小鼠冷冻精子复苏协议校内

《褪黑素在小鼠卵巢组织玻璃化冷冻复苏中的保护作用》篇一一、引言随着生物医学技术的不断进步，生殖医学领域中对于小鼠等实验动物卵巢组织的保存与复苏技术显得尤为重要。

玻璃化冷冻技术作为一种新兴的保存方法，以其高效率、低损伤的特点在实验研究中得到广泛应用。

然而，在冷冻复苏过程中，卵巢组织常面临损伤和功能丧失的风险。

近年来，褪黑素作为一种具有抗氧化、抗凋亡特性的生物活性物质，其在冷冻保存中潜在的保护作用引起了科研工作者的广泛关注。

本篇论文主要探讨了褪黑素在小鼠卵巢组织玻璃化冷冻复苏过程中的保护作用及其潜在机制。

二、材料与方法1. 材料准备本实验选用小鼠卵巢组织作为研究对象，并使用玻璃化冷冻技术进行保存和复苏。

同时，选用不同浓度的褪黑素作为实验处理组。

2. 实验方法（1）将小鼠卵巢组织分为对照组和不同浓度的褪黑素处理组；（2）使用玻璃化冷冻技术对各组卵巢组织进行冷冻保存；（3）在复苏后对各组卵巢组织进行形态学观察和功能评估；（4）利用生物化学手段检测各组卵巢组织在冷冻复苏后的损伤程度和细胞凋亡情况；（5）分析褪黑素对卵巢组织冷冻复苏后细胞存活率的影响。

三、实验结果1. 形态学观察与功能评估通过显微镜观察发现，褪黑素处理组的小鼠卵巢组织在冷冻复苏后，其形态结构保持得更为完整，卵泡数量和形态均优于对照组。

功能评估结果显示，褪黑素处理组的卵巢组织在复苏后的激素分泌水平和生殖能力均有所提高。

2. 生物化学检测结果生物化学检测结果显示，与对照组相比，褪黑素处理组的卵巢组织在冷冻复苏后的细胞凋亡率明显降低，同时抗氧化能力显著增强。

此外，褪黑素处理组的卵巢组织在冷冻过程中的损伤程度也相对较低。

3. 细胞存活率分析通过细胞存活率分析发现，随着褪黑素浓度的增加，小鼠卵巢组织在冷冻复苏后的存活率呈上升趋势。

尤其是在高浓度褪黑素处理组中，卵巢组织的存活率显著高于对照组。

四、讨论本实验结果表明，褪黑素在小鼠卵巢组织玻璃化冷冻复苏过程中具有显著的保护作用。

7日龄小鼠生精上皮单细胞冷冻保存李莲军;李德雪;张学明;文兴豪;岳占碰;王延钊【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2002(22)1【摘要】在 DMEM中添加 10 %小牛血清 (NBS) ,并分别添加不同浓度的抗冻剂二甲基亚砜 (DMSO)、丙二醇 (PG)、乙二醇 (EG)及甘油 (G) ,对 7日龄小鼠生精上皮单细胞进行冷冻保存 ,复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。

结果 :当冻存液中DMSO分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %、2 5 %时 ,细胞复苏率分别为 77.1%、88.2 %、86 .5 %、73.5 %、6 5 .5 % ,其中10 %和 15 % DMSO组细胞复苏率最高 ,与其余各组间均差异极显著 (P<0 .0 1)。

当冻存液中 PG分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %、2 5 %时 ,细胞复苏率分别为 6 6 .2 %、84 .3%、72 .1%、6 9.9%、4 7.5 % ,其中 10 % PG组细胞复苏率最高 ,与其余各组间均差异极显著 (P<0 .0 1)。

当冻存液中 EG分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %时 ,细胞复苏率分别为 64 .9%、81.6 %、6 0 .9%、4 4 .7% ,其中 10 % EG组细胞复苏率最高 ,与其余各组间均差异极显著 (P<0 .0 1)。

当冻存液中 G分别为 5 %、10 %、15 %、2 0 %、2 5 %时 ,细胞腹苏率均低于 10 %。

10 % DMSO组细胞复苏率与 10 % PG组和10 % EG组之间均差异显著 (P<0 .0 5 )或极显著 (P<0 .0 1)。

结果表明 ,10 % DMSO、10 % PG及 10 % EG均适宜冷冻保存小鼠精原细胞 ,以 10 % DMSO的冻存效果最好 ,而 G则不适宜冷冻保存。

在含 10 %【总页数】2页(P94-95)【关键词】抗冻剂;冷冻保存;生精上皮;精原细胞;小鼠【作者】李莲军;李德雪;张学明;文兴豪;岳占碰;王延钊【作者单位】解放军军需大学动物科技系【正文语种】中文【中图分类】S814.8【相关文献】1.七日龄小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存 [J], 李莲军;李卫真;尹革芬;龚伟;何志云2.周期素Cyclin G2在小鼠睾丸生精上皮中的表达特点 [J], 海涛;邓泽勋;何锐;张志红;徐倩;3.周期素Cyclin G2在小鼠睾丸生精上皮中的表达特点 [J], 海涛;邓泽勋;何锐;张志红;徐倩4.四种抗冻剂20℃时对小鼠生精上皮单细胞存活率的影响 [J], 李莲军;施江滨;陆峻波5.鸡睾丸生精上皮细胞冷冻保存研究 [J], 采克俊;张易祥;丁志丽;谢小丹;周源;刘莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

利用精子冷冻、体外受精技术进行昆明小鼠育种初探陆　晔1,2,唐一岷1,刘丽均1,毛佳贤1,鲍世民1,符　杰1,谢　恩1,薛智谋2,徐　平1(1.国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心,上海201615;2.苏州大学生命科学学院,苏州215006)摘要:在昆明(KM )小鼠标准化研究中,采集武汉生物制品研究所、上海第一生化制药厂普通级KM 小鼠的精子并冷冻运输,冻融精子与中科院上海实验动物中心KM 雌鼠的超排卵体外受精(IVF)得到杂交一代2细胞胚胎,用中科院动物中心KM 鼠冻融精子对照。

无菌条件下2细胞胚胎移植入SPF 级假孕鼠,受体饲养于独立通气笼具(IVC )中。

平均产仔率为51.9%,离乳率100%。

三种群12周龄KM 雄鼠精子冷冻复苏率,IVF 率,移植成绩均无显著差异(P >0.05)。

仔鼠经微生物、寄生虫学检测达SPF 标准。

结果表明,利用冷冻精子,通过IVF 、胚胎移植能够方便快速的建立种群间杂交一代,并实现生物净化。

关键词:KM 小鼠;精子冷冻;育种;生物净化中图分类号:Q95-33　文献标识码:A 文章编号:1004-8448(2004)01-0016-03收稿日期:2003-08-12基金项目:国家科技部基础性工作专项基金项目(2001EDA 0001)作者简介:陆　晔(1977-),女,硕士研究生,研究方向:细胞生物学通讯作者:徐　平,研究员,xuping @slaccas .co m 。

小鼠精子低温保存在1990年代才获成功[1～3],是目前仍在不断发展的胚胎工程新技术。

精子冷冻用于动物品系资源的保存,方便又经济,尤其适合不断发展的基因工程小鼠的保种。

国际上通过冷冻精子的交换,交流各种新的基因工程小鼠品系资源,避免活动物运输造成疾病传播的危险和气候,亦节约了运输和检验检疫等费用[4]。

KM 小鼠是我国使用最多的小鼠品种,广泛地应用于药理学、毒理学、药品、生物制品生产、检定中。

冷冻细菌复苏操作流程引言：冷冻细菌的复苏操作是一种常用的实验技术，用于从冷冻状态中恢复细菌的生活活性。

本文将介绍一种常见的冷冻细菌复苏操作流程，以帮助读者了解该技术的步骤和原理。

一、准备工作在进行冷冻细菌复苏操作之前，需要做一些准备工作，确保实验的顺利进行。

首先，准备所需的试剂和材料，包括LB培养基、冷冻保存的细菌样品、离心管、烧杯、恒温恒湿箱等。

其次，检查所使用的试剂和材料是否过期或受损，确保其质量良好。

最后，进行必要的消毒操作，以防止污染。

二、解冻细菌样品解冻细菌样品是冷冻细菌复苏操作的第一步。

将冷冻细菌样品从低温保存中取出，迅速放入冰上解冻。

解冻过程中要避免细菌样品受到过长时间的高温暴露，以免细菌的生活活性受到损害。

三、接种细菌解冻后的细菌样品应立即进行接种操作，以保证细菌的生活活性。

取出一定量的细菌样品，加入预先准备好的LB培养基中，并充分混合。

接种时要注意无菌操作，避免细菌样品受到外部环境的污染。

四、培养细菌接种后的细菌样品需要在适当的条件下进行培养，以促进其生长和繁殖。

将含有细菌样品的LB培养基转移到恒温恒湿箱中，设置适当的温度和湿度。

根据所使用的细菌菌株的特性，选择合适的培养条件。

培养的时间可以根据需要进行调整，通常为12-24小时。

五、分离细菌在细菌培养达到一定程度后，需要进行细菌的分离操作。

取出培养好的细菌样品，用离心机进行离心分离。

离心的目的是将细菌从培养基中分离出来，以便后续的实验操作。

离心后，将上清液倒出，保留细菌沉淀。

六、制备细菌悬浮液将细菌沉淀用适量的无菌生理盐水或PBS缓冲液进行悬浮，制备细菌悬浮液。

悬浮液的浓度可以根据实验需要进行调整，通常为OD600=0.5。

制备好的细菌悬浮液可以用于后续的实验操作，如菌落计数、细菌培养等。

七、保存细菌如果需要保存复苏后的细菌样品，可以进行冷冻保存。

将细菌悬浮液加入离心管中，加入适量的甘油或甘露醇作为保护剂，混匀后分装成小份，冻存于-80℃的冰箱中。

代理繁育小鼠协议书甲方：乙方：南京医科大学医药实验动物中心为充分体现南京医科大学医药实验动物中心“科技支撑平台计划”的立项宗旨，支持学科建设，促进我校生物医学及生物医药研究，乙方为甲方提供小鼠代理繁育服务。

经甲乙双方协商，就本次代繁服务达成以下协议：1.甲方委托乙方代其繁育并饲养品系小鼠；2.繁育期限：自年月日起至甲方向乙方提出终止代繁服务的书面要求为止；3.甲方向乙方支付代繁饲养费，收费标准为：①校内课题¥3元/笼/天；②附院非校内课题¥3.5元/笼/天；③校外课题¥5.5元/笼/天。

甲方根据饲养规模提前向乙方预付饲养费，款项由乙方记帐管理；4.甲方需向乙方提供明确的小鼠信息和繁育方案，包括但不限于小鼠编号、出生日期、基因型、表型特点、生育能力、特殊注意事项、合笼小鼠安排等；5.乙方负责甲方小鼠的常规饲养管理；6.乙方负责按照甲方提供的繁育方案进行小鼠合笼、后代小仔剪趾剪尾、淘汰小鼠操作；7.乙方代甲方繁育小鼠产下的后代基因型由甲方负责鉴定，甲方在收到乙方取鼠尾通知后必须在2日内到乙方处取回鼠尾，并于7日内给予乙方小鼠基因型鉴定结果；8.甲方如需取出或转移小鼠，需提前告知乙方，并按照动物中心规定办理相关手续；9.繁殖笼小仔出生后需在21天内进行分笼，生长笼每笼饲养小鼠的数量不超过5只，雌性和雄性小鼠在达到8周龄后可安排合笼；10.基因工程小鼠长期饲养的死亡率约为20%，因此在饲养过程中，若有小鼠发生非人为操作失误而死亡的情况，乙方不承担任何责任；11.乙方应每周一次向甲方汇报小鼠情况，每月一次向甲方汇报费用明细；12.如发生甲方欠费，甲方在收到乙方发出的欠费通知后应于5个工作日内主动办理转账手续，如乙方发出欠费通知30日后甲方仍未办理转账，乙方可终止对甲方小鼠的一切饲养服务；13.如有收费标准调整，乙方应提前30日告知甲方；14.本协议一式二份，甲乙双方各执一份；15.本协议经双方签字并盖章后方可生效执行；16.其他未尽事宜，由甲乙双方友好协商解决。