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生血康口服液黄芪甲苷含量测定方法学研究发布时间：2021-12-22T08:27:45.856Z 来源：《中国科技人才》2021年第27期作者：高萍[导读] 参照中国药典对本品中君药黄芪，摸索建立了黄芪甲苷的含量测定方法，并进行了方法学验证试验，具体内容如下：哈药集团三精制药有限公司黑龙江省哈尔滨市 150069摘要：目的：建立HPLC法测定生血康口服液中黄芪甲苷的含量方法。
方法：采用SpursilC18柱（200×4.6mm，5μm）为色谱柱；乙腈-水（28:72）为流动相；流速1.0ml?min-1；柱温30℃；进样量20μl；漂移管温度50℃，喷雾器级别70%，增益150，气体流量20PSI。
结果：黄芪甲苷在10.25μg?mL-1～153.75μg?mL-1的浓度范围内具有良好的线性关系，R=0.9999；平均回收率为99.07%，RSD（%）=0.46%。
结论：本方法准确，灵敏，可用于生血康口服液中黄芪甲苷的含量测定。
关键词：生血康口服液；黄芪甲苷；HPLC生血康口服液是补气补血、健脾益肾、化瘀解毒的纯中药制剂，是恶性肿瘤放、化疗后的用药，使用中药材达十八位，有黄芪、红参、五味子、当归、枸杞子等名贵药材，目前检验标准采用国家药品标准，含量测定采用薄层扫描法测定其黄芪甲苷含量。
生血康口服液由十八味中药材加工而成的中药合剂，具有补气生血、健脾益肾、化瘀解毒，主治恶性肿瘤放化疗引起的红、白细胞减少症，气血两虚兼脾肾虚损、腰膝酸软、恶心呕吐、口渴喜饮等症候。
参照中国药典对本品中君药黄芪，摸索建立了黄芪甲苷的含量测定方法，并进行了方法学验证试验，具体内容如下：一、试药生血康口服液规格：20ml/支)；乙腈为色谱纯，甲醇、氨水为分析纯，水为纯化水。
二、色谱条件与系统适用性试验SpursilC18柱（200mm×4.6mm，5μm）；流动相乙腈-水（28:72）；流速1.0mL?min-1；柱温30℃；漂移管温度50℃，喷雾器级别70%，增益150，气体流量20PSI。
蒸发光检测器测定黄芪药材中黄芪甲苷的含量作者：卯升宇陈宇赵瑜来源：《科学与财富》2019年第36期摘要：目的：建立一个用蒸发光检测器测定黄芪药材中黄芪甲苷含量的方法。
方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ;以乙腈-水（36：64）为流动相，流速1.0ml/min;柱温30℃;用蒸发光散射检测器检测（ET：100℃、NT：40℃、氮气流速：1.60SLM、增益：1）。
结果：精密度试验、重复性试验、准确度试验测试结果均能满足要求，质控结果满意。
结论：该方法简便、准确，可用于黄芪药材中黄芪甲苷的质量控制。
关键词：黄芪;黄芪甲苷;蒸发光检测器;方法确认黄芪甲苷是黄芪中的标志有效成分，收载于《中国药典》2015版一部中，本实验在药典的基础上，优化黄芪甲苷含量测定中蒸发光检测器的具体实验条件，建立一个适用于本实验室的黄芪甲苷HPLC-ELSD 含量测定方法。
1.仪器与试药1.1高效液相色谱仪：美国安捷伦1260高效液相色谱仪。
1.2试药 ;甲醇，色谱级;乙腈，色谱级;氨水，分析纯;乙醇，分析纯;正丁醇，分析纯;超纯水，自制。
黄芪甲苷标准品，来源中国食品药品检定研究院。
1.3天平：电子天平（0.1mg /0.01mg/0.001mg）2.方法与结果2.1供试品制备参照《中国药典》2015年一部“黄芪”【含量测定】项下操作。
2.2色谱条件的优化：鉴于实验室条件的考虑，选取流动相比例、飘移管温度（ET）和雾化器温度（NT）作为主要因素通过正交设计进行考察。
正交试验设计表L9（34）如下：采用直观分析法-极差分析法对上述正交试验的结果进行分析，确定因素主次，遴选出优水平，最终确定色谱条件为飘移管温度：100℃、雾化温度：40℃、流动相比例（乙腈：水-36：64）。
2.3精密度试验：分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（浓度为：0.281976mg/ml）各10μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值。
各次测得的峰面积值分别是593.8、593.5、591.3、588.9、588.7、581.6，平均值为589.6，相对标准偏差RSD为0.4%。
XXXXXXX有限公司原料质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：黄芪1.2 汉语拼音：Huangqi2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2020年版一部）、团体标准（T/CATCM 004-2018）6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：甲醇、中性氧化铝、水、正丁醇、黄芪甲苷对照品、三氯甲烷、硫酸、乙醇、氢氧化钠、盐酸、乙酸乙酯、无水硫酸钠、黄芪对照药材、氨水、乙腈、甲酸。
7.2 仪器与用具：显微镜、水浴锅、三用紫外分析仪、恒温鼓风干燥箱、马福炉、硅胶G薄层板、原子吸收仪、气相色谱仪、高效液相色谱仪、索氏提取器。
7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：7.4.1 取本品制片置10×10显微镜下做显微观察7.4.2照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取〔含量测定〕项下的对照品溶液与供试品溶液各5~10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13 : 7 : 2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯（365nm）下显相同的橙黄色荧光斑点。
7.4.3 取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干。
残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取黄芪对照药材，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法（附录7）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（10 ：1）作为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点。
外标法含量计算公式
外标法是一种常用于计算物质含量的方法。
它通常适用于通过与已知
浓度的标准溶液进行比较来确定未知溶液浓度的情况。
以下是外标法含量
计算的基本公式和实施步骤。
1.基本公式：
C1V1=C2V2
其中
C1是标准溶液的浓度（mol/L）；
V1是标准溶液的体积（L）；
C2是待测溶液的浓度（mol/L）；
V2是待测溶液的体积（L）。
2.实施步骤：
步骤1：准备标准溶液。
根据需要测定的物质浓度范围和实验条件，准备一系列不同浓度的标
准溶液，一般包括低、中、高三个浓度，并保持一定的量级关系。
步骤2：制备待测溶液。
根据需要测定的物质浓度，按照实验要求和样品性质，制备待测溶液。
步骤3：测定吸光度。
使用光谱仪或光度计等仪器，分别测定标准溶液和待测溶液的吸光度。
在实际操作中，通常会选择一个特定的波长进行测定。
步骤4：建立标准曲线。
将标准溶液的浓度与其对应的吸光度数据绘制成曲线，这个曲线被称为标准曲线。
根据实验结果选择适当的曲线拟合方法，如一次线性拟合、二次曲线拟合等。
步骤5：计算待测溶液浓度。
使用标准曲线，根据待测溶液的吸光度值，通过插值或者外推的方法得到其浓度。
步骤6：计算物质含量。
使用上述的基本公式，根据标准溶液和待测溶液的体积和浓度计算出待测溶液中物质的含量。
步骤7：结果分析。
对实验结果进行分析和比较，根据实验的要求和目的，对结果进行讨论和解释。
科技论坛生血康口服液由十八味中药材加工而成的中药合剂，具有补气生血、健脾益肾、化瘀解毒，主治恶性肿瘤放化疗引起的红、白细胞减少症，气血两虚兼脾肾虚损、腰膝酸软、恶心呕吐、口渴喜饮等症候。
参照中国药典２０１５年版一部，针对本品中君药黄芪，摸索建立了黄芪甲苷的含量测定方法，并进行了方法学验证试验，具体内容如下：１对照品及试药来源美国安捷伦１１００（蒸发光散射检测器）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：１１０７８１－２００６１３，纯度：１００％）；生血康口服液（市售样品，规格：２０ｍｌ／支）；乙腈为色谱纯，甲醇、氨水为分析纯，水为纯化水。
２色谱条件与系统适用性试验ＳｐｕｒｓｉｌＣ１８柱（２００ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈－水（２８：７２）；流速１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温３０℃；漂移管温度５０℃，喷雾器级别７０％，增益１５０，气体流量２０ＰＳＩ。
理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于４０００。
３对照品溶液、供试品溶液的制备３．１对照品储备液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每１ｍｌ含黄芪甲苷０．１ｍｇ的溶液，即得第１个浓度对照品溶液。
精密量取上述溶液５ｍｌ，至１０ｍｌ量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得第２个浓度对照品溶液。
３．２供试品溶液的制备：精密量取本品５ｍｌ，加水１５ｍｌ，用水饱和的正丁醇提取３次，每次２０ｍｌ，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤２次，每次２０ｍｌ，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水５ｍｌ使溶解，通过Ｄ１０１型大孔吸附树脂柱（内径为１．０ｃｍ，柱高为８ｃｍ），以水８０ｍｌ洗脱，弃去水液，再用４０％乙醇４０ｍｌ洗脱，弃去洗脱液，再用７０％乙醇６０ｍｌ洗脱，收集洗脱液，蒸干，加甲醇溶解并转移至１０ｍｌ量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法：分别精密吸取２个浓度的对照品溶液和供试品溶液各２０μｌ，注入液相色谱仪，用外标两点法计算黄芪甲苷含量。
气相色谱外标法含量计算公式
在气相色谱中，外标法常用于测定样品中目标化合物的含量。
其计算公式如下：
目标化合物的含量（%）=（样品中目标化合物峰面积/外标化合物峰面积）×外标化合物浓度 ×（样品体积/外标溶液体积）
其中，
样品中目标化合物峰面积：在气相色谱图上测得的目标化合物的峰面积。
外标化合物峰面积：在气相色谱图上测得的外标化合物的峰面积。
外标化合物浓度：已知的外标化合物的浓度，可以通过称量外标溶液的质量和溶液体积来计算。
样品体积：取样时所使用的溶剂的体积。
外标溶液体积：用于制备外标溶液的溶剂的体积。
含量外标法计算公式和方法含量外标法是一种常用的化学分析方法，用于确定样品中某种成分的含量。
在这种方法中，我们可以通过测量样品中某种成分的含量，并将其与标准物质的含量进行比较，从而得出样品中该成分的含量。
本文将介绍含量外标法的计算公式和方法。
一、含量外标法的计算公式。
在含量外标法中，我们通常使用以下公式来计算样品中某种成分的含量：样品中成分的含量 = (样品测定值空白测定值) ×标准物质浓度 / 标准物质测定值。
其中，样品测定值是指样品中某种成分的测定值，空白测定值是指不含该成分的样品的测定值，标准物质浓度是指标准物质的浓度，标准物质测定值是指标准物质的测定值。
二、含量外标法的计算方法。
1. 准备标准物质和样品。
首先，我们需要准备好标准物质和样品。
标准物质是已知含量的纯净物质，用于确定样品中某种成分的含量。
样品是我们需要测定的物质，其中含有我们需要确定含量的成分。
2. 进行测定。
接下来，我们需要进行测定。
首先，我们需要对标准物质进行测定，得到其测定值。
然后，我们对样品进行测定，同样得到其测定值。
在进行测定时，还需要对不含该成分的样品进行测定，得到空白测定值。
3. 计算含量。
最后，我们使用上述的计算公式，将测定值代入公式中进行计算，就可以得出样品中某种成分的含量。
三、含量外标法的应用。
含量外标法在化学分析中有着广泛的应用。
它可以用于测定各种物质中某种成分的含量，如药品中的活性成分含量、食品中的营养成分含量等。
在药品分析中，含量外标法可以用于确定药品中活性成分的含量，从而保证药品的质量和安全性。
在食品分析中，含量外标法可以用于测定食品中的各种营养成分的含量，如蛋白质、脂肪、维生素等，从而帮助人们科学合理地膳食。
此外，含量外标法还可以用于环境监测、工业生产等领域。
例如，在环境监测中，可以用含量外标法来测定水体中各种污染物的含量，从而评估水质的好坏。
在工业生产中，可以用含量外标法来测定原材料和产品中的各种成分的含量，从而控制产品的质量。
中药液相外标法计算公式
中药液相外标法的计算公式是：含量（cx）=crAx/Ar。
其中，cx代表样品
浓度，cr代表对照浓度，Ax代表样品峰面积，Ar代表对照峰面积。
这个公式是用来推算未知试样中被测组分浓度的定量方法。
具体使用时，应先按梯度添加一定量的标准品（对照品）于空白溶剂中制成对照样品，与未知试样平行地进行样品处理并检测。
然后，不同浓度的标准品进样，以峰面积为值绘制成标准曲线。
以上内容仅供参考，如果需要更多信息，建议查阅相关文献或咨询专业医生。
黄芪甲苷含量测定方法
本方法用于检测黄芪提取物中黄芪甲苷的含量检测，照高效液相色谱法（2010版《中国药典》附录ⅥD测定）。
色谱条件
色谱柱： C18柱（Shodex, 4.6×250mm,）
流动相：乙腈-水=40-60
柱温：30℃
流速：1.0ml/min
检测器：ELSD检测器（75℃，2.5L/min）
对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定后加入25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声10min后静置待用。
供试品溶液的制备取供试样品适量，精密称定，加入25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声10min后静置待用。
测定法分别精密吸取经微孔滤膜过滤的对照品溶液和供试品溶液各
20μl，注入液相色谱仪，测定后根据外标法计算即得。
HPLC-ELSD法测定景天祛斑胶囊中黄芪甲苷的含量
成志俊
【期刊名称】《海峡药学》
【年(卷),期】2012(024)010
【摘要】目的建立景天胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法.方法采用HPLC-ELSD 法,色谱柱为ZORBAX SB-C18(5μm,250mm×4.6mm);流动相为乙腈-水(32∶68);流速为0.8min·mL-1,柱温为30℃.PL-ELS2100型蒸发光散射检测器(漂移管温度:80℃,雾化温度:50℃),载气(氮气)流速1.5mL·min-1.采用外标两点法计算含量.结果黄芪甲苷在选定浓度0.00525～0.0525mg·mL-1内有良好的线性关系
(r=0.9959),回收率为100.85%(RSD=1.73%).结论本法方便、快速、准确,重现性好,可用于该制剂中黄芪甲苷的定量分析.
【总页数】2页(P76-77)
【作者】成志俊
【作者单位】浙江省义乌市中医医院,义乌,322000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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1.HPLC-ELSD法测定复胃散胶囊中黄芪甲苷的含量 [J], 刘晓瑜;华颖婷
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5.HPLC-ELSD法测定康心胶囊中黄芪甲苷的含量 [J], 丁明聪;李涛;施务务
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第9卷第13期·总第117期2011年07月·上半月刊140HPLC法测定红芪中黄芪甲苷的含量王玉霞1金晓玲2摘要：目的建立用高效液相色谱法测定红芪中黄芪甲苷含量的检测方法。
方法以甲醇－水（68:32）为流动相，于200nm波长处，以外标法测定。
结果红芪中黄芪甲苷的量在3.704～14.816μg范围内，浓度与峰面积线性关系良好（r=0.9994），平均回收率为98.83%。
结论本方法灵敏、准确、快速。
关键词：红芪；黄芪甲苷；高效液相色谱法doi：10.3969/j.issn.1672-2779.2011.13.095 文章编号：1672-2779（2011）-13-0140-02红芪为豆科植物多序岩黄芪（Hedysarum polybolrysHahd-Mazz）的干燥根，为常用中药。
红芪其性温，味甘，归肺、脾经。
具有补气固表，利尿托毒，排脓，敛疮生肌之功效。
常用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷等症[1]。
因其性味与归经，功能与主治均与黄芪相同，故历代本草都把红芪作为黄芪的一个品种收载在黄芪项下。
我国南北朝时期著名医药学家陶弘景在论述黄芪时就有“又有赤色者，可作膏贴，俗方多用，道家不须”[2]的记载。
《中国药典》（1977年版）一部首次把红芪作为一个品种来源收载在黄芪项下。
《中国药典》（1985年版）一部始把红芪与黄芪分列，单独收载。
而现行的《中国药典》（2010年版）一部，对红芪的药材质量仅以鉴别和浸出物来控制，显然不能系统完整地反映红芪的内在质量。
为了有效地控制红芪药材的质量，我们尝试应用高效液相色谱法对红芪中黄芪甲苷的含量进行测定，通过实验证明该方法准确可靠，重现性好，能较好地控制红芪药材的质量。
1 材料与方法1.1 仪器高效液相色谱仪（日本岛津LC－2010型，LC-solution工作站），L－160DTP分析天平（上海精密仪器厂）。
1.2 试药重蒸馏水，色谱甲醇，其他试剂均为分析纯。
XXXXXXX有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1中文名：黄芪、黄芪圆片、黄芪瓜子片、黄芪柳叶片炙黄芪1.2 汉语拼音：Huangqi Huangqiyuanpian HuangqiguazipianHuangqiliuyepian Zhihuangqi2 代码：3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：中国药典（2020年版一部）、团体标准（T/CA TCM 004-2018）6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：甲醇、中性氧化铝、水、正丁醇、黄芪甲苷对照品、三氯甲烷、硫酸、乙醇、氢氧化钠、盐酸、乙酸乙酯、无水硫酸钠、黄芪对照药材、氨水、乙腈、甲酸。
7.2 仪器与用具：水浴锅、烘箱、紫外光灯、马福炉、硅胶G薄层板、原子吸收仪、气相色谱仪、高效液相色谱仪、索氏提取器、二氧化硫测定仪。
7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：7.4.1黄芪圆片、黄芪瓜子片、黄芪柳叶片取本品制片置10×10显微镜下做显微观察。
7.4.2 照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取〔含量测定〕项下的对照品溶液与供试品溶液各5~10μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13 : 7 : 2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外光灯（365nm）下显相同的橙黄色荧光斑点。
7.4.3 取本品粉末2g，加乙醇30ml，加热回流20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%氢氧化钠溶液15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干。
残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。
另取黄芪对照药材，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（10：1）作为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯（365nm）下检视。
RIGOL L-3530用户操作指南一、 原理简介：L-3530蒸发光散射检测器用于检测高效液相色谱系统（HPLC），凝胶渗透色谱系统（GPC），制备高效液相色谱系统，快速色谱系统或逆流色谱（CCC）系统中的洗脱组分。
当洗脱溶液流速处于100μL/min到5mL/min之间时，L-3530蒸发光散射检测器均可进行检测。
蒸发光散射检测器技术应用非常广泛，可以检测任何非挥发性分析物质。
与其它类型的检测器（如UV 检测器）不同，它不依赖于放射线的吸收，也并不受溶剂吸收特性影响。
因此，可使用具有紫外放射线吸收的溶剂。
由于溶剂会完全蒸发，可执行梯度操作以优化分离效果。
检测器通过前面板上的键盘和数字显示器控制。
此外，也可通过RS-232端口连接外部电脑控制检测器。
输出结果可发送至记录仪，积分仪或数据站。
检测器包含雾化池，蒸发管和检测舱。
运行过程中蒸发管会被加热，以实现溶剂的蒸发。
检测器操作包含三个独立步骤：洗脱溶液雾化，溶剂蒸发和组分检测（见下图）。
雾化指将洗脱溶液转化为细微的气溶胶。
转化后的气溶胶进入蒸发器蒸发溶剂，蒸发形成的雾经光源照射，照射所产生的散射光由光电倍增管进行测量，该过程与样品组分浓度相关。
二、 仪器操作：1、开机a) 按下后面板的开关按钮启动检测器；b) 接通气源并打开气体分配阀并将压力设置为3.5bar（51 Psi），压力将在状态界面显示；c) 确保雾化室虹吸溢流管中有足够的液体。
如果需要的话，可通过仪器抽取几毫升的溶剂填入虹吸管；d) 启动流动相，并稳定一段时间，以保证所有的组件都达到平衡，基线保持稳定。
2、 参数设置1）通过外部按键设置（适用于非Rigol CWS工作站软件反控）：初始界面：a) 设置最优温度： 在上述界面显示模式下连续两次按下按钮可进入温度/增益界面设置温度如果使用的是水性流动相，则初始温度应当设定在60℃，如果使用的是有机流动相(流速为lmL／min)，则初始温度应当设定为40℃。
外标法含量计算公式在外标法中，我们使用一个已知浓度的标准溶液（外标）和待测样品溶液进行测定。
首先，我们通过在不同浓度下制备多个外标溶液，利用仪器测量它们的吸光度或荧光强度，并绘制标准曲线。
这个标准曲线是外标浓度与其对应的吸光度或荧光强度之间的关系图。
接下来，我们用同样的方法测量待测样品的吸光度或荧光强度。
然后，根据标准曲线，我们可以通过外标法计算出待测样品中化学物质的含量。
下面是外标法含量计算公式的一般表达形式：C=(S-So)/m其中：C是待测样品中化学物质的含量（单位可以是摩尔、毫摩尔、克等）；S是待测样品的吸光度或荧光强度；So是纯溶剂（不含化学物质）的吸光度或荧光强度；m是标准溶液的浓度。
这个公式的推导过程如下：1.假设标准曲线的方程为：y = mx + b其中y是吸光度或荧光强度，x是标准溶液的浓度，m是斜率，b是截距。
2.将待测样品的吸光度或荧光强度用S表示，纯溶剂的吸光度或荧光强度用So表示。
3.带入标准曲线的方程，得到：S = mx + bSo = mb4.将这两个方程相减，得到：S - So = mx + b - mb = m(x - b/m)5.由此可得：C=(S-So)/m=(m(x-b/m))/m=x-b/m所以，这个公式就是外标法含量计算公式的一般形式。
需要注意的是，对于吸光度的测量，可以使用紫外可见吸收光谱仪进行测量，对于荧光强度的测量，则可以使用荧光光谱仪进行测量。
另外，在实际操作中，通常会进行多次测量，然后取平均值以提高测量结果的精确度。
最后，需要提醒的是，在使用外标法计算含量时，需要注意标准曲线的线性范围以及样品的稀释倍数，以确保测量结果的准确性。
如果标准曲线不是线性的，或者样品浓度过高或过低，则计算结果可能会偏离实际值。
因此，在进行实际测量之前，需要进行一定的方法验证和优化。
