流式细胞仪培训ppt课件

二.细胞分选原理
●高通量 ●高纯度：可达99.9% ●可分选极少含量的细胞 ●多种分选方式
FACSVantage Diva 的模拟四路分选。
四.实例与数据分析
（1）红细胞裂解后的外周血细胞检测
• 成分：样本中的细胞有单核细胞，淋巴细胞，粒细胞 • 染色：单克隆抗体标记
1）CD14存在于单核细胞表面。 荧光染料： Phycoerythrin（PE）
（5）各色荧光信号分离
激光束
侧向散射光， 荧光
细胞
二色反光镜

1
2
3
前向 散射 光
收集透镜
带通滤光片 光电倍增管
多通道（多参数）
另一个参数：时间—连续 过程的检测
多激光激发：多通道（多参数）—6杆激光，17个荧光通道
（6）更先进的光信号收集和分离方式
八角反射式 信号收集系统
提高的灵敏度— (二色反光镜)反射~透 射:95%~80%
（2）测量对象：颗粒尺度
（单细胞悬浮液）
当前流式细胞仪可测量颗粒大小 最小约0.2μm
电镜
光学 显微镜
人眼极限
0.1nm 1nm 10nm
100nm
1μm
10μm
100μm
1mm
原子氨基蛋白 病毒 支原体 细菌 酸质
红细胞 上皮细胞 植物细胞
（3）可测量的细胞参数
核酸分析： DNA、 RNA含量，DNA合 成、降解、断裂， 区分核酸单、双 链，测量端粒长 度、染色质结 构 、碱基构成。 染色单体分选。
（2）DNA含量检测
高精确性—以及极小的 仪器误差（CV）！
BD FASCalibur
• 质量控制：
变异系数（CV）：流式细胞仪的“分辨率”。

流式细胞仪培训
26、机遇对于有准备的头脑有特别的 亲和力 。 27、自信是人格的核心。
28、目标的坚定是性格中最必要的力 量泉源 之一， 也是成 功的利 器之一 。没有 它，天 才也会 在矛盾 无定的 迷径中 ，徒劳 无功。- -查士 德斐尔 爵士。 29、困难就是机遇。--温斯顿．丘吉 尔。 30、我奋斗，所以我快乐。--格林斯 潘。
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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收集数据，进行定量和定性分 析。
流式细胞术的检测原理
细胞染色
使用荧光染料标记细胞 表面的抗原或内部的分
子。
细胞悬浮
将细胞悬浮在液流中， 通过喷嘴引入检测区域
。
激光照射
激光束照射细胞，激发 荧光染料发出荧光。
信号检测
检测器收集荧光和散射 光信号，转化为电信号
。
荧光染料的种类与选择
荧光染料种类
有异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白 (PE)、罗丹明(Rhodamine)等。
疫苗研发
用于监测疫苗接种后免疫 细胞的反应和变化，评估 疫苗的有效性和安全性。
流式细胞术的发展历程
19世纪末期
流式细胞术的初步设想诞生。
20世纪60年代
第一代流式细胞仪问世，可以进行简单的 细胞计数和大小测量。
20世纪80年代
21世纪初
第二代流式细胞仪出现，引入荧光染色和 多参数检测技术，提高了检测的灵敏度和 特异性。
特点
具有高速度、高精度和高通量等 优点，能够同时检测多个细胞参 数，广泛应用于临床医学、生物 学和生物医学研究中。
流式细胞术的应用领域
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临床诊断
用于检测血液系统疾病、 免疫系统疾病和肿瘤等， 如白血病、淋巴瘤和实体 瘤的分类和分型。
生物研究
用于研究细胞生长、分化 、凋亡和免疫应答等生物 学过程，以及药物筛选和 基因表达分析等。
荧光染料选择
根据抗原特异性和实验需求选择合适 的荧光染料，确保特异性标记和最佳 信号强度。
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流式细胞术实验技术
样本的制备与保存
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血液样本
采集静脉血液，使用抗凝剂， 避免溶血和细菌污染。

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PMT
1
PMT
2
Bandpass Filters
Laser
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流式细胞仪的液流系统
Injector Tip
Sheath fluid
Fluorescence signals
Focused laser beam
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2、控制流式细胞仪可变性的具体步骤：
A、校正激发、发射光路 B、监控检测器的灵敏度(cv) C、监控仪器电子线路的稳定性
流式细胞术实验结果的质控
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获得流式细胞术实验结果 必须经历以一下步骤：
1、检测样本的获得 2、抗体染色与洗涤 3、流式细胞仪对样本的采集、存取与分析
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影响流式细胞术实验结果的
主要因数:
一、仪器的可变性。 二、标本的可变性。 三、操作过程的可变性。 四、数据分析的可变性
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在DNA直方图中鉴别细胞增殖(SPF) 与DNA 异倍体G0/1细胞峰
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在DNA直方图上，二倍体G0/1细胞出现右肩峰时，先对DNA直方图作二倍体周期 分析，若SPF比率与CD71+细胞检出率接近时，则该细胞峰为增殖细胞，若SPF 比率显著高于CD71+细胞检出率时，完整则版该课右件肩峰可能为DNA异倍体细G0/1峰。 30
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荧光标记：FL1:CD3-FITC, FL2:CD(16-56-PE)
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荧光标记：FL1:CD71.177
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B、设联动门分析某些参数
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4、二联体细胞对DNA含量分析的影响