建立HPLC用于双黄连口服液中黄芩苷的含量测定以及方法学验证1040314 潘明对原实验选用方法进行改进的原理：黄芩苷有两个最大吸收波长，分别为278nm和315nm，因为双黄连口服液中另一主要成分绿原酸的最大吸收波长为326nm，为保证得到良好峰形，仍采用278nm为检测波长。
黄芩苷为黄酮类化合物，有多酚羟基结构，在低温和酸性条件下稳定，一般将pH控制在3-4之间。
原实验用冰醋酸调节pH，但醋酸有易挥发不稳定的缺点，所以改用0.4%的磷酸溶液（低浓度减少磷酸盐对色谱柱的侵蚀），流动相为甲醇-0.4%磷酸(50∶50）。
改进后实验条件:色谱柱：C18(250mmX4．6mm，5μm )；流动相：甲醇-0.4%磷酸(50∶50）流速：1.0ml/min进样量：20µl柱温：室温理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于1500样品含量的测定方法：取样品溶液，按上述色谱条件，进样测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。
方法学验证：1.专属性实验空白溶液：甲醇-0.4%磷酸(50∶50）黄芩苷对照品溶液制备：精密量取黄芩苷对照品适量，精密称定，制成0.1mg/ml溶液供试品溶液：精密量取双黄连口服液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声波处理20min，放置至室温，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得不含黄芩苷的阴性对照供试品溶液制备：原则上需要，制备复杂，本实验不做取上述溶液分别进样，测定，观察在相同位置上是否有与标准品溶液对应的峰，表明空白对照无干扰2 回收率实验取制得的供试品溶1ml置于10ml容量瓶中，共6份。
精密量取黄芩苷对照品0.013g，0.016g和0.019g各两份，分别加入上述6份溶液中，依法测得其含量，并计算回收率。
（加入的标准品一般为供试品含量的80% 100% 120%）加样回收率=（测得量-本底量）/加入量×100%3.线性范围考察精密量取上述黄芩苷对照品溶液1，2，3，4，5，6m1分别置于lOml 量瓶中，加5O% 甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，分别取20µl进样，记录色谱图。
第1篇一、实验目的通过本实验，掌握黄芩的性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别方法，了解黄芩的药用价值和临床应用。
二、实验材料1. 黄芩药材（干燥根）2. 乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂3. 显微镜、药材粉末、试剂等4. 《中国药典》及相关参考资料三、实验方法1. 性状鉴别（1）观察药材的外观形态：黄芩呈圆锥形，扭曲，长8～25cm，直径1～3cm。
表面棕黄色或深黄色，有稀疏的疣状细根痕，上部较粗糙，有扭曲的纵皱纹或不规则的网纹，下部有顺纹和细皱纹。
质硬而脆，易折断，断面黄色，中心红棕色；老根中心呈枯朽状或中空，暗棕色或棕黑色。
（2）气味鉴别：黄芩气微，味苦。
（3）水试鉴别：取黄芩药材1～2g，加适量水浸泡，观察其溶解情况。
黄芩在水中溶解度较低，但可形成黄棕色混悬液。
2. 显微鉴别（1）制片：取黄芩药材粉末，进行制片。
（2）显微镜观察：在显微镜下观察黄芩粉末的显微特征，包括韧皮纤维、石细胞、木栓细胞、网纹导管、木纤维、淀粉粒等。
3. 理化鉴别（1）黄酮类化合物含量测定：采用高效液相色谱法（HPLC）测定黄芩药材中黄芩苷、黄芩素等黄酮类化合物的含量。
（2）薄层色谱法（TLC）：取黄芩药材粉末，进行薄层色谱分析，观察其色谱图谱，与对照品进行对比。
四、实验结果1. 性状鉴别：实验中观察到的黄芩药材外观形态、气味和水试结果与《中国药典》描述相符。
2. 显微鉴别：显微镜下观察到的黄芩粉末特征与《中国药典》描述相符。
3. 理化鉴别：HPLC分析结果显示，黄芩药材中黄芩苷、黄芩素等黄酮类化合物的含量符合《中国药典》规定。
薄层色谱法分析结果显示，黄芩药材色谱图谱与对照品色谱图谱基本一致。
五、实验结论1. 通过本实验，成功掌握了黄芩的性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别方法。
2. 实验结果表明，本批黄芩药材符合《中国药典》的规定，质量合格。
3. 黄芩具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎等功效，临床应用广泛。
六、实验注意事项1. 实验过程中应注意安全操作，避免有机溶剂接触皮肤和眼睛。
黄芩有效成分的含量测定技术樊志强(本溪市化学工业学校,辽宁本溪117004)摘要:黄芩中有效成分含量测定方法有高效液相色谱法、反相高效液相色谱法、近红外光谱法、超高效液相色谱法、超高效液相色谱-串联质谱技术等。
综述黄芩有效成分含量测定研究进展,为进一步开展黄芩相关研究提供参考。
关键词:黄芩;有效成分;含量测定;色谱中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1674-1161(2019)06-0055-02黄芩来源于唇形科植物黄芩的干燥根,是传统的药食兼用天然植物,具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效。
现代研究表明,黄芩中的有效成分主要是黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等。
近年来,科研工作者针对黄芩中有效成分含量测定开展研究和应用,并取得诸多有价值的研究成果。
综述黄芩有效成分含量测定研究进展,为进一步开展黄芩相关研究提供参考。
1高效液相色谱法高效液相色谱法是中药材有效成分含量测定的常用方法,具有精密度高、分离效能高等优点。
李因泽等采用HPLC 色谱法同时测定不同产地黄芩中的黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、去甲汉黄芩苷、千层纸素A 苷含量。
采用Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度为流动相,流速1.0mL /min,检测波长280nm,柱温30℃。
黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、去甲汉黄芩苷、千层纸素A 苷的线性关系良好,平均回收率在98.70%~99.17%之间。
2反相高效液相色谱法颜梅等采用反相高效液相色谱法测定黄芩中5种黄酮苷元成分含量。
去甲汉黄芩素、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A 的进样量分别在0.0180~0.1080、0.3780~2.2680、0.0945~0.5670、0.0225~0.1350、0.0354~0.2124μg 范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;精密度、重复性、稳定性试验的RSD 约3%;加样回收率分别为98.72%、101.80%、99.25%、98.71%、99.05%。
高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量实验三高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量【实验目的】（1）初步掌握福立FL-2200高效液相色谱仪原理及其使用方法；（五号宋体）（2）掌握高效液相色谱对流动相、样品处理的要求及注意事项；（3）能根据测定数据计算双黄连口服液中黄芩苷的含量；（4）了解中药制剂质量检测的方法。
【实验原理】双黄连口服液由金银花、黄芩及连翘经提取精制而成，具有辛凉解表、清热解毒功效，对于上呼吸道感染、扁桃体炎、咽炎、病毒性肺炎等细菌和病毒感染性疾病有一定疗效。
其中绿原酸、黄芩苷、连翘苷、汉黄芩素是其主要活性成分。
本试验根据《2010版中国药典》方法对双黄连口服液中黄芩苷含量进行测定，以便控制制剂质量。
【仪器和试剂】1. 高效液相色谱仪（福立FL-2200）：2. 黄芩苷对照品（中食品药品检定所）【实验步骤】1.按操作说明书使用仪器，其色谱条件如下：色谱柱：C18 反相色谱柱流动相：甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）检测波长：274nm。
柱温：30℃流速：1.0ml/min理论板数：按黄芩苷峰计算应不低于 1500。
2.【含量测定】黄芩照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。
对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品 10mg，置 100ml 量瓶中，加 50%甲醇适量，置水浴中振摇使溶解，放置至室温，稀释至刻度，摇匀，即得（每 1ml 中含黄芩苷 0.1mg）。
供试品溶液的制备精密量取装量项下的本品 1ml，置 50ml 量瓶中,加 50%甲醇适量, 超声处理20 分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每支含黄芩按黄芩苷(C21H18O11)计，不得少于 80mg。
【数据处理】采用外标法进行含量计算。
【思考题】1. 高效液相色谱仪在样品检测过程中设置的主要仪器参数有哪些？2. 高效液相色谱仪在使用过程中应注意些什么？3. 高效液相色谱仪在样品检测中与紫外-可见分光光度计相比，具有哪些不同和优势？。
