实验1特殊显微镜的使用

实验一特殊显微镜的工作原理和使用特殊显微镜是一种能够观察微观尺度物体的仪器，它通过利用光学、电子、声波等原理来放大和显示样品的细节。

特殊显微镜在科学研究、医学诊断、材料分析等领域起着重要的作用。

本文将重点介绍光学、电子和声学显微镜的工作原理和使用。

一、光学显微镜光学显微镜是一种利用可见光作为照明源的显微镜，其主要由物镜、目镜、调焦机构和光源构成。

它的工作原理是通过物镜将样品上的光聚焦到目镜上形成放大的影像。

光学显微镜的使用步骤如下：1.确保显微镜放置在平稳的台面上，并保持垂直。

2.调节光源亮度，使其能够提供足够的照明。

3.将样品放在载物台上，并使用样品夹夹紧。

4.用粗调焦机构将物镜与样品靠近，然后用细调焦机构调节焦距，直到看到清晰的影像。

5.调节目镜，使影像更为清晰。

6.根据需要，可以使用滤光片或偏振片来改变光的属性。

7.使用目镜检查样品，并调节焦距和目镜，如有需要。

光学显微镜的优点是成本较低、易于操作，并且可以观察到样品的活体细胞。

缺点是分辨率有限，仅能观察到大约200-300纳米的细节。

二、电子显微镜电子显微镜是一种利用电子束取代可见光来照射样品的显微镜，它可以提供比光学显微镜更高的分辨率和放大倍数。

电子显微镜的工作原理是通过电子束的散射、透射和反射来获得样品的影像。

具体而言，电子束通过电子枪产生，然后经过准直系统和电子透镜聚焦。

在样品中穿透或被散射后，电子束最终落在屏幕或探测器上生成影像。

电子显微镜的使用步骤如下：1.准备样品，通常需要制备薄片并清洁表面。

2.打开电子显微镜，等待其预热。

3.将样品放置在样品台上，并将其安装在显微镜中。

4.调节电子束的对焦，使其尽可能锐利。

5.对样品进行调节，以便获得所需的放大倍数和分辨率。

6.观察和记录样品的影像，可以使用照相机或电子影像探测器。

电子显微镜的优点是具有更高的分辨率和放大倍数，可以观察到更小的细节，如原子尺度。

缺点是设备复杂、操作困难，并且样品必须处于真空环境中才能进行观察。

实验一显微镜油镜的使用及微生物基本实验技术实验一显微镜油镜的使用及微生物基本实验技术一、实验目的1. 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术。

2. 了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。

3. 掌握微生物实验的操作技能。

二、实验内容：1．学习油浸系物镜的使用方法。

2．用油镜观察细菌和酵母菌染色装片。

3. 学习微生物实验的操作技能。

三、实验材料和用具细菌三型、酵母菌染色装片；显微镜、香柏油、擦镜液、擦镜纸；试管、培养皿、移液管、纱布、棉花等。

四、操作步骤（一）显微镜油浸的使用1．将显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为4cm，坐正。

2．调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm 左右。

转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平面镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。

观察染色装片时，光线宜强；观察末染色装片时，光线不宜太强。

3. 低倍镜观察染色装片首先下降镜台，将酵母菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至低倍镜正下方，镜台升至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使镜台下降至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。

移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。

4. 高倍镜观察染色装片眼睛离开目镜从侧面观察，旋转物镜转换器，将高倍镜转至正下方，注意避免镜头与玻片相撞。

再由目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适宜。

用细调节器校正焦距使物镜清晰为止。

将最适宜观察部位移至视野中心。

不要移动装片位置，准备用油镜观察。

5. 油镜观察染色装片提起镜筒约2cm，将油镜转至正下方。

在玻片标本的镜检部位(镜头的正下方)滴一滴香柏油；从侧面注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不扩大为止，镜头几乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头；将光线调亮，从目镜观察，用粗调节器将镜台徐徐下降(切忌反方向旋转)，当视野中有物像出现时，再用细调节器校正焦距。

细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。

2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。

二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。

暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。

暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。

相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。

相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。

0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。

三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。

四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。

（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。

（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。

倒置显微镜的使用方法：1.将亮度调节柄调至最小位置，接通电源，打开开关，再将亮度调节柄调至适中位置。

2.将样品置于载物台上，调节载物台纵横移动手轮，确定观察目标的位置。

3.将10X物镜置入光路，通过目镜观察，粗调焦使成像清晰。

将高倍物镜置入光路，右目镜观察，微调焦使成像清晰。

用左目镜观察，调整其上的视度调节圈，使成像清晰。

4.双手握左右相对转动，调整瞳距（双像重合）。

5.调节灯丝成像居中，然后观察样品。

相差显微镜的使用方法：1.将相差聚光镜转盘转至“0”标记处。

2.将亮度调节柄调至最小位置，接通电源，打开开关，再将亮度调节柄调至适中位置。

3.将样品置于载物台上，调节载物台纵横移动手轮，确定观察目标的位置。

4.把绿色滤色镜放入镜座的视场光阑转圈上。

5.将10X物镜置入光路，通过目镜观察，粗调焦使成像清晰。

将高倍物镜置入光路，右目镜观察，微调焦使成像清晰。

用左目镜观察，调整其上的视度调节圈，使成像清晰。

6.双手握左右相对转动，调整瞳距（双像重合）。

7.将相差聚光镜转盘转至“10”标记处，并将10X相差物镜置入光路。

（更换物镜倍数时，相差聚光镜转盘要转至匹配的数值）8.取下目镜，换上对中目镜（CT望远镜），旋松对中目镜上的螺钉并轴向抽动，使相板圆环和光阑圆环清晰，锁紧对中目镜上的螺钉。

9.调节相差聚光镜转盘两侧的调节扳手，左右推动，直至相板圆环和光阑圆环重合。

10.取下对中目镜（CT望远镜），换上目镜进行相差观察。

荧光显微镜的使用方法：1.将滤片转换拉杆拉至“E”位置，然后按倒置显微镜的使用方法中1－4步骤调整一起，作明场观察。

2.将汞灯电源箱上的电源接通，关闭荧光落射装置上的视场光阑拉杆，关闭显微镜右侧底座电源开关，开启汞灯电源开关，10分钟后，汞灯点燃至稳定状态，方可开始使用。

3.将25X荧光物镜置入光路，将滤片转换拉杆拉至所需位置，即蓝光（B）获绿光（G）的位置上。

4.将荧光落射装置上的视场光阑拉杆开至最大，粗调焦使成像清晰，观察荧光。

实验一显微镜的使用和微生物形态的观察一、目的要求1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。

2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。

3、观察各种染色标本，认识微生物的基本形态和特殊结构。

二、基本原理显微镜包括普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

微生物个体微小，难于用肉眼观察形态结构，只有借助显微镜，才能对其进行研究和利用。

普通光学显微镜是一种精密的光学仪器，是观察微生物最常用的工具。

细菌等原核细胞型微生物个体微小，一般需要使用油镜观察其形态结构。

而油镜头晶片极小，投入光线少，从载玻片透过光线，又被空气折射（空气折光广率1.00、玻璃折光率为1.52），更不易射入镜头内，致使光线较弱物像不清。

当在镜头和载玻片之间滴加香柏油后，由于香柏油折光率为1.515，与玻璃相近，可消除光线通过玻璃与物镜间空气时发生折射现象，避免光线损失，使亮度和清晰度都得到了提高，几乎可以看清所有细菌。

三、实验材料及仪器（1）标本及试剂：微生物标本片、香柏油、二甲苯。

（2）仪器及其他用具：普通光学显微镜、擦镜纸等。

四、实验步骤1.普通光学显微镜的构造及使用方法。

1）普通光学显微镜的构造。

普通光学显微镜有机械部分和光学部分组成。

A．显微镜的机械部分。

包括镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推动器、粗调节器（粗调螺旋）和细调节器（微调螺旋）等部件（图1-1）普通光学显微镜机械部分各部件的构造与功能见表1-1B．显微镜的光学系统。

由反光镜、聚光镜、物镜、目镜、虹彩光圈等组成，光学系统使标本物像放大，形成倒立的放大物像。

表1-2普通光学显微镜光学系统的构造与功能2）普通显微镜的使用①取镜。

从镜箱中取镜时，一手握镜臂，一手托镜座，保持镜体直立，以防反光镜及目镜脱落被摔坏，将显微镜放置于平稳的实验台上。

端正坐姿，镜检时两眼同时睁开，单目显微镜一般用左眼观察，用右眼帮助绘图或做记录。

双目显微镜用双眼观察。

②使低倍镜与镜筒呈一直线，调节反光镜，让光线均匀照射在反光镜上，电光源显微镜打开照明光源，并使整个视野都有均匀的照明。

实验一显微镜的使用和植物细胞构造目的要求：一、熟悉显微镜各部分的结构和功能。

二、初步学会正确地使用显微镜和显微镜放大倍数的计算方法。

三、记住使用显微镜时应注意的事项。

四、了解细胞的形态及基本构造。

五、学习表皮制片法及绘制植物细胞图的基本技术。

用品：显微镜毛线纤维装片镜子解剖针刀片盖玻片碘液蒸饿水ZE1SS数码显微镜药用植物电子图片相册实验内容：(一)显微镜的使用方法及注意事项1.观察前的准备(示教)(1)显微镜从显微镜柜或木盒内取出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，保持镜体直立，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。

严禁用单手提着镜子走，防止目镜滑出。

(2)将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约IOCm左右，右侧可放记录本或绘图纸。

用显微镜观察时，必须用双眼，切勿紧闭二眼。

要反复训练用左眼窥镜，右眼作图。

(3)对光：一般可利用日光灯或自然光做光源，避用直射阳光。

直射阳光会影响物像的清晰，损坏光源装置和镜头并刺激眼睛。

对光时先把低倍镜转到中央，对准载物台上的通光孔，然后用左眼观察目镜中视野的同时，转动反光镜使视野的光线最明亮最均匀为止。

如果靠近光源，或光线较强时，宜用平面的反光镜，如果光源较远或光线较弱时，宜用凹面的反光镜。

当在镜筒内见到一个圆形而明亮的视野时，再利用聚光镜或虹彩光圈调节光的强度，使视野内的光线均匀而明亮。

2.低倍镜的使用镜检任何标本要养成必须先用低倍镜观察的习惯因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定要观察的位置。

(1)放置切片：升高镜筒，把玻片标本放在载物台中央，使材料正对通光孔，然后用压片夹压住载玻片的两端。

(2)调整焦点：两眼从侧面注视物镜，并慢慢按顺时针方向转动粗调焦螺旋，使镜筒徐徐下降至物镜离玻片约5mm处，用左眼或双目注视镜筒内，同时按反时针方向转动粗调焦螺旋使镜筒上升，直到看见清晰的物像为止(注意不可在调焦时边观察边下降镜筒，否则会使物镜和玻片触碰，压碎玻片，损伤物镜)。

实验一金相显微镜的使用与金相组织的观察一、实验目的1(了解金相显微镜的构造，各个主要部件的效用。

2(掌握正确使用显微镜的操作及维护方法。

3(观察几种式样的金相组织二、实验概述(一)金相显微镜的知识及正确使用1(显微镜放大原理:利用透镜将物体的像放大，单个透镜的放大倍数是有限的(一般在20倍以下)，因此要考虑用另一透镜组将第一次放大的像再行放大，以得到更高更清晰放大倍数的像，显微镜就是根据这一需求设计的。

显微镜中装有两组放大透镜，靠近物体的一组为物镜，靠近眼睛的一组透镜称为目镜，但实际上显微镜采用的物镜和目镜都是由复杂的透镜组组成。

图1-1为显微镜成像原理图。

图1-1显微镜成像原理图若将试样AB 置于物镜之前距其一倍焦距(F)略远一些的位置，由物体反射1 的光线通过物镜折射后得到一个倒立的放大的实像A′B′，在目镜上观察时，经物镜放大的倒立实像A′B′落在目镜焦距F内 ( 在设计时安排好使目镜的焦点位置2在 F以内) ，目镜又将A′B′再次放大，人眼在(250mm)的明视距离处，看到2一个经两次放大的倒立的虚像A″B″ 就是我们在显微镜下的物象。

总的放大倍数为物镜的放大倍数与目镜放大倍数的乘积，M=M×M 总物目普通光学金相显微镜主要由三大系统构成:既光学系统，照明系统和机械系统。

下面简单分述其主要构件的功能与特性。

光学系统:主要包括物镜和目镜，物镜是显微镜最重要的部件，成像质量在很大程度上取决于物镜的质量，它的性能包括数值孔径和分辨率，有效放大倍数及像差校正程度。

A:数值孔径:物镜的数值孔径(N.A)表示物镜的收集光线的能力，增强物镜的聚光能力可使成像的质量提高，它的大小通常以进入物镜的光线锥所张开的角度，既孔径角的大小，公式表示为:N.A=n.sinθ式中n—物镜与观察物之间介质的折射率θ—为物镜的孔径半角因此提高数值孔径有两个途径:a(增大透镜的直径或减小物镜的焦距。

实际上sinθ的最大值只能0.9左右，此方法会导致像差增大和制造困难。

实验1 显微镜油浸系物镜的使用一、实验原理微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜(16mm ，10⨯)高倍物镜(4mm ，40-45⨯)和油镜(1.8mm ，95-100⨯)三种。

油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。

使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。

这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n ＝1.52，与玻璃基本相同。

当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。

如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就减低了(图1-1)。

利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值口径。

因为显微镜的放大效能由其数值孔径决定的。

所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：2sin α⋅=⋅n A N式中 数值孔径=⋅A N介质折射率=n最大入射角，即镜口角=α数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨力强弱的依据；分辨力是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。

A N ⋅=2λ能辨别两点间最小距离式中 λ=光波波长 由上述可知若n 值和α角越大则N ·A 越大或光波波长越短，则显微镜的分辨力越大(图Ⅰ-2)。

一些物质的折射率：水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.515。

二、实验目的和内容目的：学习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。

内容：1．学习油浸系物镜的使用方法。

2．用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。

三、实验材料和用具枯草芽孢杆菌(Bacillus subitilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的染色装片。

香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。

四、操作步骤1、取镜显微镜是光学精密仪器，使用时应特别小心。

实验一显微镜调试使用一、实验名称显微镜调试使用二、实验目的1清楚普通光学显微镜的结构、原理，熟练掌握其操作方法。

2能够使用显微镜观察微生物的形态、大小等。

三、实验内容与实验步骤（一）显微镜的结构显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成。

机械装置的主要作用是使整个光学系统坚固在一个光轴直线上，而且可精确地调节各光学部件之间的距离，使显微镜能产生清晰的物像。

其组成包括：①镜座和镜臂；②镜筒；③物镜转换器；④载物台；⑤调焦装置的粗调节器和细调节器。

光学系统是显微镜最主要的部分，起分辨和放大目的物的作用。

其组成包括：①接目镜；②接物镜；③聚光器；④反光镜；⑤光源。

显微镜的使用原则是先低倍后高倍，镜检细菌需用油浸接物镜。

（二）操作步骤1观察前的准备(1)显微镜的安置置显微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘约3-4cm。

镜检时姿势要端正。

取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。

切忌用单手提拎；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛疲劳，也便于边观察边绘图或记录。

(2)光源调节安装在镜座内的光源灯可通过调节电压以获得适当的照明亮度，而使用反光镜采集自然光源或灯光作为照明光源时，应根据光源的强度及使用物镜的放大倍数选用凹面或凸面反光镜并调节其角度，使视野内的光线均匀、亮度适宜。

(3)目镜间距调节根据使用者的个人情况，调节双筒显微镜的目镜，双筒显微镜的目镜间距可以适当调节，而左目镜上一般还配有曲光度调节环，可以适应眼距不同或两眼视力有差异的不同观察者。

(4)聚光器数值孔径的调节调节聚光器虹彩光圈与物镜的数值孔径值相符或略低。

有些显微镜的聚光器只标有最大数值孔径值，而没有具体的光圈数刻度。

使用这种显微镜时可在样品聚焦后取下一目镜，从镜筒中一边看着视野，一边缩放光圈，调整光圈的边缘与物镜边缘相切或略小于其边缘。

因为各物镜的数值孔径值不同，所以每转换一次物镜都应该进行这种调节。