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顶空气相色谱法测定小鼠血液中乙醇的浓度

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顶空气相色谱法测定小鼠血液中乙醇的浓度雷红伟,高铁祥,田先翔,杨　敏,陈　靓(湖北中医学院药学院,湖北武汉430065) 摘要:目的　建立测定小鼠血液乙醇的浓度的灵敏方法。

方法　取仲丁醇标液1m l和血样0125m l放入顶空瓶中,用内衬聚四氟乙烯膜的硅垫密封,置电热恒温器中60℃加热平衡30m in,气相色谱仪测定小鼠血液的乙醇浓度。

结果　校正因子Fi/Fs的平均值为31686,平均偏差为2115%。

结论　本方法是测定血液乙醇浓度简便、灵敏、有效的方法。

关键词:顶空气相色谱法;血药浓度;乙醇;仲丁醇中图分类号:R96911 文献标识码:A 文章编号:1008-987X(2007)02-0037-02D e tec ti o n o f the A l co ho l Co ncen tra ti o n i n R a ts’B l o o d byHead sp ace Ga s C h r om a t o g rap hHong wei Lei,Tiexiang Gao,Xianxiang Tian,et,al(11Depart m ent of Phar macol ogy,Phar maceutic of Hubei Chinese medicfal college W uhan430065) Ab s trac t:O b j ec ti ve:To detect the alcohol concentrati on in Rats’bl ood.M ethods:Sec-butyl alcohol is used as the inter2 nal standard and,heated at the te mperature of60℃and balanced f or30m inutes.Heads pace gas chr omat ograph is adop ted t o detect the alcohol concentrati on in Rats’bl ood.Results:The average value of correcti on fact or Fi/Fs is3.686,and the average deviati on is2.15%.Conclusi ons:Heads pace gas chr omat ograph is the si m p le,flexible and effective method t o detect the alco2 hol concentrati on in Rats bl ood.Ke y wo rd s:Heads pace gas chr omat ograph;B l ood concentrati on;A lcohol;Sec-butyl alcohol 血液乙醇含量测定,一般采用三氯醋酸稀释[1],离心后取上清液经微孔滤膜过滤,再以气相色谱法测定。

该法处理繁琐,有时不能满足实际工作需要。

笔者采用顶空气相色谱法(GC)[2]测定小鼠血液的乙醇浓度,操作简便,准确可靠。

1　材料与方法111　材料11111　药品与试剂无水乙醇(天津市北方化学玻璃购销中心),批号: 20031118,密度0179;仲丁醇(天津化学试剂有限公司),批号:20001129;密度0181;肝素钠注射液(常州千红制药有限公司),批号:20040131。

11112　仪器:上海天美GC-7890型检测器、电恒温加热器、10m l顶空玻璃瓶若干、250μl气密型注射器、250μl微量移液器,50μl微量移液器。

11113　色谱条件　DET:250℃;I N J:200℃;OVE N:110℃;色谱柱:OV-103130m×0132mm×110μm。

112　实验方法11211　试剂的配制　①乙醇/仲丁醇标液:分别吸取1010μl仲丁醇和10μl乙醇于10m l双蒸水中,浓度分别为0181mg/m l和0179mg/m l。

②仲丁醇标液:吸取1010μl仲丁醇于10m l双蒸水中,浓度为018mg/m l。

11212　内标法测定的原理[2]:C i=F i A i(1)C s=F s A s(2)上式中Ci和Cs分别是组分I和内标物S的浓度,Fi和Fs 分别是组分I和内标物的比例系数,A i和A s是组分Ⅰ和内标物S的气相色谱峰面积。

将式(1)、(2)两式相比得:Ci/C s=(F i/F s)×(A i/ A s)(3):F i/F s=(C i/C s)×(A i/A s)(4)式(4)中的Fi/Fs称为相对校正因,只要配制已知浓度的组分I和内标物S,平衡后测定两峰面积值,就可以根据式(4)计算出相对校正因子。

将式(3)重排得:Ci=(F i/F s)×(A i/A s)×C s (5)11213　相对校对因子的测定　取乙醇/仲丁醇标液1m l和双蒸水0125m l于顶空瓶中,用内衬聚四氟乙烯膜的硅胶垫密封,置电热恒温器中60℃加热30m in,然后用150μl气密型注射器吸100μl进样,测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面积,计算Ai/A s,根据式(4)得出相对校正因子F i/F s,重复3次。

11214　A i/A s与C i线性关系比较　分别以5、15、20、25μl乙醇与10μl仲丁醇配制4种乙醇/仲丁醇标液。

分别用含5、10、15、20、25μl乙醇的乙醇/仲丁醇标液1m l于5个顶空瓶中,每瓶再各加0125m l双蒸水,用内衬聚四氟乙烯膜的硅胶垫密封,置电热恒温器中60℃加热30m in,然后用250μl气密型注射器吸100μl进样,测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面・73・2007年6月第9卷第2期June12007,Vol19,No12 湖北中医学院学报Journal of Hubei College of T C M 作者简介:雷红伟(19682),男,湖北中医学院药学院讲师。

积,计算A i /A s 。

以C i 为横坐标,A i /A s 为纵坐标,绘制曲线,观察线性关系。

11215　血中乙醇的浓厚测定:取小白鼠60只,实验前12h 禁食不禁水,灌服56度白酒二倍稀释液012m l/10g,于酒后30、60、90、120和180m in 时每组各取10只小鼠经眼眶采血015m l,放入肝素抗凝EP 管中备测。

60℃加热30m in[3]。

然后用250μl 气密型注射器吸100μl 进样,测定组分乙醇和内标物仲丁醇的色谱峰面积,计算A i /A s ,根据式(8)计算血样中的乙醇浓度。

2　结果211　相对校正因子的测定结果测定结果见表1。

表1　相对校对因子(F i /F s )的测定结果122平均值相对标准偏差31638364231777316862115% F i /F s 平均值为31686,相对标准偏差为2115%,F i /F s 值可看作常数31686。

212　A i /A s 和C i 线性关系比较测定结果表明C i 和A i /A s 成正比,数据见表2;以C i 为横坐标,A i /A s 为纵坐标绘制的曲线表明两者成线性关系,见图1。

回去归方程为:Y =010176+310719X (6)R 2=019982,P>010001(7)。

综上所述,相对校正因子C V 很小,可作常数31686,C i和A i /A s 成正比,因此可用式(5)计算血样中的乙醇浓度。

即:C i =31686×(A i /A s )×0181(8)。

A i /A s 的测定结果见表2。

其线性关系比较见图1。

图1　A i /A s 随乙醇浓度变化的线性关系比较表2　A i /A s 的测定结果乙醇含量(μl )乙醇浓度(mg/m l )A i A s A i /A s 501405324370011221001791599603901265151119205055690136820115828595629015082511983752584501642213　小鼠血中不同时间乙醇浓度的测定结果测定结果见表3,药时曲线见图2。

表3　小鼠乙醇浓度测定结果时间(m in )乙醇浓度(mg/L )30654±11360985±325901381±3291201411±300150920±135180792±201图2　乙醇的药时曲线图3　讨论顶空分析是通过样品基质上方的气体成分来测定这些组份在原样品中的含量的分析方法。

顶空分析只取气相部分进行分析,大大减少了样品基质对分析的干扰,它是GC 分析最为简便的方法[3]。

本次试验采取静态顶空测定血样中乙醇的含量。

为保证不同样品乙醇浓度与乙醇色谱峰面积值成线性关系。

本次试验在样品中加入仲丁醇作为内标液,观察乙醇色谱峰面积和仲丁醇色谱峰面积的比值与乙醇浓度间的线性关系。

试验表明多次测定乙醇/仲丁醇标液所得F i /F s 可作为常数,以F i /F s 的平均值31686作为相对校正因子。

在A i /A s 和C i 线性关系比较试验中可见A i /A s 和C i 成线性关系。

如图1。

由此可见顶空气相色谱内标法测定乙醇浓度准确、可靠,本法测定的结果与多项资料结果一致,证明静态顶空气相色谱内标法是测定血液中乙醇浓度简便、灵敏、有效的方法。

参考文献:[1]　徐淑云,陈修,卞如濂1药理学实验方法[M ]1北京:人民卫生出版社,198211731[2]　王永华1顶空气相色谱测定血液中乙醇含量[J ]1Modern Scien 2tific I nstruments,2000,(3):262271[3]　刘虎威1气相色谱方法及应用[M ]1北京:化学工业出版社,2000113321471(收稿日期:2007-01-31　编辑:郑晓屏)・83・湖北中医学院学报 2007年第9卷第2期。

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血中乙醇的顶空气相色谱分析

血中乙醇的顶空气相色谱分析

基金项目　校级科研项目,项目编号:07LG002。

作者简介　刘兆(1974—　),男,汉族,讲师,法医学博士。

2008年第4期No 142008　Journal of Chinese Peop le πs Public Security University (Science and Technol ogy )　总第58期Su m58血中乙醇的顶空气相色谱分析刘　兆,温永启,张惠芹(中国人民公安大学刑事科学技术系,北京　100038)摘　要　目的:探讨改良测定血中乙醇的顶空气相色谱分析方法。

方法:以正常人空白血液添加乙醇为样本,采用1,4-二氧六环作为内标物并在稀释液中加入硫脲和高氯酸以提高挥发性并促进蛋白质的降解,通过顶空气相色谱法进行定性定量分析,在对实际案例检样的检验中与采用“标准方法”检测的结果进行对比。

结果:采用新方法定量分析时,血中乙醇在010625mg/mL ～1mg/mL 范围内线性关系良好(r 2=019996),各浓度组的变异系数(CV )<2%,血中乙醇的最低检出限为012μg/mL (S/N ≥3)。

结论:以1,4-二氧六环为内标物的新方法简便、准确,比以往的方法更加灵敏且避免干扰,适用于血醇的定性、定量检验。

关键词　乙醇;顶空气相色谱;法医检验中图分类号　D9181930　引言血醇检验是法医毒化分析中的一项基本工作,在酒后驾车、中毒死亡等案件的鉴定中至关重要[1]。

目前国内公共安全行业标准中使用的方法(以下简称方法A )采用叔丁醇作内标物,通过顶空气相色谱法进行血中乙醇的检验[2],同时还可检测出甲醇、丙醇、戊醇等易挥发性物质。

所述方法中用作内标物的叔丁醇由于保留时间较短,易与其他挥发性物质产生干扰,且其定性、定量检验需使用约3mL 血液,在一些特殊情况中实属较大的消耗。

为改善上述问题,本实验方法(以下简称方法B )采用保留时间较长的1,4-二氧六环作为内标物以避免与其他挥发性物质的干扰,在检样制备中所用的稀释液里加入硫脲和高氯酸可提高挥发性和分解蛋白质[3],以便提高灵敏度,减少检样的消耗。

血液酒精含量的检验方法

血液酒精含量的检验方法

血液酒精含量的检验方法1 范围本标准规定了血液酒精含量的顶空气相色谱检验方法。

本标准适用于道路交通执法活动中对人员血液中酒精的定性和定量分析。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法GB 19522 车辆驾驶人员血液、呼气酒精含量阈值与检验GA/T 122 毒物分析名词术语3 术语和定义GB 19522和GA/T 122界定的术语和定义适用于本文件。

4 原理本方法利用酒精(以下称乙醇)的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测；经与平行操作的乙醇标准品比较，以保留时间或相对保留时间定性，用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量分析。

5 试剂本标准所用试剂除另有说明外均为色谱纯，试验用水为二级水（见GB/T 6682-2008规定）：a）乙醇；b）叔丁醇；c）乙醇标准工作溶液：精密吸取或称取无水乙醇标准品适量，用水配成1000 mg/100 mL乙醇储备液，密封，冷藏保存，使用期6个月。

将乙醇储备液按倍数用水稀释制成试验中所用系列浓度的乙醇标准工作溶液，使用期3个月；d）叔丁醇内标工作溶液：精密吸取或称取叔丁醇标准品适量，用水配成4 mg/100 mL叔丁醇内标工作溶液，密封，冷藏保存，使用期3个月。

6 器材顶空气相色谱检验方法应具备以下器材：a) 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）；b) 顶空自动进样器；c) 分析天平：感量0.1mg；d) 精密移液器；e) 样品瓶；f) 硅橡胶垫；g) 铝帽；h) 密封钳。

7 操作方法7.1 定性分析7.1.1 样品制备7.1.1.1 案件样品制备取0.10 mL待测全血及0.50 mL叔丁醇内标工作溶液加入样品瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，待测。

血液中乙醇浓度的快速分析方法

血液中乙醇浓度的快速分析方法

环球市场/理论探讨-56-血液中乙醇浓度的快速分析方法郝彩雨鄂尔多斯市公安局交通管理支队摘要：目的：对血液中的乙醇浓度进行快速测定和分析。

方法：采用气相色谱快速分析法，选取气相色谱FID 检测器以及GD*103玻璃柱对经离心后的全血血清进行分析，样品质量为0.5μl。

结果：通过此种方法对血液中的乙醇浓度进行分析检测，最后的加标回收率为94-98%之间，相对的标准偏差率＜2%。

结论：采用这种方式能够将检测有效率大大提高，而且时间上大大的缩短了，操作起来简便易行，成本较少。

另外，它的检测灵敏度、回收率和线性范围也很好，极大的方便了血液检测工作。

关键词：血液，乙醇浓度，分析乙醇是酒精的化学名称，在生活中酒精制品就是常见的酒。

而酒是我们经常饮用的，饮酒过量就会造成我们眩晕、视线模糊、意识不清，甚至酒精中毒。

我国每年都有数十万人因为饮酒过量导致酒后驾车而致使车祸发生，失去生命或者让他人失去生命。

酒驾已经成为了交通安全事故中的重点整治对象。

判定酒驾和查处酒驾的重要方法就是检测血液中的乙醇浓度。

本文根据气相色谱快速分析法而对血液中的乙醇浓度进行分析讨论，探讨此法的检测有效度，为更多的酒精检测工作提供建议。

1.资料与方法1.1资料。

首先，准备一台气相色谱仪(GC4010A 型号)自带FID 检测器，以及A5500气相色谱工作站。

其次，在玻璃柱中将50-70目的担体填充进去，将汽化室温度、玻璃柱温度·检测器温度调为190℃、150℃和200℃。

将氢气和载气的流量均设为30ml 每分钟，而空气流量设为300ml 每分钟。

最后，用蒸馏水配备好0mg/100ml、20mg/100ml、40mg/100ml、80mg/100ml、160mg/100ml、240mg/100ml 的标准乙醇溶液。

1.2检测方法。

采集1ml 的静脉血在离心管中以3000rpm 的方式进行血清采集，共进行5分钟，操作后将样品静置一段时间。

顶空气相色谱法测定乙醇消毒剂中乙醇含量

顶空气相色谱法测定乙醇消毒剂中乙醇含量

分析与检测沈平申广文卢志敏(广州市浪奇实业股份有限公司，广东广州，510627)摘要：采用毛细管顶空气相色谱法测定乙醇消毒剂中的乙醇含量。

该方法以体积比配制试液，采用极性岛津WondCapwax毛细管色谱柱分离，FID检测器进行检测，内标法定量。

结果表明，乙醇的体积浓度在0.2~1.0mL/L范围内与其色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.9998,方法定量限为1口L/L，加标平均回收率99.8%，该方法简单、快捷、准确。

关键词：毛细管柱；顶空气相色谱；内标法；乙醇含量测定中图分类号：R187+.2文献标识码：A文章编号：1672-2701(2021)04-61-05随着新型冠状病毒感染的肺炎疫情暴发，消毒剂成为市面上热销产品，其中包括众所周知的乙醇类消毒剂。

乙醇是良好的溶剂，有较强的渗透作用，其作用时间快，易挥发、性质稳定、安全。

市面上通常有喷雾型、凝胶型两种。

乙醇消毒原理是能够使细菌蛋白质变性，降低细菌活性从而杀灭细菌，适用于一般物体表面消毒，手和皮肤消毒。

研究表明乙醇消毒剂中的乙醇含量在70%〜80%(v/v)之间对细菌及病毒具有良好的灭活作用。

目前GB/T26373《醇类消毒剂卫生要求》中乙醇含量的检测方法是采用色谱填充柱，制备样品后直接进样，标准曲线法定量。

本文探讨以体积比进行试液配制，采用极性毛细管顶空气相色谱分离、内标法定量来检测消毒剂中乙醇含量。

实验证明，对比目前使用的手动进样的填充柱色谱法更方便、快捷、准确，同时能满足液状和凝胶状（黏度高）的消毒剂样品检测。

1实验部分1.1实验原理用毛细管气相色谱法结合顶空技术，在选定工作条件下，使乙醇、正丙醇（内标物）得到分离，用FID检测，根据内标法计算出乙醇的含量。

1.2主要试剂和仪器乙醇（色谱纯）；正丙醇（色谱纯）；水（实验室二级用水），自制。

气相色谱仪（岛津GC-2010plus），岛津公司；气相顶空进样器（DK-3001A型），北京中兴分析仪器研究所；色谱柱（0.25mmX30mX0.25pm WondCapwax柱），岛津公司；FID检测器，岛津公司；分析天平（AL204），梅特勒托利多仪器有限公司；移液器（100〜1000pL），艾本德Eppendorf。