小鼠皮下脂肪细胞使用说明

小鼠皮下荷瘤标准操作规程小鼠皮下荷瘤（或称移植瘤）实验是一种常用的动物实验方法，用于研究肿瘤生长、药物疗效等方面。

为了保证实验操作的准确性和动物福利的最大化，下面是一份小鼠皮下荷瘤标准操作规程。

一、实验动物1. 鼠种选择：建议使用常用的实验动物品系（如BALB/c、C57BL/6等）。

2. 年龄选择：选择6-8周龄的小鼠，确保其免疫系统和器官发育成熟。

3. 处理：在实验之前，将小鼠隔离一段时间，以适应新环境，并遵循动物实验伦理和相关法规进行处理。

二、荷瘤动物的准备1. 荷瘤细胞株的选择：根据实验目的选择合适的肿瘤细胞株。

细胞株应来源于可靠且经验证的来源，如细胞库、研究机构合作实验。

2. 细胞培养：在符合无菌条件下，将细胞培养在合适的培养基中，保持其活性和稳定性。

3. 细胞计数：使用细胞计数仪准确计算细胞数目，并调整细胞浓度。

4. 细胞检测：定期检测细胞的纯度、鉴定和验证细胞的肿瘤特性。

5. 注射剂量：根据实验需求和细胞特性，确定荷瘤细胞的注射剂量。

三、手术准备1. 操作间的准备：在符合无菌条件下进行手术，准备好所需的实验器具和仪器。

2. 麻醉与镇痛：使用适合的麻醉方法对小鼠进行麻醉，并在手术中给予镇痛以减轻小鼠的疼痛。

3. 无菌操作：实施手术之前，用适当的方法消毒手术台和手术器械。

四、手术操作1. 注射位置选择：选择合适的部位进行皮下注射（如腹部、背部），确保容易观察和测量肿瘤的生长。

2. 手术操作流程：(1) 麻醉小鼠并进行镇痛。

(2) 将小鼠定位到手术台上，以固定小鼠的身体。

(3) 使用酒精棉球消毒注射部位。

(4) 使用规格合适的针头将预定剂量的荷瘤细胞注入小鼠的皮下组织中。

(5) 注意注射的角度和深度，避免插入过深或过浅。

(6) 注射完毕后轻轻拍打注射部位以防止荷瘤细胞漏出。

(7) 小鼠苏醒后放回适宜的养护环境。

五、术后护理1. 观察：术后密切观察小鼠的行为和健康状况，特别是对于术后48小时内的小鼠，要加强监测，以及记录并报告任何异常情况。

一、实验背景随着生物科技的发展，干细胞研究已成为医学领域的前沿课题。

脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells，ASCs）作为一种易于获取、增殖能力强、多能性的干细胞，在组织工程、再生医学等领域具有广阔的应用前景。

本研究旨在探讨脂肪干细胞的分离、培养、鉴定及其在组织工程中的应用。

二、实验目的1. 探讨脂肪干细胞的分离、培养及鉴定方法。

2. 研究脂肪干细胞在组织工程中的应用。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：脂肪组织、DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、青霉素、链霉素、抗生素、鼠抗人CD105抗体、鼠抗人CD34抗体、鼠抗人CD29抗体、鼠抗人CD44抗体、鼠抗人CD45抗体等。

2. 实验仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。

四、实验方法1. 脂肪干细胞的分离与培养（1）将脂肪组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，用DMEM/F12培养基清洗3次，去除多余脂肪。

（2）加入0.25%胰蛋白酶消化脂肪组织，37℃水浴消化30分钟，1000r/min离心5分钟，弃上清。

（3）加入DMEM/F12培养基重悬细胞，吹打均匀，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 脂肪干细胞的鉴定（1）采用免疫荧光染色法检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。

（2）采用流式细胞术检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。

3. 脂肪干细胞在组织工程中的应用（1）将脂肪干细胞接种于生物降解支架材料上，构建组织工程化脂肪组织。

（2）将组织工程化脂肪组织植入小鼠皮下，观察其成活情况。

五、实验结果1. 脂肪干细胞的分离与培养成功分离出脂肪干细胞，细胞呈梭形，生长旺盛。

2. 脂肪干细胞的鉴定免疫荧光染色和流式细胞术结果显示，脂肪干细胞表达CD105、CD34、CD29、CD44，不表达CD45。

中国组织工程研究第19卷第6期2015–02–05出版C hi n ese Jo urna l o f Tis sue Engineeri ng Res earch February 5,2015Vol.19,No.6O B x ,S y RT R 5www.CRTER.org侯晓琳，女，1989年生，山西省运城市人，汉族，北京大学航天临床医学院在读硕士，主要从事干细胞移植、消化系疾病方面的研究。

通讯作者：崔梅花，主任医师，副教授，硕士生导师，北京大学航天临床医学院消化科，北京市100049d oi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.06.007[http://www.crter.o rg]中图分类号:R394.2文献标识码:A 文章编号:2095-4344(2015)06-00854-07稿件接受：2015-01-13Hou Xia o-lin,Stud y ing for ma ste r ’s de gree,Dep artment of Gastroe nterolo gy,Pe king Unive rsity Aero space Sch ool o f C lin ical Me dicine,Beijing 100049,ChinaC orresp ond ing a uthor:Cui Me i-hu a,C hie f ph ysicia n,Asso ciate pro f e ssor,Master ’s su pervisor,De partmen t of Gastroe nterolo gy,Pe king Unive rsity Aero space Sch ool o f C lin ical Me dicine,Beijing 100049,China 53小鼠脂肪间充质干细胞的分离培养及肠道归巢侯晓琳1，郁卫东2，崔梅花1，何湘君2，梁君1(1北京大学航天临床医学院消化科，北京市100049；2北京大学人民医院临床分子生物学研究所，北京市100044)文章亮点：1文章创新性地采用胶原酶消化法联合组织块贴壁法从小鼠脂肪组织中有效、快速分离出了脂肪间充质干细胞，其增殖活力良好，具备间充质干细胞的生物学特性，表达CD29、CD44、CD90，不表达CD45，能够向成骨细胞和脂肪细胞诱导分化。

小鼠内脏脂肪细胞小鼠内脏脂肪细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠内脏脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠内脏脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

小鼠内脏脂肪细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

小鼠内脏脂肪细胞其他相关小鼠原代细胞：小鼠小肠粘膜上皮细胞小鼠大隐静脉平滑肌细胞小鼠肺微血管内皮细胞小鼠冠状动脉平滑肌细胞小鼠肺血管平滑肌细胞小鼠大隐静脉内皮细胞小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞小鼠冠状动脉内皮细胞小鼠气管上皮细胞小鼠骨细胞小鼠气管平滑肌细胞小鼠滑膜细胞小鼠肺成纤维细胞小鼠骨骼肌细胞小鼠支气管上皮细胞小鼠表皮细胞小鼠支气管成纤维细胞小鼠真皮成纤维细胞小鼠肺大静脉平滑肌细胞小鼠破骨细胞小鼠肺大动脉平滑肌细胞小鼠皮肤肥大细胞小鼠肺大动脉内皮细胞小鼠前脂肪细胞小鼠肺动脉成纤维细胞小鼠成骨细胞小鼠肺大静脉内皮细胞小鼠关节软骨细胞小鼠气管和支气管上皮细胞小鼠胎儿表皮角质形成层细胞小鼠胰岛细胞小鼠成年表皮角质形成层细胞小鼠胰腺星状细胞小鼠皮下脂肪细胞小鼠胰腺导管上皮细胞小鼠内脏脂肪细胞小鼠颌下腺上皮细胞小鼠脑动脉血管内皮细胞小鼠腮腺细胞小鼠脑动脉血管平滑肌细胞小鼠乳腺上皮细胞小鼠脑静脉血管内皮细胞小鼠胰腺上皮细胞小鼠脑静脉血管平滑肌细胞小鼠甲状腺上皮细胞小鼠脑膜细胞小鼠淋巴管内皮细胞小鼠神经胶质细胞小鼠淋巴成纤维细胞小鼠海马神经元细胞小鼠外周血白细胞小鼠脑微血管内皮细胞小鼠骨髓基质细胞小鼠脑成纤维细胞小鼠食管上皮细胞小鼠神经小胶质细胞小鼠食管平滑肌细胞小鼠雪旺氏细胞小鼠肠动脉内皮细胞小鼠小脑颗粒细胞小鼠肠静脉内皮细胞小鼠嗅鞘细胞小鼠肝实质细胞小鼠视网膜微血管内皮细胞小鼠肝动脉内皮细胞小鼠小梁网细胞小鼠肝动脉平滑肌细胞小鼠视网膜色素上皮细胞小鼠小肠血管内皮细胞小鼠视网膜muller细胞小鼠小肠隐窝上皮细胞小鼠虹膜色素上皮细胞小鼠肝内胆管上皮细胞小鼠晶状体上皮细胞小鼠胃粘膜上皮细胞小鼠角膜上皮细胞小鼠肝窦内皮细胞小鼠视网膜神经节细胞小鼠肝星形细胞小鼠角膜成纤维细胞小鼠直肠平滑肌细胞小鼠脉络膜血管细胞小鼠小肠平滑肌细胞小鼠牙乳头细胞小鼠结肠平滑肌细胞小鼠肝外胆管上皮细胞小鼠肠上皮细胞小鼠肝Kupffer细胞小鼠肠微血管细胞小鼠骨髓间充质干细胞小鼠肠巨噬细胞小鼠下丘脑神经元细胞小鼠子宫内膜上皮细胞小鼠睾丸支持细胞小鼠卵巢颗粒细胞小鼠心肌微血管内皮细胞小鼠子宫颈上皮细胞小鼠真皮微血管上皮细胞小鼠子宫平滑肌细胞小鼠胚胎成纤维细胞小鼠卵巢上皮细胞小鼠心脏干细胞小鼠子宫成纤维细胞小鼠神经干细胞小鼠卵巢成纤维细胞小鼠骨髓来源内皮祖细胞小鼠肾实质细胞小鼠椎间盘髓核细胞小鼠肾系膜细胞小鼠肾足突细胞小鼠膀胱上皮细胞小鼠肾小管平滑肌细胞小鼠膀胱平滑肌细胞小鼠肾成纤维细胞小鼠肾动脉内皮细胞小鼠尿道上皮细胞小鼠肾动脉平滑肌细胞小鼠输尿管上皮细胞小鼠肾小管上皮细胞小鼠肾管状上皮细胞小鼠肾小球内皮细胞小鼠心肌细胞小鼠前列腺上皮细胞小鼠心肌成纤维细胞小鼠肾上皮细胞小鼠主动脉内皮细胞小鼠膀胱成纤维细胞小鼠主动脉平滑肌细胞小鼠血管外膜成纤维细胞。

皮下移植瘤实验步骤
1、提前2-5个工作日与细胞房人沟通好收细胞时间，收到细胞后，用锡箔纸包裹EP管。

2、将接种所用的细胞、注射器和记录纸等带去动物房，放进传递窗，喷酒精，照紫外线灭菌10min。

3、用1ml注射器吸取适量培养基与细胞轻轻吹打混匀（吸取量视所需接种体积确定）。

4、抓起裸鼠，于裸鼠左侧腋窝处皮下注射，接种对照组细胞，右侧接种实验组细胞，接种体积均为0.1ml。

5、把耳标放入打孔器中，用手抓起固定好裸鼠，用打孔器把耳标固定在裸鼠耳朵上。

6、称重，并登记好相应信息。

7、每三天称量一次裸鼠体重，成瘤后每三天用游标卡尺测量一次肿瘤长径和短径，将相应数值填写在记录纸上。

8、待肿瘤生长至合适大小，用CO2处死小鼠，按照实验结果摆拍裸鼠（如图）
9、用手术剪剪开裸鼠肿瘤周围皮肤，用组织镊小心分离肿瘤附近组织，将剥离出来的肿瘤放在垫了锡箔纸的冰上。

待所有肿瘤都取下后，称重，记录数据，按照实验结果摆拍（如图）
10、选取其中差异大的三组，将肿瘤小心分为两部分，一部分4%PFA固定，一部分放已灭菌离心管冻存。

剩余组织放已灭菌离心管冻存。

（需要冻存的组织放进EP管后要插入冰盒的冰里）
11、将组织带回公司，需要冻存的放进-80°C，并填写《-80°C动物组织存放表》。

小鼠皮下注射操作流程
一准备工作：
1.确保实验室环境整洁。

消毒，并穿戴手套口罩。

2.准备所需的器材和试剂，包括小鼠、注射液、注射器、等。

二注射液准备：
1.根据实验需要准备好相应量的注射液。

2.将注射液吸入注射器中，并排出气泡。

三小鼠准备：
1.使用合适的方法将小鼠固定，如可以食指拇指捏颈部无名指小指抓尾。

2.检查小鼠的健康状况，确保适合进行皮下注射（生命力力充沛无残疾无影响实验疾病）。

四皮肤消毒：
1.使用消毒剂（如酒精）擦拭小鼠的注射部位，确保皮肤表面干净。

五注射操作：
1.头部三角区皮下注射按压固定小鼠平行注射。

2.腹侧皮下注射反转小鼠使其肚皮朝上，将注射器的针头刺入皮下组织约1.5cm，角度约为15°—25°（根据需要调整）。

3.针尖上挑确认针头所处位置为皮下。

4.缓慢推进注射液，注意不要快速注入，以免造成压力过大伤害小鼠组织或出现鼓包情况。

5.等待注射完成后，缓慢拔出注射器。

六完成操作：
1.观察注射部位是否有出血或者漏液情况。

2.将小鼠放回恢复笼中，观察其恢复情况。

3.针头注射器按规定丢弃。

小鼠脂肪干细胞提取方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述：随着干细胞研究领域的不断深入，小鼠脂肪干细胞作为一种重要的干细胞资源备受关注。

小鼠脂肪干细胞具有较高的分化潜能和增殖能力，可广泛应用于再生医学、组织工程和疾病治疗等领域。

提取小鼠脂肪干细胞是进行相关研究的基础和关键步骤，因此本文将详细介绍小鼠脂肪干细胞的提取方法及其在研究中的应用。

通过深入探讨小鼠脂肪干细胞的重要性和相关提取方法，旨在为读者提供实用的研究参考和启发，促进小鼠脂肪干细胞研究领域的进一步发展。

1.2 文章结构本文主要分为引言、正文和结论三部分。

在引言部分，将介绍小鼠脂肪干细胞的重要性，并简要阐述文章的结构和目的。

正文部分将详细介绍小鼠脂肪干细胞提取方法，包括提取的步骤、操作注意事项和实验流程。

同时还会探讨小鼠脂肪干细胞在研究中的应用，如在生物医学研究中的作用和潜在应用价值。

在结论部分，将对提取方法的重要性进行总结，并展望小鼠脂肪干细胞研究的未来发展趋势。

最后，对整篇文章进行总结，强调小鼠脂肪干细胞研究的重要性和潜在价值。

1.3 目的小鼠脂肪干细胞作为一种重要的细胞资源，在干细胞研究领域具有广泛的应用价值。

本文旨在探讨小鼠脂肪干细胞的提取方法，为相关研究人员提供可操作的实验指导，推动小鼠脂肪干细胞研究的进展。

同时，通过总结现有提取方法的优缺点，展望未来小鼠脂肪干细胞研究的发展方向，为更深入的研究提供理论基础和实践指导。

通过本文的阐述和分析，旨在促进小鼠脂肪干细胞领域的持续发展，推动干细胞研究的进步。

2.正文2.1 小鼠脂肪干细胞的重要性:小鼠脂肪干细胞是一种来源于小鼠脂肪组织的多能干细胞，具有很高的潜在应用价值。

首先，小鼠脂肪干细胞具有自我更新和多向分化的能力，可以分化成多种细胞类型，如脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，这使得它们在再生医学领域具有重要意义。

其次，小鼠脂肪干细胞来源广泛，并且易于提取和培养，这为研究人员提供了便利。

小鼠皮下注射（SC,SQ）方法
•保定小鼠背部朝上，拇指与食指夹住小鼠颈背侧皮肤。

•注射针自小鼠头部向尾部方向进入，插入被提起的颈背侧皮肤形成的三角区。

•
针头可轻轻向左右摆动，如果很容易摆动就表示进入皮下，再轻轻抽吸，观察到没有回血后即可缓慢地将药物推入。

•为防止药物外漏，推入药物后，可让针头在皮下停留几秒钟；拔针时，保定手的拇指与食指捏住进针部位片刻。

•皮下注射的吸收比其他途径（比如静脉注射或腹腔注射）要慢。

注射的药物应该调至生理pH且无刺激性。

小鼠内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：96T3µg/L-160µg/L小鼠内皮脂肪酶(EL)检测试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。

用纯化的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，再与HRP标记的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度。

试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（320µg/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

160µg/L5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液80µg/L4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液40µg/L3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液20µg/L2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液10µg/L1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。

小鼠脂肪分区小鼠的脂肪分区呀，这可有趣得很呢。

咱先来说说小鼠这个小可爱吧。

小鼠小小的一只，看着就特别萌，可它身上的脂肪分区却有着大学问。

小鼠的脂肪大概可以分成几个不同的区域呢。

比如说皮下脂肪，这就像是小鼠给自己穿的一件小棉袄，就在皮肤的下面。

你可以想象一下，就像我们人穿的那种薄薄的打底衫一样，紧贴着身体。

这个皮下脂肪呢，它有自己的小作用。

它可以帮助小鼠保暖呀，在那些有点冷的环境里，皮下脂肪就像个小火炉一样，默默地散发着温暖，让小鼠不会冻得瑟瑟发抖。

再讲讲内脏周围的脂肪吧。

这部分脂肪就像是内脏的小保镖。

它把小鼠的那些重要内脏器官，像心脏呀、肝脏呀、肠胃呀，都小心翼翼地包裹起来。

你看，这就很像我们给那些珍贵的东西包上一层软软的棉花一样，起到保护的作用呢。

要是小鼠不小心摔了一跤或者受到点小碰撞，这内脏周围的脂肪就能缓冲一下，不让内脏受到太大的伤害。

而且呀，这些内脏周围的脂肪还能储存一些能量，就像小鼠的小仓库一样。

当小鼠一时半会儿找不到食物的时候，这个小仓库就能提供能量，让小鼠还能继续活蹦乱跳的。

还有一个区域的脂肪也很特别，就是小鼠的骨髓脂肪。

这个骨髓脂肪就像是住在小鼠骨头里的小精灵。

它虽然不太起眼，但是对于小鼠的健康也有着重要的意义呢。

骨髓脂肪和小鼠的造血功能呀，骨骼的健康呀，都有着千丝万缕的联系。

如果骨髓脂肪出现了问题，那小鼠的骨头可能就没那么强壮了，造血功能也可能会受到影响。

这就好比一个团队里的小螺丝钉，虽然小，但是少了它，整个机器可能就运转不顺畅了。

我们再来聊聊这些脂肪分区之间的联系吧。

它们就像是一个大家庭里的不同成员，虽然各自有着自己的工作和小地盘，但是彼此之间又相互联系、相互影响。

比如说，皮下脂肪要是太多或者太少，可能就会影响到内脏周围脂肪的状态。

就像家里的老大要是出了问题，可能老二老三也会跟着有点状况。

而内脏周围脂肪要是不正常了，也可能会让骨髓脂肪跟着闹别扭。

它们之间就这么相互牵连，共同维持着小鼠身体这个小世界的平衡。

小鼠内皮脂肪酶（EL）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：6.25ng/ml-400ng/ml最低检测限：1.56ng/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的小鼠EL，且与其他相关蛋白无交叉反应。

有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中EL含量。

说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗EL抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗EL抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的EL呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）。

7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）。

8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

小鼠皮下注射操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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小鼠皮下瘤实验步骤
嘿，咱今儿就来说说这小鼠皮下瘤实验的那些事儿！
你想啊，这小鼠就像是个小小的实验舞台，咱们就是幕后导演，要让这出戏精彩上演呢！
首先，咱得选好咱的主角——小鼠。

要挑那些健康活泼的小家伙，就像选演员得选有灵气的一样。

然后呢，给它们准备一个舒服的家，干净又温暖。

接下来，就是要给小鼠“种瘤”啦！这就好像是给它们安排一个特别的角色。

咱得小心翼翼地把瘤细胞注射到它们的皮下，就像是轻轻地给它们戴上一个特殊的标志。

注射完了可别以为就没事啦！这时候得好好照顾这些小家伙们。

观察它们的吃喝拉撒睡，看看它们有没有不舒服呀，有没有好好长瘤子呀。

这就好比看着自己的宝贝孩子成长一样，得时刻留意着。

过了一段时间，瘤子长起来啦！就像是果实成熟了一样。

这时候就可以开始各种检测啦！测量瘤子的大小呀，看看它的形态呀，分析里面的成分呀。

这就像给这个瘤子做个全面的体检。

咱做这个实验可不能马虎，得像对待一件珍贵的艺术品一样。

每一个步骤都得认真仔细，不能有一点差错。

要是不小心弄错了，那不就像演戏演砸了一样嘛！
你说，这小鼠皮下瘤实验是不是很有意思呀？虽然有点复杂，但当你看到实验结果的时候，那种成就感，就像自己导演的戏大获成功一样！所以呀，别怕麻烦，好好去做，肯定能收获满满的惊喜呢！。

皮下注射行为对肥胖模型小鼠葡萄糖代谢的影响肥胖是当今社会面临的一大健康挑战，其不仅会引起心血管疾病、糖尿病等多种代谢性疾病的发生，还会给个人的身体和心理健康带来很多负面影响。

怎样改善肥胖状况，减少相关的代谢性疾病发生风险，一直是许多研究的热门话题。

近年来，越来越多的研究表明，皮下注射行为可能会对肥胖模型小鼠的葡萄糖代谢产生重要影响。

首先，皮下注射可以影响机体内的炎症反应。

在肥胖的小鼠身体内，由于过量的脂肪积累，会导致机体产生慢性低度炎症反应，加重组织损伤程度，进一步影响葡萄糖代谢。

而一些研究发现，皮下注射后可以减少肥胖小鼠的炎症程度，降低血液中的白细胞浓度，改善了机体对葡萄糖的利用情况。

其次，皮下注射还可能影响小鼠内分泌系统的功能。

肥胖常常和内分泌失调密切相关，而一些研究显示，皮下注射对小鼠肝脏内雌激素的生成有重要影响，从而可能改善小鼠体内的代谢状态。

皮下注射还可以提高小鼠体内去甲肾上腺素的生成，进一步增强脂肪分解、糖原代谢等代谢过程。

此外，皮下注射还可以调节肥胖小鼠的食欲和运动行为。

肥胖小鼠往往有较强的食欲和较低的运动能力，而皮下注射后可以逐渐提高小鼠的运动能力，帮助小鼠加强运动锻炼，加速体内储存的脂肪和糖原的消耗，降低小鼠的体重，改善小鼠代谢状态。

总之，皮下注射行为对肥胖模型小鼠葡萄糖代谢的影响可能与多种机制有关，包括调节小鼠内分泌系统、减轻炎症等方面。

不过需要注意的是，皮下注射行为可能会引起一些副作用，如注射位点的疼痛、局部感染等。

因此在进行皮下注射行为时，需要谨慎操作，选择合适的注射位置和注射方式，并且注意每次注射之间的间隔时间，保证小鼠的健康和安全。

小鼠脂肪组织形态学小鼠脂肪组织形态学，这个话题看起来有点儿沉甸甸的，但咱们可以把它聊得轻松点。

咱们得知道，脂肪组织对小鼠来说，不仅仅是那些软乎乎的“肉肉”或者是储备能量的地方。

它其实还有不少“内幕”。

大家常常一提到脂肪，就想到了“大肚腩”，可是在小鼠身上，这些脂肪可不仅仅是为了让它们变胖。

脂肪组织在小鼠体内可是一个“多面手”，既负责储存能量，又参与激素调节，甚至还能在免疫反应中发挥一定作用。

你看看这些小家伙，虽然它们个头小，但是脂肪组织的结构可真不简单。

一般来说，小鼠的脂肪组织分布得还挺广泛的，尤其是皮下脂肪和内脏脂肪。

皮下脂肪就像是小鼠身上的“防护服”，给它们提供一些缓冲和保温的作用。

你别看小鼠个头小，万一它们跑出去，外面寒冷的空气可不是开玩笑的，这层脂肪就成了它们的“暖宝宝”。

不过，脂肪组织的作用可不仅仅局限于温暖，有时候还会充当“小小库房”，帮助小鼠储存它们的能量。

而内脏脂肪，嗯，说实话，它更像是“幕后老板”，虽然平时看不见摸不着，但它却负责着调节身体的各项重要功能。

说到这里，也许你会问了，脂肪组织到底是怎么运作的呢？其实脂肪组织的“内部结构”也挺有意思的。

它们有一种叫做“脂肪细胞”的东西，像小袋子一样，里面储存着油脂，别看这些脂肪细胞看似不起眼，它们可是有很多功能的。

比如，它们不仅能储存能量，还能分泌各种激素，这些激素能影响小鼠的食欲、代谢，甚至是免疫系统。

所以，脂肪细胞并不是“只会吃”的角色，它们可是一群“能人”。

其实脂肪的“增生”问题，咱们人类是最有发言权的，毕竟谁没试过吃一顿大餐，过后发现自己好像变成了气球一样。

不过，脂肪的形成和分布，在小鼠身上就显得更有意思了。

你可能不知道，小鼠的脂肪细胞是通过增生和膨胀的方式来储存脂肪的。

就像是你把一堆气球吹得大大的，这些脂肪细胞就像气球一样，越吹越大。

它们可以通过膨胀来储存更多的脂肪，直到它们的容量达到一定的限度。

到了那个时候，脂肪细胞就不再膨胀了，它们开始增加数量，也就是新建更多的“气球”。

小鼠体脂率分析仪安全操作及保养规程小鼠体脂率分析仪是进行实验研究时常用的设备之一，其具有高效、精准、稳定等特点。

使用者在使用仪器的同时需要注意其安全操作和保养，以保证其正常工作和延长使用寿命。

本文将介绍小鼠体脂率分析仪的安全操作及保养规程。

一、安全操作规程为了避免在使用过程中出现意外事故，使用者需要遵守以下的规程：1. 严格按操作说明操作在使用小鼠体脂率分析仪前，使用者必须认真阅读操作说明，了解设备的性能、结构、使用方法、操作流程和注意事项等内容。

2. 使用前检查仪器是否正常使用者在开始操作前，应该检查设备各个部位、电缆和接头是否完好无损，以及仪器电源是否正常，以确保设备正常工作。

3. 禁止拆卸仪器小鼠体脂率分析的仪器处于高精度的电子设备，使用者对其进行拆卸可能会造成设备损坏或个人伤害，禁止未经授权的拆卸、维修和改动。

4. 使用正确型号电源为了保证设备的正常工作，使用者必须使用正确的电源适配器，并按照使用说明对电源进行正确的连接。

5. 使用时保持清洁、干燥、稳定使用小鼠体脂率分析仪时，使用者须放置于平稳表面上，在设备表面不要放置水杯、笔记本电脑等东西，以免影响仪器的稳定性和出现误差。

二、保养规程为了延长小鼠体脂率分析仪的使用寿命，需要定期对设备进行清洁和维护。

以下为设备保养的规程：1. 定期清洁使用者需要在每次使用后将设备表面进行清理和消毒，保证设备表面干净。

如果在操作过程中出现了沾染污物的情况，需要在使用前将其清理干净，避免对设备的影响。

2. 定期维护小鼠体脂率分析仪需要定期进行校验和校准，以保证设备的测量数据准确。

如果出现了测量异常的情况，需要及时通知维护人员进行检修和处理。

3. 妥善保存在使用小鼠体脂率分析仪时，需要将设备保存在干燥，通风，温度稳定的环境之中，在停用设备之前需要考虑将其断电并拔掉电源接口。

4. 维修与更换如果在使用小鼠体脂率分析仪时发现设备出现了故障并无法正常使用，需要联系相关的维修人员进行回收和维修，不得私自更换器件或进行维修操作。

User ManualOriCell TM C57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem CellsCatalog No.MUBMD-01001IntroductionAdipose-derived mesenchymal stem cells are a type of pluripotent stem cells that exist in adipose matrix.Because of its strong value-added ability and immune regulation function,it is widely used in the fields of tissue engineering,cell therapy and gene therapy.As a research hotspot,C57BL/6mouse adipose-derived mesenchymal stem cells are widely used in regenerative medicine and tissue engineering,especially in the fields of bone, cardiovascular and nervous system diseases.OriCell TM C57BL/6mouse adipose-derived mesenchymal stem cells are taken from the inguinal fat of C57BL/6mouse.These cells can express specific proteins of ADSCs and have strong proliferation and multidirectional differentiation capabilities.It can be used as a cell model to study proliferation,aging,immunity,differentiation and transplantation.Note:This product is only provided for further scientific research.It is not intended for diagnostic,therapeutic,clinical,household,or any other applications.Product InformationName OriCell TM C57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells Catalog Number MUBMD-01001Amount of Cells1×106cells/vialPassage Number P2Storage at Liquid Nitrogen（-196℃）The Shape of OriCell TM C57BL/6Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem CellsQC●Pass the detection of bacteria,fungi,mycoplasma,and endotoxins.●Pass the viability examination.The viable rates is higher than80%.●The cell doubling time is less than72hours.●Flow cytometry showed that,CD29、CD44、Sca-1are positive(>70%),CD117、CD31is negative(<5%).●The cells can be induced to differentiate into osteoblasts,adipocytes,chondrocytes,etc.Please reference"COA"for details.General Handing Principles1.Ensure that all equipments are kept clean and tidy.2.Please Follow the instructions.e suitable and reliable consumables and reagents.4.Adipose-derived mesenchymal stem cells have limited ability to proliferate in vitroand cannot maintain their differentiation potential for a long time.OriCell TMC57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells can be passaged formore than5times and still maintain all indicators qualified.But we alwaysrecommend using lower generation cells for scientific research.ually the inoculation density of mouse adipose-derived mesenchymal stem cellsis(2.5~4)×104live cells/cm2.Note:The cryopreservation solution of this product contains DMSO,which has potential risks.Please handle it carefully.Thawing and Establishing of CellsMaterials Required●OriCell TM C57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells●OriCell TM C57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells Complete Medium(MUXMD-90011)StepsNote:If the received cells are thawed within24hours,they can be stored in a refrigerator at-80°C.If more than24hours,please store them in liquid nitrogen. Please take them out10minutes early before thawing and place them at-80°C to allow the liquid nitrogen in the tube to evaporate.1.Preheat the water bath at37°C.2.Warm the complete medium to37°C.3.Add more than5mL of complete medium to a15mL centrifuge tube for use.4.Take the cells out of the-80°C refrigerator,put them in a37°C water bath andshake them quickly to thaw the cryopreservation solutionNote:During the thawing process,the cryotube must be shaken to ensurethat solution melts quickly and evenly.5.When shaking,please avoid water immersing the pipe cover to cause pollution.6.When the cryopreservation solution has thawed into ice crystal with a diameter ofabout2mm,stop the water bath.Continue to shake the cryotube until the icecrystal melts thoroughly.7.Wipe the outer surface of the cryotube with75%medical alcohol.8.Open the cryopreservation tube in the ultraclean bench,use a Pasteur pipette tosuck the cell suspension,and transfer it to the prepared centrifuge tube.9.Wash the cryotube once with1mL of complete medium to collect residual cells toreduce loss.10.Centrifuge the cell suspension at250×g for4minutes.11.Remove the supernatant after centrifugation.Add2mL of complete medium,gently pipette the cell pellet,blow and mix thoroughly.12.Inoculate the cells into a T25flask or a culture container with an equivalent bottomarea.Add enough complete medium,the total amount of medium in a T25flaskshould not less than5mL.13.Shake the cells well and incubate them in a CO2incubator at saturated humidity,37°C,5%CO2inside.Note:Do not move or observe the cells within2hours of inoculation.Thiswill seriously affect cell adhesion,resulting in poor shape,cell clumping,and uneven adhesion.14.On the next day of recovery,observe the cell status,and replace medium withfresh complete medium or passage.Note:If you find lots of floating cells or other abnormal conditions,pleaseinvestigate the cause in time and contact us.15.Then refresh the complete medium every2days until the cells have grown to90%confluence,which requires passage generarion.Passaging of CellsMaterials Required●OriCell TM0.25%Trypsin-0.04%EDTA(TEDTA-10001)●OriCell TM Phosphate-Buffered Saline(1×PBS)(PBS-10001)●OriCell TM C57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells Complete Medium(MUXMD-90011)Steps1.Preheat complete medium and Trypsin to37°C.2.Move the medium in the culture container.3.Wash the cells twice with PBS(approximately3mL for T25flask and6mL for T75flask).Please perform relatively slightly and wash thoroughly.Move the PBS.4.Add Trypsin(approximately1.5mL for T25flask and3mL for T75flask),spreadquickly to ensure full contact with the cells.5.Observe the cells under a microscope.After about70%~80%of the cells haveshrunk and round,tap the outer wall of the culture vessel to remove the cells fromthe culture surface.6.Add complete medium(approximately3mL for T25flask and6mL for T75flask)immediately,and then slightly shake the culture container to mix the medium and Trypsin quickly to stop the digestion.e a pipette to suck up the cell suspension,pipetting the bottom surface of theculture container several times,and pipetting down as much as possible of the cells.Note:The pipetting action should not be violent.8.Transfer the cell suspension to a centrifuge tube.Wash the container once withPBS(approximately3mL for T25flask and6mL for T75flask)to collect residual cells.9.All the collected cell suspensions are centrifuged at250×g for4minutes.10.Remove the supernatant after centrifugation.Add2mL of complete medium,gently pipette the cell pellet,blow and mix thoroughly.11.Inoculate the cells into a suitable culture container at(2.5~4)×104live cells/cm2,oradjust the passage ratio according to the actual growth of the cells.Note:OriCell TM C57BL/6Mouse Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells usually have a passage ratio of1:3,and they will grow to reach confluence within72hours.12.Shake the cells well and incubate them in a CO2incubator at saturated humidity,37°C,5%CO2inside.13.Then refresh the complete medium every2days until the cells have grown to90%confluence,which requires passage generarion or frozen.Note:Under normal conditions,the growth time of C57BL/6Mouse adipose-derived mesenchymal stem cells does not exceed72hours per generation, and there is no need to change the medium.Frequent fluid changes will destroy the built-up cellular micro-environment.Cryopreservation of CellsMaterials Required●OriCell TM NCR Protein-Free Cryopreservation Medium For General Use(NCPF-10001)●OriCell TM Cryopreservation Medium For General Use(CYRO-10001)Steps1.If you choose OriCell TM Cryopreservation Medium For General Use,please put theFreezing Containers in the refrigerator at4°C before next process.2.The cells are cryopreserved after growing to appropriate density that can bepassaged.3.For cell digestion,please refer to OriCel lTM C57BL/6Mouse Adipose-derivedMesenchymal Stem Cells“Passaging Steps1~9”.4.The cells are uniformly suspended with an appropriate amount of cryopreservedsolution,then the supernatant is removed after centrifygation.5.The cells are divided into cryopreservation tubes based on proportion or quantity.6.If you choose OriCell TM Cryopreservation Medium For General Use,put thecryotube in the Freezing Containers,and then put the Freezing Containers in the-80°C refrigerator.If you choose OriCell TM NCR Protein-Free CryopreservationMedium For General Use,please disperse the cryopreservation tube directly intothe refrigerator at-80°C.Note:During the cryopreservation of cells,especially within4hours of thebeginning,the refrigerator door should not be opened,which will seriouslyaffect the survival rate of cells.7.After8hours,cells can be transferred to liquid nitrogen for long-term storage.Note:We suggest that the storage time in the refrigerator at-80°C shouldnot exceed48hours.Cyagen Biosciences(GuangZhou)Inc.reserves all rights to the technical documents of OriCell TM cell culture products.Without the written permission of Cyagen Biosciences(GuangZhou)Inc. any part of this document shall not be adapted or reprinted for other commercial purposes.。

小鼠皮下脂肪细胞小鼠皮下脂肪细胞产品说明：为使能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠皮下脂肪细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠皮下脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

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小鼠皮下脂肪细胞注意事项：1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

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培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

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小鼠皮下脂肪细胞产品简介：1、产品名称：小鼠皮下脂肪细胞2、组织来源：小鼠脂肪组织3、产品规格：5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠皮下脂肪细胞简介：小鼠皮下脂肪细胞来源于小鼠脂肪组织，皮下脂肪细胞主要功能：（1）脂肪细胞能储存能量并参与身体代谢。

（2）脂肪细胞分化是一个发展的过程，它对代谢稳态和营养信号很重要。

（3）前脂肪细胞存在于小鼠脂肪组织中，能根据能量的平衡增殖和分化成熟的脂肪细胞。

前体细胞的增殖和分化能够增加脂肪组织的体积。

（4）前脂肪细胞与脂肪分化以及许多生理病理过程密切相关，如脂肪代谢、能量平衡、肥胖、糖尿病、高血脂和乳癌，所以小鼠皮下脂肪细胞对这些疾病的研究提供素材。