过平板打孔法比较这ｔ１株菌株的产酶活力，并对产酶活力高的菌株进行酶学性质试验，测得其产
酶的最适条件为：ｐＨ值７．５、温度４５℃、酶活力为４．７ Ｕ／ｍＬ。在ｐＨ值为８～９、温度为３５℃的条件下，酶具有良好的
稳定性。本试验建立了低温碱性脂肪酶产生菌的筛选模型，并为扩大脂肪酶的生产源奠定了理论基础。
关键词：脂肪酶；产酶条件；分离；筛选；酶学性质
中图分类号：Ｑ９３６ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２—１３０２（２０１３）０４—０３２５—０２
脂肪酶（ＥＣ ３．１．１．３）别称三酰甘油酰基水解酶，是由一
类水解长链脂肪酸甘油酯生成游离脂肪酸和甘油的界面
酶…，被广泛应用于油脂水解、食品加工、食品品质改良、疾
病诊断、催化药物合成、皮革生产、可生物降解的无污染洗涤
剂的研发和生物柴油的生产等方面－ｚ 。低温碱性脂肪酶在
ｐＨ值为８．０～１０．５、温度为１Ｏ一３５ 的范围内有高催化活 性、耐有机溶剂以及对热敏感等特点，因此在洗涤、食品、制
药、脂类加工、毛纺和低温环境修复等工业上有巨大的应用潜
力，最重要的是它在解决能源危机——生物柴油的制备、地沟
油的利用回收方面有不可替代的应用价值 Ｊ。因此，分离筛
选产低温碱性脂肪酶的菌株具有非常重要的现实意义。根据
目前的报道，产脂肪酶的微生物有根霉、曲霉、扩展青霉、毛 霉、假单胞菌、产气肠杆菌等 。本试验利用宁夏地区特殊
