实验一 显微镜使用和简单染色1_PPT课件

实验三、简单染色法
目的要求
1. 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌 握细菌的简单染色法。 2. 初步认识细菌的形态特征。 3. 学习显微镜（油镜）的使用方法，熟悉 无菌操作技术。
• 简单染色：利用单一染料对菌体进行染色。 • 染料是一类苯环上带有发色基团和助色基 团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征， 后者使染料能形成盐。 • 常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染 料和碱性染料两大类：美蓝（即亚甲蓝）、 结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔 雀绿等都属于碱性染料；酸性复红、伊红 及刚果红属于酸性染料。
显微镜使用操作步骤
1、观察前的准备 2、显微镜观察 3、显微镜使用完毕后的处理
1、观察前的准备
仔细阅读显微镜使用说明书 取镜（一手握镜臂，一手托底座） 显微镜的放置（平放，距边缘约10cm） 熟悉显微镜，检查显微镜 调节光源（光线均匀，亮度适宜） 调节双筒显微镜的目镜 调节聚光器数值孔径 检查显微镜物镜、目镜、聚光器

n 介质折射率 射率大于空气和水，因此，它作介质 时，数值孔径值高于低倍镜和高倍镜。 数值孔径值越大，显微镜最小可分辨距离越小， 即分辨率越高。
使用完毕后的处理
观察完毕，上升镜筒，取下标本片。 先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾 少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜 纸擦去残留的二甲苯。 用绸布擦净显微镜的金属部件。 将各部分还原，关闭电源, 将接物镜转成八字形， 再向下旋。罩上镜套，然后放回镜箱中。 填写显微镜使用记录。
高倍镜观察
将高倍物镜转至镜筒下方 (在转换物镜时，要 从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜 头与玻片相撞) 。 调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细 转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，移 动推动器选择最满意的镜检部位，待油镜观察。 物镜的同焦现象（P44）

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[自读教材· 填要点] 一、铁路，更多的铁路 1．地位
铁路是
交通运输 建设的重点，便于国计民生，成为国民经济
发展的动脉。 2．出现 1881年，中国自建的第一条铁路——唐山 路建成通车。 1888年，宫廷专用铁路落成。 至胥各庄铁 开平
3．发展
(1)原因：
①甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 ②修路成为中国人 (2)成果：1909年 权收归国有。 4．制约因素 政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入 修筑权 。
”；此后十年间，航空事业获得较快发展。
筹办航空事宜
处
三、从驿传到邮政 1．邮政
(1)初办邮政： 1896年成立“大清邮政局”，此后又设
邮传部 邮传正式脱离海关。
，
(2)进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站； 1920年，中国首次参加 万国邮联大会 。
2．电讯 (1)开端：1877年，福建巡抚在 办电报的开端。 (2)特点：进程曲折，发展缓慢，直到20世纪30年代情况才发生变 化。 3．交通通讯变化的影响
二、实验原理---革兰氏染色

当用结晶紫初染 后，像简单染色法一样，所有细菌都被染 成初染剂的蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成 结晶紫一碘的复合物 ，从而增强了染料与细菌的结合力。 当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的 。革兰 氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成， 壁厚、类脂质含量低，用乙醇(或丙酮)脱色时细胞壁脱水、 使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶 紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染 后仍保留初染剂的蓝紫色。革兰氏阴性菌则不同，由于其 细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时， 类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来 ，用复染剂复染后，细胞 被染上复染剂的红色。。

实验显微镜使用及简单染色
【实验目的】
1.学习微生物涂片、染色基本技பைடு நூலகம்，掌握细菌的简单染色法。
2.学习显微镜油镜的使用和镜头的维护方法。
3.建立“无菌操作”的概念，掌握无菌操作相关技术。
4.观察细菌的特殊结构。
【实验原理】
细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。故现将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用更能清楚地观察到细菌的形状及细胞结构。
6观察
【注意事项】
1.注意涂片时，滴生理盐水和取菌不宜过多，涂片要均匀，不可过于浓厚。
2.火焰固定温度要适宜。注意：不可过热，以载玻片不烫手为宜，温度过高会改变甚至破坏细胞的形态。
3.灯光开到最大（适宜即可），光圈调到最大，聚光灯调到最高，油镜头浸入油中。用完必须用擦镜液擦拭油镜头。
单染色法：仅用一种染料染色，可以观察细菌的大小、形态与排列，但不能鉴别细菌（当有多种细菌一起观察时）。
复染色法：用两种以上的染料染色，可将细菌染成不同的颜色。不仅可以观察细菌大小、形态和排列外，还可以鉴别细菌的染色性。
【材料与试剂】
菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌
染料与试剂：石碳酸复红、生理盐水或无菌水
器材：显微镜、接种环、酒精灯、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等
【实验步骤】
1涂片：在洁净的载玻片中央滴一滴生理盐水，用接种环（需要“无菌操作”，在酒精灯周围10-20cm操作，接种环需要灼烧除杂菌）从大肠杆菌上挑取少许菌苔于生理盐水中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1-1.5cm²。
2干燥
3固定
4简单染色
5水洗、吸干

一 目的要求
1 学习制染色片技术，学习简单染色\革兰氏染色原理， 理解着色机理。
2 学习并掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色\革兰氏染色的方法，并能正确染色 4 巩固显微镜油镜的使用方法。
二 基本原理
（一）细菌的简单染色原理 （二）革兰氏染色基本原理
（一）细菌的简单染色原理
细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察， 所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式. 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可 以增强菌体的着色能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均 应维持细胞原有形态。
❖革兰氏染色原理：
第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻 留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时， 肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内， 细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因 其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细 胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。
◆用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色
实验三 细菌的简单染色和 革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰氏染色
一 目的要求 二 基本原理 三 实验材料 四 无菌操作过程 五 操作步骤 六 实验报告 七 思考题
占细胞壁的90%
占细胞壁的10%