小鼠肺成纤维细胞使用说明

细胞自噬在器官纤维化病变中的作用毛　骏１，３　李仁礼１，３　李?华２，３　张　青２，３　李　海２，３　向晓辉２，３，△（１武警后勤学院，天津３００３０９；２天津市西青医院消化内科，天津３００３８０；３天津市肝脏胰腺纤维化与分子诊疗重点实验室，天津３００１６２）摘要　自噬是细胞中一种进化上保守的生物学过程，通过降解受损的细胞器和多余的蛋白质使细胞在应激损伤时能够维持正常的平衡。

它包括一系列连续的过程，如吞噬泡的形成与延伸、自噬体的成熟、自噬体与溶酶体的融合等。

目前，对于调节自噬过程不同阶段的分子机制以及在疾病发展中作用的认识正逐渐加强。

本文综述了近几年来细胞自噬在多种器官纤维化病变中的研究进展，着重整理归纳与疾病相关的发生机制，以期为纤维化疾病的治疗提供新的理论指导和临床思路。

关键词　自噬；器官纤维化；分子机制中图分类号　Ｒ５９３ＣｅｌｌｕｌａｒＡｕｔｏｐｈａｇｙｉｎＯｒｇａｎＦｉｂｒｏｓｉｓ ＭＡＯＪｕｎ１，３，ＬＩＲｅｎ Ｌｉ１，３，ＬＩＭａｎ Ｈｕａ２，３，ＺＨＡＮＧＱｉｎｇ２，３，ＬＩＨａｉ２，３，ＸＩＡＮＧＸｉａｏ Ｈｕｉ２，３，△（１ＬｏｇｉｓｔｉｃｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｅｏｐｌｅ＇ｓＡｒｍｅｄＰｏｌｉｃｅＦｏｒｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３０９，Ｃｈｉ ｎａ；２ＤｉｇｅｓｔｉｖｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＴｉａｎｊｉｎＸｉｑｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３８０，Ｃｈｉｎａ；３ＴｉａｎｊｉｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｅｐａｔｏ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｔｉａｎｊｉｎ，３００１６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｕｔｏｐｈａｇｙｉｓａｎｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｃｅｌｌｓ．Ｉｔｃａｎｍａｉｎｔａｉｎａｎｏｒ ｍａｌｂａｌａｎｃｅｂｙｄｅｇｒａｄｉｎｇｄａｍａｇｅｄｏｒｇａｎｅｌｌｅｓａｎｄｒｅｄｕｎｄａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｓｔｒｅｓｓｉｎｊｕｒｙ．Ｉｔｉｎｃｌｕｄｅｓａｓｅ ｒｉｅｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｏｆｐｈａｇｏｐｈｏｒｅ，ｔｈｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆａｕｔｏ ｐｈａｇｏｓｏｍｅ，ｔｈｅｆｕｓｉｏｎｏｆａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅａｎｄｌｙｓｏｓｏｍｅ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｓｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｄｉｓｅａｓｅｓｉｓｇｒａｄｕａｌｌｙｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ，ｔｈｅｒｅｃｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙｉｎｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｐａｔｈｏ ｇｅｎｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｓｉｓｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｉｄｅ ａｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ａｕｔｏｐｈａｇｙ；ｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍ 纤维化是指组织中细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）发生过度沉积，细胞再生能力不能满足损伤修复的动态病理过程，几乎可以发生在任何实体器官或组织中，终末期可导致肝、肺、肾等重要器官的衰竭［１］。

LMNAR527C基因突变纯合型小鼠表型及其组织、细胞衰老相关蛋白表达观察李东明; 刘恒; 朱兰玉; 方玲; 吴华裕; 潘尚领; 林有坤; 舒伟【期刊名称】《《山东医药》》【年(卷),期】2019(059)033【总页数】5页(P5-9)【关键词】LMNA基因; LMNAR527C突变基因; 细胞衰老蛋白; γH2Ax; β-半乳糖苷酶【作者】李东明; 刘恒; 朱兰玉; 方玲; 吴华裕; 潘尚领; 林有坤; 舒伟【作者单位】广西医科大学基础医学院南宁530021; 广西医科大学第一附属医院【正文语种】中文【中图分类】Q419LMNA基因主要编码LaminA/C蛋白与LaminB蛋白共同构成细胞核膜内层的网状核纤层结构，维持细胞核结构稳定，参与对外界机械力的转导，固定染色质和基因转录调控作用[1～3]。

LaminA/C还存在细胞核质中，对细胞增殖分化、染色质重组和DNA复制具有调控功能。

LMNA第527位氨基酸(LMNAR527)位于蛋白结构域的表面，参与盐桥的形成，精氨酸是碱性氨基酸，半胱氨酸是中性氨基酸。

因此，R527C的取代会破坏蛋白质的表面结构，对核纤层结构产生影响[4]。

LMNAR527是引起核纤层蛋白病的热点突变区域。

LMNA基因突变导致十几种退行性疾病的发生，包括Emery-Dreyfus肌营养不良、外周神经病变、脂肪营养不良和儿童早老症等[5]。

研究[6]发现，LMNAR527C基因突变会导致儿童早老症，但在LMNAR527C基因突变导致的早老症患者细胞中，并未发现有prelamin A 的堆积和早老蛋白progerin的积累[7]。

目前，LMNAR527C基因突变在衰老中的作用仍不清楚， LMNA基因突变与疾病的发生发展呈现复杂和多样性，LMNA 基因型与疾病表型的关系并不明确[8]。

2016年9月～2019年3月，本研究通过构建LMNAR527C突变基因小鼠模型，观察了LMNAR527C基因突变纯合型小鼠的表型特征及细胞衰老标志物的变化，以探讨LMNAR527C基因突变对衰老的影响。

乳鼠心肌成纤维细胞分离与培养一、实验动物1~3日龄C57小鼠乳鼠10只。

二、试剂及配制高糖DMEM( gibco)、Ⅰ型胶原酶（MP）、0.25%胰蛋白酶(solarbo公司), 胎牛血清（gibco 160000-044）、青霉素-链霉素混合液（solarbo）。

培养液: DMEM培养基：FBS：双抗 100：10：1（45ml：5ml：0.5ml）酶消化液:将胰蛋白酶用PBS缓冲液(pH 7.2 ～ 7.4)稀释, 配成0.1%胰蛋白酶消化液;将Ⅰ型胶原酶溶于PBS缓冲液(pH 7.2 ～ 7.4)中, 配成0.1%的胶原酶消化液。

0.1%胰蛋白酶及01% Ⅰ型胶原酶以2∶1混合, 现配现用。

三、实验仪器超净工作台、CO2培养箱、光学倒置显微镜、离心机……四、组织消化和分离细胞1、将乳鼠于75%乙醇缸中浸泡5ｓ, 转移至超净台。

用大头针将其固定在无菌的泡沫板上, 用聚维酮碘消毒胸、腹部皮肤。

2、取2把弯镊子撕开皮肤, 充分撕拉开, 再用乙醇棉签消毒。

用眼科虹膜剪在剑突处正中线稍偏左向上开胸后用剪子压住胸骨右缘, 使心脏自然跳出, 用弯镊子勾住心脏根部, 取出心脏, 置于盛预冷PBS液的培养皿中。

3、将鼠心脏全部取出后, 剪去心房、剔除心脏上结缔组织、脂肪及血管, 预冷ＰＢＳ液清洗3次, 去除血污。

4、将心脏剪成约1mm ×1mm×1mm的组织块, 刮入加有搅拌子的锥形瓶中, 酶消化液冲洗剪刀及培养皿, 转移至锥形瓶中。

5、加入孵育过的酶消化液为心肌组织的5倍, 37 ℃水浴, 打开磁力搅拌器, 60r/min搅拌10min, 吸管轻轻吹打组织块1min分散细胞, 自然沉降2min后遗弃上清液。

6、再次加入消化酶液8～15ml消化8min。

五、培养细胞1、吸取上清液入离心管, 加入预冷培养液2ml, 吹打均匀后, 1 200r/min离心4min, 弃上清, 细胞沉淀加预冷的培养液吹打后成细胞悬液用封口膜封口放于冰中备用。

吡非尼酮通过抑制热休克蛋白90的表达改善肺纤维化罗丽珊;杨敬源;林俊鸿【期刊名称】《齐齐哈尔医学院学报》【年(卷),期】2022(43)15【摘要】目的观察吡非尼酮(Pirfenidone)对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化小鼠模型及TGF-β1刺激的肺成纤维细胞中热休克蛋白90(HSP90)、热休克因子-1(HSF-1)表达的影响,探讨吡非尼酮改善肺纤维化的作用机制。

方法将40只C57BL/6小鼠随机分为四组,气管内注射3 U/kg BLM以构造肺纤维化小鼠模型;Pirfenidone治疗组在造模后第2天开始以灌胃方式给予300 mg/kg/d Pirfenidone。

第21天,应用H&E、Masson染色评估小鼠肺纤维化程度,免疫组化和Western blot测定肺组织α-SMA及HSP90的含量。

10 ng/ml TGF-β1单独或联合100μg/ml Pirfenidone处理肺成纤维细胞HFL-1细胞24小时后,应用Western blot检测α-SMA、HSP90、胞浆及胞核HSF-1的含量。

结果BLM组小鼠的肺纤维化程度、α-SMA的表达均高于Pirfenidone治疗组。

且BLM组肺组织HSP90的表达较对照组明显升高,而Pirfenidone的处理可抑制HSP90的表达。

TGF-β1刺激肺成纤维细胞表达HSP90明显增多,并可诱导HSF-1由胞浆转移至胞核中。

Pirfenidone可抑制上述过程。

结论吡非尼酮可能通过抑制HSF-1由胞浆转移至胞核中,从而在基因水平抑制HSP90的表达而改善肺纤维化。

【总页数】4页(P1401-1404)【作者】罗丽珊;杨敬源;林俊鸿【作者单位】惠州市中心人民医院呼吸与危重症医学科;惠州市中心人民医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R453.9【相关文献】1.吡非尼酮联合尼达尼布治疗小鼠肺纤维化的效果2.吡非尼酮和尼达尼布体外抗肺纤维化作用3.吡非尼酮和尼达尼布抑制博来霉素诱导的小鼠肺纤维化药效比较4.吡非尼酮与尼达尼布治疗特发性肺纤维化的成本-效果分析5.吡非尼酮和尼达尼布抗肺纤维化的应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小鼠肾实质细胞小鼠肾实质细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

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同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

小鼠肾实质细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

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5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠肾实质细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。

原代心肌细胞-原代心成纤维细胞培养方法实验准备：昆明乳鼠25~30只；生物安全柜；巴氏吸管2支；培养皿2个；原代器械盒；15ml 离心管；50ml离心管各一支；胰酶；PBS；1%双抗；封口膜；酒精灯；Dhanks；实验主要分为两大步骤进行：第一天晚上1、培养皿内加入预冷的PBS+1%双抗。

2、取乳鼠酒精喷全身取心脏放到提前准备的培养皿中无需剪碎稍抖动清洗。

3、所有心脏取完，用巴氏吸管将培养皿中的心脏吸到15ml离心管中，稍等沉降，吸去液体。

4、加入Dhanks冲洗心脏，吸出弃去，将心脏上沾有的血尽量冲洗干净。

5、加入3mlDhanks和5ml胰酶。

封口膜封好，放到饭盒里，四度摇床8-12小时。

第二天上午1、配置二型胶原酶（16.8mg二型胶原酶+21mL DMEM,配好后放到水浴锅预热，微孔滤膜过滤，现用现配）2、8-12小时后，向装有心脏的15ml离心管中加入5ml DMEM完全培养基中和胰酶。

之后小心吸去液体，加入7ml提前准备好的二型胶原酶。

放到37度摇床摇10min转速160r，摇10min后将上清吸到新的50ml离心管中。

这个过程重复3次，基本上心脏全部溶解，只有少量组织。

（每次可以少加二型胶原酶4-5ml多消化几次）3、将50ml离心管中3次收得的上清滤网过滤，离心1000r5min，弃上清，沉淀加入DMEM完全培养基，逐层吹起，加入到细胞培养瓶中。

5只鼠铺一个培养瓶。

4、1.5-2小时后差速，将培养瓶中的培养液转移到六孔板里。

心肌细胞10只鼠一个6孔板即可。

注：用心肌细胞的取6孔板中细胞培养48小时；用成纤维细胞的将培养瓶中差速的瓶用1000ul的枪冲洗30次得到的成纤维细胞相对较纯。

小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞产品说明：为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

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注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

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小鼠骨髓来源内皮祖细胞产品简介：产品名称：小鼠内皮祖细胞组织来源：小鼠骨髓产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠骨髓来源内皮祖细胞简介：小鼠骨髓内皮祖细胞来源于成年大鼠骨髓组织，是血管内皮细胞的前体细胞，亦称为成血管细胞(angioblast)，在生理或病理因素刺激下，可从骨髓动员到外周血参与损伤血管的修复。

体外培养的小鼠骨髓来源的内皮祖细胞呈圆形、短梭形或不规则形，可向细胞密度低的方向伸出1至数个足突，细胞融合后呈铺路石状排列。

本公司生产的小鼠内皮祖细胞采用密度梯度离心后，流式筛选制备而，细胞总量约为5×105cells/瓶，DIL-acLDL免疫荧光鉴定细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

小鼠肺单细胞悬液制备
小鼠肺单细胞悬液的制备步骤如下：
1. 取小鼠肺组织，清洗干净，置于平皿中。

2. 将肺组织剪成泥状，进一步剪断，放入胶原酶溶液中。

3. 将装有肺组织和胶原酶的容器放在37℃的震荡摇床上，转速为300rpm，消化40-60分钟，直到肺组织几乎全部消化。

4. 通过离心（1200rpm，5分钟）除去胶原酶。

5. 加入2mLRPMI1640培养液，吹打混匀。

6. 通过200目筛网过滤，收集滤液。

7. 再次离心（1000rpm，5分钟），去上清液。

8. 加入红细胞裂解液，在冰上孵育后，再次离心（1000rpm，5分钟），去上清液。

9. 加入1-2mLRPMI1640培养液，吹打混匀。

进行两次离心（1200rpm，5分钟），去上清液。

10. 加入不完全RPMI1640培养液1mL，得到小鼠肺单细胞悬液。

这个过程需要无菌操作，以避免污染。

制备得到的单细胞悬液可用于后续的实验，如细胞培养、染色或流式细胞术等。

巨噬细胞向肌成纤维细胞转化促进LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺纤维化赵东;查世乾;王易轩;潘舟;于文蓁;胡克【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2024(44)3【摘要】目的探讨巨噬细胞向肌成纤维细胞转化(MMT)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺纤维化过程中的作用。

方法将21只小鼠分为7组:对照组、不同时间点LPS诱导小鼠早期肺纤维化(LPS-PF)模型组和不同时间点氯磷酸二钠脂质体(CL-LIP)干预组(n=3)。

用HE、Masson染色评估各组肺纤维化程度;用免疫荧光检测MMT过程中CD68和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)共标记阳性细胞数量。

骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)分为对照(Ctrl)组和转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(n=3);用RT-qPCR检测各组α-SMA、纤连蛋白(FN)、人I型胶原蛋白(Col1)表达水平。

用Western blot检测各组间α-SMA以及Smad同源物3(Smad3)、磷酸化的Smad3(p-Smad3)蛋白表达量。

结果LPS-PF模型小鼠肺组织第7天Ashcroft评分较对照(Ctrl)组显著增高(P<0.01);但在CL-LIP组中肺纤维化程度较LPS-PF组明显减轻(P<0.05)。

肺组织免疫荧光染色发现,CL-LIP组CD68α-SMA 共标记阳性细胞数较LPS-PF组对应时间点明显减少(P<0.01)。

体外实验中,TGF-β1刺激组48 h、96 h后α-SMA、FN、Col1较对应时间点表达量明显增加(P<0.01)。

检测体内、体外实验中Smad3、p-Smad3的蛋白表达量,发现LPS-PF 组(第7天、第10天)和TGF-β1刺激组(48 h和96 h)均较各自对照(Ctrl)组明显增加(P<0.01)。

结论MMT具有促进LPS诱导模型小鼠肺纤维化的作用,其转化过程可能经Smad3调节。